PTBP1通过PTEN/Akt通路调节结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移

目的 ：探讨多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)通过蛋白激酶B(Akt)/磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）通路调节结肠癌（CRC）细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法：将SW620细胞分为SW620组、si-NC组、si-PTBP1组、bp V(PTEN抑制剂)组、si-PTBP1+bpV组；检测SW620细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭情况及PTBP1、PTEN/Akt通路蛋白、凋亡蛋白、自噬蛋白表达；检测正常的结肠上皮细胞（FHC）以及SW620、SW480、HT29细胞PTBP1、PIK3、Akt、PTEN蛋白水平。结果：与FHC细胞相比，SW620、SW480、HT29细胞PTBP1、p-PI3K/PIK3、p-Akt/Akt蛋白水平显著上调，PTEN蛋白显著下调；与SW620组、si-NC组相比，si-PTBP1组PTBP1、p-PI3K/PIK3、p-Akt/Akt、Bcl-2蛋白水平、48 h吸光度值、细胞迁移和侵袭数量显著降低（P<0.05），细胞凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、Beclin1、LC3-II/I、PTEN蛋白水平显著升高（P<...     

c-Met在结直肠癌细胞株中的表达及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞株增殖和侵袭能力的影响

目的探讨c-Met在结直肠癌细胞株中的表达以及其配体肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌SW480细胞系增殖、侵袭能力的影响。方法应用RT-PCR及Western blot技术检测HGF受体c-Met在不同结直肠癌细胞中的表达,筛选出c-Met高表达细胞系;用不同浓度(0、20、40、70 ng/m L)的HGF作用SW480细胞48 h,分别用MTT法、Transwell法检测其对SW480细胞增殖、侵袭能力的影响。结果 1 RT-PCR及Western blot检测结果均表明,c-Met在不同结直肠癌细胞系中均有表达,其中体外培养的结肠癌细胞系SW480中存在c-Met和蛋白高表达。2 MTT实验结果显示,HGF可增强SW480细胞的增殖能力,且在一定范围内随浓度增高作用增强,呈剂量依赖性关系。3 Transwell实验结果显示,HGF处理后的SW480细胞侵袭能力增强。结论 c-Met在结肠癌SW480细胞中存在高表达,HGF可促进结直肠癌细胞的增殖及增加其体外侵袭能力。     

自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对结直肠腺癌细胞生长与Notch1蛋白表的影响

目的：探讨自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA）对人大肠癌SW480细胞生长与Notch1蛋白表达的影响。方法：将3-MA（5 mmol/L）作用于SW480细胞24 h后（以培养相同时间无处理的SW480细胞为对照）,分别免疫组化和Western blot法检测细胞Notch1蛋白的表达,用CCK-8法和Annexin/PI双染法检测细胞增殖与凋亡。结果：免疫组化与Western blot结果均显示,3-MA作用后,SW480细胞Notch1蛋白的表达明显下调（均P<0.05）;增殖与凋亡检测结果显示,3-MA作用后,SW480细胞增殖率明显降低,而凋亡率明显增加（均P<0.05）。结论： 3-MA能抑制结直肠癌细胞的增殖并促进其凋亡,该作用可能与3-MA抑制Notch1蛋白表达从而改变细胞自噬水平有关。

     

丹参酮ⅡA调控凋亡及信号转导与转录激活因子3信号通路抑制人结肠癌细胞增殖及迁移

目的观察丹参酮ⅡA(Tan ⅡA)对人结肠癌细胞(SW480、HCT116细胞)增殖、凋亡与迁移的影响, 探究其分子机制。方法采用人结肠癌SW480及HCT116细胞, 随机分为对照组, 丹参酮ⅡA(25、50、100 μmol/L)处理组, 噻唑蓝比色法(MTT)检测细胞增殖, 流式细胞术检测细胞凋亡, 划痕试验分析细胞迁移。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测SW480细胞中凋亡通路血管内皮生长因子(VEGF)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)蛋白及信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路STAT3、c-Myc蛋白表达水平。结果丹参酮ⅡA呈剂量及时间依赖性的方式抑制SW480及HCT116细胞增殖;与对照组比较, 丹参酮ⅡA(50、100 μmol/L)处理组细胞凋亡率分别增加了23.1%、35.3%及26.8%、34.6%;丹参酮ⅡA(50、100 μmol/L)干预后, 两组细胞的迁移抑制率分别增加了26.6%、36.5%及39.8%、42.0%;丹参酮ⅡA干预后SW480细胞中细胞凋亡通路中VEGF、bcl-2蛋白表达下...     

RIZ1基因表达缺陷对结肠癌细胞增殖凋亡的影响

目的 观察抑癌基因Rb结合锌指结构基因(RIZ1)表达缺陷对结肠癌细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 以表达RIZ1的LoVo细胞和不表达RIZ1的SW480细胞作为研究对象,采用甲基化特异性PCR(MSP)法检测2株结肠癌细胞的RIZ1基因启动子的甲基化状况;以3×105/瓶为细胞观察单位,5 μmol/L的5-杂氮2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)对细胞进行去甲基化处理48 h,用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot分别检测RIZ1的mRNA和蛋白表达,观察处理前后的差异;细胞增殖实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡.结果 在SW480细胞中可以扩增出RIZ1基因启动子的甲基化条带,经去甲基化处理后,则能检测出该基因的mRNA和蛋白的表达条带,其增殖速度明显减慢,凋亡率从(4.4±1.7)%增高到(23.8±2.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05),5 μmol/L的5-aza-CdR可显著上调SW480中RIZ1的表达;而LoVo细胞中未检测到基因启动子的甲基化,处理前后其基因表达、增殖和凋亡差异均无统计学意义(P＞O.05).结论 抑癌基因RIZ1启动子异常甲基化在调节其表达中发挥重要作用,对RIZ1进行去甲基化处理使其重新表达能明显减缓结肠癌SW480细胞的生长,促进其凋亡.     

环氧化酶2抑制剂对结肠癌细胞中BCL-3及细胞周期蛋白D1表达的影响

目的 探讨环氧化酶2（COX-2）抑制剂对BCL-3基因及其靶向基因细胞周期蛋白1（cyclin D1）的转录和表达的影响.方法 实验组分别以25、50、100及200 μmol/L的NS398（COX-2抑制剂）处理结肠癌SW480细胞48 h或72 h;对照组以不含NS398的溶媒处理SW480细胞.采用RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学染色方法分别从mRNA和蛋白水平检测各组细胞中BCL-3和cyclin D1的表达情况.结果 各组细胞处理48 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1 mRNA水平下降,呈剂量依赖性;而蛋白水平则无明显差异（P〉0.05）.处理72 h后,与对照组相比,实验组BCL-3和cyclin D1蛋白水平下降,亦呈现剂量依赖性.当NS398浓度达到100 μmol/L时,其BCL-3 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.01）：当NS398浓度达到50 μmol/L时,其cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平与对照组比较差异即有统计学意义（P〈0.05）.结论 结肠癌细胞株SW480中有BCL-3的表达.COX-2抑制剂NS398可从基因及蛋白水平对BCL-3及cyclinD1进行抑制,并呈剂量依赖性.NS398可能通过BCL-3而抑制cyclinD1.     

体外转染KISS-1基因对SW480细胞系侵袭和迁移力的影响

目的 探讨人肿瘤转移抑制基因KiSS-1对人结肠癌SW480细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响.方法 将携有KISS-1基因的重组真核表达质粒pRc/CMV2-KISS-1转化大肠杆菌DH5et并扩增,抽提纯化质粒并进行酶切鉴定,pRc/CMV2-KISS-1体外转染SW480细胞(SW480-FH1T),筛选稳定转染的细...     

肝癌细胞迁移过程中Notch信号通路的作用效果

目的:探讨Notch信号通路在肝癌细胞迁移过程中的作用及相关机制。方法:体外培养正常非肿瘤肝细胞系HL-7702,肝癌细胞系HepG2、Huh-7。利用Transwell小室检测细胞的迁移能力,Western blot检测Notch、Snail、E-cadherin蛋白的表达。分别采用1μmol/L DAPT、5μmol/L DAPT阻断Notch信号通路,比较不同浓度下对细胞迁移能力的影响以及对肝癌细胞中Snail和E-cadherin蛋白表达的影响。结果:肝癌细胞系的侵袭迁移能力明显高于正常非肿瘤肝细胞(P0.05),肝癌细胞HepG2的侵袭迁移能力稍高于Huh-7,但差异未见统计学意义(P0.05)。采用Western blot蛋白印记方法检测细胞Notch、Snail、E-cadherin的蛋白表达量,肝癌细胞中Notch、Snail的表达高于正常细胞,E-cadherin的表达显著低于正常细胞。采用1μmol/L DAPT和5μmol/L DAPT阻断Notch信号通路,与对照组比较,1μmol/L DAPT和5μmol/L DAPT均能明显下调Snail的表达,上调E-cadherin的表达,且随着浓度的增加作用加强(P0.05)。结论:Notch信号通路在肝癌细胞侵袭迁移过程中发挥着重要作用,初步认为与Snail、E-cadherin的表达有关。     

薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究薯蓣皂甙元对结直肠癌细胞的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人结直肠癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,对数期生长的SW480细胞分组进行转染和慢病毒感染;RT-PCR检测SW480细胞中miR-145-5p表达、KLF5和HIF-1α mRNA表达;Western blotting检测细胞中KLF5和HIF-1α蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验检测miR-145-5p对KLF5表达的调控作用。结果与正常组相比,癌细胞组中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05),miR-145-5p 表达显著下调(P0.05);与常氧组相比,缺氧组细胞中KLF5、HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05);薯蓣皂甙元(10、20、40、80、160 μmol/L)可抑制SW480细胞活力(P0.05);与对照组相比,薯蓣皂甙元组SW480细胞中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达、细胞克隆数、迁移和侵袭细胞数均显著下调(P0.05),上调KLF5可逆转薯蓣皂甙元对SW480细胞的作用,上调HIF-1α的表达(P0.05);miR-145-5p靶向调控KLF5;与对照组相比,薯蓣皂甙元组miR-145-5p 表达显著上调(P0.05),KLF5蛋白表达下调(P0.05);与薯蓣皂甙元组相比,薯蓣皂甙元组+miR-145-5p抑制物组miR-145-5p 表达显著下调(P0.05),KLF5蛋白表达上调(P0.05)。结论薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

转染胸苷磷酸化酶基因对5'-脱氧氟脲苷抗结肠癌细胞株活性的影响

目的 探讨人结肠癌细胞系SW480和LOVO细胞株转染胸苷磷酸化酶(TP)基因后转化5′-脱氧氟脲苷(5′-DFUR)为氟尿嘧啶(5-FU)能力的变化及5′-DFUR抗癌细胞株活性的变化.方法 构建包含TP cDNA的真核表达载体,用慢病毒包装后转染结肠癌细胞株SW480和LOVO.转染5代后以免疫荧光法和流式细胞技术检测转染效率;RT-PCR和Western blot法分别检测2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达.然后以高效液相色谱法(HPLC)检测2株细胞转染前后转化5′-DFUR为5-FU的量;MTT法检测5′-DFUR对2株细胞转染前后半数抑制浓度(IC50).结果 转染TP基因后SW480-TP与LOVO-TP 5代细胞转染效率稳定在95％左右.2株转染细胞的TP mRNA表达分别比野生型细胞增加(695±172)倍(t=-7.00,P=0.002)和(282±87)倍(t=-5.61,P=0.030),Western blot显示TP蛋白表达也明显增强.转染后的SW480-TP与LOVO-TP在培养基中分别使5′-DFUR转化为5-FU的量增加(t=19.406 ～66.921,P＜0.01).5′-DFUR对SW480的IC50由(1641±53) μmol/L降至(587±17) μmol/L(t=-32.59,P＜0.01);对LOVO的IC50由(1607±57) μmol/L降至(1088±89) μmol/L(t=-8.52,P＜0.01).结论 慢病毒载体能够高效地将TP cDNA转染至人结肠癌细胞SW480和LOVO并稳定传代,转染后2株细胞的TP mRNA和TP蛋白表达明显增高,使5′-DFUR转化为5-FU的量增加,对结肠癌细胞株SW480和LOVO的抑制作用增强.     

FOXC2介导Hedgehog/Gli信号通路对乳腺癌侵袭及迁移的影响

目的探讨FOXC2介导Hedgehog/Gli信号通路通过调控上皮间质转化（EMT）途径参与乳腺癌侵袭及迁移的机制。 方法应用不同浓度环靶明（Cyclopamine）处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率及计算药物半数抑制浓度（IC₅₀）;采用Cyclopamine或沉默FOXC2基因表达以阻断Hedgehog/Gli信号通路活化;通过Transwell小室体外侵袭实验及划痕实验分别检测阻断Hedgehog/Gli信号通路对MDA-MB-231细胞侵袭及迁移影响;Western blotting检测阻断前后Hedgehog/Gli信号通路分子Smoothened（Smo）、Gli1和EMT相关标志物FOXC2,E-cadherin及Vimentin蛋白表达变化。 结果与空白对照组比较,Cyclopamine可显著地抑制MDA-MB-231细胞增殖并呈现时效-量效关系,48 h的IC₅₀为25 μmol/L。Transwell小室体外侵袭实验及划痕实验均显示,与未转染组及Control-siRNA组相比,FOXC2-siRNA组和Cyclopamine组细胞穿膜数及迁移率均显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Western blotting显示,与未转染组及Control-siRNA组相比较,FOXC2-siRNA组及Cyclopamine组Smo、Gli1及FOXC2蛋白表达显著降低,差异有统计学意义（P<0.05）。而沉默FOXC2表达可显著降低Vimentin蛋白表达及增加E-cadherin蛋白表达,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论FOXC2通过介导Hedgehog/Gli信号通路从而调控EMT促进乳腺癌侵袭及迁移,提示阻断该信号通路有望成为乳腺癌靶向治疗新线索。     

来那度胺通过抑制VEGF蛋白表达抑制人肝癌细胞LM3的迁移和侵袭

目的 研究来那度胺对人肝癌细胞LM3细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 采用不同浓度的来那度胺（0、5、10、20、40、80 μmol/L）处理人肝癌细胞LM3,通过检测对LM3细胞活性变化和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达量变化筛选最适实验药物浓度。通过划痕实验以及Transwell侵袭实验检测来那度胺对LM3细胞迁移率及侵袭数量的影响。采用蛋白印迹法（Western blotting）检测上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白标志物E-cadherin、Vimentin、Snail、VEGF的表达情况。结果 确定40 μmol/L来那度胺为最佳浓度。40 μmol/L来那度胺处理LM3细胞48 h后迁移率为（40.75±4.17）%,侵袭数为（43.67±9.03）,与对照组[迁移率（66.80±3.49）%,侵袭数（135.77±13.67）]比较具有统计学差异（P＜0.05）。在VEGF作用下LM3细胞发生EMT,迁移率（84.66±5.09）%和侵袭数（229.73±15.16）明显增加（均P＜0.05）;同时VEGF表达量也升高（P＜0.05）。而来那度胺作用于VEGF预处理细胞后,VEGF表达量下降（P＜0.05）,EMT受到抑制,随之迁移率（57.69±4.63）%和侵袭数（108.63±13.27）降低（P＜0.05）。结论 本研究表明,来那度胺可能通过抑制VEGF蛋白表达从而抑制人肝癌细胞LM3的迁移和侵袭。     

活化血管内皮生长因子受体1诱导肝癌细胞株MHCC97-H细胞上皮-间叶表型转化的分子机制

目的 探讨活化血管内皮生长因子受体1(VEGFR-1)诱导肝癌细胞株MHCC97-H细胞上皮-间叶表型转化(EMT)的分子机制.方法 将MHCC97-H细胞分为对照组(1％胎牛血清的DMEM培养)、PP2组(10 μmol/L PP2培养)、PBS组(10 μmol/L PBS培养)、VEGF-B组(50 μg/L的VEGF-B培养)、PP2+ VEGF-B组(10 μmol/L PP2和50 μg/L的VEGF-B培养)、PBS+ VEGF-B组(10 μmol/L PBS和50 μg/L VEGF-B培养).Westem blot法检测各组上皮标志物E-钙黏蛋白、α-连环蛋白和间叶标志物波形蛋白、N-钙黏蛋白的表达水平;细胞免疫荧光检测上述蛋白的表达部位;细胞侵袭和迁移试验检测各组MHCC 97-H细胞的侵袭和运动能力.组间比较采用t检验.结果 对照组、PP2组、PBS组、VEGF-B组、PP2+ VEGF-B组、PBS+ VEGF-B组的MHCC97-H细胞上皮标志物E-钙黏蛋白的表达分别为3.23±0.76、4.18±0.32、2.83 +0.65、2.06±0.15、6.12±0.08、1.36±0.54;α-连环蛋白的表达分别为3.01 +0.25、3.29+0.11、3.03±0.27、2.84+0.76、5.45±0.37、1.26±0.45;波形蛋白的表达分别为3.01±0.22、4.85±0.36、1.37±0.24、5.79±0.38、3.36±0.42、4.05±0.17;N-钙黏蛋白的表达分别为2.63±0.40、3.02±0.52、2.98±0.36、5.54±0.28、3.26±0.13、1.05±0.33.PP2组、PP2+ VEGF-B组的MHCC97-H细胞E-钙黏蛋白和α-连环蛋白表达明显上调,PP2+ VEGF-B组与VEGF-B组比较,差异有统计学意义(t=7.625,9.931,P＜0.05).PP2+ VEGF-B组的波形蛋白和N-钙黏蛋白的表达显著低于VEGF-B组(t=12.001,11.910,P＜0.05).VEGF-B处理6h后,VEGF-B组、PP2+ VEGF-B组、PBS+ VEGF-B组的MHCC97-H细胞迁移数量分别为19±l、5±2和16±1,VEGF-B组MHCC97-H细胞迁移数量显著多于PP2+ VEGF-B组(t=13.566,P＜0.05),PP2+ VEGF-B组中MHCC97-H细胞穿过Matrigel包被的改良侵袭小室的数量为4±2,显著少于VEGF-B组的16±l(t=12.350,P＜0.05).结论 VEGFR-1活化诱导MHCC97-H细胞发生EMT是由c-Src激酶信号转导通路介导的,c-Src作为该信号通路的关键因子之一可能是干预肝细胞癌侵袭和转移的有效靶点.     

microRNA-34a增加奥沙利铂对结肠癌细胞敏感性的实验研究

目的:构建奥沙利铂耐药结肠癌细胞株(SW480/ADR),观察miRNA-34a对SW480/ADR细胞奥沙利铂敏感性的影响。方法:使用浓度梯度法构建奥沙利铂耐药细胞株(SW480/ADR)。miR-34a慢病毒转染SW480/ADR细胞,MTT法检测细胞增殖,Real-time PCR定量检测miR-34a表达,Western blot检测蛋白表达。结果:SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞miR-34a的2-△△Ct值为0.15±0.03、0.12±0.02和0.74±0.13,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。奥沙利铂对SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞的IC50值分别为8.64±1.54、24.16±3.72和11.52±1.22μmol/L,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。SW480、SW480/ADR和过表达miR-34a-SW480/ADR细胞OCT-4蛋白的相对灰度值为0.096±0.014、0.352±0.053和0.136±0.017,各组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-34a可以显著降低结肠癌奥沙利铂耐药细胞OCT-4蛋白表达,逆转结肠癌细胞对奥沙利铂的耐药。     

微小RNA-195靶向调控Delta样配体4抗结直肠癌分子机制研究

目的观察微小RNA(microRNA,miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达,探讨其作用靶点,明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本,3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量,应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll43’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性,采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480,运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA),独立样本t检验比较蛋白表达量差异,统计学方法分别采用独立样本t检验、配对样本t检验及单因素方差分析。结果结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜,而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜,分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003)(t=3.116、2.374,P<0.05),差异均有统计学意义,体外转入miR-195后,Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002,t=4.305,P<0.01),差异有统计学意义,miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路,抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%,t=4.232,P<0.01),差异有统计学意义,诱导其凋亡(13.7%比48.3%,t=8.355,P<0.01),两者具有协同作用(t=7.474,P<0.01),差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。结论结直肠癌中miR-195及Dll4呈拮抗性表达,与其病理学特征密切相关,Dll4为miR-195调控的下游靶基因,miR-195通过负性调控Dll4/Notch信号通路抗结直肠癌。     

吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN表达的关系

目的 观察表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼对人结肠癌细胞的生长抑制作用,探讨这种作用与结肠癌细胞PTEN表达的关系.方法 应用体外药物敏感实验检测吉非替尼对6种人结肠癌细胞系的生长抑制作用;应用RT-PCR检测不同结肠癌细胞中PTEN mRNA水平;应用Western blot 检测结肠癌细胞中PTEN蛋白表达水平.结果 吉非替尼在体外对6种结肠癌细胞系的生长抑制作用差异很大(F=325.51,P＜0.05).吉非替尼作用浓度为1 μmol/L时,Lovo细胞系抑制率达34%,对吉非替尼最为敏感,其半量抑制浓度(IC50)＜10 μmol/L;HT29和SW480为中度敏感(10μmol/L＜IC50＜100 μmol/L);而HCT116、LS174T和SW620不敏感,其IC50＞100 μmol/L.各个细胞系中PTEN mRNA和PTEN蛋白均有表达.结论 吉非替尼对结肠癌细胞的生长抑制作用与PTEN mRNA和PTEN蛋白表达水平无明显相关,即PTEN表达状态还不能作为预测结肠癌对吉非替尼敏感性的可靠生物学指标.     

缺氧下调结肠癌细胞株CDX2表达的研究

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和基因系尾型同源盒基因2(CDX2)在人结肠癌细胞株SW480和LS174T不同缺氧时间的表达及其可能的作用机制。方法(1)MTT方法检测在不同CoCl2浓度(100,150,200μmol/L)下和不同时点(24,36,48 h)时对SW480和LS174T细胞活力以及增殖的影响,筛选适宜的CoCl2作用浓度。(2)在细胞化学缺氧培养相应时段,采用半定量RT-PCR技术检测HIF-1α,Snail和CDX2的mRNA的表达变化;同时采用Western blotting技术检测CDX2的蛋白表达。结果结肠癌细胞株在不同浓度CoCl2环境下随缺氧时间的延长,细胞活力明显受到抑制。在低浓度CoCl2(100μmol/L)干预下,随着缺氧时间的延长,HIF-1α和Snail mRNA表达逐渐上升,缺氧24 h时达到高峰,CDX2 mRNA及蛋白表达水平逐渐下降。结论缺氧诱导HIF-1α过表达可通过下调CDX2而加速结直肠癌的进展。