建立双抗原夹心酶免疫试验对人畜布鲁氏菌抗体检测的研究

目的为人畜布鲁氏菌病(布病)的血清学诊断、监测及流行病学调查提供特异、敏感、快速的试验方法。方法在制备高滴度的布鲁氏菌(布氏菌)抗原及其抗原辣根过氧化物酶结合物基础上。建立了检测人畜布氏菌抗体的双抗原夹心酶免疫试验(DAgS-EIA),包括常规双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)、双抗原夹心酶免疫斑点试验(DAgS-DIEA)以及快速双抗原夹心ELISA(快速DAgS-ELISA),并对影响本试验的主要因素因素进行了试验。结果制备了高滴度的布氏菌抗原及其抗原酶结合物和冻干制品。并在此基础上,建立了常规DAgS-ELISA及DAgS-DIEA以及快速DAgS-ELISA检测人畜布氏菌抗体方法。经对115份布病患者血清检测结果,阳性率以DAgS-ELISA为最高(61.7%),其余依次为RBPT(58.1%)I、-ELISA(55.6%)、DAgS-DIEA(53.7%)、及SAT(44.2%)且用DAgS-EIA检测布氏菌感染羊、牛、猪及实验动物家兔、豚鼠和小鼠均为强阳性反应,而对正常人、羊、牛、猪及实验动物血清均为阴性反应。结论双抗原夹心酶免疫试验检测人畜血清布氏菌抗体,不仅特异、敏感、快速、简便而且仅需制备单一的布氏菌抗原酶结合物就可对人及各类动物血清布氏菌抗体进行检测。     

双抗原夹心酶联免疫试验检测急性布鲁杆菌病患者抗体真实性观察

目的观察双抗原夹心酶联免疫试验(DAgS-ELISA)检测急性布鲁杆菌病(布病)患者的真实性,即灵敏度和特异度。方法以试管凝集试验(SAT)法为金标准,用DAgS-ELISA与虎红平板凝集试验(RBPT)、补体结合试验(CFT)以及间接酶联免疫试验(I-ELISA)对同一布病患者人群和对照组人群血清标本进行检测比较。结果真实性比较,与金标准SAT的符合率分别为:DAgS-ELISA 96.49%,RBPT 94.74%,I-ELISA 85.09%,CFT 72.81%;诊断效能比较,阳性和阴性预测值DAgS-ELISA分别为93.48%、98.53%,RBPT分别为88.00%、100%,CFT分别为100%、69.30%,I-ELISA分别为78.72%、89.55%。结论DAgS-ELISA检测急性布病患者的敏感性和特异性优于其他方法。     

用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验检测人畜布氏菌抗体的研究

目的摸索建立用布氏菌乳环抗原的血清学试验,以用于人畜血清中布氏菌抗体的检测。方法在制备并标化布氏菌乳环抗原的基础上,用此抗原分别做PAT、SAT、CAT、CFT、及DAgS-ELISA,同时与这些试验的常规方法对部分布氏菌感染的人畜血清及正常血清进行对比检测。结果5种常规血清学试验即RBPT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA与用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验即PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对部分布氏菌感染人畜血清进行对比检测,其阳性率分别为91.5%(65/71)、83.3%(60/72)、58.2%(39/67)、46.4%(26/56)、81.9%(59/72)以及94.4%(67/71)、83.3%(60/72)、56.7%(38/67)、54.5%(30/55)、80.6%(58/72)。并且对两种抗原的试验所得阳性率进行显著性差异检验,差异均无显著性。(χ2分别为0.220、0.000、0.950、0.360、0.005,P>0.05)。其所测抗体的几何平均滴度(GMT)分别为1∶121、1∶23、1∶6和1∶19以及1∶109、1∶23、1∶10和1∶19。结论用布氏菌乳环抗原不仅适用做MRT对布氏菌感染奶特异性抗体的检测,而且可用此种抗原PAT、SAT、CAT、CFT及DAgS-ELISA对人畜血清布氏菌抗体的检测。     

布鲁氏菌与耶尔森氏菌感染的鉴别诊断试验研究(Ⅱ)

目的 用PCR和酶联试验鉴别布氏菌与耶尔森氏菌感染。方法 以不同种布氏菌及不同型耶尔森氏菌分别感染动物，不同时间采样进行PCR和DAgS-ELISA及其他血清学方法进行检查。结果 两菌感染血清的SAT都出现了不同程度的交叉，RBPT及DAgS－ELISA几乎无交叉反应。布氏菌与耶尔森氏菌0：9型的B.abortus 36KD蛋白基因引物的PCR有明显交叉反应。结论 用RBPT或DAgS-ELISA对两菌感染的鉴别是有益的。用B.abortus 36KD蛋白基因引物的PCR鉴别两菌感染是困难的，而且有交叉扩增。     

双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测布氏菌抗原的实验研究

目的建立检测布氏菌抗原特异、敏感和快速的试验方法。方法在制备高滴度布氏菌抗体辣根过氧化物酶结合物及其冻干制品基础上，建立检测布氏菌抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(DAbS-ELISA)，包括常规DAbS—ELISA及快速DAbS-ELISA。用建立的两种DAbS-ELISA法对布氏菌菌体抗原及可溶性抗原进行有关其特异性及敏感性对比观察；同时对模拟的这些抗原污染的饮用水标本进行对比观察。结果常规DAbS—ELISA检测布氏菌544A、16M、133OS及104M的菌体抗原以及布氏菌16M可溶性抗原的敏感性分别为0．22万菌／ml、120万菌／ml、190万菌／ml、2万菌／ml和0．012μg／ml；用快速DAbS—ELISA法的敏感性分别为22万菌／ml、120万菌／ml、1900万菌／ml、20万菌／ml和1．2μg／ml；同时用这两种DAbS—ELISA检测上述抗原污染的饮用水标本其敏感性分别为0．22万菌／ml、1900万菌／ml、20万菌／ml和0．012μg／ml；以及22万菌／ml、120万菌／ml、1900万菌／ml、200万菌／ml和1．2μg／ml。而且这两种DAbS—ELISA法检测不含布氏菌抗原的所有对照均为阴性反应。结论双抗体夹心酶联免疫吸附试验是检测布氏菌抗原的特异、敏感、快速和适用的试验方法。     

酶联免疫吸附试验诊断布鲁氏菌病的研究

Carlesson 氏应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定牛种布氏菌抗体获得较好结果。ELISA 陆续用于人畜布氏菌病的诊断。目前,大多数作者认为,ELISA,检测布氏菌抗体,具有方法简便、快速、特异及灵敏等优点。但也有资料表明,本试验在检测抗体敏感性上还不及试管凝集试验。此外,关于 ELISA 检测布氏菌抗体类型以及对布氏菌病患者的诊断标准等,这在布氏菌病(简称布病)防治工作上仍是尚未解决的课     

免疫斑点法检测布氏菌病人血清中抗原的初步应用

免疫斑点试验是一种酶联免疫分析新技术,应用硝基纤维素纸结合蛋白质,比聚苯乙烯吸附牢固这一特点,来替代聚乙烯作固体载体,据报道,对实验动物绵羊布氏菌病的抗原检测,具有可靠性,特异性强,敏感性高等优点,但仍有操作烦杂,有非特异干优因素,目前用斑点——ELISA双抗夹心法检测病人血清抗原的报道甚少,作者以硝酸纤维膜(NC)作为载体,检测了36例布病患者及43例因S_2菌苗感染抗体阳性血清(同时作SAT和RBPT抗体测定为参考),结果如下。1 实验材料与方法 材料:硝酸纤维膜,直径0.4cm,北京化工学校附属工厂生产,包被抗体自制,以牛型104M布氏菌     

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4( ) 2份和1:16( )1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。     

应用间接酶联免疫吸附试验方法与常规方法诊断牛、羊布鲁氏菌病的比较试验

本试验应用虎红平板凝集试验方法、试管凝集方法、间接酶联免疫吸附试验方法对37份牛羊血清进行了布鲁氏菌病的检验，虎红平板凝集试验方法检出率最高，虎红平板凝集试验与试管凝集试验的结果符合率为94．59％，虎红平板凝集试验与间接酶联免疫吸附试验的结果符合率为81．08％，试管凝集试验与间接酶联免疫吸附试验的结果符合率为86.49％。试验表明间接酶联免疫吸附试验方法特异性较强，具有检测快捷、客观、准确等优点。     

酶标金葡菌A蛋白结合物用于猪种布病疫区人群血清流行病学检查的价值

本文介绍了应用HRP-SPA结合物,作为第二抗体做ELISA试验,用于猪种布病疫区人群血清流行病学检查。本方法重复性好,特异性强,敏感性高。用该法对猪种布病疫区1168份人血清进行检查,同时用布病血检常规(SAT、CFT、PAT、RBPT、AGT),进行对比检定,结果表明:无论对人猪种布病的诊断或疫区人群的普查,ELISA的阳性率都比SAT、CFT、RBPT、PAT、AGT高。ELISA与SAT的符合率为92.6％。发现ELISA与SAT之间有良好的正相关;HRP-SPA结合物与HRP-兔抗人IgG结合物敏感性、特异性相似。认为利用HRP-SPA作为第二抗体的ELISA技术,无论对人猪种布病的诊断或疫区人群进行大规模血清流行病学检查都是适用的,有推广的价值。     

布病特异性血清学检测技术应用概述

布病是由布鲁菌属细菌侵入机体引起的传染-变态反应性疾病。目前,该病在世界范围内广泛流行,主要侵犯人类、家畜及其它多种动物,部分人或动物感染后并无明显临床表现,不能为临床布病确诊提供可靠依据。因此,准确、快速的检测诊断是预防和控制布病的关键环节。本文就目前国内外用于布病检测诊断的方法平板凝集试验(PAT)、琥红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、荧光偏振试验(FPA) 、免疫胶体金技术(GICA)等特异性血清学检测技术予以概述。     

2005-2008年贵州省人间布鲁杆菌病监测结果分析

目的 分析贵州省人间布鲁杆菌病(简称布病)监测结果,了解相关人群布鲁杆菌感染现状,为制定预防控制措施提供依据.方法 2005-2008年,根据《布鲁杆菌病监测标准》(GB 16885-1997),在贵州省选择花溪、乌当、兴义、独山、册亨、龙里、息烽、凯里和紫云等区(市、县)为监测点,选择畜牧业职业人群、农区接触家畜的农民和学生为监测对象,采用虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)检测布病抗体.结果 2005-2008年贵州省布病抗体检出率为0.63％(37/5904),花溪、乌当、兴义和册亨等县(市、区)的布病抗体检出率分别为2.28％ (19/832)、0.16％(2/1274)、1.84％(15/815)和0.14％( 1/735);畜牧业职业人群、农区接触家畜的人群、学生布病抗体检出率分别为1.29％(36/2800)、0.04％(1/2814)、0％(0/290).布病抗体阳性者以奶牛养殖人员为主,占总感染人数的83.78％( 31/37).结论 贵州省部分县(市、区)养殖奶牛、山羊的人群存在布鲁杆菌感染,直接接触病畜是人间布病主要的传播途径.加强对牲畜的检疫和及时处理染疫病畜是布病防治工作的关键.     

青藏高原喜马拉雅旱獭布鲁氏菌病血清流行病学调查分析

目的 检测青海省喜马拉雅旱獭布鲁氏菌抗体,确定青海喜马拉雅旱獭布鲁氏菌病的地理分布.方法 采用描述性流行病学研究中的现况调查方法,选取青海省人、畜布鲁氏菌病流行地区,有喜马拉雅旱獭栖息的部分县(市),采集青藏高原喜马拉雅旱獭血样,采用胶体金免疫层析技术(GICA)、虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SA T)...     

Case report: Brucellosis: a re-emerging disease in Thailand

Brucellosis is a zoonotic disease prevalent in many countries, but it has been reported only once in Thailand, 36 years ago. We describe here two consecutive cases of brucellosis in Bangkok, Thailand. Both cases presented with prolonged fever and weight loss. Blood cultures taken from 2 patients yielded Brucella melitensis. The slide agglutination test of blood samples were also positive, with a titer of 1:64 for antibodies to Brucella. The first patient responded to a combination of doxycycline, gentamicin, and ciprofloxacin; the other responded to doxycycline and rifampicin. Brucellosis is a potential public health threat, therefore, preventive measures should be actively implemented. This clinical syndrome should be included in the differential diagnosis of patients presenting with prolonged fever, particularly those with contact to animals which could serve as reservoirs.     

2003-2006年唐山市人间布鲁杆菌病血清流行病学分析

目的 了解2003-2006年唐山市人间布鲁杆菌感染状况及其流行病学特征.方法 采集有牛羊接触史人群(422例)、疑似病例(22例)和部分与感染者密切接触人员(41例)的血清共485人份,进行虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT),根据血清学检验和流行病学调查结果进行病例诊断.结果 2003-2006年唐山市布鲁杆菌病抗体阳性检出率分别为8.8%(12/137)、12.7%(8/63)、13.1%(22/171)、16.2%(19/114),呈逐年上升趋势.2、3季度呈现明显的感染发病高峰,占总感染人数的77.0%(47/61).有明确的牛羊接触史人员占总感染人数的98.4%(60/61).职业分布上,以牛羊养殖人员为主,占总感染人数的86.9%(53/61),均为散养户人员,其次是兽医,占总感染人数的8.2%(5/61).与感染者密切接触人员抗体均为阴性.结论 唐山市部分县(区)人间布鲁杆菌病发生在高危人群中呈上升趋势,直接接触病畜尤其病畜流产物或胎盘足人间布鲁杆菌病主要的传播途径,但尚未发现布鲁杆菌病在人与人之间传染.     

2006-2010年青海省人间布鲁杆菌病调查分析

目的 分析青海省布鲁杆菌病(简称布病)的流行特征及其影响因素,为制订布病防制对策提供科学依据.方法 2006- 2010年,选择青海省布病高发地区以及青海省中央补助地方公共卫生专项资金人间布病预防控制项目的5个县(河南县、达日县、天峻县、平安县、海晏县)为调查点,同时对青海省生物药品厂高危从业人员进行调查.对调查对象进行布鲁杆菌素皮内变态反应试验,同时按知情同意原则,采集血清,做虎红平板凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT).按《全国人间布鲁氏菌病监测方案(试行)》中的调查表进行流行病学调查,询问流行病学接触史,结合临床症状和体征,按照《布鲁氏菌病诊断标准及处理原则》(GB 15988-1995)和《布鲁氏菌病诊断标准》(WS 269-2007)进行检测确诊病人.结果 在被检测的8368份血清样品中,RBPT检出阳性347份,阳性率为4.15％;SAT检测血样5346份,阳性180份,阳性率为3.37％.2009年6月对青海省生物制药厂进行跟踪调查,全厂共调查112人份,RBPT检出阳性83份,阳性率为74.11％,SAT检出阳性58份,阳性率为51.79％,确定布病新发病人8例,布病慢性期病人4例.2006 - 2010年青海省报告新发布病25例,发病高峰为每年的3-7月份,病例以牧民为主.结论 加强动物检疫,强化宣传教育、提高防护意识,可切实控制布病疫情.     

布鲁氏菌病快速检测试纸条的探索

目的 建立一种操作简单、结果肉眼可视,并具有良好敏感性和特异性的适合现场快速检测布鲁氏菌病的胶体金层析方法。方法 将重组的布鲁氏菌外膜蛋白OMP22和OMP28作为胶体金标记物,抗OMP22单克隆抗体作为质控线,OMP22和OMP28蛋白作为检测线组装试纸条。结果 该试纸条检测牛布鲁氏菌标准阳性血清最大稀释度可达1:128;并且与牛结核、蓝舌病、牛病毒性腹泻、口蹄疫、牛白血病及小反刍兽疫血清无交叉反应;检测牛、羊源血清样品结果与商品化的ELISA检测试剂盒(IDEXX)符合率为95%,与虎红平板凝集试验(RBPT)检测的符合率为97.4%。结论 胶体金层析试纸条在检测布鲁氏菌病方面具有快速、敏感性高及特异性强的特点,适用于布鲁氏菌病动态流行病学调查和临床快速筛查。     

浙江省鄞州区级布鲁氏菌病监测结果分析

目的分析鄞州区布鲁氏菌病监测结果,了解相关人群中发病现状。方法选择包括在职职业人群、离岗职业人群及其他相关人群作为监测对象,采用血清学方法进行监测。结果2005-2007年期间对806人次的监测,共检出虎红试验阳性者7例,试管凝集试验阳性者2例,阳性率分别为0.87%和0.25%。首次在离岗职业人群中发现布鲁氏菌病病人。从事或曾从事兽医的非专业人员,其布病血清学阳性率高于普通工人(OR=6.027,95%CI:1.152~31.525)。结论离岗职业人群中也可能存在布鲁氏菌病病人,为此有必要适当扩大监测人群的范围。监测资料同时显示,非专业人员的兽医职业史可能是布鲁氏菌病感染的危险因素。     

胶体金免疫层析技术在羊布鲁氏菌病的检测应用

目的 了解胶体金免疫层析技术(GICA)检测布鲁氏菌病血清的效果。方法 选择格尔木送检的299份羊血清,分别采用GICA、虎红试管凝集试验(RBPT)和试管凝集试验(SAT)3种方法进行布病检测,分析3种方法检测结果的一致性。结果 3种方法的检测结果进行两两对比后,RBPT与 SAT的一致性检验结果kappa值为0.972(χ²=282.563,P<0.001);GICA与SAT的一致性检验结果kappa值为0.940(χ²=256.577,P<0.001)。结论 说明GICA的实验结果与SAT的实验结果具有高度一致性。