抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的 制备抗恶性疟原虫EBA-175的单克隆抗体(McAb),为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法 以恶性疟原虫EBA-175(II区F2段)重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westernblot试验分析其特异性。结果 筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4A1、4C3、4H9,6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1,1株为IgG2a,6株McAb的培养上清ELISA效价为1:256~1:512,腹水效价为1:12800~1:25600,间接ELISA显示其中4株McAb1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合,而只有1F3、4A1、4H9在Westernblot试验中识别恶性疟原虫M_r约35000的虫源蛋白。结论 获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp）单克隆抗体（McAb）,并对其特异性进行鉴定,用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA、Westen blotting试验分析其特导性。结果,制备出2A5和 1H10两株能稳定分泌抗LDHp　McAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1:512和1:256,腹水效价分别为1:25600和1:12800,两株单抗与间日疟、红细胞、弓形虫、日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

轮状病毒单克隆抗体的研究和鉴定

运用杂交瘤技术,制备出7株分泌抗人轮状病毒短型S_2株单克隆抗体的杂交瘤,其中6株分泌IgG_(2a),1株分泌IgG_(2b)抗体。7株杂交瘤培养上清的免疫荧光抗体(IFA)滴度为1:32～256,腹水IFA滴度为1:8000～25600。双夹心ELISA腹水抗体滴度达10~(-4)～10~(-6)。7株McAb均与HSV、CMV、RSV、ADV等其它常见病毒无交叉反应。7株McAb均能与HRV长型Wa株反应,滴度为10~(-3)～10~(-6)。将其中二株或数株McAb混合后用ELISA检测其相应的OD值较每一单株为高,但相加指数(AI)值均在10%左右。结果表明,7株McAb均属RV群特异性抗体,但各自作用的抗原决定簇可能稍有差异。     

风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒（RV）Gos-10株免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与Sp2/0细胞融合，用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株，经克隆培养后发现其中的1A9株能稳定分泌高效价特异性McAb，经鉴定为IgG2a，经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验证明该McAb是种特异性的，能与各株RV发生交叉反应，而与其它种病毒不发生反应，证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性，可用以制备诊断试剂，实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。     

抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体的研究——12株杂交瘤细胞的建立及其分泌抗体的分析

本文报道12株分泌抗乙型肝炎病毒表面抗原单克隆抗体(HBsAg McAb)杂交瘤细胞的建株及其 McAb 性质的分析结果,用 ID、CEP、PHA 和 ELISA 等四种方法均测得较高水平的McAb。杂交瘤细胞培养液中 McAb 的 PHA 效价为1:80～1:320,由杂交瘤诱生的小鼠腹水 McAb的 ID 和 CEP 效价可高达1:3,200～6,400,PHA 和 ELISA 滴度分别为10~(-4)～10~(-5)和10~(-5)～5×10~(-7)。将这些腹水以 PBS 稀释到 10~(-5),分别与~(125)I-HBsAg(2×10~4cpm)结合,其结合率为52.8～68.4%.12个 McAb 的特异性均良好,其中1个为抗“HBs/d”亚型抗体,其余的均为抗“HBs/a”型特异性抗体。这些 McAb 均属小鼠 IgG_1亚类。选出其中3个 McAb 用于制备 HBsAg 诊断试剂,获得良好结果。     

抗恶性疟原虫EBA-175单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的制备抗恶性疟原虫EBA—175的单克隆抗体（McAb），为恶性疟原虫的诊断及疫苗研究奠定基础。方法以恶性疟原虫EBA-175（Ⅱ区F2段）重组抗原免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb，间接ELISA筛选分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株．测定其免疫球蛋白亚类及其效价，ELISA、Western blot试验分析其特异性。结果筛选获得6株稳定分泌抗重组EBA-175McAb的杂交瘤细胞株1F3、2E8、2H5、4Al、4C3、4H9，6株McAb经鉴定其亚类5株为IgG1，1株为IgG2a，6株McAb的培养上清ELISA效价为1：256～1：512，腹水效价为1：12800-1：25600，间接ELISA显示其中4株McAb 1F3、2H5、4A1、4H9能与恶性疟原虫抗原发生特异性结合，而只有1F3、4A1、4H9在Western blot试验中识别恶性疟原虫Mr约35000的虫源蛋白。结论获得了能稳定分泌高特异性抗EBA175McAb的杂交瘤细胞。     

应用ELISA筛选脊髓灰质炎病毒单克隆抗体及其抗原分析

在Ⅲ型Polio病毒McAb的研究中,用ELISA法筛选出60株阳性杂交瘤细胞系,其中11株中和试验阳性。ELISA试验型特异的McAb有10个,中和试验型特异的McAb有5个。McAb C_(36)和C_(50)只能与疫苗株和类疫苗株起中和反应而不能与非类疫苗株病毒起反应。因而这二株McAb具有区分Ⅲ型Polio野毒株与疫苗株相关病毒株的能力。另外应用McAb初步分析了17株Polio Ⅲ型病毒的抗原性。     

兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体的制备及鉴定

目的建立能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌（Bb）的单克隆抗体杂交瘤细胞株,为今后进一步建立该菌的免疫检测技术奠定基础。方法以Bb分离株BLJ05的灭活菌液为免疫原,腹腔免疫BALB/c小鼠,采用常规杂交瘤技术制备Bb单克隆抗体（McAb）,用间接ELISA、Western-blot等方法对McAb特性进行鉴定。结果获得两株能稳定分泌抗Bb单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为A7D5和D6B2,其小鼠腹水抗体效价分别为1∶409600和1∶102400;且不与兔大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌、产气荚膜梭菌等兔的常见病原菌反应,特异性强。两株单抗亲和力实验表明A7D5亲和力略高于D6B2。ELISA相加试验表明它们针对相同的抗原表位。结论成功建立了两株能稳定分泌抗兔支气管败血波氏杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,效价高、特异性强,为今后建立该菌的免疫检测技术建立奠定了基础。     

A组轮状病毒检测方法的研究及初步应用

用自制的 A 组轮状病毒(RV)共同组抗原 McAb.建立了检测 A 组 RV 的两种新方法(RIHA,OS),并与 RT 和 PAGE 法进行了比较。结果显示,这两种方法实用性强,特异性好,方法简便、快速,便于推广.54例疑为 RV 感染的婴幼儿粪样,用四种方法进行测定,阴、阳性总符合率为90.7%(49/54)。RIHA,OS 与 PAGE 法的符合率均为96.2%,经统计学处理 P 均>0.05.表明三种方法之间差异不显著.RIHA,OS 可作为 A 组 RV 快速诊断之用。但 RV McAb(2C_7)为识别 A 组 RV 共同组抗原的 McAb,故不能区别 A 妇 RV 的亚组及血清型.     

风疹病毒单克隆抗体的研究

用风疹病毒(RV)Gos-10株免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞融合,用ELISA法筛选分泌RV McAb的杂交瘤细胞6株,经克隆培养后发现其中的1A_9株能稳定分泌高效价特异性McAb,经鉴定为IgG2a,经ELISA检测、抗原吸收试验、中和试验及HI试验征明该McAb是种特异性的,能与各株RV发生交叉反应,而与其它种病毒不发生反应,证明此McAb对RV抗原有高度特异性与敏感性,可用以制备诊断试剂,实现风疹的早期、快速诊断和基础理论研究。