硅纳米载体携带RNA干扰质粒逆转人结肠癌细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨硅纳米颗粒作为基因转染载体携带干扰质粒MRP2siRNA逆转人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP的多药耐药,为硅纳米作为靶向基因治疗和化疗药物的有效性打下基础. 方法 制备硅纳米载体,用硅纳米载体和脂质体分别将多药耐药基因MRP2的干扰重组质粒pGensil-MRP2siRNA,转染人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP,观察两种载体转染人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP后绿色荧光的表达,利用RT-PCR和Western-blot检测MRP2的表达,CCK-8实验测定转染干扰质粒后顺铂对人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP细胞增殖抑制作用,并比较两种载体的逆转效率. 结果 在人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP中,两种载体携带的siRNA都明显抑制了MRP2 mRNA及蛋白的表达,两种载体逆转效果差异无统计学意义（P＞0.05）.在相同浓度化疗药物的作用下,两种载体的RNA干扰组细胞凋亡比例显著高于对照组（P＜0.01）,表明细胞耐药性显著下降,两种载体细胞凋亡差异无统计学意义（P＞0.05）. 结论 硅纳米能有效的携带pGensil-MRP2siRNA质粒转染人结肠癌细胞人结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP,并且对结肠癌耐药细胞的MRP2的表达有明显抑制作用,取得良好的逆转耐药效果.     

三氧化二砷对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402作用相关机制的研究

目的研究As2O3诱导多药耐药人肝癌细胞Bel-7402/VCR凋亡及相关基因表达的情况。方法MTT法观察细胞生长和对VCR敏感性,应用形态学手段和流式细胞术检测细胞凋亡,应用免疫组织化学研究多药耐药相关基因表达的影响。结果As2O3对Bel-7402/VCR及Bel-7402细胞的生长抑制均呈明显的量效关系;Bel-7402/VCR及Bel-7402凋亡细胞百分比随着As2O3作用时间延长和作用浓度的增加明显增加;As2O3对Bel-7402/VCR及Bel-7402MDR1阳性表达率为81.6%和80.2%。结论As2O3在体外表现出较强的逆转肝癌多药耐药性作用。     

三氧化二砷对人肝癌多药耐药细胞Bel-7402作用相关机制的研究

目的研究As2O3诱导多药耐药人肝癌细胞Bel-7402／VCR凋亡及相关基因表达的情况。方法MTT法观察细胞生长和对VCR敏感性,应用形态学手段和流式细胞术检测细胞凋亡,应用免疫组织化学研究多药耐药相关基因表达的影响。结果As2O3对Bel-7402／VCR及Bel-7402细胞的生长抑制均呈明显的量效关系;Bel-7402／VCR及Bel-7402凋亡细胞百分比随着As2O3作用时间延长和作用浓度的增加明显增加;As2O3对Bel-7402／VCR及Bel-7402MDR1阳性表达率为81．6％和80．2％。结论As2O3在体外表现出较强的逆转肝癌多药耐药性作用。     

重复加热对肝癌HepG2细胞多药耐药相关蛋白表达的影响

目的：探讨多次加热后对残存的肝癌HepG2细胞的多药耐药相关蛋白（MRP）基因／蛋白表达的影响。方法：HepG2细胞43℃加热，每次80min，2次／d，10个循环后，MTT法分析其对阿霉素的敏感性，免疫组化法检测细胞MRP蛋白的表达，RT-PCR法检测细胞MRP mRNA的表达。结果：热处理后的HepG2细胞对阿霉素产生化疗耐受性升高，MRP基因／蛋白的表达增强。结论：热处理后HepG2细胞对化疗药物的耐受性可能与其MRP基因／蛋白的表达增强有关。     

人食管癌顺铂耐药细胞系的建立及耐药相关基因的筛选

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,并初步探讨其耐药机制。方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇冲击作用方法历时9mon诱导人食管癌细胞系Ec9706,建立相应耐药细胞系,采用MTT法测定耐药细胞系对cD-DP的耐药指数,用RT-PCR半定量方法测定亲本细胞及耐药细胞耐药相关基因如DNA聚合酶(polβ)、多药耐药相关基因(MRP)、谷胱甘肽转移酶(GST)、二氢叶酸还原酶(DHFR)、拓扑异构酶(TPO)和多药耐药基因(mdr1)等基因的mRNA表达水平。结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,该细胞系中polβ、DHFR、GST基因mRNA的表达比亲本细胞显著增加,TPO的表达降低,而mdr1、MRP表达的增加无显著统计学意义。结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,其耐药性的产生与polβ、GST、DHFR、TPO等基因的异常表达有关,而与mdr1、MRP表达的关系不密切。     

不同RNAi对肝癌耐药细胞MDR1基因表达抑制作用比较

[目的]探讨应用RNAi技术抑制肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制作用以及对P-糖蛋白(p-gp)表达和功能的抑制作用. [方法]根据MDR1基因序列,设计并体外转录合成2条siRNA(small interfering RNA),用脂质体转染将其导入细胞内.应用MTT检测转染后癌细胞生长增殖情况,用MTT法测定细胞对化疗药物阿霉素(ADM)的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)表达和细胞内罗丹明(Rhdamingl23,Rh123)的潴留. [结果]转染sh-MDR1-1和sh-MDR1-2可显著抑制两株耐药细胞MDR1 mRNA和P-gp的表达.细胞内的Rh123稳态积累量均明显增高;第1条序列更能有效的抑制MDR1基因表达. [结论]sh-MDR1-1特异性siRNA可更强的抑制肝癌耐药细胞MDR1基因表达.     

姜黄素对人骨肉瘤细胞株/阿霉素多药耐药逆转作用的实验研究

目的观察姜黄素对多药耐受糖蛋白(P-gp)介导的人骨肉瘤细胞株/阿霉素(U-2OS/ADM)细胞多药耐药(MDR)的逆转作用。方法以阿霉素为诱导药物,人骨肉瘤细胞系U-2OS为诱导对象,采用大剂量冲击法建立人骨肉瘤多药耐药细胞系模型(U-2OS/ADM),采用MTT法检测姜黄素作用于U-2OS/ADM细胞前后对化疗药物的逆转;流式细胞仪检测细胞内罗丹明-123积聚和外排的影响。结果 MTT显示姜黄素20μmol/L能增加不同浓度阿霉素对U-2OS/ADM细胞的抑制作用(P<0.01),且姜黄素对阿霉素为2.0μg/ml时的U-2OS/ADM细胞抑制作用增加幅度达49%。FCM结果显示,姜黄素能增加阿霉素对U-2OS/ADM的细胞毒性作用,且呈剂量依赖关系。结论姜黄素可有效逆转U-2OS/ADM细胞的多药耐药现象的作用。     

稳定转染CDK2干扰RNA的人肝癌HepG2细胞系的建立

目的建立稳定转染CDK2干扰RNA的人肝癌HepG2细胞系。方法用Lipofectamine^TM 2000法将已构建好的特异性的携带绿色荧光蛋白的CDK2干扰RNA的重组质粒P^Genesil-1-CDK2转染入HepG2细胞，经G418筛选后获得稳定转染细胞株，并用倒置荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白，利用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测转染后的HepG2细胞CDK2 mRNA的表达。结果倒置荧光显微镜观察与KT-PCR检测，结果显示获得重组质粒P^Genesil-1-CDK2稳定转染的细胞克隆。结论建立了可稳定转染CDK2干扰RNA的人肝癌HepG2细胞系，为进一步研究细胞周期调控蛋白激酶对肝细胞癌的治疗与开发新的特异性药物提供了实验依据。     

岩舒对人大肠癌细胞株HCT8/VCR多药耐药的逆转作用及P糖蛋白表达的影响

目的研究岩舒对大肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR的逆转作用及P糖蛋白(P-gp)表达的影响。方法 MTT法测定岩舒含药血清对HCT-8/VCR细胞株的逆转作用,并以流式细胞仪测定P-gp的表达。结果经岩舒含药血清作用72 h后,HCT-8/VCR细胞株对化疗的耐药性显著下降,对长春新碱逆转指数为0.893±0.085,其逆转倍数大于13.7倍,与维拉帕米比较无统计学差异(p>0.05)。HCT-8/VCR细胞的P-gp表达显著高于HCT-8(p<0.01),经岩舒含药血清作用后P-gp表达显著降低(p<0.01)。结论岩舒可以逆转人大肠癌耐药细胞株HCT-8/VCR的多药耐药性,其机制可能与其下调P-gp的表达有关。     

二十二碳六烯酸联合5-氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2耐药相关蛋白表达的影响

目的研究二十二碳六烯酸(DHA)联合5氟尿嘧啶(5-FU)对人肝癌细胞HepG2耐药相关蛋白ERK、JNK及p38的表达。方法 Western blot检测5-FU5μg/mL,或5-FU5μg/mL联合DHA30μg/mL作用HepG2细胞48h后ERK、JNK及p38蛋白表达。结果与单用5-FU组比较,5-FU联合DHA组对耐药相关蛋白的影响,p-ERK明显受到抑制,而p-JNK表达显著增加,p-p38表达无差别。结论 DHA对肝癌细胞耐药相关蛋白的调控可能通过抑制ERK、激活JNK信号通路来增强5-FU的细胞毒活动,发挥增敏化疗药物的作用。