HCTB006联合5-FU对胃癌细胞系MKN28、7901的作用及其机制

目的:探讨肿瘤坏死因子相关诱导配体受体(DR5)的单克隆抗体HCTB006联合5-FU对人胃癌细胞系7901、MKN28的作用以及机制.方法:用ATPlite法检测HBCT006单药组、5-FU单药组及两药物合用对胃癌细胞存活率的影响,研究两者之间的关系;采用流式细胞技术检测胃癌细胞系7901以及MKN28表面DR5的表达水平;Westernblot检测上述3组用药后胃癌细胞内XIAP,caspase3的变化.结果:胃癌细胞系7901、MKN28对HCTB006不敏感;5-FU对二者的增殖抑制作用具有时间以及浓度依赖效应;联合用药组具有很好的协同抑制胃癌细胞系增殖的效果,且具有浓度依赖效应,与给药次序无关.流式细胞技术检测胃癌细胞系7901,MKN28表面死亡受体DR5的表达依次为:93.8%以及87.7%.免疫迹印结果表明,联合用药组可以引发胃癌细胞内凋亡抑制蛋白XIAP的降解,激活最终凋亡执行蛋白caspase3,引起细胞死亡.结论:HTB006与5-FU联合应用具有协同杀伤胃癌细胞的作用.胃癌细胞7901、MKN28对于HCTB006的敏感程度与细胞表面DR5的表达量不相关;联合用药作用机制可能与细胞内抑制凋亡蛋白XIAP降解有关.     

5-FU增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究

目的 观察5-FU对TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的影响,明确死亡受体5(DR5)在5-FU和TRAIL诱导凋亡中的作用.方法 采用MTT法测定细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡、免疫印迹检测蛋白表达.结果 TRAIL可导致BGC823细胞轻度的增殖抑制和少量的细胞凋亡.与单药TRAIL和5-FU相比,TRAIL联合5-FU对细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强(P＜0.05).免疫印迹结果显示,TRAIL没有改变DR5的蛋白表达,而5-FU作用BGC823细胞48 h后,DR5蛋白表达上调(P＜0.05).TRAIL和5-FU联合作用后,DR5蛋白表达同样明显上调(P均＜0.05).结论 5-FU通过上调DR5蛋白表达提高了BGC823细胞对TRAIL的敏感性.     

MicroRNA-133a在5-氟尿嘧啶促进胃癌细胞BGC823及SGC7901细胞凋亡中的功能研究

[目的]研究microRNA-133a(miR-133a)在5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导胃癌细胞BGC823及SGC7901凋亡中的作用。[方法]用荧光定量PCR检测经5-Fu(IC50值)处理过胃癌细胞miR-133a的表达;构建过表达miR-133a的胃癌细胞株并行细胞增殖、细胞流式验证miR-133a的生物学功能;5-Fu分别处理过表达及敲低miR-133a的胃癌细胞株后,行细胞增殖、细胞流式、Western Blot观察细胞生长及凋亡情况。[结果]5-Fu诱导BGC823及SGC7901内源性miR-133a的表达(50%,P0.0001,24h),miR-133a促进胃癌细胞凋亡,敲低miR-133a可以抑制5-Fu对胃癌细胞的促凋亡作用。[结论]5-Fu通过诱导胃癌细胞BGC823及SGC7901内源性miR-133a的表达,促进胃癌细胞凋亡。     

紫杉醇对TRAIL诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响。方法采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡、Western blot检测蛋白表达。结果在胃癌SGC7901细胞中,100 ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL（100 ng/ml）联合紫杉醇（7.19μg/ml,24 h的IC50剂量）引起明显的细胞增殖抑制和诱导凋亡作用（P〈0.05）。TRAIL单药没有改变死亡受体5（DR5）的蛋白表达,而7.19μg/ml紫杉醇作用于胃癌SGC7901细胞后明显上调了DR5的蛋白表达。TRAIL和紫杉醇联合作用后,也有DR5蛋白的明显上调。结论紫杉醇通过上调DR5的蛋白表达增强了TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡。     

miR-204在胃癌组织中的表达及对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-204在胃癌组织中的表达与临床病理参数的关系及其对胃癌细胞凋亡的影响。方法接受手术治疗的胃癌患者53例,收集手术切除的胃癌组织作为胃癌组标本,并收集其癌旁(3 cm)正常组织作为对照组标本,同时培养人胃癌细胞株(BGC823、SGC7901)和永生化胃上皮细胞株(GES-1)。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测胃癌组标本、对照组标本、BGC823、SGC7901、GES-1细胞株中的miR-204表达,分析胃癌组组织miR-204相对表达量与临床病理参数的关系,对部分BGC823、SGC7901细胞株进行转染miR-204,对比转染miR-204组与未转染miR-204组的BGC823、SGC7901细胞株的细胞增殖和细胞凋亡情况。结果胃癌组标本中的miR-204相对表达量明显低于对照组标本中miR-204的相对表达量(P0.05)。BGC823细胞株和SGC7901细胞株中的miR-204相对表达量明显低于GES-1细胞株中的miR-204相对表达量(P0.05)。胃癌组组织标本中miR-204相对表达量与患者的年龄、性别无关(P0.05),与TNM分期、淋巴结转移、分化程度有关(P0.05)。第3天的BGC823、SGC7901细胞株中,未转染组的吸光度高于转染miR-204组(P0.05),未转染组的细胞凋亡百分比显著低于转染miR-204组(P0.05)。结论 miR-204在胃癌组织以及胃癌细胞株中呈现低表达,且其表达与TNM分期、淋巴结转移以及分化程度有关,转染miR-204后能抑制胃癌细胞株的细胞增殖,并能促进其细胞凋亡。     

5-Aza-CdR对胃癌细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响

目的:观察5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycitydine,5-Aza-CdR)对体外培养的胃癌SGC7901细胞和BGC823细胞增生、细胞周期和凋亡的影响及其对此两株细胞中Apaf-1基因的甲基化状态的影响.方法:不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养的SGC7901细胞和BGC823细胞后,用MTT法检测处理24,48和72 h的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理后72 h细胞周期分布和细胞凋亡率;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT-PCR法及Western blot法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA及蛋白表达的变化.结果:1×10-7,5×10-7,1×10-6和5×10-6 mol/L5-Aza-CdR处理SGC7901和BGC823细胞24,48,72 h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量的依赖性.流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72 h后凋亡率增加明显:SGC7901细胞5×10-7,1×10-6和5×10-6 mol/L组分别为2.53%±1.19%,5.93%±0.86%,10.14%±1.51%,与对照组(0.12%±0.03%)相比差异显著(P＜0.05);BGC823细胞5×10-7,1×10-6和5×10-6 mol/L组分别为1.57%±0.26%,4.64%±1.05%,8.21%±1.46%,与对照组(0.57%±0.03%)相比差异显著(P＜0.05).在5-Aza-CdR处理前未检测到SGC7901细胞系及BGC823细胞系的Apaf-1基因的mRNA及蛋白表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在SGC7901细胞系及BGC823细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA及蛋白重新表达.结论:5-Aza-CdR对SGC7901细胞和BGC823细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关.     

RNA干扰FLOT2基因表达下调NF-κB信号对胃癌细胞凋亡诱导作用研究

目的 探讨RNA干扰FLOT2基因表达对胃癌细胞凋亡及NF-κB信号的影响。方法 Western blotting检测人胃癌BGC823、SGC7901和MKN28细胞中FLOT2蛋白表达。BGC823细胞分为空白组、阴性组和si-FLOT2组,参照脂质体Lipofectamine~(TM)2000将siRNA转染细胞,细胞转染48 h,Western blotting检测FLOT2、NF-κB p65、IKK-β、p-IKK-β和Bax的蛋白表达。流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 BGC823、SGC7901和MKN28胃癌细胞中FLOT2蛋白表达均显著高于人正常胃黏膜上皮细胞GES1(P0.05)。转染si-FLOT2的BGC823细胞FLOT2蛋白表达显著低于空白组(P0.05)。与空白组比较,si-FLOT2组细胞凋亡率显著升高,NF-κB p65、IKK-β和p-IKK-β蛋白表达显著降低,Bax蛋白表达显著升高(P0.05)。结论 RNA干扰FLOT2基因表达可诱导胃癌细胞凋亡,机制可能与下调NF-κB信号通路有关。     

长链非编码RNA核仁小分子RNA宿主基因1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨长链非编码(lnc)RNA核仁小分子RNA宿主基因(SNHG)1在胃癌中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和侵袭过程的影响。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SNHG1在胃癌细胞SGC7901、BGC823和正常胃上皮细胞NGEC中的表达水平及采用SUHG1的小干扰RNA(si-SNHG1)干扰后SNHG1的表达水平;噻唑蓝(MTT)法检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞增殖的影响,Transwell小室检测沉默SNHG1对SGC7901、BGC823细胞侵袭能力的影响。Western印迹法检测沉默SNHG1前后增殖标志物Ki67和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9在SGC7901、BGC823中的表达变化。结果 SNHG1在胃癌细胞株中的表达显著高于正常胃上皮细胞株(P0.05);沉默SNHG1能显著抑制Ki67、MMP-2、MMP-9的表达。结论 lncRNA SNHG1在胃癌细胞中高表达,沉默SNHG1对胃癌细胞的增殖、侵袭起抑制作用,SNHG1可能成为治疗胃癌的一个有效靶点。     

survivin基因shRNA真核表达载体的构建及其对人胃癌细胞株中survivin表达的影响

背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,在胃癌组织中高表达。目的:构建survivin基因短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并观察其对人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中survivin表达的影响。方法:根据GenBank中survivin基因序列设计并合成能转录shRNA的双链DNA序列,插入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因和U6启动子的真核表达载体pRNAT-U6.3中,构建重组载体pRNA-shSUR。重组载体经鉴定后转染胃癌细胞株BGC823和SGC7901,以转染pRNA-shControl作为阴性对照。荧光显微镜下观察转染情况,蛋白质印迹法检测survivin蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测胃癌细胞凋亡情况。结果:成功构建了针对survivin基因的shRNA表达载体。转染胃癌BGC823和SGC7901细胞48 h后,与阴性对照组相比,pRNA-shSUR组GFP表达增强,survivin蛋白表达受到明显抑制(P<0.05),胃癌细胞早期凋亡率明显增加。结论:成功构建靶向survivin基因的特异性shRNA真核表达载体,转染胃癌细胞后可抑制survivin蛋白表达并促进细胞凋亡,为进一步研究survivin基因与胃癌生物学行为以及化疗耐药等的相关性奠定了基础。     

胃癌细胞对细小病毒H-1敏感性差异的实验研究

目的 探讨不同胃癌细胞株对细小病毒细胞毒作用的敏感性差异及可能的机制。方法共选用HGC27(未分化)、BGC823(未分化)、MKN45(低分化)、AGS(低分化)、SGC7901(中分化)和MKN28(高分化)等6株不同分化状态的胃癌细胞株，用流式细胞仪分析其各自的细胞周期，H-1病毒感染后采用MTT方法检测不同胃癌细胞株对其细胞毒作用的敏感性差异，用RT-PCR来检测H-1病毒中的非结构蛋白基因(NS-1)在6株不同胃癌细胞中的表达。结果 HGC27、BGC823、MKN45、AGS、SGC7901和MKN28等不同分化状态细胞株中，S期细胞的比率分别为24．72％，30．15％，27．10％，29．03％，31．82％和33．73％。其中HGC27细胞对H-1病毒的细胞毒作用敏感；SGC7901细胞其次；MKN45、AGS细胞对H-1病毒的细胞毒作用中等敏感；MKN28细胞对H-1病毒的细胞毒作用不敏感；而BGC823则对H-1病毒的细胞毒作用抵抗。病毒NS-1的mRNA在HGC27、BGC823、MKN45和SGC7901等细胞中的表达水平较高，而在AGS和MKN28中的表达水平却较低。结论 H-1病毒的细胞毒作用在不同的胃癌细胞株中的差异显著。总体上，与高分化细胞株MKN28细胞相比，分化差的细胞对细小病毒H-1的细胞毒作用敏感性增加。其机制至少部分与分化差细胞中病毒NS-1蛋白的产生和积聚能力增高相关。未分化的BGC823细胞对H-1病毒的细胞毒作用抵抗，进一步证实并非所有的肿瘤细胞都对细小病毒的溶胞性作用敏感。     

ERCP and MRCP--when and why

Since the introduction of endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP) in the 1970s, gastroenterologists have a wide spectrum of diagnostic and therapeutic options in the biliopancreatic ductal system at their disposal. With its arrival in the 1990s, magnetic resonance cholangiopancreatography (MRCP) developed as a potent diagnostic tool in biliopancreatic pathology. Currently, MRCP is widely replacing diagnostic ERCP and thereby avoiding complications related to endoscopic technique.We summarize evidence-based data and demonstrate indications and differential indications for MRCP and ERCP in pancreatic disease. Complications related to the procedures and possible medical prevention are discussed. The feasibility of interventional endoscopy in pancreatic disease is reported in detail. The role of gastroenterologists in performing MRCP is outlined on the basis of practical examples.     

Convection and permeation and albumin between plasma and interstitium.

Nonequilibrium thermodynamics is combined with compartmental analysis to interpret albumin sieving and tracer experiments in terms of a permeability-surface product PS (permeation) and a solvent drag reflection coefficient σ_f (convection) for various blood-tissue barriers. The human whole-body albumin data of Lassen, Parving, and Rossing (Lassen, Parving, and Rossing, Microvasc. Res.7, i–iv (1974)), modified for nonliver tissues by Johnson and Levitt (Johnson &; Levitt, Microvasc. Res.9, 141 (1975)) lead to P ～ 1.8 × 10^?8 cm sec^?1 (based on a surface area per unit plasma volume of 700 cm^?1) and to σ_f ～ 0.9, which imply, in agreement with Johnson and Levitt, that permeation is the dominant nonliver blood-tissue transport mechanism for albumin in the normal resting human. Similar values are derived from the dog paw muscle data of Garlick and Renkin (Garlick and Renkin, Amer. J. Physiol.219, 1595–1605 (1970)). The Casley-Smith (Casley-Smith, Microvasc. Res.9, 43–48 (1975)) mechanism of uphill albumin transport is verified as possible. It is tentatively inferred that lymph formation in resting tissue does not result from a small difference between a large fluid (volumetric) filtration and an almost equally large fluid reabsorption, either in the same capillary (Starling) or between different capillaries (Zweifach) (Zweifach, Circ. Res.34, 858–866 (1974)). Rather, reabsorption is negligibly small relative to filtration, and lymph flow is comparable to volumetric filtration.