高效液相色谱法测定芦荟排毒胶囊中芦荟大黄素的含量

目的:建立高效液相色谱法测定芦荟排毒胶囊中芦荟大黄素的方法。方法:采用W aters 2690型高效液相色谱仪(美);检测器:996 PDA二极管阵列检测器;色谱柱:D iamonsil C18柱(200mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(80:20);流速:1m l/m in;于254nm波长处以外标法测定。结果:在0.0748-7.48 g/m l范围内浓度与峰面积有良好的线性关系(r=0.9999)。平均回收率为99.2%,RSD为3.18%。结论:方法简便可靠,可用于测定芦荟排毒胶囊中芦荟大黄素的含量。     

反相高效液相色谱法测定血浆中依诺沙星浓度

本文报道用反相高效液相色谱法测定人血浆中依诺沙星浓度。采用Beckman 344系列高效液相色谱仪,包括114型泵,160型固定波长254nm紫外检测器,Ultrasphere-ODS柱(250×4.6mm,5μm)。以0.025mol/L醋酸盐缓冲液(pH3.0):乙腈:二甲基甲酰胺:四丁基氢氧化铵=91∶4∶4∶1为流动相,流速1.2ml/min,检测器灵敏度置0.002aufs。样品血     

血小板活化因子与妊娠期高血压疾病及其胎儿生长发育关系的研究

目的检测妊娠期高血压疾病患者及其胎儿脐血血清中血小板活化因子(PAF)的水平,以探讨PAF在妊娠期高血压疾病发病及胎儿生长发育中的作用。方法采用酶联免疫吸附技术(ELISA)测定150例妊娠期高血压疾病患者及50例正常妊娠妇女及其胎儿脐血血清中PAF水平。结果妊娠期高血压疾病患者血清中PAF浓度为(妊娠期高血压组为12.47±1.44μg/l,轻度子痫前期组为14.78±0.76μg/l,重度子痫前期组为17.39±1.46μg/l),明显高于对照组(9.43±0.73μg/l),比较差异有极显著性。妊娠期高血压疾病新生儿脐血血清中PAF水平(妊娠期高血压组为4.19±0.38μg/l,轻度子痫前期组为6.38±0.33μg/l,重度子痫前期组为8.44±0.41μg/l),对照组为(2.46±0.27μg/l)比较差异有极显著性。结论孕妇血清中PAF水平与妊娠期高血压疾病的发病及病情轻重有关,随着病情加重,PAF逐渐升高。脐血血清中PAF水平影响着胎儿及胎盘的生长发育。     

快速点斑酶联法检测抗HBcIgG、IGM、IgA

用本室制硝酸纤维素(NC)膜作为载体,做快速快速斑点酶联(Dot-ELISA)间接法检测IgG、IgM、IgA型抗HBc。其步骤为:1.将NC膜加工成梳状,在梳齿上点0.5μl左右HBcAg,室温干燥。各梳齿用20%小牛血清封闭,干后,置4℃冰箱保存。2.各份患者血清用含20%小牛血清的PBS作成1:1000稀释,吸60μl于本室自制的20孔塑料板(与梳状NC膜配合使用)各孔中,再将已包被HBcAg的NC膜梳齿插入其中,4℃20分,Tris     

ELISA在检测百日咳杆菌免疫原中的应用

本文采用ELISA技术,实验研究了LPF-ELISA和FHA-ELISA的最适条件以及LPF和FHA免疫原在纯化过程中的动态。实验结果表明,LPF-ELISA的HP最佳包被浓度为0.413μg/100μl;所用第二抗体(抗LPF兔血清)的最佳浓度为2.8EU/100μl。FHA-ELISA的抗FHA豚鼠血清的最佳包被浓度为0.05EU/100μl,所用第二抗体(抗FHA兔血清)的最佳浓度为2.25EU/100μl。LPF和FHA在经培养、盐析、浸提、超速和分级离心后,其ELISA单位与蛋白量密切相关,呈同步消长。证明用LPF-ELISA和FHA-ELISA作新菌苗批量生产工序中的质量控制,是一种行之有效的方法。     

氧化修饰低密度脂蛋白在子痫前期中的测定及意义

目的测定氧化修饰低密度脂蛋白(oxLDL)在子痫前期中的变化,探讨其意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定子痫前期重度组、子痫前期轻度组及对照组血清oxLDL水平。结果(1)3组孕妇血清oxLDL比较,见子痫前期重度组升高(49.35±4.22)μg/d l,与对照组(31.71±3.51)μg/d l比较有显著差异(P<0.01);子痫前期轻度组(39.12±2.37)μg/d l升高,与对照组比较有显著差异(P<0.05);子痫前期重度组与轻度组比较无显著差异(P>0.05)。(2)子痫前期重度组血清oxLDL与收缩压、舒张压呈正相关(r=0.51,P<0.01;r=0.47,P<0.05)。结论研究提示oxLDL可能是子痫前期发病的重要因素。     

抵抗素与2型糖尿病患者胰岛素抵抗的关系

研究血清抵抗素与2型糖尿病(DM)患者胰岛素抵抗(IR)的关系。应用EIA测定72例2型DM患者(非肥胖2型DM组33例,肥胖2型DM组39例)及34名健康者(对照组)的空腹血清抵抗素水平。对照组、肥胖2型DM组及非肥胖2型DM组血清抵抗素水平分别为11.0±6.5μg/L、30.2±9.5μg/L及19.1±8.3μg/L,肥胖2型DM组和非肥胖2型DM组血清抵抗素水平均显著高于对照组(P均<0.001),肥胖2型DM组血清抵抗素水平显著高于非肥胖2型DM组(P<0.001),血清抵抗素水平与2型DM患者HOMAIR指数和程度呈显著正相关(P<0.001)。     

血清中纤维母细胞生长因子受体1与肺癌的相关性研究

目的建立血清中纤维母细胞生长因子受体(FGFR)1 DNA的测定方法,并探索其在肺癌诊断中的临床意义。方法收集60例肺癌患者、10例良性病变患者及30例健康人血清;实时荧光定量链式聚合酶反应检测各组血清FGFR1 DNA水平。结果肺癌患者血清中FGFR1 DNA水平显著高于健康人及良性病变患者[6.35(4.45,10.68)×10~5vs 0.62(0.43,0.92)×10~5copies/μl,P0.001;6.35(4.45,10.68)×10~5vs 3.02(1.74,4.81)×10~5copies/μl,P=0.007],并且FGFR1 DNA的水平与肿瘤类型、肿瘤TNM分期及淋巴结转移有关(P0.05)。ROC曲线提示,当取1.79×10~5copies/μl为诊断临界值时,血清FGFR1诊断非小细胞肺癌的敏感性和特异性分别是96.9%和81.8%。此外,血清FGFR1 DNA水平与患者的性别、年龄、组织学类型没有相关性。结论血清FGFR1 DNA作为肺癌的辅助诊断指标具有一定的临床意义,值得进一步研究。     

AFP时间分辨荧光免疫分析试剂盒的研制及其临床应用

目的:研制AFP时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)试剂盒。方法:采用双抗体夹心法建立AFP-Tr-FIA试剂盒,对反应条件进行优化,并对试剂盒的各项指标进行评价。结果:抗体包被浓度确定为5μg/m l,铕标抗体最佳稀释比为1 50。试剂盒的线性范围为1ng/m l~1210ng/m l,灵敏度为0.41ng/m l,准确度高,批内和批间变异系数分别5.1%~8.8%,6.7%~11.9%。与CA199、CA125、CEA和白蛋白无交叉反应。破坏试验表明试剂在37℃可稳定7d。收集50例肝癌患者和370例健康人血清,用本试剂盒测得肝癌患者血清AFP浓度(557.3ng/m l±322.1ng/m l)显著高于健康人(6.5ng/m l±5.4ng/m l)(P<0.001)。370例正常人血清标本测试该试剂盒的正常参考范围为(0~12.0)ng/m l。本试剂盒检测结果与商用W allac AFP试剂盒检测结果相关系数为0.9988。结论:试剂盒各项指标达到规定的要求,可用于临床血清AFP检测。     

低剂量LPS对PC12细胞抗氧化能力的影响

目的:探讨低剂量脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对PC12细胞抗氧化能力的影响。方法:分别以浓度为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.25、0.5、1μg/μl的LPS刺激PC12细胞24小时,MTT法检测细胞活性确立对细胞没有毒性作用的安全剂量;采用安全剂量刺激PC12细胞24小时,收集培养基上清和细胞,采用试剂盒检测上清中的总抗氧化能力(T-AOC),细胞中超氧化物歧化酶(SOD)的表达,Western blot检测细胞内Bcl-2蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、钙离子(Ca2+)的平均荧光强度。结果:LPS浓度小于0.1μg/μl对细胞没有明显毒性作用(P>0.05);采用0、0.01、0.025、0.05、0.1μg/μlLPS分别刺激PC12细胞24小时,培养上清中T-AOC呈下降趋势,以0.05、0.1μg/μl组明显(P<0.01),细胞内SOD呈上升趋势(0.05μg/μl组,P<0.05;0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内Bcl-2表达逐渐升高(0.025~0.1μg/μl组,P<0.01),细胞内ROS呈下降趋势(0.1μg/μl组,P<0.01),钙离子未见明显变化(P>0.05)。结论:低剂量LPS处理PC12 24小时具有剂量依赖性增强细胞抗氧化能力,并可能藉此参与应激耐受。     

临床实验室对白细胞抗原(HLA)分型血清的筛选和鉴定

<正> 研究HLA的关键是需有可靠的HLA分型血清,但这种分型血清极难获得,且价格昂贵。本文介绍小型实验室利用废血,筛选抗HLA血清的经验以及鉴定HLA分型血清的结果。 材料与方法 一、仪器设备:倒置相差显微镜,微量淋巴细胞毒反应盘,-60℃低温冰箱及50μl连续分配器。 二、血清及淋巴细胞来源:血清得自产妇的产程血。供筛选用的淋巴细胞取自本院病人的血沉废血(3.8％枸橼酸钠抗凝),鉴定用的淋巴细胞得自测定疾病相关的病人或正常人。用于鉴定的淋巴细胞配组包括HLA-A抗原9种型,B位点抗原14种型。 三、标准分型血清:任何从国外获得的分型     

肝豆状核变性患者肝纤维化血清标志物的变化

目的:探讨肝豆状核变性(HLD)患者的肝纤维化血清标志物:透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)和四型胶原(Ⅳ-C)的变化。方法:对186例HLD患者和39例正常对照组用放射免疫分析检测HA、LN和Ⅳ-C水平。结果:HLD组的HA、LN和Ⅳ-C水平分别为(175.12±73.81)μg/L、(128.60±21.36)μg/L和(87.98±32.74)μg/L显著高于正常对照组(P<0.01)。结论:HLD患者肝纤维化血清标志物水平显著升高,其均有不同程度的肝纤维化的存在。     

不同光照时间对新生儿高胆红素血症的疗效观察

目的通过对不同光照时间对同一高胆红素血症患儿的疗效观察,探讨光疗时间长短对高胆红素血症疗效的影响及预后分析。方法我院产科2006年6月1日~2006年10月10日分娩的明确诊断为新生儿高胆红素血症的正常足月新生儿100例,(不包括糖尿病母亲婴儿、母有妊高征、窒息等患儿)以随机分组方式决定此患儿第一次蓝光治疗时间为12h或16h,光疗后出蓝光箱观察,入室24h后行第二次光疗,如第一次光疗为12h,第二次改为16h,如第一次光疗为16h,第二次改为12h,分别于入室时、入室24h时、入室48h时查微量血清总胆红素。12h光疗及16h光疗血清总胆红素下降幅度,分别为51.3±15.90μmol/l,(相当于3.00±0.93mg/dl),93.20±35.40(相当于5.45±2.07mg/dl),差异有统计学意义(P<0.01)。分析预后:血清总胆红素≥290.7μmol/l(17mg/dl)的患儿脑电图异常的发生率较血清总胆红素<290.7μmol/l(17mg/dl)的发生率高,差异有统计学意义(P<0.05)结论蓝光治疗16h对同一高胆红素血症患儿疗效好于12h。说明微量血清总胆红素≥290.7μmol/l(17mg/dl)时应注意有无胆红素性脑病的发生,建议注意随访。     

应用新的免疫方法在鼠体内产生多克隆和单克隆抗体(文摘)

作者为了用简单的方法和有限量的抗原生产高效的IgG类型McAb,以各种浓度的人血清白蛋白(HSA)作为抗原,福氏完全佐剂和抗原按1:2比率(V/V)混合,采用脾内、腹股沟淋巴结和皮下免疫小鼠,比较了这些方法所诱导的免疫反应性,同时还比较了在每一种免疫过程中福氏完全佐剂、不完全佐剂和明矾的效应。 腹股沟淋巴结免疫方法是用氯氨酮(400μg/kg)麻醉BALB/c小鼠,消毒后切开皮肤约1cm,暴露一个腹股沟淋巴结,用1ml注射器吸取50μl乳剂注入淋巴结内,缝合切口,术后肌注青霉素15000单位,连续3d。1周后拆线。脾内免疫技术按Spitz(1986年)方法进行。注射佐剂后,脾入腹腔,肠线缝合肌肉层,用0.5mg四注入腹腔,最后缝合皮肤。产生杂交瘤的免疫方法是用5μg HSA和福氏完全佐剂2:1混合脾内免疫BALB/c小鼠,3个月后用8μg HSA静脉注射加强免疫,3d后杀死     

活血行气方抑制人胃癌SGC-7901细胞株增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的探讨活血行气方药物血清治疗人胃癌SGC-7901的作用。方法采用血清药理学方法,制备药物血清,应用MTT法测定细胞增殖抑制率,在光、电镜下观察细胞凋亡的的形态学变化。结果药物血清作用24h,中药小剂量组(5μl/ml)未见明显抑制作用,其余各组(10μl/ml,20μl/ml)均表现出不同程度的抑制作用;作用48h,中药小剂量组出现抑制作用,各药物血清组随着作用时间的延长抑制更明显,抑制效应呈时间依赖性。顺铂的抑制作用强于药物血清。光镜下,HE染色药物血清组细胞,为圆形或卵圆形,核染色质密集。电镜下人胃癌SGC-7901细胞为圆形,微绒毛及突起明显减少,伪足消失,线粒体空泡化,核染色质凝集,可见调亡小体。凋亡细胞百分率与药物浓度呈正相关。结论活血行气方具有明显抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖、诱导细胞凋亡的作用,活血行气方与顺铂合用有协同作用。     

一种可检测到毫微克以下的敏感而重复性好的IgE测定方法

血清IgE的测定在变态反应疾病的研究中价值很大。研究的客观需要把IgE的定量推向毫微克以下水平。近年来ELISA法、纸片放免吸附法(PRIST)、酶放免法(USERIA)以及微量固相平板放免法(MSPRIA)等相继建立。但这些方法不是敏感度低,就是重复性差。本文介绍了一种采用高吸附的聚苯乙烯试管为固相来测定血清IgE的放免方法(Maxisorp)。Maxisorp法具体流程如下:1.偶联300μl兔抗人IgE(100μ/ml)置于各试管     

中国HIV感染长期不进展者相关免疫指标的研究

目的:研究中国HIV感染长期不进展者(Long-term nonprogressors,LTNP)相关免疫指标的变化。方法:采集284例未经抗HIV治疗的LTNP、典型进展的HIV感染者和AIDS病人及130例HIV抗体阴性健康人的抗凝全血,应用流式细胞仪分析技术对CD8+T淋巴细胞、NK细胞及DC细胞进行测定。结果:LTNPCD8+T淋巴细胞绝对值[(1104.51±511.81)个/μl]高于AIDS病人[(678.40±295.39)个/μl,P<0.05]。LTNPNK细胞的绝对值[(377.59±289.23)个/μl]显著高于HIV感染者[(292.49±445.87)个/μl]和AIDS病人[(153.62±110.36)个/μl,P<0.05]。LTNPCD123+DCs细胞绝对值[(6.76±3.74)个/μl]高于HIV感染者[(5.30±3.16)个/μl]和AIDS病人[(3.32±2.09)个/μl,P<0.05]。LTNPCD11c+DCs细胞绝对值[(21.73±11.92)个/μl]高于HIV感染者[(14.51±9.53)个/μl]和AIDS病人[(7.27±3.74)个/μl,P<0.05]。结论:LTNPCD8+T淋巴细胞、NK细胞和DC细胞高于典型进展的HIV感染者和AIDS病人,是延缓疾病进程的重要因素。     

利用金葡菌A蛋白的一种循环免疫复合物新测定法

作者介绍了一种循环免疫复合物的新测定法:用聚乙二醇(6.000)将血清中的免疫复合物沉淀,并使其吸附于富含A蛋白的金葡菌(Cowan Ⅰ株)上,再用~(125)I标记的A蛋白与之结合。具体方法如下。金葡菌悬液:用PBA(pH7.2 PBS,含0.5％牛血清白蛋白,0.1％迭氮钠)将热毙并经甲醛处理的Cowan Ⅰ株配成1％(v/v)悬液。 A蛋白的标记:50μg(50μl)A蛋白加     

ELISA检测百日咳抗体的初步研究

以干菌为抗原作ELISA,检测血清百日咳IgG抗体,最适包被菌液浓度为20亿/ml。以血清稀释度≥1:320,OD_(490nm)≥0.47(阴性对照血清OD+3S)为阳性判定标准,测得抗体滴度和阳性检出率均高于凝集法。非百日咳病人血清用ELISA检测交叉率为5.0％;对细菌凝集滴度<1:80的正常人血清的假阳性率为2.0％。以阻断试验证实本法特异性强,稳定性好,且试验所需血清量仅为5μl。     

腺病毒介导hTGF-β1基因体内转染兔椎间盘对髓核细胞I型、II型胶原的影响

目的:观察腺病毒载体介导外源性人转化生长因子(Ad/CMV-hTGF-β1)对兔椎间盘髓核细胞Ⅰ型、Ⅱ型胶原的影响。方法:纯种成年新西兰大白兔20只,随机分为实验组和对照组,每组10只。于实验组兔腰3、4椎间盘髓核内注射Ad/CMV-hTGF-β1(6×106pfu),注射量为20μl,对照组则注射20!μl磷酸盐缓冲液(PBS)。术后3周取出椎间盘,免疫组织化学方法观察椎间盘髓核细胞中Ⅰ型、Ⅱ型胶原的表达情况,并用VIDAS图像分析系统进行半定量分析。结果:免疫组织化学染色显示:实验组椎间盘髓核细胞Ⅰ型胶原的表达比对照组低;而Ⅱ型胶原的表达则比对照组高,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:体内转染腺病毒介导的hTGF-β1基因能降低椎间盘髓核细胞Ⅰ型胶原的表达、提高Ⅱ型胶原的表达,提示hTGF-β1可以抑制椎间盘的退变。