雷公藤内酯醇对表皮生长因子诱导的HaCaT细胞生长增殖的影响

目的研究雷公藤内酯醇对表皮生长因子(EGF)信号刺激下HaCaT细胞生长增殖的影响.方法以永生化的皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞为靶细胞,观察雷公藤内酯醇(10-10～10-6 mol·L-1)对10 ng·mL-1 EGF信号刺激下HaCaT细胞生长曲线的影响;用光镜直接镜检及Gimasa染色观察细胞形态和生长状况;用MTT法检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞DNA合成和凋亡.结果雷公藤内酯醇影响EGF信号刺激下HaCaT细胞的生长状态并抑制其生长速度,对细胞增殖效应的抑制呈剂量依赖性,IC50在(1.2～2.5)×10-8 mol·L-1,对DNA的合成也有较强的抑制作用.同时雷公藤内酯醇有诱导HaCaT细胞晚期凋亡的现象.结论雷公藤内酯醇对EGF信号刺激下的角质形成细胞生长和增殖效应有明显抑制作用.     

黄芪注射液对寻常型银屑病皮损角质形成细胞增殖细胞核抗原表达的影响

<正>银屑病的发病原因复杂,表皮角质形成细胞(KC)的增殖和分化异常为其特征之一[1]。当细胞进入DNA复制分裂增殖周期时增殖细胞核抗原(PCNA)表达,PCNA表达水平是检测细胞增殖状态的标志[2]。近年来,临床上将黄芪注射液应用于银屑病治疗,取得较好疗效且未见明显不良反应[3],但其治疗机制尚不清楚。为探讨其作用机制,本研究观察了黄芪注射液对KC中PCNA表达的影响。     

人皮肤角质形成细胞库的构建

目的探索人皮肤角质形成细胞的分离、培养、传代、冻存、复苏及鉴定技术。方法采用细胞培养技术及免疫组化技术。结果我们采用细胞培养技术体外分离培养了小儿包皮角质形成细胞,传代后的角质形成细胞,经冻存、复苏后,此角质形成细胞仍既能增殖、又能分化,生长状态与新鲜分离的角质形成细胞相类似。结论酶消化法是快速大量培养皮肤角质形成细胞的简便易行的方法。     

扁平苔藓皮损中IL-17、FoxP3和Caspase-3的表达及意义

目的研究扁平苔藓皮损中白介素-17(IL-17)、叉头转录因子3(FoxP3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达及意义。方法采用免疫组织化学法和原位末端标记技术检测30例扁平苔藓患者皮损和30例健康人皮肤组织中IL-17、FoxP3、Caspase-3的表达和细胞凋亡情况。结果扁平苔藓组IL-17、FoxP3和Caspase-3的积分光密度值分别为(14.67±1.79)×103、(14.52±2.56)×103和(11.82±2.09)×103,明显高于健康对照组,差异有统计学意义(t=18.88、14.69、12.43,P<0.01)。扁平苔藓组的凋亡指数为(70.55±5.78),明显高于健康对照组的(30.01±3.97),差异有统计学意义(t=31.67,P<0.01)。扁平苔藓组IL-17与FoxP3呈正相关,FoxP3与Caspase-3呈正相关,FoxP3和Caspase-3与角质形成细胞凋亡程度呈正相关。结论 IL-17、FoxP3在扁平苔藓皮损中表达上调,可能导致T细胞免疫功能紊乱,且FoxP3、Caspase-3可能参与了角质形成细胞的凋亡。     

金樱子提取液对H2O2诱导HaCaT细胞氧化损伤保护作用研究

目的探讨金樱子提取液对H2O2诱导后人角质形成细胞(HaCaT cell)氧化损伤的保护作用。方法体外培养人角质形成细胞,用不同浓度的H2O2诱导细胞构建氧化应激损伤模型。CCK-8法检测不同浓度金樱子提取液对细胞增殖作用的影响;Hochest染色法检测不同浓度金樱子提取液对细胞凋亡作用的影响。结果100μmol·L-1 H2O2为构建氧化应激损伤模型的最适浓度。CCK-8法检测结果表明金樱子提取液能显著提高细胞的增殖,且随浓度的升高而增大。Hochest染色结果表明金樱子提取液能有效抑制由H2O2氧化损伤引起的细胞凋亡。结论金樱子提取液对H2O2诱导后的人角质形成细胞具有一定的氧化损伤保护作用。     

皮肤角质形成细胞的无血清培养方法

目的探索建立少量成年自体皮肤角质形成细胞体外无血清培养体系,为自体组织工程皮肤的构建与移植奠定物质基础。方法:无菌条件下,取2cm×2cm 兔耳皮肤组织块,Dispase 消化,分离真表皮,表皮以胰蛋白酶+EDTA 消化获得角质形成细胞,以含钙和不含钙的角质形成细胞培养液(K-SFM),按不同细胞密度接种于24孔板,观察细胞生长状况;免疫组化鉴定,MTT 法测定不同血清浓度对角质形成细胞增殖分化的影响。结果:在适当的 Ca~(2+)浓度下,少量自体角质形成细胞能够在无血清培养液 k-SFM 中培养扩增,最多可传4～6代。添加血清后可明显加速细胞分化。结论:无血清培养体系适用于少量成年自体角质形成细胞的体外连续培养扩增,培养的细胞可用于自体组织工程皮肤的构建。     

芦荟大黄素对人永生化角质形成细胞增殖和凋亡作用研究

目的研究芦荟大黄素（AE）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的生长抑制效应和诱导细胞凋亡能力,探讨其治疗银屑病的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测芦荟大黄素对HaCaT细胞增殖的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态学变化,流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡。结果芦荟大黄素质量浓度在20～80μg／mL范围内可抑制HaCaT细胞增殖且呈剂量依赖性;镜下观察到细胞稀疏,生长减慢,细胞形态拉长,细胞被阻滞于S期而凋亡。结论芦荟大黄素能抑制HaCaT细胞的增殖、诱导HaCaT细胞的凋亡。可用于治疗银屑病。     

β-溶血型链球菌胃蛋白酶消化产物对银屑病 PBMCs和角质形成细胞的作用

目的 :探讨链球菌M蛋白在银屑病发病中的可能机制。方法 :应用胃蛋白酶消化的方法获得M蛋白粗品(pep -M) ,其不同剂量对银屑病组和健康人组外周血单一核细胞 (PBMCs)增殖的影响用MTT方法检测。用3H -TdR掺入法和流式细胞仪检测pep -M对人角质形成细胞株Colo -16的作用。结果 :pep -M可以明显促进银屑病组和对照组的PBMCs增殖 (P<0.05) ;并且银屑病组PBMCs的增殖强度要明显高于健康对照组 (P<0.05)。pep-M不能明显促进体外培养的角质形成细胞DNA合成 ;相反 ,大剂量时出现Colo -16细胞死亡增多的现象 ,Colo -16细胞亚二倍体细胞的含量并未明显增加。结论 :pep -M对角质形成细胞没有直接的促增殖作用。它可能通过M蛋白特异性的T淋巴细胞在银屑病发病中发挥作用     

ERK1/2信号通路在角质细胞生长因子-2诱导角膜基质细胞增殖中的作用

目的观察角质细胞生长因子(keratinocyte growthfactor-2,KGF-2)对角膜基质细胞的增殖作用及ERK1/2信号在角膜基质细胞增殖中的调控作用,探讨KGF-2对角膜基质细胞增殖的可能机制。方法体外培养角膜基质细胞,MTT法检测细胞增殖,Western blot检测磷酸化ERK1/2表达水平。结果 KGF-2在1～100 mg·L-1对角膜基质细胞有明显的促进增殖作用且呈现剂量-效应关系;100 mg·L-1 KGF-2处理角膜基质细胞,5、15、30 min后ERK1/2磷酸化表达水平明显升高,60、90、120、180 min后ERK1/2磷酸化表达水平逐渐减弱;20μmol.L-1 ERK1/2抑制剂PD98059可抑制KGF-2对角膜基质细胞的促增殖作用。结论 KGF-2激活ERK1/2信号通路,提高细胞增殖率,可被抑制剂PD98059阻断;ERK1/2信号通路调控角膜基质细胞的增殖,在角膜基质细胞损伤中发挥作用。     

苦参和土茯苓联用改善小鼠银屑病样皮损的作用机制

目的 采用62.5 mg咪喹莫特乳膏诱导的小鼠银屑病样皮损模型,探索苦参和土茯苓联用外治银屑病的作用及其机制。方法 首先通过银屑病进行期和复发期的小鼠模型,结合HE染色,评价其外治银屑病的作用;其次采用免疫组化研究苦参和土茯苓联用对银屑病的核心病理机制——角质形成细胞异常增殖与皮肤免疫微环境正反馈环路的干预作用;最后利用代谢组学探索苦参和土茯苓联合外用是否通过调节银屑病中炎症、脂质相关代谢通路等治疗银屑病。结果 苦参和土茯苓联用改善小鼠银屑病样皮损;有效减弱小鼠银屑病痊愈后复发,药效与本维莫德相当,并且抑制小鼠表皮角质形成细胞的增殖和减少皮肤中T细胞的数量,调节花生四烯酸、鞘脂、色氨酸、苯丙氨酸等代谢通路。结论 苦参和土茯苓联合外用通过抑制表皮角质形成细胞的增殖和减少皮肤中T细胞的数量改善小鼠银屑病样皮损及调节代谢干预其复发,本研究提供了一种减缓银屑病复发的潜在外用治疗药物。     

苦参碱对皮肤疾病的药理作用及其临床应用近况

苦参碱能抑制增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原的合成,并诱导凋亡和基质金属蛋白酶的表达,对增生性瘢痕具有防治作用。苦参碱也能抑制皮肤癌细胞增殖并诱导其凋亡,也能抑制表皮角质形成细胞的增殖和黑素的生成。苦参碱对各种免疫性和非免疫性皮肤炎症均有抗炎作用,临床上已被试用于皮炎的治疗。综述苦参碱对皮肤疾病的药理作用及其临床应用近况的文献资料,并对其药理作用做了分析。     

以角质形成细胞异常增生为特点的皮肤病hTR、hTERT mRNA表达

目的：探讨端粒酶RNA（hTR）／和端粒酶反转录酶（hTERT）在几种以角质形成细胞异常增生为特点的皮肤病中的表达及其与角质形成细胞增殖的关系。方法：应用原位杂交方法检测银屑病、基底细胞癌（BCC）、鳞癌（SCC）、脂溢性角化（SK）组织标本中hTR、hTERT mRNA的表达。应用免疫组织化学方法检测Ki-67抗原的表达，并对hTR、hTERT mRNA的表达与Ki-67抗原的表达行相关性分析。结果：hTR表达在基底细胞、棘细胞、颗粒层细胞层和所有有核细胞的胞浆。与细胞的增殖情况无关；其阳性细胞百分率在各组差异无统计学意义（P〉0．05）。而hTERT主要表达在癌巢和生长活跃的组织和细胞。与细胞的增殖状态有关。阳性细胞百分率高于正常皮肤（P〈0．05）。Ki-67抗原主要表达在细胞生发层和分裂旺盛的组织；其表达与hTERT的表达呈正相关（r=0．674。P〈0．01）：而与hTR（r=0．295，P〉0．05）无关。结论：hTERT mRNA与细胞增殖活性有关，在银屑病、基底细胞癌、鳞癌、脂溢性角化中的表达明显升高．可作为细胞增殖活性的分子生物学标志。     

角质细胞生长因子对上皮细胞损伤的防护作用

角质细胞生长因子（KGF）属于成纤维细胞生长因子家族，由成纤维细胞和其他来源的基质细胞合成分泌，可特异性地促进上皮细胞的增殖分化，在多种组织器官中发挥着重要功能，尤其是在上皮细胞损伤的修复中起重要作用。KGF防护作用的机制可能是通过调节促细胞增殖、抗氧化蛋白等相关基因的表达来实现的。     

复方煤焦油洗剂治疗银屑病的主要药效学研究

目的探讨复方煤焦油洗剂治疗银屑病的药效学机制。方法采用小鼠尾鳞片表皮、鼠阴道上皮实验模型,观察复方煤焦油洗剂对上皮细胞分裂及表皮细胞分化的影响;采用豚鼠磷酸组织胺致痒阈模型,观察其抑制瘙痒的作用;采用角叉菜致大鼠足跖肿胀模型,观察其抗炎作用。结果复方煤焦油洗剂有显著的抑制小鼠阴道上皮细胞有丝分裂及增殖细胞核抗原表达、促进小鼠尾鳞片表皮颗粒层形成的作用,能显著提高磷酸组织胺对豚鼠的致痒阈,可使角叉菜胶所致的大鼠足跖肿胀显著减轻。结论复方煤焦油洗剂可抑制角质形成细胞增殖、促进角质形成细胞正常分化,有明显抑制瘙痒和急性炎症的作用。     

姜黄素对HaCaT细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的观察姜黄素对人角质形成细胞株HaCaT细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。 方法倒置显微镜观察不同浓度姜黄素处理的HaCaT细胞形态;噻唑蓝（MTT）法检测姜黄素对细胞增殖的影响;流式细胞技术（FCM）检测细胞凋亡率;Western Blot 检测Bcl 2和Bax的表达情况。结果与对照组比较,姜黄素组细胞形态发生改变,随着浓度增加,细胞贴壁性较差,部分细胞脱落;MTT结果示0.1 μmol &#8226;L 1姜黄素组与对照组差异无统计学意义（P＞0.05）,浓度＞0.1 μmol &#8226;L 1的姜黄素组增殖受到抑制,且均与姜黄素有浓度依赖关系（P＜0.05）;流式细胞术结果示姜黄素组细胞凋亡明显,凋亡率随药物浓度增加而上升;Western Blot结果示姜黄素作用24 h后,Bcl 2表达下降,Bax表达上升。结论姜黄素能抑制HaCaT细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与影响Bcl 2及Bax表达有关。     

视网膜脱离状态下色素上皮细胞的动力学变化

目的 :研究视网膜脱离后色素上皮细胞 (RPE)细胞增殖与凋亡改变 ,为增生性玻璃体视网膜病变的治疗提供实验依据。方法 :在青紫兰家兔眼建立RD模型 ,通过流式细胞仪技术定量分析RPE细胞的增殖和凋亡改变。结果 :RD后 ,RPE细胞可发生增殖和凋亡改变 ;RD后 8hRPE细胞增殖及凋亡增加 ,RPE细胞增殖第 14d达到最高峰 ,第 2 8d接近正常 ;其凋亡 2 4h形成高峰 ,至第 2 8d仍然高于正常。RD后 8hRPE细胞增殖和凋亡之间具有显著的正相关 (r=0 945 2 ,P >0 0 5 ) ,RD后 1d后RPE细胞增殖和凋亡之间未见显著相关(P >0 0 5 )。结论 :RD后 ,RPE细胞可发生增殖和凋亡改变 ;RD后RPE细胞增殖的启动可能与其凋亡有关     

丹参酮ⅡA逆转人ER阳性乳腺癌细胞的恶性表型及其机理

目的 证实丹参酮ⅡA对体外培养的雌激素受体(ER)阳性人乳腺癌细胞(MCF-7)的增殖抑制及恶性表型的逆转作用;探讨其作用的分子机理.方法 用光镜、电镜观察丹参酮ⅡA处理前后细胞形态的改变;细胞增殖试验(MTT法)、集落形成试验检测丹参酮ⅡA对MCF-7细胞生长、增殖的影响;RT-PCR技术半定量检测细胞增殖、分化相关基因mRNA表达的改变;流式细胞仪定量检测细胞增殖、分化相关基因蛋白表达的改变.结果 经一定浓度丹参酮ⅡA处理后MCF-7细胞形态改变,接近正常上皮细胞形态;丹参酮ⅡA对MCF-7细胞增殖抑制作用具有明显的剂量一时问依赖关系;对MCF-7细胞增殖具抑制作用;可上调增殖、分化相关基因ERa、nm23-1、c-fos的表达,下调c-myc的表达.结论 丹参酮ⅡA对MCF-7细胞体外生长、增殖有明显抑制作用;对MCF-7细胞形态具有恶性表型逆转作用;可上调细胞ERa、c-fos、nm23-1和下调c-myc基因表达,可能通过调控细胞增殖和分化相关基因的表达来逆转肿瘤细胞的恶性表型.     

增殖性玻璃体视网膜病变的药物治疗研究进展

<正> 增殖性玻璃体视网膜病变(prolife-rative vitreoretinopathy,PVR)是眼科疾病的常见并发症;是导致视网膜脱离(retinal detachment,RD)手术失败的主要原因。PVR发生的机理可能是由于视网膜表面及玻璃体内细胞的增殖。增殖的细胞主要是胶质细胞,视网膜色素上皮细胞及成纤维细胞,这些细胞增殖形成膜,而膜收缩可引起RD导致视力丧生。     

扁平苔藓中p21的表达及其意义

目的探讨p21蛋白在扁平苔藓(LP)发病中的意义。方法采用免疫组织化学法检测30例LP和30名正常皮肤组织中p21的表达情况。结果LP组中p21蛋白表达的阳性率为53%,正常对照组无一例表达,两组间表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论LP病变中p21蛋白的表达可能与角质形成细胞的凋亡有关。     

KGF对绒癌细胞系JEG-3及BeWo体外增殖和分泌功能的影响

目的探讨角质生长因子(KGF)是否具有调节正常滋养细胞及绒癌细胞系JEG-3、BeWo的增殖和分泌HCG的功能,以及彼此间有无差异。方法采用MTT法、IEMA法测定早孕绒毛膜滋养层细胞和绒癌细胞系JEG-3、BeWo的增殖和分泌HCG能力。结果KGF对滋养细胞及JEG-3、BeWo细胞增殖均有促进作用,滋养细胞存在最大作用浓度,在100ng/ml以上,生长曲线受到抑制。而对JEG-3细胞,有剂量依赖效应,随浓度加大,增殖能力增强。KGF对BeWo同样具有促进作用,类似JEG-3,无统计学意义。KGF对上述细胞分泌HCG的影响与生长曲线基本相一致。KGF促JEG-3、BeWo的增殖和分泌能力明显高于滋养细胞(P<0.01)。结论KGF参与早孕期滋养细胞的增殖及分泌,但受体内母胎界面内环境调控。同时KGF能明显增强肿瘤细胞JEG-3、BeWo的无节制增殖、分泌过程。提示KGF可能参与滋养细胞肿瘤的发生、发展过程。