Bel-2反义寡核苷酸增强小细胞肺癌细胞化疗敏感性研究

目的：研究Bcl-2反义寡核苷酸是否能增强小细胞肺癌细胞NCI—H69对化疗药物的敏感性。方法：将NCI．H69细胞培养传代，细胞共分4组，反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组，通过脂质体介导的方法将不同寡核苷酸导人细胞中，Western—Blot法检测Bcl-2蛋白的表达。不同浓度的顺铂与阿霉素作用于4组转染后的细胞，MTT法测定细胞存活分数。结果：4组细胞中，与空白对照组相比较，反义寡核苷酸组的Bcl-2蛋白表达明显受到抑制，而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的Bcl-2蛋白表达则与空白对照组差别不明显。细胞分别同顺铂与阿霉素作用后，反义寡核苷酸组细胞在各个浓度的存活分数均低于空白组，其差异在统计学上有显著性意义（P〈0．01），而转染正义链和无义链组与空白组比较其差异在统计学上无显著性意义。结论：Bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭Bcl-2基因的表达，增强小细胞肺癌细胞对化疗药物的敏感性。     

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌NCI—H69细胞凋亡的影响

目的探讨bcl-2反义寡核苷酸能否增加小细胞肺癌细胞NCI—H69的凋亡。方法将NCI—H69细胞培养传代,细胞共分4组,反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同浓度的寡核苷酸导人细胞中,WesternBlot法检测bcl-2蛋白的表达,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果与空白对照组比较,反义寡核苷酸组的bcl-2蛋白表达明显受到抑制,而正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组细胞的bcl-2蛋白表达则与空白对照组差异不明显。反义寡核苷酸组细胞在10、20、40umol／L 3个不同浓度时的凋亡率分别是（9．97±1．54）％、（15．28±1．73）％、（21．41±1．85）％,明显高于空白组和正义链、无义链组阴性对照组,且差异有统计学意义（F=7．19～15．48,q=5．21—7．98,P〈0．01）,而转染正义链和无义链组与空白组比较则差异无统计学意义。结论bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达,增加小细胞肺癌细胞的凋亡。     

抑制Bcl-2基因表达增强非小细胞肺癌NCI-H460细胞放射敏感性的研究

背景与目的:Bcl-2基因是一种重要的抑制细胞凋亡的基因,广泛存在于各种肿瘤细胞中.本研究利用短发夹RNA(shRNA)重组质粒抑制Bcl-2基因的表达,观察其对非小细胞肺癌NCI-H460的细胞凋亡和放射敏感性变化的影响.方法:将特异性抑制Bcl-2基因表达的干扰质粒Bcl-2/shRNA稳定转染NCI-H460细胞,获得H460-RNAi细胞,同时设转染含无义序列Neg-shRNA质粒的H460-Neg细胞及未转染的H460细胞为对照组,采用Western blot法,观察Bcl-2基因在蛋白表达水平的变化;X射线照射后,采用细胞形态学及克隆形成实验,检测RNA干扰对NCI-H460细胞凋亡和放射敏感性的影响.结果:H460-RNAi细胞的Bcl-2蛋白表达较对照组明显降低(P<0.05);H460-RNAi细胞的凋亡率[(10.8±0.7)%]明显高于对照组(P<0.05),4 Gy X线照射48 h后的凋亡率[(24.9±1.4)%]明显高于对照组(P<0.05)及未照射组(P<0.05):H460-RNAi细胞的存活参数D0、Dq、N和SF2值分别为0.97、0.75、2.18和0.26,均低于其余两组,而H460细胞组与H460-Neg细胞组比较差异无统计学意义(分别为1.39、1.39、2.72、0.52和1.21、1.28、2.87、0.46).结论:Bcl-2/shRNA重组质粒可以有效抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞的Bcl-2基因的表达,增强NCI-H460的细胞凋亡及放射敏感性.     

bFGF反义硫代寡核苷酸增强人喉鳞癌Hep2细胞的化疗敏感性

目的:研究bFGF反义硫代寡核苷酸增强人喉鳞癌Hep2细胞对多柔比星、氟脲嘧啶及顺铂的敏感性。方法:设计、合成bFGF反义脱氧寡核苷酸(AS),用聚乙烯亚胺(jetPEI)介导bFGF反义脱氧寡核苷酸转染入Hep2细胞;半定量RT- PCR测定bFGF反义硫代寡核苷酸转染后细胞中bFGF mRNA水平;免疫细胞化学法检测Hep2细胞转染前后bEGF的表达水平;FACS分析bFGF反义硫代寡核苷酸诱导细胞的凋亡;MTT法检测bEGF反义硫代寡核苷酸及其与化疗药物联合处理后的细胞增殖。结果:bFGF反义硫代寡核苷酸呈剂量与时间依赖抑制Hep2细胞增殖,最高抑制率为25.5%;被转染细胞bFGF mRNA和蛋白的表达分别降低52.0%和41.1%,细胞凋亡率为20.5%;bFGF反义硫代寡核苷酸协同多柔比星、氟脲嘧啶及顺铂作用Hep2,使3种药物的IC_(50)分别降低75.5%、83.5%及65.4%。结论:bFGF反义硫代寡核苷酸协同化疗药物增强Hep2细胞对化疗药物敏感性,将为人喉鳞癌的生物和化学药物治疗增添新途径。     

Survivin基因反义寡核苷酸增强胃癌细胞对顺铂的敏感性研究

目的探讨survivin基因的反义寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对胃癌细胞系(SGC7901)下调化疗药物的耐药性的研究.方法采用survivin基因反义ODN及其对照序列(空白对照和错配ODN)通过脂质体途径分别转染SGC7901细胞.经转染的各组SGC7901细胞分别采用蛋白印迹法观察survivin基因的表达、通过MTT法检测顺铂对癌细胞的毒性作用以及流式细胞仪(FCM)观察顺铂(CDDP)诱导各组SGC7901细胞的凋亡.结果经转染反义ODN之胃癌细胞出现survivin蛋白表达明显下降,反义ODN伴CDDP联合作用的细胞抑制率达49.9±2.1%,而单独应用CDDP或错配ODN联合CDDP的细胞抑制率分别为30.7±2.9%及34.8±3.4%,两者间呈明显差异(P＜0.01).细胞流式仪分析显示对照组、survivin反义ODN组、survivin错配ODN组的细胞凋亡率分别为8.1±0.9%、15.2±0.7%、8.5±0.8%,反义ODN组细胞凋亡率明显高于对照组、错配ODN组(P＜0.01).结论Survivin基因反义ODN能增强胃癌细胞株SGC7901对顺铂的敏感性,为临床提供一种增强化疗敏感性研究的途径.     

沉默ATF5对卵巢癌细胞顺铂敏感性影响的研究

目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(ATF5)对卵巢癌细胞SKOV-3顺铂敏感性的影响。方法:采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测不同卵巢癌细胞系ATF5的表达。采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NT-Azip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组;于转染后24h给予不同浓度的顺铂作用48h,通过MTT法测定细胞增殖抑制率;转染后24h给予4μmol/L顺铂作用0、12、24和48h,通过流式细胞术和蛋白质印迹法分别检测细胞凋亡和Bcl-2蛋白的表达。结果:ATF5在3种卵巢癌细胞系中均有不同程度的表达,其中SKOV-3细胞系表达最高;显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显受抑制,顺铂的IC50由5.4μmol/L下降为3.6μmol/L;顺铂作用24h,特异性转染组细胞凋亡率显著升高,约为非特异性转染组3倍,抗凋亡基因Bcl-2蛋白表达明显下降,P<0.05。结论:显性负抑制ATF5的表达可明显增强卵巢癌细胞系SKOV-3对顺铂的化疗敏感性,其协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与Bcl-2的下调相关。     

Bcl—2反义核酸增强三氢化二砷诱导NCI—H69肺癌细胞凋亡

目的：探讨Bcl-2反义核酸对三氧化二砷(As2O3)诱导NCI-H69肺癌细胞株凋亡的影响。方法：合成Bcl-2反义核酸(ASON)，导入NCI-H69肺癌细胞。Western—blot法检测Bcl-2蛋白的表达；FTIC-TUNEL流式细胞仪检测导入ASON的NCI—H69肺癌细胞凋亡的变化；Western-blot法检测As2O3；作用后多聚ADP核糖聚合酶(PARP)裂解片段。结果：1)导入Bcl-2反义核酸后NCI-H69肺癌细胞(ASON—NCI-H69)的Bcl-2基因表达受抑制，Bcl-2蛋白的合成减少；2)随As2O3浓度增加，肺癌细胞的凋亡指数逐渐上升，ASON—NCI-H69细胞凋亡指数明显高于NCI-H69细胞；3）As2O3诱导后从ASON-NCI-H69肺癌细胞PARP的89KD裂解片段检测呈强阳性，NCI-H69肺癌细胞则呈弱阳性。结论：三氧化二砷可诱导肺癌细胞株NCI-H69凋亡；Bcl—2反义核酸通过阻断Bcl-2基因表达，增强了As2O3诱导NCI-H69细胞凋亡。     

Chk2反义寡核苷酸对放射线照射诱导的HeLa细胞凋亡的影响

目的：观察宫颈癌细胞HeLa转染chk2反义寡核苷酸后，在X射线作用下对凋亡的影响。方法：以脂质体为载体将chk2正义链和反义链转染HeLa细胞，用Western blot检测HeLa细胞中Chk2蛋白的表达，用流式细胞仪和TUNEL法检测X射线照射后细胞凋亡率。结果：反义封闭chk2可明显抑制Chk2蛋白表达（P〈0．01），X射线作用下细胞凋亡率明显高于转染正义链组（P〈0．01）。结论：反义封闭chk2基因可增加He-La细胞对X射线照射的凋亡敏感性。     

反义热休克蛋白90β对HeLa细胞恶性表型和药敏感性的影响

目的　探讨和研究热休克蛋白 90 (hsp90 β)与肿瘤恶性表型和耐药性的关系。 方法　将hsp90 β正义、反义表达质粒及pLXSN空载体 ,lipofectin法转染HeLa细胞。G418抗性筛选。台盼蓝染色法 ,绘细胞生长图。MTT法检测细胞对药物的敏感性。软琼脂细胞集落形成实验检测肿瘤细胞恶性表型。结果　转染正义hsp90 β表达质粒的细胞生长与转染空载体细胞及HeLa细胞差别不大。而转染hsp90 β反义表达质粒的细胞生长慢于对照组细胞 ,对常用的化疗药物阿霉素 (ADM)、顺铂(CDDP)的药敏感性比对照组细胞明显升高 ,其半致死剂量仅为后两者的 1/2和 1/5 ;软琼脂集落实验表明 ,转染反义hsp90 β表达质粒的细胞集落形成能力减弱。 结论　反义hsp90 β在一定程度上抑制了HeLa细胞的生长 ,降低HeLa细胞恶性表型 ,明显增强HeLa细胞对化疗药物的敏感性。     

不同途径免疫的AFP基因修饰DC瘤苗体内抗肿瘤效应的研究

目的:评价bcl-2反义寡核苷酸对肾细胞癌细胞Bcl-2蛋白表达抑制及诱导凋亡作用.方法:合成与已知人类基因无同源性的bcl-2反义寡核苷酸(AS1与翻译起始端互补,AS2与编码区互补),以阳离子脂质体Lipofectin为转染载体,MTS比色实验测定细胞活率,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定bcl-2 mRNA的表达,Western杂交法测定Bcl-2蛋白表达,碘化丙啶(PI)染色流式细胞术测定凋亡细胞.结果:所测定的5个肾癌细胞株均有稳定的bcl-2 mRNA表达;转染的反义寡核苷酸对ACHN细胞Bcl-2蛋白的表达有明显抑制作用,而正义寡核苷酸无明显影响,AS2的抑制作用大于AS1;反义寡核苷酸可诱导ACHN细胞的凋亡,AS1和AS2的诱导率分别为32.1%和43.2%.结论:bcl-2反义寡核苷酸可抑制肾癌细胞Bcl-2蛋白的表达,并进而诱导细胞的调亡.     

Bcl-2反义寡核苷酸对人肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

背景与目的：研究表明,靶向bcl-2 mRNA的反义寡核苷酸（antisense oligodeoxynuelectide, ASODN）在体内外可产生抗肿瘤效应。我们已经在bcl-2 mRNA蛋白编码区发现了一个新的有效反义作用靶点,同时证实这个靶点的ASODN能增强白血病及肺癌细胞对化疗药物、放射线的敏感性。本研究进一步探讨bcl-2 ASODN对裸鼠非小细胞肺癌NCl—H460细胞移植瘤的成瘤能力和移植瘤的抑制作用。方法：将经硫代修饰的bcl-2ASODN直接加入到培养的NCl—H460细胞内,MTF法检测细胞生长抑制率．然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时取未经处理的NCl—H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待瘤结节直径≥5mm后,分为bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组。实验组用15mg／kgASODN两天一次直接瘤内注射．连用3周,测肿瘤大小和组织形态学改变。结果：bcl-2ASODN显著抑制NCl—H460细胞的生长,并呈时间依赖性,与无义寡核苷酸组相比．有显著性差异（P〈0．05）。bcl-2ASODN作用后的NCl—H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低。平均成瘤时间延长为12．6天（P〈0．01）,最大抑瘤率达87．5％（P〈0．01）。在处理NCl—H460细胞裸鼠移植瘤过程中．生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组的瘤体进行性增大．而bcl-2ASODN组的瘤块生长缓慢,ASODN处理组与两个对照组相比均有显著性差异（P〈0．05）。处理后第30天剥离瘤块．ASODN处理组分别与两个对照组瘤重相比均有显著性差异（P〈0．01）。bcl-2ASODN处理组裸鼠NCl—H460细胞移植瘤的生长受到明显抑制,抑瘤率为71．0％。病理学检查可见．bcl-2ASODN处理组瘤块内有大片的变性坏死灶．结缔组织增生．炎性细胞浸润：而两个对照组瘤体内癌细胞呈弥漫性密集分布。结论：bcl-2ASODN能降低NCl—H460细胞的成瘤能力．抑制移植瘤生长。     

生存素反义寡核苷酸对胃癌细胞株SGC-7901生长的影响

目的　观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及转染不同浓度的生存素反义寡核苷酸(ASODN )对胃癌细胞SGC- 790 1生长的影响。方法　采用细胞免疫组织化学染色观察生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1中的表达。将胃癌细胞株SGC 790 1分为8个组:空白对照组,脂质体转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L无义链转染组,2 0 0nmol/L、40 0nmol/L、60 0nmol/L反义链转染组,转染48h后,采用四氮唑盐(MTT )比色法,测定各组的细胞生长抑制率,并采用流式细胞仪检测60 0nmol/L无义链转染组、60 0nmol/L反义链转染组细胞的凋亡率以及生存素蛋白表达。结果　显示生存素蛋白在胃癌细胞株SGC- 790 1的胞核和胞质中均有表达,但以胞核为主;各组生存素ASODN对胃癌细胞株SGC- 790 1有明显的抑制作用(P <0 .0 1) ,抑制作用呈浓度依赖性,60 0nmol/L反义链转染组抑制率为最高,达40 .0 % ,流式细胞仪检测表明生存素ASODN有明显的诱导细胞凋亡的作用,定量检测结果显示生存素ASODN可以下调生存素蛋白至8.8% (P <0 .0 1)。结论　不同浓度的生存素ASODN均能通过下调生存素蛋白表达来抑制胃癌细胞株SGC- 790 1的生长。     

反义ST6GalⅠ基因对HeLa细胞黏附和侵袭力的影响

目的研究人α2,6-唾液酸转移酶（ST6GalⅠ）反义寡核苷酸（ASODN）转染对ST6GalⅠ高表达的官颈癌HeLa细胞的黏附和侵袭力的影响。方法设计并合成靶向ST6GalⅠ的ASODN及正义寡核苷酸（SODN）,用脂质体Lipofectamine 2000包裹后转染HeLa细胞。实验设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和ASODN组。应用RT-PCR测定细胞中ST6GalⅠ mRNA水平,流式细胞术检测细胞表面α2,6-唾液酸含量,分别用CytoMatrix^TM细胞黏附试剂盒和细胞侵袭分析试剂盒,检测细胞对细胞外基质（ECM）的黏附与侵袭力。结果HeLa细胞被转染48h后,与空白对照组、脂质体对照组和SODN组相比,ASODN组细胞中ST6GalⅠ mRNA表达明显下调（P〈0．01）;与3个对照组相比,ASODN组细胞表面以,6-唾液酸的含量明显降低,同时细胞对ECM的黏附和侵袭力均降低（均P〈0．05）。结论靶向ST6GalⅠ的ASODN能下调HeLa细胞ST6GalⅠ基因的表达,降低细胞表面α2,6-唾液酸含量,继而降低细胞对ECM的黏附和侵袭力。     

bcl-2基因反义寡核苷酸增强放射线诱导Raji细胞凋亡的研究

目的研究bcl-2基因反义寡核苷酸作用淋巴瘤细胞株Raji后,放射线对细胞凋亡的影响.方法bcl-2基因反义寡核苷酸作用Raji细胞后,台盼蓝拒染法计数活细胞;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色和碘化丙啶染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用Raji细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,活细胞数分别与单用放射线组及无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P＜0.05).bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用于Raji细胞后显著抑制bcl-2蛋白表达,蛋白水平分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组比较,差异有显著性(P＜0.05).bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线同时作用于Raji细胞后,姬姆萨染色可见凋亡细胞,通过流式细胞仪检测的细胞凋亡率显著增加,分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组相比,具有显著性差异,P＜0.05.结论bcl-2反义寡核苷酸能增强放射线诱导Raji细胞凋亡.     

Bcl-2反义寡核苷酸对裸鼠人肺癌移植瘤抑制作用的研究(英文)

目的探讨 Bcl-2反义寡核核苷酸(ASODN)对裸鼠人肺癌移植瘤的成瘤能力和生长的抑制作用。方法将经硫代修饰的 Bcl-2 ASODN 导入非小细胞肺癌 NCI-H460细胞内,然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时采用未经处理的 NCI-H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待长出瘤结节直径为≥5mm 后,分为 Bcl-2 ASODN 实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组3组。实验组用15mg/kg ASODN 两天一次直接瘤内注射,连用3周,测肿瘤大小变化和组织形态学改变。结果 Bcl-2 ASODN 作用后的 NCI-H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低,最大抑瘤率达87.5%(P<0.01)。Bcl-2 ASODN 处理的NCI-H460细胞在裸鼠皮下成瘤的平均时间延长为12.6天(P<0.01)。在治疗 NCI-H460细胞裸鼠移植瘤过程中,生理盐水对照组和无义对照组的瘤块体积进行性增大,而 Bcl-2 ASODN 组的瘤块生长很缓慢,治疗组和两个对照组瘤重相比均有显著性差异(P<0.05)。治疗后第30天剥离瘤块,两个治疗组分别与两个对照组瘤重相比均有显著性差异(P<0.01)。Bcl-2 ASODN 治疗组裸鼠肺癌细胞移植瘤的生长受到明显抑制,抑瘤率为71.0%。瘤块病理学检查可见,Bcl-2 ASODN 治疗组瘤块内有大片的变性坏死灶,结缔组织增生,炎性细胞浸润;而两个对照组瘤体内癌细胞呈弥漫性密集分布。结论 Bcl-2反寡义核苷酸能降低肺癌细胞的成瘤能力,抑制移植瘤生长。     

Bcl-2反义寡核苷酸对裸鼠人肺癌移植瘤抑制作用的研究

目的探讨Bcl-2反义寡核核苷酸(ASODN)对裸鼠人肺癌移植瘤的成瘤能力和生长的抑制作用。方法将经硫代修饰的Bcl-2ASODN导入非小细胞肺癌。NCI-H460细胞内,然后将这种细胞接种于裸鼠皮下,观察肿瘤出现的时间和肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。同时采用未经处理的NCI-H460细胞接种于裸鼠背部皮下建立裸鼠人肺癌移植瘤模型,待长出瘤结节直径为≥5mm后,分为Bcl-2ASODN实验组、生理盐水对照组和无义寡核苷酸对照组3组。实验组用15mg/kgASODN两天一次直接瘤内注射,连用3周,测肿瘤大小变化和组织形态学改变。结果Bcl-2ASODN作用后的NCI-H460细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低,最大抑瘤率达87.5%(P相似文献   

反义survivin基因对786-O细胞的体外作用及其对表阿霉素诱导细胞凋亡作用的观察

的研究survivin反义寡核苷酸（ASODN）转染对肾透明细胞癌786-O细胞的survivin蛋白表达、细胞凋亡、增殖的影响,及其对表阿霉素诱导细胞凋亡的作用。方法设计并合成特异性靶向survivjn的ASODN及正义寡核苷酸（SODN）,将其转入786-O细胞。设空白对照组、脂质体对照组、SODN组和600nmol／L ASODN组,处理24h后收获各组细胞。透射电子显微镜观察细胞形态变化,免疫组化法检测各组细胞survivin表达情况,流式细胞术检测各组细胞增殖和凋亡指数。结果ASODN组的细胞呈典型凋亡的形态学改变,而对照组细胞生长良好;ASODN组细胞survivin表达减弱,凋亡指数明显升高（P〈0．05）;转染ASODN 24h后,表阿霉素诱导786-O细胞凋亡的作用明显增强。结论survivin ASODN能下调survivin蛋白表达,诱导肾透明细胞癌786-O细胞凋亡,抑制786-O细胞增殖,并增强表阿霉素诱导的细胞凋亡。     

Survivin反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:采用survivin反义寡核苷酸(ASODN)封闭骨肉瘤细胞survivin的作用,观察其对骨肉瘤细胞系MG63增殖和凋亡的影响。方法:以脂质体为载体,介导survivin反义寡核苷酸转染人骨肉瘤细胞系MG63,用MTT法测定细胞增殖;流式细胞仪检测转染survivin反义寡核苷酸后细胞凋亡率;Westernblot及半定量RTPCR检测转染survivin反义寡核苷酸后的骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达。结果:脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染骨肉瘤细胞系MG63后,细胞增殖明显受到抑制,细胞凋亡率明显增加,骨肉瘤细胞survivin蛋白及mRNA表达均明显降低。结论:脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以抑制细胞增殖,有效降低细胞内survivin基因的表达,促进细胞凋亡。     

反义STAT3对肿瘤细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用

背景与目的：研究表明STAT3蛋白在多种肿瘤组织或细胞中高表达。STAT3蛋白可能参与了肿瘤的形成和发生。本文拟研究STAT3蛋白在鼠黑色素瘤细胞B16、人肝癌细胞SMMC-7721、人肝癌细胞HepG-2、人肺癌细胞A549、人宫颈癌HeLa细胞株中表达和活化情况,研究反义STAT3寡核苷酸对B16细胞的增殖抑制和促凋亡作用,为进一步反义药物设计及应用于辐射领域作前期研究。方法：利用Western blot检测所选几种肿瘤细胞的STAT3蛋白表达和磷酸化情况、反义干涉前后B16细胞中STAT3蛋白表达和磷酸化活化的变化情况,MTT法检测细胞增殖变化,利用Hoechst33258染色对细胞凋亡作形态学上的观察．用Annexin V／PI复染结合流式细胞仪检测细胞早期凋亡。结果：所研究的几种肿瘤细胞中均可检测到STAT3蛋白的高表达和磷酸化;反义STAT3转染后,B16细胞中STAT3蛋白的表达量及磷酸化水平均有下降;转染后48h,在0到200nmol／L范围内,反义核酸浓度越高。对B16细胞的增殖抑制效应越强,但是并不能够完全抑制肿瘤细胞的增殖（P〈0．01）。寡核苷酸浓度超过250nmol／L时．正义对照也表现出一定的增殖抑制作用（P〈0．05）;转染后不同时间内检测,结果表明转染后24h反义核酸即开始表现出一定的增殖抑制效应,48h起表现出明显的抑制效应;反义转染后,检测各组细胞早期凋亡率：对照组早期凋亡率为5．52％．反义400、800、2000nmol／L组早期凋亡率分别为8．22％、9．99％．16．97％,正义对照400、800、2000nmol／L组早期凋亡率分别为5．87％、5．36％、13．31％。统计分析表明反义寡核苷酸与B16细胞作用后能够促进细胞的早期凋亡（P〈0．01）,正义低浓度转染组（400、800nmol／L组）与对照组无明显差别（P〉0．05）,而对照组与正义2000nmol／L组相比,细胞的早期凋亡率也有统计学差异（P〈0．01）。结论：B16、SMMC-7721、HepG-2、A549、HeLa等恶性肿瘤细胞株中STAT3蛋白高表达并且可检测到磷酸化水平的增高;反义转染后B16细胞中STAT3蛋白的表达和磷酸化水平降低．细胞增殖受到明显抑制。细胞的凋亡增加．表明STAT3可能成为肿瘤治疗新的分子靶位。