131Ⅰ-KDR单克隆抗体抑制荷人膀胱癌SCID小鼠瘤体生长的实验研究

目的探讨131Ⅰ标记抗KDR单抗对SCID小鼠人膀胱癌皮下移植瘤模型瘤体生长的抑制作用.方法在复制SCID小鼠人膀胱癌皮下移植瘤模型的基础上,用131Ⅰ标记抗KDR单抗3G9,尾静脉注射荷瘤SCID小鼠作为实验组,以非标记抗KDR单抗3G9及生理盐水尾静脉注射荷瘤SCID小鼠作为对照组及空白组,观察131Ⅰ标记抗KDR单抗对SCID小鼠人膀胱癌皮下移植瘤模型瘤体生长的抑制作用.结果131Ⅰ-3G9尾静脉注射荷瘤SCID小鼠后3周,移植瘤瘤体内癌组织可见大片坏死,对照组移植瘤瘤体内癌组织也可见部分坏死,与空白组相比实验组与对照组对瘤体生长大小的抑制率分别为96.8%和87.7%.结论131Ⅰ-抗KDR单抗对肿瘤的抗血管生成治疗有潜在的临床应用前景.     

裸小鼠异种移植人脑胶质瘤KDRmRNA的表达与血管形成的关系研究

目的 探讨KDR mRNA在裸小鼠异种移植人脑胶质瘤不同生长阶段与不同组织区域中的表达规律,以及其与肿瘤血管形成的作用关系.方法 利用恶性人脑胶质瘤细胞系SHG-44构建NC裸小鼠皮下移植瘤模型,30只荷瘤裸小鼠随机分成10组,每5d取一组肿瘤标本,移植瘤石蜡标本行H-E染色、KDR mRNA原位分子杂交和vWF免疫组化检测,光镜下检测上述基因的表达率和表达部位,并观察移植瘤中血管形成模式.同时仅用SHG-44细胞行原位杂交和免疫组化检测作为对照组.结果 KDR mRNA表达于移植瘤中内皮细胞和部分瘤细胞,在瘤组织浸润边缘、瘤团中央、变性区域阳性细胞数较高.移植早期(5～15d)、中期(20～30d)和晚期(35～50d)的阳性细胞病理指数分别为26.4±2.1、16.9±1.8、24_7±2.2,中期显著低于早晚期(P＜0.01).体外SHG-44细胞少量表达KDR mRNA.vWF标记的微血管密度平均计数为(31.53±9.06)个.移植瘤中存在内皮细胞被覆的血管、马赛克血管和肿瘤仿生血管三种血供模式.结论 KDR mRNA在移植性人脑胶质瘤细胞中呈高表达,在不同的生长阶段和不同的瘤组织区域上存在差异表达的规律性,对肿瘤血管形成具有重要作用.KDR可作为抗胶质瘤血管形成的治疗靶点.     

靶向sKDR对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察靶向可溶性血管内皮生长因子受体（sKDR）对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响,探讨KDR基因作为膀胱癌基因治疗靶点的可行性和有效性。方法：将人膀胱癌细胞T24分为sKDR转染组、未转染组和对照组,构建靶向sKDR真核分泌型表达质粒PCI-KDR,经Lipofctamine^TM2000转染T24细胞,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测能否与VEGF结合,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测稳定表达sKDR的T24细胞KDR基因表达水平,噻唑蓝比色法（MTT）检测sKDR对T24细胞增殖的作用,转移酶末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡率,裸鼠皮下移植稳定表达sKDR的T24细胞,观察其成瘤性的改变。结果：与未转染组比较,转染组稳定表达sKDR的T24细胞其KDR mRNA表达水平升高了4.16倍,细胞增殖抑制率增加了55.1%（P<0.01）,细胞增殖速度明显缓慢并出现显著的凋亡峰。在裸鼠体内转染组与未转染组上述各项指标比较差异有显著性（P<0.01）,转染组肿瘤生长明显缓慢,成瘤能力受抑。结论：靶向sKDR能够在很大程度上抑制膀胱癌T24细胞增殖并促进其凋亡。     

人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型、细胞系建立及其生物学特性研究

目的建立人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和相应体外细胞系.方法将病理证实的人卵巢浆液性乳头状腺癌手术切除标本移植于SCID小鼠皮下,成瘤后行鼠间传代,取移植瘤细胞体外分离培养、传代和建系,并应用细胞、分子生物学手段对移植瘤和建系细胞进行一系列生物学特性检测.结果历时14个月传至5代,皮下移植瘤存活率为90%,持续6个月,体外建系(OVA-319)细胞生长稳定.镜下观察组织形态学和超微结构符合原肿瘤组织基本特征;染色体分布在12～46条之间,多为异倍体,显示人类肿瘤异常染色体;流式细胞术和RT-PCR技术分析原代、体内移植瘤和OVA-319细胞结果一致,表现为瘤细胞生长活跃、细胞周期分布相仿,MAGE-2基因在mRNA水平异常表达.结论人卵巢癌SCID小鼠移植瘤模型和OVA-319细胞系为人类肿瘤的研究提供了良好的实验材料.     

过表达核糖核酸酶抑制因子对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化的影响

目的：研究过表达核糖核酸抑制因子（RI）对膀胱癌移植瘤侵袭转移及上皮细胞间质转化（EM T ）的影响。方法将 RI 过表达质粒（pIRES2-EGFP-RI）和阴性对照质粒（pIRES2-EGFP）稳定转染膀胱癌 T24细胞,稳定表达细胞株分别命名为：T24-RI 组、T24 vector 组、T24组。将各组 T24细胞分别接种至 BALB／C 裸鼠左腋皮下,观察移植瘤的生长、微血管密度及肺组织转移灶的变化;进一步分析 RI 、MMP-2、MMP-9、EM T 相关蛋白（E-cadherin 、N-cadherin 、Vimentin 、Snail 、Slug 、Twist 蛋白）在肿瘤组织中的表达水平。结果 T24-RI 组较 T24组与 T24 vector 组,瘤体质量显著降低（P ＜0．01）,抑瘤率分别为26．67％和38．85％;与对照组比较,T24-RI 组瘤组织微血管密度明显减少,肺组织未见明显转移灶,同时 CD31在瘤组织中表达减少;免疫组织化学染色显示：T24-RI 组瘤组织中 RI 、E-cadherin 蛋白的表达明显升高,而 MMP-2、MMP-9、N-cadherin 、Vimentin 、Snail 、Slug 、Twist 蛋白表达明显降低。结论过表达 RI 可能通过调节侵袭转移 EM T 关键蛋白的表达,显著抑制了膀胱癌移植瘤生长、侵袭和转移的潜能。     

人多发性骨髓瘤荷瘤SCID小鼠模型的建立及其生长特性

为研究人多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma，MM)在SCID小鼠免疫重建前后体内生长的特性和免疫细胞对肿瘤的作用，建立人多发性骨髓瘤(MM)荷瘤SCID小鼠模型。体外培养IL-6依赖的人MM细胞株XG7，接种于SCID小鼠和用人淋巴细胞重建的SCID小鼠皮下；监测成瘤状态，通过免疫组化观察细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes，CTLs)杀伤。结果表明：成瘤后的肿瘤细胞CD28、CD138等分子的表达与接种前没有明显变化；免疫重建后的SCID小鼠成瘤潜伏期延长，瘤体积小；免疫重建后的SCID小鼠肿瘤组织中，有人CD3 T细胞的浸润。结果提示：SCID小鼠是建立肿瘤模型和肿瘤免疫研究的良好动物；免疫重建后的SCID小鼠体内肿瘤生长受抑制：人MM细胞在小鼠体内的生长状态与淋巴细胞免疫有关。     

MRPS5对膀胱癌细胞增殖能力及干性特征的影响

目的 探讨线粒体核糖体蛋白S5(mitochondrial ribosomal protein S5,MRPS5)对人膀胱癌细胞的增殖能力及其中干细胞干性特征的影响.方法 Western blot检测人膀胱癌及癌旁正常组织MRPS5的表达;构建靶向干扰MRPS5的慢病毒载体,感染膀胱癌细胞株T24,以干扰Scramble序列作为对照,Western blot检测MRPS5干扰效率;细胞活力实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;细胞成球实验观察成球能力;Western blot检测肿瘤干性转录因子Nanog,Oct4,c-Myc和Sox2的表达;小鼠皮下移植瘤实验观察T24体内成瘤能力.结果 MRPS5在膀胱癌组织中的表达高于癌旁正常组织;慢病毒干扰载体PLKO.1-shMRPS5有效,且干扰MRPS5表达后T24细胞增殖能力下降(P＜0.05),周期阻滞于S期,干性因子表达均下调,成球率无变化(P＞0.05)但成球直径明显减小;同时小鼠体内成瘤体积减小[(0.784±0.278) vs (0.500±0.245) cm3,P ＜0.05],瘤质量减轻[(0.862±0.372) vs(0.412 ±0.248)g,P＜0.05].结论 MRPS5在膀胱癌中较高表达,且干扰MRPS5表达能抑制T24增殖并抑制T24中的干细胞生物学特征.     

人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤模型的建立及其VEGF的表达

目的 建立人浸润性膀胱癌裸鼠移植瘤动物模型,研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在人浸润性膀胱癌的表达水平,探讨应用抗－ＶＥＧＦ抗体抑制血管生成治疗膀胱癌的应用前景。方法 裸鼠皮下接种人浸润性膀胱癌Ｔ２４细胞建立动物模型;应用Ｓ－Ｐ免疫组织化学技术检测人浸润性膀胱癌Ｔ２４细胞及其裸鼠移植瘤组织血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的表达。结果 裸鼠皮下接种Ｔ２４细胞的成瘤率为９４．４％;Ｔ２４细胞及其移植瘤组织     

下调血管生成素基因表达对膀胱癌移植瘤生长及p－AKT、p －GSK3β、p －mTOR 表达的影响

目的：探讨下调血管生成素（ ANG ）基因表达,对膀胱癌移植瘤生长及p－AKT、p－GSK3β、p－mTOR表达的影响。方法采用ANG mRNA的特异性siRNA表达载体和无同源性的对照载体,在脂质体介导下稳定转染膀胱癌T24细胞,根据转染质粒不同分为3组：T24组为正常T24细胞,T24－NC组为转染阴性对照质粒T24细胞,T24－siANG组为转染干扰质粒T24细胞。通过筛选、鉴定后,将各组细胞皮下注射到BALB／c裸鼠中,观察肿瘤生长和肿瘤微血管密度、肺上肿瘤转移灶的变化,利用免疫组化技术检测CD31、p－AKT、p－GSK3β、p－mTOR的表达。结果与T24－NC组相比,T24－siANG组瘤体质量显著降低（P＜0.01）,抑瘤率为57.46％。 HE染色显示,T24－siANG组肿瘤微血管较T24和T24－NC组明显减少,T24－siANG组CD31、p－AKT、p－GSK3β、p－mTOR表达呈弱阳性反应。结论下调ANG基因的表达能显著抑制膀胱癌移植瘤生长,并通过降低CD31、p－AKT、p－GSK3β、p－mTOR表达抑制膀胱癌裸鼠移植瘤增殖及转移的潜能。     

免疫缺陷小鼠肿瘤模型的建立及其肿瘤相关免疫机制的探讨

目的　观察不同免疫缺陷小鼠中的人肝癌细胞生长情况以及 T,B淋巴细胞的免疫作用 ,探讨免疫缺陷小鼠肿瘤模型制作的意义 .方法　将体外培养的人肝癌细胞接种到四种免疫缺陷小鼠 ,分别为 :B细胞缺陷的 CBA/N,T细胞缺陷的 BAL B/c- nu,T,B细胞缺陷的 SCID及免疫重建的 SCID小鼠 ,观察其生长特点 ;作鼠脾细胞毒试验 ,测定外周血 CD4 + ,CD8+ 数分数和荷瘤鼠血清 Ig含量的变化 ;作肝癌细胞凝集试验 .结果　 CBA/N和用 BAL B/c鼠外周血淋巴细胞重建的 SCID(B- PBL- SCID)鼠不成瘤 ,nude,SCID和用 CBA/N鼠外周血淋巴细胞重建的 SCID (C- PBL - SCID)小鼠全部成瘤 ;SCID鼠的瘤体比裸鼠瘤体长的更快 ,肝内接种转移率更高、转移范围更大 .接种瘤细胞的 BAL B/c和 CBA/N鼠脾细胞对癌细胞杀伤力较强 ,免疫重建的 SCID鼠脾细胞毒杀伤较小 .接种瘤细胞的鼠 CD4 +数分数都下降 ,CD8+变化不大 ,CD4 + /CD8+比值下降 .具有 B细胞的实验鼠均测得 Ig在 mg· L- 1 水平 ,并能使癌细胞产生凝集反应 .结论　 SCID鼠是建立肿瘤模型和免疫重建研究的理想小鼠 ;小鼠成瘤率与 T细胞相关 ,T细胞在异种瘤移植排斥中起主要作用 ;B淋巴细胞及其产生的抗体在抗肿瘤中起着不可忽视的作用     

Evaluation of tumor formation of three bladder cancer cell lines in nude mice

This study examined the differences in tumor formation of three bladder tumor cell lines (BIU-87, T24 and EJ) after subcutaneously transplanted into nude mice, in order to find the best technique for establishing in vivo bladder tumor model. BIU-87, T24 and EJ cells at logarithmic phase were re-suspended in serum-free medium. The cells suspensions of the identical concentration were subcutaneously transplanted into nude mice and then the success rate and tumor growth were compared among the three cell groups. The results of tumor formation were pathologically evaluated. Lung, liver and kidney tissues were also pathologically examined for distant metastasis. The proliferation of the three cells were determined by immunohistochemically detecting the PCNA expression in the tumors. The results showed that the success rates of EJ and T24 cells were significantly higher than that of BIU-87 cells and no distant metastasis was noted among the three groups. The proliferation levels of EJ and T24 cells was significantly higher than that of BIU-87. But at the later stage of tumor formation, as compared with T24 cells, EJ grew more vigorously, soon resulting in the central necrosis of tumor, which affected the measurement of the actual size of the tumors. Moreover, PCNA staining exhibited that the proliferation of EJ and T24 was significantly higher than that of BIU-87 cells. It is concluded that as compared with BIU-87 cells, EJ and T24 cells had higher success rates, with not significant differences in death rate and distant metastasis found among them. There existed no significant difference in tumor formation between EJ and T24 cells and T24 cells do not rupture easily, which makes it a better cell line for the establishment of in vivo bladder tumor model.     

血管内皮生长因子siRNA对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的实验研究

目的观察VEGF siRNA对人膀胱癌裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用，探讨VEGF作为膀胱癌基因治疗靶点的有效性。方法已稳定转染pGC-siVEGF的T24接种至裸鼠皮下，建立荷瘤裸鼠膀胱癌模型。利用免疫组织化学方法（SABC）检测肿瘤细胞VEGF和肿瘤间质CD34的水平，根据CD34表达情况评价肿瘤微血管密度（MVD），末端脱氧核苷酸转移酶标记法（TUNEL）测定肿瘤细胞凋亡指数。结果实验组与对照组相比较：成瘤率低，肿瘤生长速度缓慢（P〈0．01）；VEGF水平下降（P〈0．01）；肿瘤微血管密度减少（P〈0．01）；凋亡指数升高（P〈0．01）。组间比较差异均具有显著性。结论以VEGF为靶点的小干扰RNA有抑制VEGF表达、遏制膀胱癌T24细胞在体内生长的作用，VEGF有可能成为临床膀胱癌基因治疗的有效靶点，为膀胱癌的抗血管生成疗法提供理论基础。     

SCID鼠人宫颈癌组织模型的建立及其生物学特性初探

目的研究人原代宫颈癌组织在SCID鼠体内成瘤性及生物学特性。方法接种人宫颈癌组织于SCID鼠皮下,以建立人宫颈癌SCID鼠模型,观察荷瘤鼠成瘤、一般特性和移植瘤生长,组织学特性,检测肿瘤组织,外周血和肝、脾等脏器HPVDNA表达情况。结果成瘤率为100%,移植瘤生长以局部浸润为主,未见转移瘤。组织学检查所有移植瘤与种植前肿瘤组织病理检查一致,HPVDNA呈阳性,亚型与所种植人宫颈癌组织HPV亚型一致,而外周血与肝、脾等脏器HPVDNA呈阴性。结论初步建立SCID鼠人宫颈癌组织模型,其较好的模拟了人宫颈癌的生物学特性,为进一步探讨宫颈癌的发病机制及鉴定治疗的新方法提供了一个理想的动物模型。     

抗菌肽LL-37 与膀胱尿路上皮癌关系的初步探讨

目的 检测抗菌肽LL-37 在膀胱尿路上皮癌中的表达,同时体外研究LL-37 对膀胱肿瘤细胞株T24、EJ 的作用。方法 ELISA 检测30 例膀胱尿路上皮癌患者和30 例健康体检者新鲜晨尿中LL-37 的表达,同时检测T24、EJ 细胞和尿路上皮SV-HUC-1 细胞经不同浓度LPS 刺激后细胞培养液上清中LL-37水平。免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测30 例膀胱癌患者的肿瘤组织标本、肿瘤基底及周围组织标本中LL-37 的表达。在体外将不同浓度的LL-37 作用于T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞,MTT 检测细胞的增殖。结果 健康体检者和膀胱癌患者尿液中LL-37 的水平分别为（2.02±0.06）和（24.32±0.02）ng/ml,差异有统计学意义（P <0.05）。免疫组织化学结果显示,LL-37 在癌组织中表达阴性,而在癌组织周围的炎症细胞、血管壁及平滑肌内却呈阳性表达。RT-PCR 结果表明,癌周围组织中LL-37的表达水平比癌组织高约30 倍。T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞经LPS 刺激后培养液上清中LL-37 浓度均升高。在体外,LL-37 呈剂量依赖性地抑制T24、EJ 细胞的增殖,而其对SV-HUC-1 细胞的抑制需更高的浓度。结论 LL-37 与膀胱癌的发生可能有着一定的关联,体外高浓度的LL-37 可抑制膀胱癌T24、EJ 细胞的生长。     

特异性ILK siRNA对膀胱癌移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响

目的 探讨应用整合素连接激酶（integrin-linked kinase,ILK）特异siRNA沉默ILK基因的表达对膀胱癌裸鼠移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响。方法实验分3组：BIU-87细胞组（正常BIU-87细胞）、BIU-87-NC组（转染阴性对照质粒的BIU-87细胞）、BIU-87 siR...     

人膀胱肿瘤细胞的荧光标记及其移植模型的整体荧光成像

目的对人膀胱移行细胞癌T24细胞进行荧光标记并建立其可在活体荧光成像系统下直接观察肿瘤生长及转移的简便、可靠的原位移植模型。方法以绿色荧光蛋白作为标记基因导入人类膀胱移行细胞癌T24细胞株中,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养,然后接种于裸小鼠膀胱壁内及颈部皮下,活体荧光成像系统直接观察肿瘤的生长与转移,并与常规石蜡切片苏木素-伊红(HE)染色比较。结果经绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞在荧光显微镜下发出绿色荧光,并可在体内、外持续稳定表达。膀胱原位接种5×105个转染后的膀胱肿瘤细胞后1周即可在荧光成像系统下观察到下腹部新生膀胱肿瘤发出绿色荧光,2周后膀胱肿瘤可被触及,4周后经解剖可在荧光成像系统下观察到腹膜后及盆腔淋巴结等远处转移。结论绿色荧光蛋白能够在T24人膀胱肿瘤细胞中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人膀胱肿瘤T24细胞建立的裸鼠原位移植模型为进一步研究膀胱肿瘤提供了一种简便、可行的新方法。