无创基因检测的临床应用现状及问题

针对遗传病的产前检测是出生缺陷防控的重要内容之一,而近年来兴起的无创基因检测技术,又称无创产前检测技术(noninvasive prenatal testing,NIPT),可以基于孕妇血浆中胎儿游离DNA来评估胎儿患有遗传病的风险,其准确性高,无创伤性,对传统的产前检测模式产生了巨大的影响,但该技术在临床的应用存在一些误解、滥用或错用情况。该文从NIPT的检测范围、检测失败/检测结果不一致等方面对NIPT的临床应用现状及问题进行讨论,期望能加深临床工作人员对NIPT的适用性和局限性的认识,促进NIPT在临床的规范化应用。     

单基因遗传病基因诊断技术研究进展

单基因遗传病(简称单基因病)种类、分型繁多,常规诊断难以确诊,而基因诊断技术在遗传病特别是单基因病的确诊、分型等方面都发挥着不可或缺的作用.近一、二十年来,基因诊断技术进展迅猛,各种检测方法层出不穷.本文重点围绕基因诊断技术的最新进展进行综述,以期对临床诊断和预防工作提供一些有益的启示.     

泌尿生殖系统单基因病研究进展

单基因遗传病（single gene disorders／monogenic disorders）简称单基因病，是指单一基因突变引起的疾病，符合孟德尔遗传方式，所以又称为孟德尔遗传病（mendelian genetic diseases）。单基因病的研究进展加深了对致病突变和基因调控机制的理解，并有效促进了诊断工具的发展，     

高通量测序技术筛查单基因隐性遗传病

目的探讨用高通量测序技术筛查新生儿单基因隐性遗传病,评估其用于孕前筛查或产前诊断的可行性。方法用目标基因筛选和高通量测序分析法分别对非孕妇的血液基因组DNA和孕妇的血浆游离DNA样本进行400多种遗传病相关基因的全面筛查分析。结果用高通量测序技术成功地在非孕妇的血液中检测出相关的致病基因,并在疑似地中海贫血患者的基因组中发现了导致地中海贫血症的致病突变基因HBB(chr11:5246595 C/G);成功地从孕妇血浆游离DNA检测出来自胎儿的遗传病相关致病基因突变,平均每个样本中有1~4个突变,基因型为杂合型。结论高通量测序技术可用于隐性基因携带者的孕前筛查及产前诊断。     

无创产前检测技术在不同血清学筛查风险值及不同年龄孕妇中检测染色体异常的价值

目的 探讨无创产前检测(NIPT)技术在不同血清学筛查风险值及不同年龄孕妇中检测染色体异常的价值,为实验室筛查技术的临床应用提供参考.方法 回顾性分析同时进行了早期血清学筛查与NIPT的单胎妊娠孕妇11517例,按孕妇年龄及血清学筛查与NIPT结果将研究对象分组,对血清学筛查高风险及NIPT提示结果异常的孕妇,建议进一...     

基于PASS技术的EGFR基因突变比例检测方法的建立与评价

目的 近期临床研究发现EGFR-TKI并非对所有EGFR基因激活突变的NSCLC患者都有效,提示EGFR-TKI的治疗效果也可能与NSCLC患者中EGFR基因突变比例相关。本研究基于平行等位基因特异性测序(Parallel Allele-Specific Sequencing, PASS)方法,建立一个稳定可靠的EGFR突变基因比例检测平台。方法 构建野生型和突变型EGFR基因重组质粒,建立EGFR基因突变比例检测的PASS平台,从灵敏度、精密度以及准确度对PASS检测平台进行性能评价。结果 建立的PASS平台可用于EGFR基因点突变和缺失突变的检测,能够检测到的最小基因拷贝数为1,能够稳定检测到的最小基因拷贝数为10,在野生型基因中最低能检测出0.01%的突变基因。线性回归分析显示,检测到的突变型/野生型比例与预期的突变型/野生型比例呈良好的线性相关(R₂=0.9962)。结论 该方法的建立能够对EGFR基因突变比例进行灵敏、准确测定,这对其在临床中的应用奠定了良好的技术基础,对于评价EGFR基因突变比例与EGFR-TKI靶向治疗NSCLC患者疗效的关系也具有重...     

应用新一代半导体靶向测序技术检测枫糖尿症致病基因突变的研究

目的应用Ion Torrent半导体靶向测序技术检测1例枫糖尿症(MSUD)患儿的致病基因突变,明确其致病突变,并探讨该技术用于复杂单基因病检测的可行性。方法采集患儿外周血,提取基因组DNA,经多重PCR扩增富集目的基因片段,构建平均片段大小为300bp左右的文库,经乳液PCR及磁珠颗粒富集,最后采用318半导体测序芯片进行高通量测序,应用Ion Torrent Suite v3.0软件进行数据提取、序列比对及SNPs和Indels提取,再用dbSNP 137数据库过滤得到SNPs和Indels,可疑突变经Sanger法测序验证。结果检出患儿1个新发错义点突变并通过Sanger测序验证,突变是BCKDHB基因第6外显子的NM183050:c.586CT(p.His196Tyr)。结论 Ion Torrent半导体靶向测序技术可对复杂单基因遗传病进行快速、准确地基因诊断。     

医学遗传学述要——第二讲 单基因病

概念在遗传病中,单基因病占相当大的比例,据McKusick 1981年统计,单基因病(包括异常性状)已达3,358种,其中有的发病率也很高,如遗传性血液病(主要是地中海贫血和镰状细胞贫血),全世界就有1亿人以上,每年约20万儿童死于本病。故有必要对基因突变及其引起的疾病作一概括性了解。     

渝东北地区胎儿染色体非整倍体疾病的NITP分析

目的应用无创产前基因检测(noninvasive prenatal genetic testing,NIPT)技术研究渝东北地区胎儿染色体非整倍体疾病的发病率和年龄分布。方法利用美国life公司二代测序平台及生物信息分析技术,分析2016年7月～2018年5月在重庆三峡中心医院基因检测中心行NIPT检测的2 784例12～24周孕妇的外周血,从中获取胎儿染色体相关信息。对NIPT结果为高风险的孕妇实施羊膜腔穿刺及胎儿染色体核型分析,对NIPT结果为低风险的孕妇进行电话随访至出生后。结果渝东北地区孕妇染色体非整倍体疾病高风险阳性检出率为0.72%(20/2 784)。其中≥40岁阳性率为2.97%,30～39岁阳性率为0.75%,30岁阳性率为0.54%。羊膜腔穿刺分析显示,21-三体、18-三体高风险诊断符合率为100%(11/11,2/2),13-三体高风险诊断符合率为80.00%(4/5)。NIPT诊断胎儿染色体非整倍体疾病的敏感度为100.00%(2 784/2 784),总特异度为94.44%(17/18),总假阳性率为0.03%(1/2 784),假阴性率为0.00%(0/0)。结论渝东北地区NIPT检测胎儿染色体非整倍体疾病的阳性检出率为0.72%,检出主要以21-三体为主,占61%,≥40岁高龄孕妇NIPT阳性率较其他年龄组明显升高,达2.97%。     

高血压基因研究现状与展望

寻找与高血压以及血压调节有关的基因,已成为当前心血管领域的研究焦点之一,一些属于单基因遗传病的继发性高血压的致病基因已被识别。原发性高血压是一种多基因遗传病,其发病系遗传与环境因素共同作用的结果,这为高血压易感基因研究带来很大困难。迄今大多用候选基因法进行高血压相关基因研究。在人和动物模型的研究中,有关高血压候选基因多态性的报道已有四十多种,但各家结果不一致。近年来用微卫星标记进行全基因组扫描和连锁分析,它已成功地用于多基因病相关基因的定位克隆研究。应用该技术对原发性高血压易感基因的定位研究正在进行中。     

基因突变快速检查方法研究进展

基因突变的检查是恶性肿瘤及遗传病基因诊断的重要方法。近年来，以ＰＣＲ技术为基础发展的检测基因突变新技术，在快速、简便、灵敏及非同位素化等方面都得到了较大发展，为基因诊断在临床实验室的广泛应用奠定了方法学基础。本文对这些新技术的基本原理、实验步骤及各自的特点做一简单介绍。     

无创产前检测在高龄孕妇产前筛查唐氏综合征中的应用

目的探讨无创产前检测(non-invasive prenatal testing,NIPT)在高龄孕妇产前筛查唐氏综合征(Down syndrome,DS)中的应用价值。方法采用高通量测序技术检测高龄孕妇血浆中胎儿游离DNA(cell-free Fetal DNA,cff DNA),结合生物信息分析,得出胎儿患染色体病的风险率;DS高危的高龄孕妇再用羊膜腔穿刺术进行胎儿染色体核型分析。结果 2 789例高龄孕妇中检测失败2例(0.07%,2/2 789)。余2 787例中共检测出25例DS高风险胎儿,阳性率0.9%(25/2 787),经羊水染色体核型分析证实24例为DS,1例核型正常。NIPT用于高龄孕妇检测DS胎儿的敏感性为100%(24/24),特异性为99.96%(2 762/2 763),假阳性率为0.04%(1/2 763)。NIPT还检测出16例其他染色体非整倍体高风险,均进行羊水穿刺术,其中确诊12例胎儿染色体核型异常。NIPT应用于2 789例高龄孕妇产前检测,其中共有43例进行有创性产前诊断,穿刺率为1.54%。结论 NIPT用于高龄孕妇检测DS胎儿具有高敏感性和特异性、无创取样的优点,但目前NIPT检测仍存在假阳性。对染色体结构异常无法准确检测。NIPT检测高风险者仍需有创性产前诊断。     

高血压基因研究现状与展望

寻找与高血压以及血压调节有关的基因,已成为当前心血管领域的研究焦点之一．一些属于单基因遗传病的继发性高血压的致病基因已被识别。原发性高血压是一种多基因遗传病．其发病系遗传与环境因素共同作用的结果．这为高血压易感基因研究带来很大困难。迄今大多用候选基因法进行高血压相关基因研究。在人和动物模型的研究中．有关高血压候选基因多态性的报道已有四十多种,但各家结果不一致。近年来用微卫星标记进行全基因组扫描和连锁分析．它已成功地用于多基因病相关基因的定位克隆研究。应用该技术对原发性高血压易感基因的定位研究正在进行中。     

基因突变快速检查方法研究进展

基因突变的检查是恶性肿瘤及遗传病基因诊断的重要方法.近年来,以PCR(polymerase chain reaction)技术为基础发展的检测基因突变新技术,在快速、简便、灵敏及非同位素化等方面都得到了较大发展,为基因诊断在临床实验室的广泛应用奠定了方法学基础.本文对这些新技术的基本原理、实验步骤及各自的特点做一简单介绍.     

母体血浆胎儿核酸分析应用于地中海贫血的无创性产前诊断

地中海贫血(地贫)是世界上最常见的单基因遗传病之一,通过产前诊断淘汰受累重型患儿是目前世界上公认的地贫首选预防措施.母血浆胎儿游离核酸的发现为地贫的无创性产前诊断提供了新的途径.近些年来,针对地贫遗传缺陷(特别是β地贫点突变)的母血浆胎儿游离DNA检测技术,如飞行时间质谱分析、分子大小分离法、肽核酸介导的突变序列富集方法和数字化PCR等技术的发展使开展地贫的无创性产前诊断成为现实,这些技术的进一步发展有望推动无创性产前诊断在其他人类单基因病上的应用.本文除重点阐述与地贫相关的研究外,也对该领域技术发展和应用的整体现状进行了综述.     

胎儿无创染色体非整倍体基因检测应用于产前诊断的临床研究

目的研究无创染色体非整倍体基因检测技术(NIPT)在产前诊断中的应用。方法选择2014年2月至2015年9月来该院诊断中心就诊的360例孕妇(高龄、唐氏生化筛查中等风险及高风险孕妇),采取高通量大规模平行测序方法行NIPT检测。评估NIPT对染色体非整倍体检测的特异性与敏感性。结果 360例NIPT检测孕妇中,5例显示性染色体异常,B超与核型检查结果均正常。NIPT检测结果提示27例18-三体、21-三体高风险的孕妇全部经核型确诊。结论无创染色体非整倍体基因检测技术对18-三体、21-三体综合征具有较高的特异性、敏感性,值得推广应用。     

协和儿科确诊多种国内首例单基因病助我国单基因病诊断水平跨上新台阶

北京协和医院儿科近年来通过分子诊断技术确诊了多种罕见单基因遗传病,其中以Costello综合征为代表的7种疾病均为国内首例报道,标志着我国单基因遗传病诊断水平跨上新台阶。Costello综合征、Kabuki综合征Jansen’SMe．taphyseal Chondrodysplasia、先天性大唾液腺发育不良、黏脂储积症Ⅲ型γ亚型、遗传性系统性玻璃样病、丙酮酸脱氢酶缺乏症等7种单基因遗传病均为罕见病,发病率极低或临床表现极不典型,难以确诊。     

重视内分泌代谢病的基因检测

随着人类基因组计划的顺利完成及功能基因组学的初露端倪,人们对疾病的基因致病机制的认识更加深入,疾病的基因检测作为一项新的诊断技术日益受到重视。基因检测的定义:为临床目的分析受试者DNA、RNA、染色体、蛋白质和代谢产物等,以探知与遗传性疾病相关的基因型、突变、表现型和核型等。内分泌代谢性疾病是一组涉及体内众多器官和组织,诊断和治疗复杂而又困难的疾病。内分泌代谢病的基因致病和诊断的研究正方兴未艾,目前已成为研究热点[1]。从基因致病的角度,可将具有遗传背景的内分泌代谢性疾病分为多基因遗传病和单基因遗传病。内分…     

NIPT及NIPT-plus在IVF胎儿染色体异常筛查中的应用研究

目的探究基于孕妇外周血胎儿游离DNA的无创产前基因检测(NIPT)和拓展性无创产前基因检测(NIPT-plus)在体外受精-胚胎移植(IVF)胎儿染色体异常筛查中的应用价值。方法收集2017年5月—2019年10月在复旦大学附属妇产科医院接受NIPT及NIPT-plus的孕妇,根据其受孕方式分为通过IVF方式受孕(IVF组)和自然受孕(对照组)。对所有研究对象NIPT、NIPT-plus及产前诊断检测结果进行回顾性分析,评价NIPT、NIPT-plus在IVF胎儿染色体异常,包括染色体非整倍体及拷贝数变异(CNV)筛查中的应用价值。结果IVF组孕妇1312例,年龄(32.83±4.02)岁,进行NIPT及NIPT-plus时平均孕周(15.59±2.16)周,其中单胎妊娠925例,双胎妊娠387例;对照组23031例,年龄(30.62±4.77)岁,进行NIPT及NIPT-plus时平均孕周(16.44±2.73)周,其中单胎妊娠22444例,双胎妊娠587例。IVF组NIPT提示21三体(T21)4例(3.05‰),阳性预测值(PPV)为100%;13三体(T13)3例(2.29‰);性染色体异常17例(12.96‰),PPV为55.56%;CNV 3例(2.29‰);其他染色体异常6例(4.57‰),PPV为33.33%。结论NIPT及NIPT-plus在IVF胎儿染色体非整倍体筛查中具有重要价值,常染色体及性染色体三体高风险结果具有较高参考价值;应用于IVF胎儿染色体单体及CNV筛查高风险结果具有一定的预警作用。     

无创DNA产前检测技术发现特殊特纳综合征孕妇1例

正在产前进行的胎儿染色体非整倍体的无创DNA检测技术,主要是通过对大规模平行测序技术进行运用,进行一个既有深度又有效率的测序,对象是针对母体外周血液中的游离DNA,这对提取胎儿染色体信息是一种非常有效的方法。随着无创产前基因检测技术(NIPT)日益成熟,科研探索方面的不断深入,该技术的应用领域也在逐步扩大。现对1例来该院进行NIPT检测的特殊病例作一分析。