乌头碱对KBV200细胞Pgp蛋白表达影响的研究

乌头碱是温阳散寒代表中药附子、乌头的主要成分之一[1].现代研究表明,乌头碱具有抑制肿瘤与抗肿瘤转移、缓解癌性疼痛、增强巨噬细胞的吞噬等作用[2～5].研究中发现,乌头碱能够增加长春新碱对KBv2f00细胞敏感性,推测机制与乌头碱能够抗耐药有关[6].KBv200细胞株具有Pgp蛋白高表达的生物学特征.为进一步证实乌头碱逆转肿瘤多药耐药效应,我们在体外细胞培养过程中,采用流式细胞仪检测了经乌头碱作用后的KBv200细胞Pgp蛋白表达.     

乌头碱抗耐药性人口腔鳞状上皮癌细胞作用的体外研究

目的观察温阳药附子、乌头主要成分乌头碱单用及与长春新碱伍用后的抗癌效果.方法以耐药性人口腔鳞状上皮癌细胞(KBv200)为研究对象,采用细胞体外孵育技术中MTT比色法测定乌头碱的抗癌效果.结果不同浓度的乌头碱能够增加长春新碱对KBv200细胞杀伤的敏感性.结论乌头碱能增加化疗药物的敏感性,其在抗耐药肿瘤方面具有潜在的研究价值.     

乌头碱逆转KBv200细胞多药耐药性体外研究

目的:在既往实验研究基础上,进一步考察乌头碱逆转肿瘤多药耐药效应.方法:采用MTT比色法,分别测定VCR、乌头碱对KBV200细胞毒效应,计算IC 50.并以抑制率低于30%的不同浓度乌头碱与VCR伍用,求IC50值,计算逆转倍数.结果:12.5μg/ml与6.25μg/ml浓度的乌头碱与VCR伍用时,IC50分别为0.2715μg/ml与0.9185μg/ml,逆转倍数分别为8.9倍与2.64倍.结论:乌头碱具有逆转肿瘤细胞多药耐药作用,值得进行深入研究.     

乌头碱逆转KB_(V200)细胞多药耐药性体外研究

目的 :在既往实验研究基础上 ,进一步考察乌头碱逆转肿瘤多药耐药效应。方法 :采用MTT比色法 ,分别测定VCR、乌头碱对KBV2 0 0 细胞毒效应 ,计算IC50 。并以抑制率低于 30 %的不同浓度乌头碱与VCR伍用 ,求IC50 值 ,计算逆转倍数。结果 :12 5 μg ml与 6 2 5 μg ml浓度的乌头碱与VCR伍用时 ,IC50 分别为 0 2 715 μg ml与 0 9185 μg ml ,逆转倍数分别为 8 9倍与 2 6 4倍。结论 :乌头碱具有逆转肿瘤细胞多药耐药作用 ,值得进行深入研究。     

乌头碱影响KBV200细胞Pgp蛋白表达的组化实验

目的:通过观察Pgp蛋白表达的细胞阳性率探讨乌头碱抗KBV200细胞耐药机制。方法:以免疫组化法,分别测定6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后的KBV200细胞Pgp蛋白阳性表达率。结果:对照组Pgp蛋白表达的阳性细胞为96%;而6.25μg/mL、12.5μg/mL乌头碱作用后Pgp蛋白表达的阳性细胞率分别为83%、30%。结论:乌头碱能够降低KBV200细胞Pgp蛋白高表达,部分逆转KBV200细胞耐药性。     

利用基因芯片技术研究乌头碱抗KBV200细胞耐药机制

目的采用基因芯片技术研究乌头碱抗KBV200细胞耐药机制。方法提取乌头碱12.5μg/mL用药组和对照组KBV200细胞的RNA,进行cDNA微阵列分析。结果整张基因芯片5504个基因克隆,其中用药前高表达基因208个,占克隆总数的3.8%,用药后高表达基因196个,占3.6%。用药前后细胞凋亡相关基因、CDKS家族、SMADS家族、MAPK信号转导系统等的基因发生变化。结论乌头碱可能通过影响细胞凋亡相关基因和影响MAPK信号转导系统等机制,最后作用于Mdr1基因的表达,从而起到抗耐药作用。     

浅谈中药中毒机理及其特效拮抗剂

对含乌头碱、莨菪碱、氰甙、吗啡、可待因、强心甙以及矿物类中药的中毒机理进行了分析，并总结了目前临床公认效果良好的拮抗剂。     

茶多酚和粉防己碱联合抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用

目的研究天然有效成分茶多酚(TP)和粉防己碱(TET)分别联合4种常见抗肿瘤药物对鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)增殖的抑制作用。方法以鼻咽癌耐药细胞株HNE-1(200)为研究对象,用MTT法测定无毒剂量的TP和TET分别联合顺铂(DDP)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱(VCR)、阿霉素(ADM)对实验细胞的增殖抑制率。结果无毒剂量的TP分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约200%;无毒剂量的TET分别与4种抗肿瘤药物联合应用后,药物对HNE-1(200)细胞的抑制率增加约300%。结论无毒浓度的天然药物TP、TET分别与抗肿瘤药物联合应用能提高药物对鼻咽癌耐药细胞株的增殖抑制率,降低药物的IC50。     

薄层扫描法测定镇痛宁注射液中乌头碱的含量

镇痛宁注射液是由制川乌、盐酸异丙嗓等中西药合用的复方制剂，具有活血化瘀、止痛作用。90年版中国药典采用酸碱中和法测定乌头碱含量，因本方中的异丙嗓具有碱性，有影响，而且需用乌头碱对照品量大，操作复杂，放采用薄层扫描法对乌头碱的含量进行了研究。1仪器与试药日本岛     

附子总生物碱在阳虚便秘模型大鼠体内的整合药动学分析

目的:研究大黄蒽醌类成分与附子总生物碱组分配伍灌胃后,附子总生物碱在阳虚便秘模型大鼠体内的整合药动学特征。方法:将大鼠分正常组和便秘组,后者依次灌胃附子总生物碱(19.2 mg·kg~(-1))和大黄蒽醌类成分(38.4 mg·kg~(-1)),采用UHPLC-Q/TOF-MS测定7种成分(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱)在不同时间点的血药浓度,流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.25 m L·min~(-1),检测波长200~400 nm,电喷雾离子化源,正离子模式检测,绘制药-时曲线,计算整合药动学参数。结果:与正常组比较,便秘组乌头碱、次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和乌头原碱的整合药动学参数药峰浓度(Cmax)和药-时曲线下面积(AUC0-∞)升高,代谢加快;新乌头碱的AUC0-∞与正常大鼠相近,半衰期(t1/2)延长,其在正常大鼠体内代谢更快。结论:附子总生物碱整合药动学数据仍具有明显的药动学过程特征,且与7种生物碱类成分各自的药动学特征基本一致,可表达上述生物碱类成分整体的药代动力学行为。     

甘草与附子配伍对乌头碱、新乌头碱、次乌头碱大鼠药动学的影响

目的:建立HPLC-MS同时测定大鼠血浆中的乌头碱、新乌头碱、次乌头碱含量的方法,并用于研究大鼠口服3种含附子煎液后乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的药动学变化。方法:3组大鼠分别灌胃附子煎液(A液)、甘草附子单煎合并液(B液)、甘草附子合煎液(C液),附子剂量均为1.5 g/kg,HPLC-MS法测定乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的血药浓度,用DAS 2.0数理统计软件分别计算其药动学参数。结果:甘草与附子配伍后,三种乌头碱的Cmax、AUC均降低,MRT、t1/2均延长,Tmax无明显变化。甘草附子合煎液相比于甘草附子单煎合并液,Cmax、AUC更低,MRT、t1/2更长。结论:甘草能够显著影响附子中三种乌头碱的药动学。     

芍药苷对乌头碱在Caco-2细胞模型上转运行为的影响研究

目的:研究芍药苷对乌头碱在Caco-2细胞模型转运行为的影响。方法:以乌头碱累积转运量及表观渗透系数Papp值为指标,采用高效液相色谱法对乌头碱含量进行检测,考察不同浓度、不同孵育时间、不同方向乌头碱在Caco-2细胞上的转运行为,以及与芍药苷不同配伍后转运行为的变化,并考察P-gp抑制剂存在与否对乌头碱转运行为的影响。结果:乌头碱累积转运量与给药浓度、孵育时间呈正相关,不同浓度乌头碱Papp值均大于1×10-6cm·s-1,且保持恒定,无统计学意义,但外排作用明显强于吸收,外排比接近1.5。在P-gp抑制剂维拉帕米存在条件下乌头碱转运量显著增加。当乌头碱与芍药苷配伍比例为1∶60时,乌头碱转运量显著减小。结论:乌头碱为吸收良好的一类药物,以被动转运为主,但仍存在外排蛋白P-gp的参与。当芍药苷配伍乌头碱达到一定比例时,对乌头碱的肠吸收具有显著的抑制作用。     

附子中3种双酯型生物碱在体外血浆中的水解规律研究

目的:建立体外血浆温孵法测定乌头碱、中乌头碱和次乌头碱水解规律的方法。方法:空白兔血浆加入不同浓度的3种生物碱混合对照品溶液,通过对温孵不同时间血浆样品的预处理(沉淀蛋白、除杂)、分离和检测等过程实现复杂生物样品中待测成分的分离分析。结果:乌头碱、中乌头碱和次乌头碱浓度在血浆中均随温孵时间的延长逐渐降低,水解速率中乌头碱>乌头碱>次乌头碱,与附子饮片在炮制过程中3种双酯型生物碱的水解规律一致。结论:所建立的体外水解方法简单、稳定、可控,对上述3种成分的体内药动学研究具有一定的参考意义。     

郭志红擅用附子经验

附子为毛莨科多年生草本植物乌头的子根加工品，其子根为乌头，主产于四川、陕西、云南，其味辛、甘，性大热，有毒，通行十二经，主入心、脾、肾经。现代药理研究表明，附子主要化学成分是多种生物碱，其中以乌头碱、次乌头碱、中乌头碱为主。川、滇产主要含次乌头碱、内脂生物碱，有强毒性，不易溶于水，受热可分解，加热水解后可变为乌头原碱，毒性只有原来的二千分之一，故加热、加水可解其毒。     

人工种植伏毛铁棒锤的化学成分研究

目的 研究人工种植伏毛铁棒锤的化学成分.方法 采用超声波乙醇提取法和正、反相硅胶柱色谱分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定结构.结果 从人工种植的伏毛铁棒锤中分离鉴定出11个化合物,分别为3脱氧乌头碱(Ⅰ)、3-乙酰乌头碱(Ⅱ)、乌头碱(Ⅲ)、3-脱氧乌头原碱-8亚油酸酯(Ⅳ)、尼奥灵(Ⅴ)、宋果灵(Ⅵ)、乌头原碱-8亚油酸酯(Ⅶ)、16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱(Ⅷ)、12-表-欧乌头碱(Ⅸ)、欧乌头碱(Ⅹ)和6-O-去甲基尼奥灵(Ⅺ).结论 人工种植的伏毛铁棒锤的化学成分与已报道野生的基本相同,人工种植的伏毛铁棒锤能够满足药用需要.     

附子单煎以及与浙贝母合煎后乌头碱、次乌头碱、新乌头碱等有毒成分的含量变化研究

目的：应用反向高效液相色谱法（RP-HPLC）测定附子中有毒成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的色谱方法，比较附子单煎、附子与浙贝母合煎后有毒成分的变化趋势，从而从化学成分变化角度证明中医理论——十八反的科学内涵；方法：试验用二氯甲烷（CH2CL2）和三氯甲烷（CHCL3）分别对采用同一煎煮条件得到的单煎、合煎物进行萃取处理，并根据《中华人民共和国药典）2000年版一部附录VID高效液相色谱法中规定对该样品进行HPIC测定；结果：发现在相同处理条件下，附子与浙贝母合煎样品中的有毒成分乌头碱、次乌头碱、新乌头碱的含量高于附子单煎样品；在此测定条件下可以有效的分离上述3种成分。且测定成分附近没有干扰峰；结论：经过与浙贝母合并煎煮后，有毒成分乌头碱、次乌头以及新乌头碱的含量显著提高，从化学成分变化的角度证明中药配伍理论——“十八反”具有科学内涵。     

HPLC法测定四逆汤中甘草次酸的含量

四逆汤由附子、炙甘草、干姜组成。其中附子为君药，具有毒性。附子中研究最多的成份为乌头类生物碱，如乌头碱、新乌头碱、次乌头碱，这些生物碱毒性很大，量甚微，几乎很难检测到，目前国内外普遍采用测定这三种生物碱的含量作为此类药材的质量控制指标。甘草的主要成份为甘草酸、甘草次酸、黄酮类化合物，以往对甘草的研究主要侧重于甘草酸，而甘草次酸是甘草酸水解后的甘元，在四逆汤方剂中，甘草次酸是对抗附子引起心律失常的主要成份，而且能够改善代谢性酸中毒，增强组织用氧能力，是四逆汤中最重要的解毒成份，所以笔者建立了四逆汤中甘草次酸的测定方法，可用于四逆汤制剂的质量控制指标之一，现介绍如下。     

制川乌配伍白芍对6种乌头生物碱经皮吸收的影响

目的研究制川乌配伍白芍对6种乌头生物碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱)经皮吸收的影响。方法采用改良Franz扩散池,以离体小鼠皮肤为透皮屏障,HPLC法测定该配伍中6种乌头生物碱,计算其透皮速率和渗透系数。结果制川乌配伍白芍后,苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱的增渗倍数分别为1.99、2.05、1.83、2.01、2.20、2.16。结论制川乌配伍白芍后,可促进苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱的经皮吸收。     

不同炮制时间附子饮片双酯型生物碱含量变化与饮片安全的相关性研究

目的:对不同炮制时间附子饮片的毒-效性与饮片3种双酯型生物碱的含量变化进行相关性研究.方法:以附子"回阳救逆"功效为评价重点,采用Bliss法和序贯法对不同炮制时间附子饮片进行安全性评价;将饮片乌头碱、中乌头碱、次乌头碱含量变化与饮片TD_(50),ED_(50),TI进行关联性分析,并对3种双酯型生物碱与饮片毒性、药效的相关性进行分析.结果:具有"回阳救逆"功效和"高效低毒"特点的附子饮片保存了适量的中乌头碱和次乌头碱,乌头碱干扰了附子"回阳救逆"功效的显现(负相关),次乌头碱与附子的毒性和"回阳救逆"功效均成正相关.结论:中乌头碱、次乌头碱在饮片中的适当配比存在是保证附子"回阳救逆"及安全性的关键.     

从蛋白质自组装的角度探析甘草附子配伍减毒机制

甘草与附子配伍有减毒增效的作用。该研究从中药汤剂甘草和附子混煎过程中蛋白质自组装的现象入手,以甘草蛋白和附子主要毒性物质——乌头碱为研究对象,探析甘草附子配伍减毒机制。研究发现经分离纯化后的甘草蛋白在p H 5时可通过自组装形成粒径为(206.2±2.02)nm的稳定颗粒,且可与乌头碱形成平均粒径为(238.20±1.23)nm的甘草蛋白-乌头碱稳定颗粒。通过小鼠急性毒性实验发现注射乌头碱单体的小鼠全部死亡,而注射相同乌头碱含量的甘草蛋白-乌头碱颗粒的小鼠全部存活。对甘草蛋白-乌头碱胶体颗粒的稳定性的调查显示,该胶体颗粒在室温下较稳定,具有成为候选药物载体的可能性。综上所述,甘草蛋白可通过与乌头碱自组装而达到减毒效果。