脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及耐药机制研究进展

脓肿分枝杆菌复合群是非结核分枝杆菌病中最常见的快速生长型分枝杆菌之一,对大多数抗结核药物耐药,临床治疗难度大。脓肿分枝杆菌复合群的3个亚种对多种抗生素的敏感性存在较大差异,临床实验室对其3个亚种的准确分型鉴定对于治疗药物的选择有重要价值。中华医学会结核病学分会制定了非结核分枝杆菌病诊断与治疗指南（2020版）,按照美国临床和实验室标准协会（CLSI）分枝杆菌药敏试验标准（2018版）进行脓肿分枝杆菌药敏试验,建议根据药敏试验结果选用多药联合治疗方案。现就脓肿分枝杆菌复合群药敏试验及对主要治疗药物的耐药机制的研究进展进行综述。     

非结核分枝杆菌分离与致病的相关性研究

目的 探讨非结核分枝杆菌分离与非结核分枝杆茵痛诊断的关系.方法 对2007年1～12月我院检验科分离的非结核分枝杆菌的实验资料及相应病例资料进行回顾性分析.结果 全年分枝杆菌培养阳性3046株,其中非结核分枝杆菌628株(占20.62%),它们包括鸟-胞内分枝杆菌复合群149株、戈登分枝杆菌98株、龟分枝杆菌90株、脓肿分枝杆菌90株,不产色分枝杆菌62株,瘰疬分枝杆菌31株、偶发分枝杆菌30株、耻垢分枝杆菌30株、次要分枝杆菌12株及其它非结核分枝杆菌56株.按中华医学会<非结核分支杆菌诊断与处理指南>(2000),从细菌学角度有13例鸟-胞内分枝杆菌病、9例龟分枝杆菌病,9例脓肿分枝杆菌病、4例偶发分枝杆菌病、2例不产色分枝杆菌病,1例戈登分枝杆菌病及1例其它非结核分枝杆菌病等39例病例确立诊断,涉及分离的非结核分枝杆菌96株.结论 多数非结核分枝杆菌为定植茵或污染菌.偶发分枝杆菌、龟分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、鸟-胞内分枝杆菌复合群等为非结核分枝杆菌病常见致病性菌种.     

结核菌L型的形成及其分离与鉴定

目的 探讨结核分枝杆菌L型的形成规律及其检测与鉴定方法。方法 将结核分枝杆菌分别接种于苏通液体培养基以及含最低抑菌浓度（MIC）的利福平、异烟肼、乙胺丁醇的苏通液体培养基内培养,L型自发形成或被诱导形成后过滤和传代培养获得L型纯培养物。观察L型纯培养物的形态与生长特性以及用结核分枝杆菌特异性基因片段的引物对L型进行菌种的PCR检测与鉴定。结果 结核分枝杆菌在非高渗透压培养基内培养3天后可自发形成L型,最低抑菌浓度的利福平、异烟肼、乙胺丁醇能够迅速诱导结核分枝杆菌大量形成L型。培养物经0．22μm孔径滤菌器过滤后传代培养可获得L型纯培养物,结核分枝杆菌特异性基因片段的PCR反应能够检测结核分枝杆菌L型并且对L型进行菌种的快速鉴定。结论 结核分枝杆菌能够自发形成和在抗结核药物的诱导下形成L型,从而导致病原学检查的漏诊或误诊以及影响治疗效果。采用非高渗培养法能够有效检出结核分枝杆菌L型,用结核分枝杆菌特异性基因片段的P（R反应能够对结核分枝杆菌稳定L型进行菌种快速鉴定。     

扬州地区结核与非结核分枝杆菌耐药现状分析

目的通过总结近年来扬州地区结核与非结核分枝杆菌耐药现状,为该地区肺结核病化疗选择药物提供参考依据。方法通过鉴别培养基对硝基苯甲酸（PNB）和噻吩-2-羟酸肼（TCH）做分枝杆菌菌型初筛鉴别,绝对浓度法检测耐药。结果结核分枝杆菌群分离率为94.63%（141/149）,非结核分枝杆菌分离率为5.37%（8/149）;结核分枝杆菌群耐多药率14.18%,总耐药率49.65%。非结核分枝杆菌耐多药率87.5%,总耐药率100%。结核分枝杆菌群以耐TH1321、SM、INH和RFP多见,非结核分枝杆菌高耐药与结核分枝杆菌群相似。结论本地区肺结核以结核分枝杆菌群为主,耐多药率及总耐药率高于全国水平,非结核分枝杆菌分离率较低,但临床应十分警惕。     

非结核分枝杆菌临床药敏结果分析

目的 为探讨非结核分枝杆菌变化以及耐药性,临床对其进行药敏试验并对结果进行分析.方法 选取本院2013年7月至2015年6月期间从肺部疾病患者痰、支气管冲洗液中分离得到的196株非结核分枝杆菌,分析其细菌种类、耐药性等情况.结果 病菌多分布在鸟-胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、龟-偶发分枝杆菌复合群、耻垢分枝杆菌中,其依次所占比例为31.6％、17.3％、14.8％、12.2％,克拉霉素对鸟-胞内分枝杆菌、龟分枝杆菌、龟-偶发分枝杆菌复合群、耻垢分枝杆菌等菌种敏感性较高,利福平、链霉素、异烟肼、乙胺丁醇、左氧氟沙星、莫西沙星、丙硫异烟胺对非结核分枝杆菌均有较高耐药性,且耐药性均在60.0％以上.结论 通过临床对非结核分枝杆菌进行药敏实验,对临床医师选药治疗,提高治疗效果有重要意义.     

分枝杆菌菌种鉴定DNA微阵列的初步研究与应用

目的制备快速鉴定分枝杆菌菌种的DNA微阵列。方法根据19种分枝杆菌标准株的16SRNA序列设计寡核苷酸探针,制备DNA微阵列,通过反向杂交技术鉴定19种分枝杆菌标准株、9种非分枝杆菌标准株和31株分枝杆菌临床分离株带荧光标记的PCR产物。结果该DNA微阵列与9种非分枝杆菌标准株不杂交,具有分枝杆菌特异性;可将19种分枝杆菌标准株鉴定到群或种,具有较高的分枝杆菌种特异性。应用PCR-SSCP分枝杆菌初步菌种鉴定方法对31株分枝杆菌临床分离株进行初步的鉴定,9株为结核分枝杆菌复合群和22株为非结核分枝杆菌。应用DNA微阵列进一步进行菌种鉴定,9株与探针a杂交阳性,为结核分枝杆菌复合群;2株与探针c杂交阳性,为胞内分枝杆菌;8株与探针d杂交阳性,为堪萨斯分枝杆菌或瘰疬分枝杆菌或猿猴分枝杆菌或胃分枝杆菌;1株与探针k杂交阳性,为戈登分枝杆菌;2株与探针p杂交阳性,为龟分枝杆菌脓肿亚种;2株与探针r杂交阳性,为偶然分枝杆菌;1株与探针s杂交阳性,为草分枝杆菌;2株与探针a和p杂交阳性,为结核分枝杆菌和龟分枝杆菌脓肿亚种复合感染株;1株与探针a和r杂交阳性,为结核分枝杆菌和偶然分枝杆菌复合感染株;3株与该芯片杂交阴性。2株临床分离株经基因测序也证实DNA微阵列鉴定的特异性。结论该DNA微阵列有可能简便、快速、准确地     

非结核分枝杆菌感染现状和治疗的探讨

目的：了解河南省非结核分枝杆菌感染发病情况,探讨非结核分枝杆菌肺病的有效治疗方案。方法：对调查点的儿童做PPD试验;肺部异常阴影,痰抗酸杆菌阳性患者做培养、耐药试验和菌型鉴定;确诊为非结核分枝杆菌肺病的患者给予治疗。结果：结核杆菌感染率为20．8％,非结核分枝杆菌感染率10．9％;非结核分枝杆菌肺病患者痰菌：耐药率100％;治愈率68．8％。结论合理的化疗方案对非结核分枝杆菌肺病可取得较满意的效果．     

镇江地区结核分枝杆菌DNA指纹图谱分型及耐药性分析

目的：分析镇江地区结核分枝杆菌的DNA指纹图谱分型及耐药情况。方法收集174例疑似结核病患者痰液标本,通过鉴别培养基对硝基苯甲酸（ PNB）和噻吩－2－羟酸肼（ TCH）进行分枝杆菌菌型初筛,再通过本室建立的PCR－ELISA法明确鉴定结核杆菌菌种,用比例法进行药敏实验,用DNA随机扩增多态性（ RAPD）指纹分型法,对其中44株耐药人型结核分枝杆菌进行DNA指纹图谱分型。结果从174份标本中分离出人型结核分枝杆菌141株（81．03％）,牛型结核分枝杆菌20株（11．49％）,非结核分枝杆菌13株（7．47％）,总耐药率42．53％;耐药率由高到低依次为异烟肼（INH）＞氧氟沙星（OFX）＞利福平（RFP）＞链霉素（SM）＞乙胺丁醇（EMB）＞卡那霉素（KM）＞卷曲霉素（ CPM）＞阿米卡星（ AKM）;非结核分枝杆菌对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于结核分枝杆菌（ P＜0．01）。复治组对EMB、RFP、SM、INH的耐药率显著高于初治组的耐药率（P＜0．01）。中、老年患者耐药率明显高于青年患者（P＜0．05或P＜0．01）。将44株耐药人型结核杆菌,用RAPD－PCR分型,并用NTsys 2．10e软件作聚类分析,共分为5型（Ⅰ型-Ⅴ型）,其中以Ⅰ-Ⅲ型为主,占84．09％。各型的耐药率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论本地区肺结核以人型结核分枝杆菌为主,结核杆菌总体耐药率和耐多药率相对较高。 RAPD指纹分型结果显示,该地区结核分枝杆菌具有明显的基因多态性,成簇类型是主要流行菌株。各型与耐药性无明显相关性。     

结核分枝杆菌耐乙胺丁醇的分子机制及其检测研究进展

结核病仍是目前威胁人类的三大感染性疾病之一，耐药结核菌的流行则导致更加严重的危害。乙胺丁醇(ethambutol。EMB)是一线抗结核药物，被广泛应用于结核分枝杆菌、鸟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌等多种非结核分枝杆菌的治疗，但近年来EMB的耐药率有上升趋势，在一些国家获得性EMB耐药率已达13．7％。因而，进一步研究结     

非结核分枝杆菌病的治疗研究进展

非结核分枝杆菌病系由结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌(Non-tuberculous mycobacteria,NTM) 引起的疾病。NTM除引起肺部病变外,尚可引起其他部位病变,常见的是淋巴结炎、皮肤软组织感染和骨骼系统病变,对严重的细胞免疫抑制者还可引起血源性播散。由于多数传统抗结核药物对大多数NTM很少或没有活性,所以NTM病治疗困难,预后不佳。近十余年来对NTM病的研究已取得很大进展,药物研究亦在迅速进展中。在原有抗结核药物的基础上,又出现了一些抗结核新药,其中一些对NTM病有效。尤其近年研究的疏水衍生物,显示了更大的抗NTM活性。     

Natural and acquired macrolide resistance in mycobacteria

The genus Mycobacterium contains two of the most important human pathogens, Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium leprae, the etiologic agents of tuberculosis and leprosy, respectively. Other mycobacteria are mostly saprophytic organisms, living in soil and water, but some of them can cause opportunistic infections. The increasing incidence of tuberculosis as well as infections with non-tuberculous mycobacteria (NTM) in AIDS patients has renewed interest in molecular mechanisms of drug resistance in these pathogens. Mycobacteria show a high degree of intrinsic resistance to most common antibiotics. For instance, species from the M. tuberculosis complex (MTC) are intrinsically resistant to macrolides. Nevertheless, some semi-synthetic macrolides as the erythromycin derivatives clarithromycin, azithromycin and most recently the ketolides, are active against NTM, particularly Mycobacterium avium, and some of them are widely used for infection treatment. However, shortly after the introduction of these new drugs, resistant strains appeared due to mutations in the macrolide target, the ribosome. The mycobacterial cell wall with its specific composition and structure is considered to be a major factor in promoting the natural resistance of mycobacteria to various antibiotics. However, to explain the difference in macrolide sensitivity between the MTC and NTM, the synergistic contribution of a specific resistance mechanism might be required, in addition to possible differences in cell wall permeability. This mini-review summarizes the current knowledge on the natural and acquired macrolide resistance in mycobacteria, gives an overview of potential mechanisms implicated in the intrinsic resistance and brings recent data concerning a macrolide resistance determinant in the MTC.     

In vitro and ex vivo activity of new derivatives of acetohydroxyacid synthase inhibitors against Mycobacterium tuberculosis and non-tuberculous mycobacteria

Sulfometuron methyl (SM) is an inhibitor of acetohydroxyacid synthase (AHAS), the first common enzyme in the branched-chain amino acid biosynthetic pathway, and shows activity against Mycobacterium tuberculosis both in vitro and in vivo. To develop AHAS inhibitor derivatives with more potent activity, 100 sulfonylurea analogues were screened for antimycobacterial activity against M. tuberculosis and non-tuberculous mycobacteria (NTM), and then evaluated for intracellular activity using mouse macrophages. Three new compounds with antimycobacterial activity comparable with that of SM were identified. These compounds exhibit significant activity against intracellular M. tuberculosis (including the drug-resistant M. tuberculosis strains), and NTM Mycobacterium abscessus and Mycobacterium kansasii, respectively.     

糖尿病合并肺结核患者结核分枝杆菌L型感染的研究

目的研究糖尿病合并肺结核患者结核分枝杆菌L型的感染情况,探讨其对临床的指导意义。方法选取2009年1月至2011年12月淮南东方医院总院收治的初诊肺结核患者128例。其中,糖尿病合并肺结核患者60例(研究组),单纯涂阳肺结核(没有合并糖尿病)患者68例(对照组)。两组患者均进行痰结核分枝杆菌细菌型和L型培养,并对培养物进行涂片镜检、鉴定,同时对L型培养物进行PCR鉴定,并对所分离到的L型菌株进行回复性的实验。结果研究组60例糖尿病合并肺结核患者中,结核分枝杆菌细菌型培养阳性13例(21.67%),L型培养阳性28例(46.70%),两者之间差异极其显著(χ2=7.86,P<0.05);其中糖化血红蛋白(HbA1c)≤6.5%的糖尿病合并肺结核患者L型阳性检出率为33.40%,糖化血红蛋白(HbA1c)>6.5%L型阳性检出率为86.10%;两者之间差异显著(χ2=8.76,P<0.05)。经PCR鉴定,28例L型培养阳性物中,23例呈阳性反应,5例呈阴性反应。对照组68例单纯性肺结核患者中,细菌型培养阳性38例(55.89%),L型培养阳性4例(5.89%),PCR鉴定均呈阳性反应。结论糖尿病患者合并肺结核后结核分枝杆菌L型的感染率较高;其中血糖控制不佳的患者结核分枝杆菌L型的感染率比血糖控制较好的患者感染率高。大多数结核分枝杆菌L型具有回复为细菌型而导致结核病的内源性复发的潜在倾向。糖尿病是并发结核的高危因素,我们通过结核分枝杆菌L型检测可以发现隐藏的糖尿病合并肺结核阳性患者,减少漏诊、误诊现象。而治疗效果不佳的糖尿病合并肺结核患者,能通过结核分枝杆菌L型的检测证实有结核分枝杆菌L型的存在,能够及时调整治疗方案,提高诊疗效果,缩短病程。取得良好的社会效益。     

Drug susceptibility of the Mycobacterium genus: in vitro tests and clinical implications

This review describes the mechanisms of drug resistance of the most clinically relevant mycobacteria and the methods that have been used for studying drug susceptibility (pnenotype, genotype and in vivo tests) and it describes the more important resistance mechanisms to the drugs. Also, this review describes the relationship between microbiological and pharmacological data and the importance of latency -stationary phase- in mycobacteria. Current clinical guidelines on the treatment of tuberculosis (populations of Mycobacterium tuberculosis within the host, drugs and duration, importance of HIV infection in the treatment of tuberculosis, and treatment of latent tuberculosis) and other diseases caused by mycobacteria (specially associated a Mycobacterium kansasii, Mycobacterium avium complex, Mycobacterium fortuitum and Mycobacterium chelonei) are commented in view of drug resistance information, including the more commonly accepted treatments to these diseases. In addition, the impact of pharmacological studies in predicting response to therapy is reviewed. Finally, it describes the new methods of susceptibility testing and the new antituberculous drugs.     

结核病临床分离株及痰标本中embB基因型的快速测定

目的建立快速测定结核病耐乙胺丁醇(EMB)分离株和痰标本中结核分枝杆菌EMB耐药基因型的方法，以期为患者提供及时、有效地化验结果。方法应用16S rDNA聚合酶链反应(PCR)-单链构象多态性(SSCP)和PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)对11株耐EMB分离株和46例结核病痰标本进行分子菌种鉴定和embB基因突变的部位与性质分析。结果以结核分枝杆菌H37Rv标准株为对照，11株耐EMB分离株和46例临床痰标本经16S rDNA PCR-SSCP分析电泳图谱均与结核分枝杆菌标准株相同；限制性内切酶NlaⅢ消化embB基因扩增产物显示，11株耐EMB分离株中4株(36．4％)不被NlaⅡ消化；46例结核病痰标本中10例(21．7％)不被NlaⅡ消化。结论部分结核分枝杆菌耐EMB是由于embB基因突变所致。采用PCR-SSCP和PCR-RFLP方法可直接快速测定结核病耐EMB分离株和痰标本中结核分枝杆菌耐EMB基因型。     

结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析

快速准确地诊断出结核分枝杆菌感染是控制和治疗结核病的前提和关键。多年来,结核杆菌的诊断技术在不断地发展和创新,近年来,一些针对结核杆菌检测的新方法陆续被报道,一些新型的诊断技术产品也陆续上市。本资料综述了结核杆菌的主要诊断方法,并对目前国际市场上广泛应用的商业化诊断技术产品进行了简要分析。     

抗分枝杆菌植物天然产物研究进展

摘要：由分枝杆菌引起的感染是人类健康的巨大威胁。目前,多种结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌对临床抗分枝杆菌药 物具有较高的耐药性。中药治疗分枝杆菌感染具有悠久历史。例如,中药材狼毒已应用于抗结核分枝杆菌的治疗。非中药来源 的植物中,也蕴含丰富的抗分枝杆菌成分。这些植物来源的天然产物具有较好的结构多样性,是开发抗分枝杆菌药物的潜在来 源。本文综述了近年来在中药和其他非中药来源植物中发现的,具有良好抗分枝杆菌活性的化合物或提取物,并介绍了它们的 作用机制。这些活性植物天然产物为新抗分枝杆菌药物的发现提供了化合物库。同时,这些植物天然产物结构与现有抗分枝杆 菌药物具有显著的差别,研究其作用机制,也可发现新的抗分枝杆菌靶标。     

噬菌体变色法检测结核分支杆菌的临床研究

目的初步建立一种结核分支杆菌快速检测方法。方法取两支无菌培养管,一支加入结核分支杆菌标准株（H37Rv）或者处理后的痰标本液;另一支加入蒸馏水作对照。两支试管均加入噬菌体D29,37℃培养90min,用硫酸亚铁铵杀死结核分支杆菌菌体外的噬菌体,柠檬酸三钠和氯化钙混和液中和硫酸亚铁铵。加入耻垢分支杆菌和硝酸钾,37℃培养6h,加入显色剂显色。同时应用噬菌体显色法和改良罗氏培养法检测20份临床标本,观察两种方法的检测效果。结果该方法灵敏度和特异性都为100％;临床标本的本法和罗氏检测表明两方法结果具有一致性（P〉0．01）。结论噬菌体变色法可作为结核分支杆菌的快速检测方法。     

噬菌体变色法检测结核分支杆菌的临床研究

目的初步建立一种结核分支杆菌快速检测方法。方法取两支无菌培养管,一支加入结核分支杆菌标准株（H37Rv）或者处理后的痰标本液;另一支加入蒸馏水作对照。两支试管均加入噬菌体D29,37℃培养90min,用硫酸亚铁铵杀死结核分支杆菌菌体外的噬菌体,柠檬酸三钠和氯化钙混和液中和硫酸亚铁铵。加入耻垢分支杆菌和硝酸钾,37℃培养6h,加入显色剂显色。同时应用噬菌体显色法和改良罗氏培养法检测20份临床标本,观察两种方法的检测效果。结果该方法灵敏度和特异性都为100％;临床标本的本法和罗氏检测表明两方法结果具有一致性（P〉0．01）。结论噬菌体变色法可作为结核分支杆菌的快速检测方法。