超滤浓缩法制备高效价人源抗-A、抗-B血型定型试剂

目的　探讨超滤浓缩法制备高效价人源ABO血型定型试剂的适用性。方法　采用小型超滤器超滤浓缩血清 ,对浓缩前后的血清测定血型血清学、总蛋白含量等指标的变化。结果　浓缩后血清抗体的效价、亲和力、凝集强度、血清总蛋白浓度等均有所增强。结论　超滤浓缩法可用于标准抗 A、抗 B血清及稀有血清的浓缩制备 ,可提高抗体效价     

胆固醇检测试剂的校准偏差和基质效应

目的 试验胆固醇试剂的校准偏差和基质效应。方法 用酶法和高效液相色谱法测定新鲜血清和不同基质类型的校准注胆固醇浓度,比较两法的测定结果。结果 多数被检试剂－校准物系统存在校准偏差（＝３．５％至＋９．４％）;所有被检试剂对冻干血清、胆固醇水溶液等制备物有不同程序的基质效应,而冰冻人血清基质效应最小。结论 制备胆固醇校准物需充分认识指定度剂条件下的基质效应,根据新鲜血清测定结果,做出正确定值。     

用Rh(D)阳性红细胞吸收制备抗-D试剂血清

目的　解决人源Rh试剂血清制备困难 ,节约Rh阴性红细胞。方法　①将A、B型含有抗 D的 2种血浆混合 ,经过稀释中和后的血浆完全抗体效价下降到只有 2 ;②采用D抗原位点结合被完全封闭的相应ABO血型Rh(D)阳性红细胞 ,吸收中和后的抗 A、抗 B。结果　既吸收了抗 A、抗 B ,又未使抗 D效价降低 ,检测效价及特异性符合Rh抗 D试剂血清要求。结论　采用中和后再吸收的方法 ,解决了人源Rh试剂血清制备困难 ,可节约大量Rh阴性红细胞。     

-20℃和4℃保存人源ABO分型血清的比较

<正> ABO分型血清在特异性、效价和亲和力等方面都必须符合一定的标准,以免误定血型,给受血者带来严重后果。要获得效价大于128的人源ABO分型血清比较困难,一旦筛选到高效价的血清最好尽量多制备些贮存备用。但保存在多少温度范围以及多长时间内,血清的质量不至发生明显的变化,《人源ABO分型血清制备的暂行标准》中指出:液体血清-20℃以下保存,有效期2年;2～8℃保存,有效期暂定6个月。但实践中大都采用4℃保存,其缺点是保存时间(有效期)较短。过期血清的效价、亲和     

教学用兔抗人全免疫血清的制备与效价测定

目的探讨制备高效价兔抗人免疫血清的方法。方法将人全血清经弗氏佐剂完全乳化,采用一定的免疫程序免疫家兔,末次加强免疫5d后收集兔免疫血清,利用双向免疫扩散实验、对流免疫电泳和间接酶联免疫吸附法分别测定血清中抗体的效价。结果家兔在全程免疫后产生了高效价抗体,效价分别达到了1∶16、1∶8、1∶64 000。结论用人全血清免疫家兔,可以获得高效价的抗血清,为进一步实验教学和实验研究奠定了基础。     

超高效价冷自身抗-Ⅰ致血型鉴定困难处理1例

目的探讨超高效价冷抗体干扰血型鉴定时实验室有效处理措施及其输血策略。方法产生超高效价冷自身抗体的淋巴瘤患者血型正反定型不符、交叉配血困难,45℃热放散不能有效处理患者红细胞的自凝和血清中的冷抗体。最终应用ZZAP试剂处理患者红细胞进行ABO血型正定型及Rh表型检测,应用2-Me试剂处理患者血清后抗球蛋白法进行ABO反定型检测;交叉配血使用试管盐水法及抗人球蛋白法,临床输血时保温输注。结果患者红细胞经过ZZAP试剂处理后鉴定结果为ABO血型为B型、Rh表型为DCCee,患者输注4U B型DCCee表型洗涤红细胞后,缺氧症状明显改善,无输血不良反应。结论 ZZAP法可以有效处理超高效价冷自身抗体导致的红细胞自凝,准确鉴定血型和交叉配血通过保温、缓慢输注ABO及Rh同型洗涤红细胞,有效改善患者缺血缺氧症状。     

不同动物红细胞制备实验教学用溶血素的方法探讨

目的检测绵羊红细胞(SRBC)和猪红细胞(PRBC)分别经2种程序免疫家兔所制得溶血素的效价,并比较几种溶血素在医学免疫学实验中的应用效果,以寻求制备符合免疫学实验及教学需求的高效价溶血素的较好方法。方法 40只雄性家兔分为4组,分别用SRBC和PRBC,间隔2d经不同程序免疫家兔制备溶血素,再用补体溶血试验检测几种溶血素的效价,比较其在免疫学实验教学中的应用,并探讨高效价溶血素的制备方法。结果经补体溶血试验测得几种溶血素效价,A组兔抗-SRBC血清效价为1∶4 800;B组兔抗-PRBC血清效价为1∶1 200;C组兔抗-SRBC血清效价为1∶1 000,D组兔抗-PRBC血清效价为1∶200。结论用SRBC制备的溶血素效价均高于相同方法下用PRBC制备的溶血素;红细胞抗原相同时,采取先皮内全血注射后耳缘静脉接种的免疫方法制备的溶血素效价也要高于单纯采取耳缘静脉注射的免疫方法制备的溶血素;且PRBC可代替SRBC免疫家兔,制备满足实验教学要求的溶血素。     

兔抗伤寒杆菌免疫血清在免疫学检验实验教学中的应用

目的探讨制备高效价兔抗伤寒杆菌免疫血清的方法。方法对家兔分组,采用短程免疫法,用伤寒杆菌"O"和"H"诊断菌液作为抗原,分别小剂量连续多次接种后,收集兔免疫血清,利用玻片凝集实验、试管凝集实验和间接凝集实验,测定血清中抗体的效价。结果家兔在全程免疫后产生了高效价抗体,效价分别达到了阳性,1∶1 280、1∶640。结论用伤寒杆菌免疫家兔,制备的免疫血清在短时间内可以获得高效价的抗血清,适用于免疫学检验本科实验教学。     

离心超滤法去除血清大相对分子质量高丰度蛋白质的实验研究

目的建立离心超滤法去除血清中大相对分子质量高丰度蛋白质的实验方法,研究其去除效果及重复性。方法取血清与20%乙腈按1∶4(V/V)混合,将混合后的血清分别加入相对分子质量分离点(MWCO)为100×103、50×103、30×103及10×103超滤膜离心管中,离心15min(8000×g)。滤液真空冷冻干燥后,以超纯水按浓缩10倍复溶。分别应用Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳法和二元梯度高效液相色谱法(HPLC)分析比较血清中大相对分子质量高丰度蛋白质去除效果,考察经50×103超滤膜离心去除血清中大相对分子质量高丰度蛋白质后保留低丰度蛋白质的重复性。结果以选择MWCO为50×103和30×103较为适宜。电泳分离结果显示,经离心超滤后滤过液中大相对分子质量高丰度蛋白质,特别是清蛋白得到有效去除。HPLC检测结果显示,选用MWCO为50×103超滤膜分离后,血清低丰度蛋白质数量保留适中。重复性统计结果显示,小相对分子质量低丰度蛋白质相对保留时间和相对峰面积RSD值分别小于0.46%和5.56%。结论离心超滤法去除血清中大相对分子质量高丰度蛋白质步骤较为简便、重复性好,为进一步深入研究血清蛋白质组学奠定了基础。     

超免疫制备抗M血清

<正> 制备特异性高效价抗血清是免疫学的基础工作,也是免疫血液学的重要课题;制备方法很多,但以人工加强免疫的超免疫方法简单易行,具有一定优点,适合中小血站应用。我们曾用超免疫方法制备抗M血清,现报告如下:     

应用超滤法对聚合血红蛋白分子量分级

目的 对聚合人胎盘血红蛋白(PolyPHb)作分子量分级以达到去除后小分子(≤64 kD)≤13％.方法 逐个分析影响超滤法超滤效果的超滤膜规格、PolyPHb浓度、超滤倍数等3个主要因素,以高效液相色谱(HPLC)检测超滤效果,选出三者较佳匹配条件后作扩试验制备出血红蛋白氧载体(HBOCs),超滤后HBOCs分别用血氧分析仪测定生物活性携/放氧功能P50和圆二色谱分析仪测定蛋白质二级结构等理化指标.结果 以结构、理化性质稳定、截留分子量合适、超滤效果较好为原则,确定超滤膜的规格为100 kD截留分子量膜堆、PolyPHb浓度为0.5％、超滤倍数8～10倍为较适组和扩试验所制得的PolyPHb分子量分布:寡聚体(≥600 kD)超大分子≤3％,小分子(≤64kD)≤13％.结论 选用合适的截留分子量膜堆、PolyPHb浓度、超滤倍数的超滤工艺能较好的将PolyPHb实现分子量分级,为大规模制备高纯度合格HBOCs奠定基础.     

用超滤改进免疫球蛋白制剂质量

按照Cohn,Kistler-Nitschmann改良冷乙醇法分离血浆以制备免疫球蛋白糊膏,其中含有的乙醇在制备免疫球蛋白液体制剂时必须将其去除。 在正常免疫球蛋白制剂生产中乙醇用冻干去除。 作者欲证实是否应用超滤替代冻干可改善免疫球蛋白制剂的乙醇去除,并降低多聚体含量。 用前述两种方法生产5％免疫球蛋白制剂,以比较其乙醇浓度和分子大小分布。     

高效毛细管电泳法快速测定血清假尿嘧啶核苷

目的 建立血清中假尿嘧啶核苷(?)的高效毛细管电泳快速测定方法。方法 用Bio-rad BioFo-cusTM 3000型高效毛细管电泳仪,仪器配有二极管阵列检测器,24 cm×25μm(i.d.)涂层石荧毛细管柱(Bio-rad公司:148-3011)及硼酸盐缓冲液(200mmol/L,pH8.2),应用电压为-16 kV,采用68.95 kPa·s压力进样。用磺基水杨酸作内标,血清标本经超滤后,超滤液直接进样分析。结果 血清中(?)可在5 min内与其它杂峰基线分离。在(?)浓度为0～100μmol/L的范围内,用(?)与内标的峰面积比值(X)对相应的(?)浓度(Y)得标准曲线为:Y=42.68X+1.23(r=0.999 2),血清中(?)最低检测限为3μmol/L。采用此法,尚可分析血清中尿酸、马尿酸等。结论 采用高效毛细管电泳法检测人血清中的(?),血清标本处理简单、精密度高、试剂消耗低、全自动化,可用于假尿嘧啶核苷等的临床应用价值探讨。     

冻干人纤维蛋白原质量提高的研究

目的通过调整生产工艺和工艺参数来提高产品的质量。方法健康人血浆化浆后采用离心方法去除冷沉淀,然后进行8%低温乙醇反应获得FI沉淀。FI沉淀进行抽提溶解,过滤后上清进行S/D病毒灭活(0.3%磷酸三丁酯和1%的吐温80);灭活后制品再进行2次8%乙醇反应以去除S/D试剂同时对制品进一步纯化,最终获得F1-2沉淀;对F1-2沉淀进行抽提溶解,过滤后超滤透析浓缩,再进行配制、除菌过滤,分装、冻干;冻干结束进行100℃30 min干热病毒灭活。结果最终的制品的纯度提高了15%左右,外观和可见异物合格,同时收率提高了30%左右。结论用改进工艺后的工艺制备的冻干人纤维蛋白原的质量和收率都得到了提高。     

罕见的B(A)表型血清学及基因检测

目的对1例B(A)表现型用血清学及基因检测进行鉴定。方法使用2个厂家的单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂;进口单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂;Diamed凝胶系统;人源抗-A、抗-B、抗-H血型试剂和试剂红细胞,用常规血清学方法对被检血样进行ABO血型定型。采用吸收放散方法;分子生物学PCR-RFLP方法;ABO基因第6、7外显子的PCR产物正反向测序方法进一步分析。结果被检血样红细胞及血清经2种单克隆抗-A、抗-B和试剂红细胞进行抗原抗体鉴定:正定型结果不一致;正反定型结果不符合。用吸收放散方法,人源抗-A、抗-B、抗-H;进口单克隆抗-A、抗-B血型定型试剂和Diamed凝胶系统检测:有弱A抗原、强H抗原检出;PCR-RFLP基因分型:检出B/O基因;基因克隆测序证实为:B(A)700/O*02。结论证实该例为B(A)700/O*02。     

WARM试剂在温性自身免疫性溶血性贫血中的应用

目的研究WARM试剂在自身免疫性溶血性贫血(AIHA)患者中的应用,提高对需要输血的AIHA患者标本快速的处理能力。方法用WARM试剂放散患者红细胞后进行自身吸收,通过对放散液、未处理血清和吸收后血清进行抗体筛查与鉴定及放散后的红细胞直接抗人球蛋白试验(DAT)实验,了解WARM试剂吸收和去除自身抗体的效果。结果该患者放散后的红细胞DAT为±;放散液中未检出抗体特异性;经过自身吸收后的患者血清中检出有意义的IgG抗S抗体。结论 WARM试剂对于温自身抗体的放散及放散后红细胞对自身抗体的吸收效果好,可用于AIHA患者自身抗体的处理。     

前列腺特异抗原质控品的制备与评价

目的制备性能稳定的前列腺特异抗原(prostate specific antigen,PSA)质控品,用作PSA定量检测试剂临床检测的质量控制。方法将人源PSA蛋白以不同稀释配方稀释成低、中、高3个浓度,制备液体和干粉两种形式的质控品,用Abbott定量检测试剂进行活性检测,考察PSA质控品的稳定性能。结果 PSA液体质控品使用未灭活血清稀释,制备过程简单,瓶间差较低,冷藏保存可至少稳定8个月,冷冻保存可至少稳定18个月;PSA干粉质控品使用含有10%人血清、50 g/L甘氨酸和4g/L人血清清蛋白的PBS制备,冻干粉外观均匀,复溶后澄清透明,干粉在37℃和复溶后25℃可稳定放置4周,冷藏保存至少稳定12个月。结论制备的PSA液体质控品和干粉质控品使用方便,稳定性能够满足室内质控要求,具有较好的市场前景。     

湿化学酶法测定华氏巨球蛋白血症患者血清肌酐假性增高的评析

目的探讨湿化学酶法检测华氏巨球蛋白血症患者肌酐假性增高的原因及解决方法。方法以2010~2012年中国人民解放军白求恩国际和平医院收治的5例华氏巨球蛋白血症患者为研究对象,采用离心超滤管将采集的患者血清中大分子蛋白滤去,分别用湿化学酶法、苦味酸法、干化学酶法检测超滤前后患者血清肌酐水平并进行比较分析。结果超滤前其中2例华氏巨球蛋白血症患者用湿化学酶法测得血清肌酐水平与苦味酸法、干化学酶法比较有明显差异,而5例患者后2种方法测得的肌酐水平差异不明显。而以离心超滤管滤去大分子蛋白后,3种方法测得的血清肌酐水平无明显差异。结论采用湿化学酶法检测华氏巨球蛋白血症患者血清肌酐时,应去除大分子蛋白以防止所测血清肌酐水平异常增高,或用干化学酶法或苦味酸法测定以确定检测的准确性,为临床提供真实可靠的检验结果。     

高效价冷凝集素患者血型鉴定及交叉配血困难的探讨

目的探讨高效价冷凝集素患者血型鉴定及交叉配血困难原因及处理方法。方法对高效价冷凝集引起的正反定型不合患者血清进行吸收放散试验或红细胞洗涤处理后进行血型的正反定型和交叉配血试验。结果红细胞用加温37℃生理盐水反复洗涤5～6次后进行ABO正定型,血清在4℃用O型洗涤红细胞吸收1～2次后反定型均为B型,正反定型相符。结论红细胞洗涤和血清吸收放散试验可排除高效价冷凝集素的干扰,能够正确地鉴定患者血型和进行交叉配血。     

鸡卵黄抗体制备的C-反应蛋白试剂测定人血清CRP的研究

目的 研究鸡卵黄抗体制备的C-反应蛋白(CRP)检测试剂测定人血清CRP能否满足临床的要求.方法 对临床2986例样本进行精密度、灵敏度、偏倚、干扰试验等研究,并用其中189例样本与进口德赛试剂进行比对分析.结果 用鸡卵黄抗体制备的CRP试剂,当血清中胆红素≤701.1靘ol/L、血红蛋白浓度≤10g/L、甘油三酯浓度≤14mmol/L、类风湿因子含量≤700u/L时没有观察到干扰,试剂批内精密度为3.40～4.74%,天间精密度为4.03～6.55%.试剂至少可稳定半年,与进口的德赛试剂进行比对试验,具有良好的相关性(y=0.988),y=0.985×+0.01mg/L.结论 采用鸩卵黄抗体制备的CRP试剂测定人血清C-反应蛋白特异性好、准确度高、精密度好,能够满足临床检测的需要,可广泛应用于各级医疗机构.