葡多酚对小鼠肝细胞体内外增殖活性的影响

目的观察葡多酚(GPC)对正常肝细胞及受乙醇损伤的肝细胞增殖活性的影响.方法将小鼠正常肝细胞和乙醇引发损伤的肝细胞加入GPC培养,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法测定各组肝细胞增殖活性.将GPC经口给予正常小鼠和乙醇引发急性肝损伤的小鼠,取肝脏匀浆后培养3和16 h,用前述方法测定肝细胞增殖活性.结果体外实验的正常对照组和乙醇对照组细胞增殖活性分别为0.438±0.040和0.365±0.024;50mg/L GPC保护组和50 mg/L GPC对照组则为0.541±0.026和0.603±0.060.体内实验的150 mg/L GPC保护组细胞增殖率较乙醇对照组升高0.095;150mg/LGPC对照组则较正常对照组升高0.030.各组之间的差异均有统计学意义(P＜0.05).结论GPC能抑制乙醇对肝细胞增殖活性的损伤,并对正常肝细胞增殖活性有一定促进作用.     

葡萄原花青素对乙醇诱发小鼠肝细胞Caspase-3和Bax蛋白异常表达的影响

目的研究葡萄原花青素(GPC)对乙醇诱发小鼠肝细胞Caspase-3和Bax蛋白异常表达的影响。方法将小鼠随机分为正常对照组、乙醇对照组和各剂量GPC组,除正常对照组外,每组小鼠均每天经口灌胃乙醇4g/kg,低、中、高剂量GPC组同时分别给予GPC 50、100和200mg/kg,连续4周。取肝组织用MTT法检测各组小鼠的肝细胞增殖活性,用免疫组织化学法检测肝细胞Caspase-3和Bax蛋白的表达水平。结果高剂量GPC组Caspase-3和Bax蛋白阳性表达率分别为19.08%和14.06%,乙醇对照组则为51.78%和58.08%,差异有显著性(P<0.05)。高、中剂量GPC组细胞增殖活性高于乙醇对照组(P<0.05)。结论 GPC可抑制乙醇诱发的肝细胞Caspase-3和Bax蛋白异常表达,对乙醇性肝损伤具有防护作用。     

葡多酚对血管内皮细胞自由基损伤的影响

目的:探讨葡多酚(grape procyanidin,GPC)对血管内皮细胞氧自由基损伤的保护作用。方法:取静脉内皮细胞株ECV304在含有不同浓度GPC的培养液中培养,用Fenton试剂引发细胞氧自由基损伤,分别于培养12,24,36和48h采用MTT法测定细胞的增殖水平、用流式细胞法测定细胞凋亡和MDA含量等指标。结果:培养12h阳性对照组及低、高剂量GPC组细胞增殖活性分别为0.475±0.122、0.524±0.068和0.949±0.111,差别均有显著性意义(P<0.05),24h细胞凋亡率分别为12.63%,10.17%和5.45%。结论:GPC可有效抑制氧自由基引发的细胞增殖活性损伤与细胞凋亡,对防止内皮细胞氧化损伤有很好的作用。     

长期酒精摄入对雄性大鼠胰岛素敏感性及肝脏IR、IRS-1、IRS-2 mRNA表达的影响

目的从基因表达水平探讨长期酒精摄入影响肝脏胰岛素敏感性的分子机制。方法清洁级Wistar雄性大鼠40只,随机分为对照组和低、中、高剂量酒精组,每天摄入酒精剂量分别为0、0·8、1·6和2·4g/kg bw。给予酒精19周后,测定空腹血糖、血胰岛素,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。提取肝脏总RNA,通过RT-PCR测定胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物2(IRS-2)的mRNA表达水平。结果与对照组相比,高剂量组血糖升高(P<0·05);各剂量组血胰岛素浓度均升高,低、中剂量组升高有显著性差异(P<0·05);各剂量组HOMA-IR均显著高于对照组(P<0·05)。各剂量组IR mRNA表达均降低;IRS-1及IRS-2mRNA表达在低、中剂量组升高,高剂量组降低。结论长期过量酒精摄入可以引起雄性大鼠胰岛素抵抗,肝脏IR、IRS-1、IRS-2mRNA表达降低是酒精影响胰岛素敏感性的分子机制之一。     

葡多酚对体外培养肝细胞PKC表达影响

目的体外观察葡多酚（GPC）对小鼠肝细胞蛋白激酶C（PKC）表达的影响。方法将正常小鼠肝细胞加入不同剂量GPC共同培养后，用免疫细胞化学法检测各组肝细胞PKC表达；四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测各组肝细胞的增殖活性。结果109mg／LGPC组肝细胞内PKC阳性表达率和细胞增殖活性分别为34．24％和0．654±0．062，经统计学X^2检验和t检验，与正常对照比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC表达。提高肝细胞增殖活性。     

葡多酚对小鼠肝细胞蛋白激酶C和增殖细胞核抗原表达的影响

目的观察葡多酚(GPC)对小鼠肝细胞蛋白激酶C(PKC)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法每日给小鼠经口灌胃不同剂量的GPC,30天后取肝组织,用MTT法测各组小鼠肝细胞的增殖活性水平,免疫组化的方法检测各组PKC和PCNA的表达。结果高剂量GPC组PKC和PCNA阳性表达率分别为47.62%和82.76%,阴性对照组则分别为6.42%和32.62%,经χ2检验,差异有显著性(P<0.05)。各组肝细胞的PKC和PCNA阳性表达率随GPC剂量的增高而增高。结论葡多酚可促进小鼠肝细胞PKC的表达,提高肝细胞增殖活性。     

葡多酚对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用研究

目的研究葡多酚(GPC)对人乳腺癌(MCF-7)细胞增殖活性的影响及雌激素受体(ER)的调节作用。方法将GPC与MCF-7细胞共同培养,共设肿瘤细胞对照组、高、中、低(200、100、10μg/ml)剂量GPC组、ER阻断剂对照组(ICI10-6mol/L)和ER阻断剂(ICI10-6mol/L)+GPC(200μg/ml)6个组。用MTT法测定各组乳腺癌细胞的增殖活性水平,用免疫组化方法检测乳腺癌细胞中增殖细胞核抗原(PCNA)和Bax蛋白的表达水平。结果与肿瘤细胞对照组比,高剂量GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平和PCNA阳性表达率降低,Bax蛋白阳性表达率升高(P<0.05);ER阻断剂+GPC组乳腺癌细胞的增殖活性水平、PCNA阳性表达率,均较高剂量GPC组升高,Bax蛋白阳性表达率降低,各项差别均有显著性意义(P<0.05)。结论GPC可有效抑制人乳腺癌细胞的增殖,并促进其凋亡;其作用与ER调节有密切关系。     

葡多酚对大鼠DNA氧化损伤的防护作用研究

目的:研究葡多酚(GPC)对DNA氧化损伤防护作用。方法: 将大鼠分为正常对照组、高脂膳食、高脂+乙醇、高脂+ GPC(50 mg/kg bw)、高脂+乙醇+ GPC(50 和100 mg/kg bw)等共6组,饲养6 w,处死动物,制作脾细胞悬液,分不给和给予Fenton氧化两种处理,测定脾细胞DNA损伤程度及血清MDA水平和SOD活力等指标。结果: 1.不给予Fenton氧化处理的高脂+乙醇组和高脂+乙醇+GPC(100 mg/kg bw)组的 DNA损伤程度分别为76.15%和15.27%,给予氧化处理的为83.02%和19.83%,差异均有显著意义。2.高脂+乙醇组和高脂+乙醇+GPC(100 mg/kg bw)组的MDA分别为8.18±0.98 mmol/L和5.63±1.16 mmol/L,SOD为597.04±88.88 NU/ml和729.71±88.88 NU/ml,差异均有显著意义。结论: GPC对高脂和乙醇引发的DNA氧化损伤有防护作用。     

甲醇和汽油汽车尾气对A549细胞株细胞毒性及增殖和凋亡功能的影响

目的:比较甲醇燃料汽车尾气和汽油燃料汽车尾气对A549细胞株的细胞毒性及增殖和凋亡功能的影响。方法:1)MTT比色法检测受试物细胞毒性。2)受试物体外培养实验:汽油组剂量分组为:0·125L/ml,0·0625L/ml,0·03125L/ml,0·0156L/ml,0·0078L/ml和一个空白对照;甲醇组剂量分组与汽油相同。A·细胞培养介质乳酸脱氢酶活性的测定;B·细胞形态学观察;C·流式细胞术a·检测细胞周期并计算细胞增殖指数;b·观察细胞亚二倍体峰的变化,计算凋亡百分比;结果:1)MTT比色法汽油组在0·125L/ml剂量组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P<0·05);甲醇组在1·0L/ml剂量组OD值与对照组相比差异有统计学意义(P<0·05);2)受试物体外培养实验:A·细胞培养介质乳酸脱氢酶活性的测定:汽油组在0·0625~0·125L/ml各剂量组LDH值与对照组相比差异有统计学意义(P<0·05),同等剂量下甲醇组与对照组相比,差异无统计学意义(P>0·05);B·细胞形态学观察:汽油组在0·125L/ml,可见大量死亡细胞和凋亡细胞数增加,相同剂量甲醇组未见明显改变;C·流式细胞术:仅汽油组0·0156,0·03125L/ml、0·0625L/ml剂量组细胞增殖指数显著低于对照组(P<0·05),汽油组和甲醇组在0·0156~0·0625L/ml剂量组凋亡百分比均高于对照组,但后者作用更强。结论:在同等剂量下,汽油燃料尾气对A549细胞株的毒性及对细胞增殖的抑制明显高于甲醇,但甲醇诱导A549细胞凋亡的作用略强。     

氯氰菊酯和甲基对硫磷混配对大鼠内分泌和免疫系统的影响——Ⅰ.剂量-效应关系

目的探讨农药氯氰菊酯(Cyp)和甲基对硫磷(MP)混配对大鼠生殖激素、甲状腺激素和免疫功能的影响及其剂量-效应关系。方法健康2月龄Wistar大鼠80只,随机分为4组,氯氰菊酯和甲基对硫磷剂量分别为(0、1/600、1/135和1/30)LD50混配,即Cyp0·0、0·4、1·8和8·0mg/kg bw+MP0·0、0·0115、0·0518和0·2300mg/kg bw;对照组用色拉油,隔日对大鼠灌胃1次,共30天。测量大鼠体重增长,称量脏器湿重;用放射免疫法测定血清生殖激素指标促黄体生成激素(LH)、促卵泡成熟激素(FSH)、雌二醇(E2)和睾酮(T);甲状腺激素指标(T3、T4和TSH),以及免疫指标IgG和IgA;取血测定淋巴细胞转化率、中性粒细胞吞噬率。结果未观察到2种农药混配对大鼠体重增长的影响;肾上腺相对重量各剂量组比对照组增加(P<0·05)。血清FSH和E2水平中、高剂量组比对照组升高(P<0·05);血清TSH含量随混配农药剂量升高有上升趋势(rs=0·327,P=0·004)。淋巴细胞转化率各剂量组比对照组显著降低(P<0·01),中性粒细胞吞噬率各剂量组比对照组升高(P<0·01),血清IgG水平中、高剂量组比对照组显著降低(P<0·01);IgA水平雌鼠中、高剂量组比对照组升高(P<0·01),而雄鼠低剂量组比对照组降低(P<0·05)。以上改变均呈现剂量-效应关系。结论氯氰菊酯与甲基对硫磷混配可干扰大鼠生殖激素和免疫系统,尤其是使雌二醇水平明显增高。     

Study on protective effect of grape procyanidins in radiation injury in radiation-contacted persons

OBJECTIVE: To study the protective effect of Grape procyanidins (GPC) on radiation injury in radiation-contacted persons. METHODS: Sixty radiation-contacted persons were randomly divided into the experimental group and the control group and 15 radiation-uncontacted persons were selected as the normal group. The experimental group was given GPC (100 mg/day), while the control group was given the capsule of starch every day for 60 days. Vein blood samples were taken before and after the study and the total antioxidative capacity (T-AOC), Malondialdehyde (MDA), cell proliferation, expression levels of proliferative cell nuclear antigen (PCNA), Bcl-2 and Bax protein, WBC were measured. RESULTS: The WBC, T-AOC and cell proliferation rate of the experimental group were (5.62 +/- 0.40) 10(9)/L, (17.07 +/- 1.91) U/ml and 0.87 +/- 0.09 respectively, which were significantly higher than those of the control group. The MDA and Bax expression levels were (4.12 +/- 0.37) nmol/L and 28.06% +/- 5.79% respectively that were significantly lower than those of the control group. CONCLUSION: GPC should have protective effects on radiation injury of the radiation-contacted persons.     

葡多酚对辐射引发胰腺细胞凋亡的抑制作用

目的　探讨葡多酚 (GPC)对辐射引发的细胞凋亡与增殖活性损伤的防护作用。方法　给口服不同剂量GPC的小鼠用 60 Co γ射线进行 1次全身性照射 ,照射后第 2天处死动物 ,取胰腺组织分别检测bcl 2和bax表达水平、细胞增殖活性及凋亡率等指标。结果　高剂量GPC组动物的细胞增殖率为 3.16 %± 0 .13% ,bcl 2表达水平为 4 9.8% ,均较辐射对照组 (分别为 0 .6 4 %± 0 .11%、2 9 .7% )高 ;而细胞凋亡率和bax表达水平则为 19.8%和 5 5 .0 % ,均低于辐射对照组 (35 .6 %、85 .7% )。各组间差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　GPC可抑制60 Co γ射线诱发的小鼠胰腺细胞凋亡及相关基因的异常表达 ,对辐射损伤有一定防护作用。     

马兜铃酸致血管内皮细胞毒性及羟苯磺酸钙的拮抗作用

目的证实马兜铃酸（AA）能使血管内皮细胞（VEC）胞内钙离子（[Ca^2＋]i）超载,致VEC损伤,而羟苯磺酸钙有拮抗作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞系（HUVEC）,用马兜铃酸钠（AA—Na）和羟苯磺酸钙处理,设对照组、AA组、干预组三组。倒置显微镜及透射电镜观察细胞形态及超微结构改变,ELISA法测定细胞培养上清液中血栓调节蛋白（TM）,FLuo-3钙离子探针检测HUVEC（[Ca^2＋]i）浓度变化。结果与对照组相比,AA组TM值和平均（[Ca^2＋]i）浓度明显升高（P〈0．05）。与AA组相比,干预组羟苯磺酸钙浓度为25、50μM时,TM值和平均（[Ca^2＋]i）浓度明显降低（P〈0．05）;与对照组相比,AA组细胞内质网池状扩张。线粒体嵴缺损。而干预组细胞内质网、线粒体形态均有改善。结论AA—Na能使VEC钙超载,致内皮细胞破坏,TM增加,内质网和线粒体破坏;羟苯磺酸钙可以通过保护内质网、线粒体,减少VEC钙超载,保护VEC。     

葡多酚对核接触人员辐射损伤的防护作用研究

目的 研究葡多酚对核接触人员辐射损伤的防护作用.方法 选取某单位从事核作业的核接触人员60人,数字表法随机分为对照组和实验组,每组30人,另选15名非核接触人员作为正常对照组.实验组服用葡多酚制剂,每天1粒(含葡多酚100 mg/粒),对照组同样的方法服用淀粉安慰剂,连续60 d.于实验前后各抽取空腹静脉血1次,检测白细胞计数、淋巴细胞转化率、血清总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、细胞增殖活性、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2、Bax等指标.结果 实验后实验组的白细胞计数、T-AOC和淋巴细胞增殖活性分别为(5.62±0.40)×109个/L、(17.07±1.91)U/ml和0.87±0.09,均较对照组增高,差异有统计学意义.MDA和Bax分别为(4.12±0.37)nmoL/L和28.06%±5.79%,均较对照组降低,差异有统计学意义.结论 葡多酚对核接触人员的细胞增殖活性降低和脂质过氧化等损伤,有一定的防护作用.     

维生素C对脂多糖所致SW480细胞氧化损伤的保护

目的 探讨不同剂量维生素C（VC）对脂多糖（LPS）所致SW480细胞氧化损伤的保护。方法 将SW480细胞随机分为对照组（0 μmol/ml VC）、模型组（0 μmol/ml VC）、低VC组（0.1 μmol/ml VC）、中VC组（1 μmol/ml VC）、高VC组（10 μmol/ml VC）,除对照组外,其余各组均加入终浓度为0.1 μg/ml的 LPS。采用CCK - 8法检测细胞活力;使用倒置显微镜观察细胞划痕修复;采用微量酶标法检测胞内还原型谷胱甘肽（GSH）含量及培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）活力;分别采用WST - 1法、TBA法检测胞内超氧化物岐化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量。结果 CCK - 8结果显示,VC可以抑制SW480细胞的增殖,且呈浓度依赖性递减;与对照组相比,模型组、低、中、高剂量VC组MDA水平[分别为（1.88±0.22）、（1.26±0.19）、（2.11±0.48）、（1.56±0.30） nmol/mgprot]均显著升高（P＜0.05）,与模型组相比,低VC组和高VC组MDA和LDH水平明显降低,且低VC组的SOD、GSH水平［分别为（16.62±0.48） U/mgprot、（126.26±1.20） μmol/gprot］显著升高（P＜0.05）;与对照组相比,细胞划痕后 48 h, 高VC组细胞划痕掩盖最为显著。结论 低剂量VC可以保护细胞膜的功能结构,增强细胞清除自由基的能力,高剂量VC有助于伤口愈合,从而保护细胞免受LPS导致的氧化应激损伤。