神经甾体化合物CPU 03-03对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及机制

目的 研究神经甾体化合物CPU 03-03(以下简称CPU)对谷氨酸诱导的嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用.方法 用谷氨酸制作PC12细胞损伤模型.检测不同浓度CPU作用后PC12细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及细胞内钙([Ca2+]i)变化.结果 CPU作用后,PC12损伤细胞LDH和MDA水平降低,[Ca2+]i降低,并呈一定的剂量依赖性.结论 CPU对谷氨酸所致的PC12细胞损伤有保护作用;其机理可能为降低LDH、MDA及受体依赖型钙通道.     

神经甾体化合物对PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究神经甾体化合物(CPU 03-03)对H2O2和Aβ25～35所诱导的PC12细胞损伤的保护作用.方法 用H2O2和Aβ25～35造成PC12细胞损伤模型,采用MTT比色法检测细胞存活率,同时检测乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA).结果 CPU 03-03能显著减少细胞死亡,降低LDH漏出量及MDA生成.结论 CPU 03-03对PC12细胞损伤具有保护作用.     

甘草苷对一氧化氮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的应用NO诱导PC12细胞制作细胞损伤模型,探讨甘草苷对PC12细胞损伤的保护作用。方法甘草苷各剂量的PC12细胞用SNAP诱导48 h后,采用MTT法测定细胞活力,LDH法测定细胞膜通透性,化学比色法测定细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,Annexin V-FITC/PI检测PC12细胞凋亡率。结果与模型组相比,甘草苷可以使PC12细胞存活率显著增加,细胞培养上清中LDH含量显著减少,SOD活性显著升高,MDA含量显著下降,并明显降低PC12细胞凋亡率。结论甘草苷对NO诱导的PC12细胞凋亡有明显保护作用。     

丙酮酸对过氧化氢诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究丙酮酸对过氧化氢(H2O2)诱发小鼠嗜铬细胞瘤瘤细胞(PC12细胞)损伤的保护作用并初步探讨其保护机制.方法 将培养的PC12细胞分为三组:正常对照组;损伤组;保护组,在用H2O2处理前30 min加入丙酮酸.通过细胞形态学方法,化学比色法测定琥珀酸脱氢酶(MTT)含量,乳酸脱氢酶(LDH)释放量,超氧化物歧化酶(SOD)含量和丙二醛(MDA)含量,观察丙酮酸的神经保护作用.结果 通过形态学方法,保护组细胞数显著比损伤组多,受损变圆的细胞数较少.保护组可明显降低细胞LDH释放量和细胞内的MDA含量(P＜0.01);提高MTT测定值和SOD活性.结论 丙酮酸对H2O2诱发PC12细胞损伤有显著的保护作用.     

兴奋性氨基酸对体外培养大鼠皮质神经元的影响及氟桂利嗪对其干预的实验研究

目的：探讨兴奋性氨基酸对体外原代培养神经元的影响及氟桂利嗪在其保护机制中的作用。方法：原代培养小鼠皮质神经元，建立兴奋性氨基酸毒性损伤细胞模型，通过检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率和形态学观察了解兴奋性氨基酸对神经元的毒性作用；用台酚蓝排斥实验测定细胞活力，并观察氟桂利嗪对神经元的保护作用。结果：经谷氨酸处理的神经元较对照组损伤明显加重，氟桂利嗪干预组较损伤组神经元死亡明显减轻。结论：兴奋性氨基酸对皮质神经元有明显的毒性作用，氟桂利嗪对兴奋性氨基酸毒性损伤神经元有保护作用。     

中药有效成分保护脑缺血再灌注损伤的研究进展

<正>脑缺血再灌注损伤(CIRI)的机制主要是兴奋性氨基酸神经毒性、神经元超微结构的变化、氧化应激、炎症反应、钙离子超载等〔1,2〕。中药有效成分可从多个方面发挥保护脑缺血再灌注损伤的作用,其作用机制值得进一步研究。1抑制兴奋性氨基酸引起的神经毒作用兴奋性氨基酸(EAA)主要包括谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)和甘氨酸(Gly)。脑缺血再灌注损伤主要与Glu的大量     

丹参酮ⅡA对谷氨酸联合淀粉样蛋白诱导细胞损伤的保护作用

目的 探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对谷氨酸(Glu)联合β淀粉样蛋白25-35 (Aβ_(25-35))诱导PC12细胞、Meynert核(nbM)神经元损伤的保护作用.方法 培养PC12细胞,用MTT法观察TanⅡA三个不同浓度(2.5、5.0、10 μmol/L)对Glu联合Aβ_(25-35)损伤PC12细胞的保护作用;运用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术,检测急性分离nbM神经元在Glu联合Aβ诱导损伤时细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]_i)变化,及不同浓度TanⅡA对这种[Ca~(2+)]_i变化的影响.结果 MTT检测结果表明,TanⅡA 各组细胞活力、损伤程度与单纯Aβ+Glu损伤组相比有显著差异(P＜0.05),但无剂量依赖关系.Glu联合Aβ_(25-35)损伤组[Ca~(2+)]_i比对照组显著升高(P＜0.01);TanⅡA 各组[Ca~(2+)]_i均较单独Glu联合Aβ_(25-35)处理组有显著降低(P＜0.01).结论 TanⅡA通过提高细胞活力、维持细胞内钙离子浓度稳态以对抗Glu联合Aβ_(25-35)损伤作用.     

亚硒酸钠预处理对Aβ损伤PC12细胞的保护性作用

目的研究β淀粉样蛋白(Aβ)对PC12细胞的氧化损伤以及亚硒酸钠的保护作用。方法将PC12细胞分为正常对照组、亚硒酸钠预处理组、亚硒酸钠预处理后损伤组、损伤组,观察细胞形态、用MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测凋亡,测定各组乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果 Aβ抑制PC12细胞的分裂增殖,经过Aβ作用24 h的PC12细胞,其GSH-Px活性下降,MDA含量升高;一定浓度亚硒酸钠预处理可有效地减轻Aβ引起的PC12细胞损伤,与Aβ损伤组相比亚硒酸钠预处理后Aβ损伤组的细胞存活率增加、凋亡下降、GSH-Px活性增高、LDH漏出率、MDA含量下降。结论亚硒酸钠对Aβ引起的PC12细胞氧化损伤具有明显的保护作用。     

脑泰方对缺血再灌注损伤沙鼠大脑皮层氨基酸类神经递质含量的影响

目的 :探讨脑泰方对缺血再灌注损伤沙鼠大脑皮层氨基酸类神经递质含量的影响。方法 :采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断模型。利用高效液相色谱 -荧光法检测大脑皮层氨基酸含量。结果 :脑泰方可显著降低沙鼠脑缺血再灌注损伤时大脑皮层兴奋性氨基酸类神经递质(EAAs)Glu、Asp含量 (P <0 .0 1) ,并显著升高抑制性氨基酸类神经递质 (IAAs)GABA、Gly、Tau含量 (P <0 .0 1) ,提高GABA/Glu比值。结论 :调节脑组织兴奋性和抑制性氨基酸类神经递质含量的平衡可能是脑泰方抗脑缺血再灌注损伤的机制之一。     

醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞缺氧损伤的影响.方法采用血清药理学方法,体外培养PC12细胞,用Na2,S2O4产生缺氧损伤,观察PC12细胞形态学、m法细胞活力、乳酸脱氢酶LDH活性的变化.结果醒脑启智胶囊药物血清对PC12细胞的形态改变具有明显的保护作用,可增强细胞活力,降低LDH活性.结论醒脑启智胶囊药物血清能明显减轻PC12细胞的缺氧损伤,并呈现一定的剂量依赖关系.     

氧化型低密度脂蛋白致PC12细胞的毒性作用及抗氧化剂的细胞保护作用

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)致PC12细胞的毒性作用及白藜芦醇等抗氧化剂的细胞保护作用。方法 通过噻唑蓝(MTT)实验、乳酸脱氢酶(LDH)释放实验、DNA断端原位末端标记法(TUNEL)实验及caspase-3测定来观察oxLDL对PC12细胞存活率、细胞膜通透性、细胞核及caspase-3活性的影响。抗氧化剂白藜芦醇、丙丁酚及维生素E预处理细胞,再加入不同浓度oxLDL,观察抗氧化剂的细胞保护作用。结果 PC12细胞存活率随着ox-LDL浓度及作用时间增加而下降;LDH释放率、TUNEL阳性细胞数及caspase-3活性随着浓度增高而增高;低密度脂蛋白(LDL)对上述各项指标无影响。白藜芦醇、丙丁酚及维生素E均能减缓oxLDL所致的细胞存活率下降、LDH释放率的升高、TUNEL阳性细胞数的增加,其中白藜芦醇作用最强;白藜芦醇、丙丁酚减缓oxLDL所致的caspase-3活性增高,而维生素E对caspase-3活性无影响。结论oxLDL导致PC12细胞死亡,其浓度与PC12细胞存活率呈剂效关系,其作用时间与PC12细胞成活率呈时效关系。     

HBIG—PBCA—NP对QSG、HepG及PBMC细胞增长率及毒性的影响

目的研究乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒（HBIG—PBCA—NP）、PBCA—NP的体外应用安全性。方法用乳化聚合法分别制备HBIG-PBCA-NP、PBCA-NP;采用MTT比色法研究不同浓度的HBIG-PBCA-NP、PBCA—NP对外周血单核细胞（PBMC）、QSG7701细胞及HepG2.2．15细胞生长抑制作用的影响;用自动生化仪测定乳酸脱氢酶（LDH）、丙氨酸转氨酶（ALT）活性。结果按相对生长率（RGR％）,HBIG—PBCA—NP、PBCA—NP对PBMC、QSG7701细胞及HepG2．2．15细胞的毒性分级分别为0—1级,LDH与ALT释放值与HBIG、空白对照相比,差异无显著性（P〉0．01）。结论PBCA—NP属无毒级载体,HBIG—PBCA—NP具有良好的细胞生物安全性。     

库普弗细胞条件培养基对原代培养肝细胞的细胞毒性

目的 探讨内毒素血症时库普弗细胞激活对肝细胞损伤的作用机制.方法 用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Percoll密度梯度离心分离、纯化SD大鼠肝细胞和库普弗细胞,制备内毒素(LPS)刺激的库普弗细胞的条件培养基(KCCM)并作用于肝细胞,检测肝细胞培养基丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测KCCM对大鼠原代肝细胞活性的影响.结果 KCCM作用于肝细胞2 h后,肝细胞培养基中ALT、AST及LDH含量均明显升高(P＜0.05),在2～4 h内随时间延长ALT、AST及LDH含量均逐渐增加,呈明显的时间-效应关系;MTT结果显示,KCCM作用后12 h、24 h时间点对肝细胞具有明显损伤作用(P＜0.05).结论 内毒素诱导库普弗细胞释放的可溶性因子作用一定时间后可直接对肝细胞造成损伤.     

原花青素对血管内皮细胞过氧化氢损伤的保护作用

目的 观察原花青素对血管内皮细胞过氧化氢损伤的保护作用及可能机制.方法 用体外培养的人脐静脉内皮细胞传代后进行实验,实验分为3组:对照组常规培养;过氧化氢损伤组;药物干预组加入原花青素低、中、高浓度组(25 mg/L、50 mg/L和100 mg/L预处理).用MTT法观察原花青素对过氧化氢损伤的内皮细胞活性的影响,各组均测定细胞中超氧化物歧化酶、丙二醛和乳酸脱氢酶的活性,用Hoechst 33258荧光染色法观察过氧化氢损伤对血管内皮细胞的凋亡情况,蛋白免疫印迹法分析各组凋亡基因bcl-2蛋白的表达.结果 (1)原花青素使过氧化氢损伤的内皮细胞的脂质过氧化物丙二醛生成减少,乳酸脱氢酶漏出液减少,超氧化物歧化酶活力增加;(2)过氧化氢损伤可以诱导内皮细胞凋亡,原花青素可显著减少过氧化氢诱导的内皮细胞的凋亡,且上调抗凋亡基因bcl-2的蛋白表达.结论 原花青素处理对过氧化氢所致的内皮细胞的损伤有保护作用,机制可能通过抗脂质过氧化,对氧自由基的清除,以及抗细胞凋亡有关.     

Protective effects of Rheum tanguticum polysaccharide against hydrogen peroxide-induced intestinal epithelial cell injury

AIM: To describe the effect of Rheum tanguticum polysaccharide (RTP) on hydrogen peroxide-induced human intestinal epithelial cell injury. METHODS: Hydrogen peroxide (100 μmol/L) was introduced to induce human intestinal epithelial cell injury. Cells were pretreated with RTP (30,100,300 μg/mL) for 24 h before exposure to hydrogen peroxide. Cell viability was detected by MTT assay and morphological observation. Acridine orange staining and flow cytometry were performed to assess cell apoptosis. Lactate dehydrogenase (LDH) activity, production of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) activity were measured by spectrophotometry with corresponding assay kits. RESULTS: Following exposure to H2O2, a marked decrease in cell survival and SOD activity, increased production of MDA, LDH leakage and cell apoptosis were found. Pretreatment of the cells with RTP could significantly elevate cell survival, SOD activity and decrease the level of MDA, LDH activity and cell apoptosis. CONCLUSION: RTP may have cytoprotective and anti-oxidant effects against H2O2-induced intestinal epithelial cell injury by inhibiting cell apoptosis and necrosis. This might be one of the possible mechanisms of RTP for the treatment of ulcerative colitis in rats.     

刺五加皂甙对PC12细胞缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的 观察刺五加皂甙（ASS）对PC12细胞缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达的影响,探讨其抗缺血缺氧脑损伤作用的机制。方法将PC12细胞分为三组,对照组在无血清的DMEM培养基中培养;模型组加入终浓度为125μmol／L的CoCl2共同作用4h;ASS组先用终质量浓度为50μg／ml的ASS预处理24h,再加入终浓度为125μmol／L的CoCl2共同作用4h。采用MTT比色分析法测定各组PC12细胞活性,Western Blot法检测HIF-1α表达的变化。结果对照组、模型组、ASS组细胞活性OD值分别为0．538±0．027、0．320±0．045、0．615±0．039;HIF-1α表达灰度比值分别为0．085±0．033、0．782±0．050、0．976±0．070。各组间相比,P均〈0．01。结论ASS对缺血缺氧性脑损伤有保护作用,其机制与诱导HIF-1α表达有关。     

心肌细胞缺氧复氧损伤时Mipu1启动子活性、Mipu1 mRNA表达变化及意义

目的探讨心肌细胞缺氧复氧损伤时心肌缺血预适应表达上调蛋白1(Mipu1)启动子活性的变化及其作用。方法按本课题组的常规方法复制心肌细胞缺氧复氧模型,先予缺氧(95%N2-5%CO2,无血清低糖DMEM)处理6 h,再分别复氧(95%空气-5%CO2,10%FBS-高糖DMEM)6、12、24 h。采用MTT法检测心肌细胞活性,比色法测定心肌细胞LDH活性,双荧光素酶报告基因技术检测启动子PGL3-Mipu1活性,实时定量PCR法检测Mipu1mRNA表达。结果缺氧6 h复氧(6、12、24 h)后心肌细胞活性减低,LDH释放增加,启动子PGL3-Mipu1活性增加,Mipu1 mRNA表达上调,且在缺氧6 h复氧12 h时变化最明显。结论 Mipu1可能参与了心肌细胞的缺氧复氧损伤,其可能通过调控凋亡相关基因发挥作用。     

去天冬氨酸血管紧张素-1对人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的观察天冬氨酸血管紧张素-1(des-aspartate-angiotensin1,DAA-1)对过氧化氢致人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用。方法实验分为正常对照组,过氧化氢模型组,过氧化氢加DAA-1组(低剂量、中剂量、高剂量组)。倒置显微镜下观察细胞形态、密度。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,比色法测定细胞培养液中超氧化物歧化酶,活性、丙二醛及乳酸脱氢酶浓度。免疫细胞化学方法测定组织纤维蛋白溶酶原激活物,Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子表达量。逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定细胞内皮素1和血栓调节蛋白mRNA的表达。结果DAA-1能明显抑制过氧化氢所致的细胞活力的降低[0.443±0.024vs.0.317±0.024,P0.01],减少细胞内乳酸脱氢酶释放[(102.35±9.87)U/Lvs.(242.78±16.10)U/L,P0.01],提高超氧化物歧化酶活力[(19.10±2.33)U/mLvs.(8.16±3.48)U/mL,P0.01],并呈剂量依赖性作用;能明显减少内皮细胞在氧化过程中丙二醛的生成[(1.35±0.19)U/mLvs.(2.33±0.48)U/mL,P0.01],增加组织纤维蛋白溶酶原激活物蛋白表达,减少Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子蛋白表达;并能明显抑制内皮素mRNA的表达和提高血栓调节蛋白mRNA的表达。结论DAA-1对过氧化氢所致人脐静脉内皮细胞损伤具有明显的保护作用。     

大黄酚对大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤分化株细胞缺氧损伤的保护作用

目的观察大黄酚对缺氧引起的大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤分化株（PC12）细胞损伤的保护作用。方法培养PC12细胞,采用自制的密闭三气培养箱建立缺氧所致的PC12细胞损伤模型,根据不同条件,分为对照组、模型组、大黄酚组（包括1μg/ml组和5μg/ml组）。于缺氧处理前及处理后1、2、6、12、24h,每个时间点取6个复孔。采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测PC12细胞增殖活性,高倍显微镜下观察PC12细胞核形态,测定各组上清液中超氧化物歧化酶（SOD）含量,免疫组化法测定各组线虫抗凋亡基因的人类同源基因表达蛋白（BCL-2）的表达,实时定量PCR测定p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和含半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）mRNA的表达。结果①缺氧处理后12 h,MTT法测定大黄酚1μg/ml组的细胞活力高于模型组;缺氧处理24 h,大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组的细胞活力均高于模型组,差异均有统计学意义（P〈0.05）。②从缺氧处理后1 h开始,大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组的SOD值高于模型组,差异有统计学意义（P〈0.05）。③从缺氧后2 h开始,大黄酚1μg/ml组和5μg/ml的BCL-2阳性率均高于模型组。④从缺氧处理2h开始,模型组p38MAPK mRNA表达量高于大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组,差异有统计学意义（P〈0.05）。从缺氧处理6 h开始,模型组Caspase-3mRNA表达量高于大黄酚1μg/ml组和5μg/ml组,差异有统计学意义（P〈0.05）。⑤缺氧处理后12、24 h,模型组细胞的细胞核皱缩、形态不清,内见颗粒样物质形成增多;大黄酚组的细胞核形态较清楚,少见颗粒样物质形成。结论大黄酚可以减轻缺氧所致PC12细胞的损伤,对PC12细胞有保护作用。