化学激活在小鼠圆形精子细胞体外受精中的应用

目的:通过对生精细胞体外培养所获圆形精子细胞显微注射(ROSI)后的小鼠卵母细胞进行单一和联合化学激活,寻找小鼠圆形精子细胞体外受精的最佳激活方案。方法:采用不同浓度的乙醇(EH)、离子霉素(Ion)、钙离子载体A23187(CIA)、氯化锶(SrCl2)、6-二甲基苯胺嘌呤(6-DMAP)及放线菌酮(CHX)对ROSI后的卵母细胞进行不同作用时间的激活,并根据不同的激活途径,联合两种最佳激活浓度和时间的激活剂对ROSI后的卵母细胞行联合激活,以受精率、卵裂率和桑囊胚形成率为观察指标,比较单一及联合方案对卵母细胞的激活效果。结果:①单一激活时,各激活剂的最佳方案分别为7%EH作用6 min,5μmol/L CIA作用5 min,5μmol/L Ion作用5 min,2 mmol/L 6-DMAP作用2 h,10 mmol/L SrCl2作用1.5 h,10μg/ml CHX作用1.5 h,其中10 mmol/L SrCl2作用1.5 h桑囊胚率最高,显著优于CHX方案(P0.05),但与其它各组无显著性差异;②EH+6-DMAP组桑囊胚率(29.63%)显著高于其它联合激活组以及除SrCl2以外所有单一激活方案(P0.05),且正常受精率、卵裂率及桑囊胚率均高于SrCl2组,但无显著性差异。结论:单一激活方案中10 mmol/L SrCl2作用1.5 h,联合方案中7%EH作用6 min+2 mmol/L 6-DMAP作用2 h对体外培养所获圆形精子细胞ROSI后的卵母细胞激活效果最佳。EH+6-DMAP的联合激活方案优于单一激活。     

丙烯酰胺对小鼠卵母细胞成熟及发育潜能的研究

目的探讨丙烯酰胺对小鼠卵母细胞成熟及发育潜能的影响。方法选择成年雌性小鼠分别给予生理盐水及丙烯酰胺5mg/kg(低剂量组)、10mg/kg(中剂量组)、20mg/kg(高剂量组),连续给药7d,统计卵母细胞成熟率、孤雌激活率;观察卵母细胞纺锤体和染色体形态;分析卵母细胞外卵丘颗粒细胞的凋亡。结果 (1)丙烯酰胺低、中、高剂量组卵母细胞的体外成熟率分别为(88.5±1.5)%、(79.5±1.7)%、(76.5±1.8)%,均低于对照组的(92.5±1.2)%,但只有中、高剂量组与对照组有统计学差异(P0.05);(2)低剂量组卵母细胞的孤雌激活率[(78.5±2.6)%]与对照组[(81.5±1.2)%]相仿(P0.05),而中、高剂量组卵母细胞的孤雌激活率[分别是(61.6±3.2)%、(40.3±5.6)%]均显著低于对照组(P0.01);(3)丙烯酰胺处理组卵母细胞纺锤体形态不正常,呈现筒形和染色体排列不规则,散乱;(4)丙烯酰胺促进了颗粒细胞的凋亡。结论小鼠卵母细胞在丙烯酰胺处理后细胞成熟延迟,发育潜能降低。     

吗啡急性处理对脂多糖刺激后离体星形胶质细胞活性的影响

目的　观察不同浓度吗啡急性处理对脂多糖刺激后乳鼠离体星形胶质细胞活性的影响。方法　体外培养星形胶质细胞于融合状态 ,随机分为八组 :对照组 (L0 M0 组 )、0 5 μmol/L吗啡组 (L0 M0 5组 )、1 0 μmol/L吗啡组 (L0 M1 0 组 )、2 0 μmol/L吗啡组 (L0 M2 0 组 )、1 0 μg/ml脂多糖组(L1M0 组 )、1 0 μg/L脂多糖 +0 5 μmol/L吗啡组 (L1M0 5组 )、1 0 μg/ml脂多糖 +1 0 μmol/L吗啡组 (L1M1 0 组 )、1 0 μg/L脂多糖 +2 0 μmol/L吗啡组 (L1M2 0 )。在相应组中加入相应终浓度的吗啡和脂多糖 ,继续培养 2 4h。采用神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)免疫组化方法分别检测星形胶质细胞免疫活性。结果　L0 M0 5、L0 M1 0 、L0 M2 0 组对正常星形胶质细胞形态均无影响 ;L1M0 组的星形胶质细胞GFAP免疫反应阳性细胞平均光密度 (AOD)明显高于L0 M0 组 (P <0 0 1) ;L1M1 0 和L1M2 0组GFAP阳性产物AOD值比L1M0 组均明显降低 (P <0 0 1)。结论　吗啡的急性镇痛机制可能与其抑制星形胶质细胞激活有关     

氯化锶激活对小鼠体细胞核移植胚胎卵裂率和囊胚率的影响

目的:建立氯化锶(SrCl2)诱导小鼠体细胞核移植胚胎激活的最佳方法。方法:首先构建及鉴定小鼠核移植胚胎,在注核完成后,使用以下实验激活核移植胚胎:实验1,采用5 mmol/L和10 mmol/L SrCl2处理核移植胚胎1～8 h,观察时间对卵裂率和囊胚率的影响;实验2,在4、6 h采用1～20 mmol/L多种浓度SrCl2处理核移植胚胎,观察不同浓度对卵裂率和囊胚率的影响;实验3,研究10 mmol/L SrCl2配合不同培养液激活核移植胚胎的效果;实验4,观察10 mmol/L SrCl2联合蛋白激酶抑制剂6-DMAP、细胞松驰素(CB)对体外培育核移植胚胎的影响。结果:研究发现当浓度一致时(5 mmol/L),6 h组卵裂率(38.9%)与1 h组(6.7%)、2 h组(22.8%)、3 h组(22.8%)、4 h组(25.6%)比较差异均有显著性(P<0.05),但与5 h组(28.9%)、7 h组(34.4%)、8 h组(28.9%)均无显著差异(P>0.05);当时间固定时(6 h),SrCl2浓度为10 mmol/L获得的卵裂率和囊胚率(68.9%和7.2%)较高,较1 mmol/L组(28.3%和0%)、2.5 mmol/L组(35.6%和0%)、5 mmol/L组(37.8%和1.1%)、7.5 mmol/L组(60.6%和2.2%)、15 mmol/L组(51.7%和1.1%)和20 mmol/L组(41.7%和1.1%)均高(P<0.05);不同成分培养液实验显示,含Ca2+和Mg2+KSOM组的胚胎卵裂率较低,仅为27.8%,与不含Ca2+组(69.4%)、不含Ca2+/Mg2+组(66.1%)和添加EDTA组(68.3%)比较差异均显著(P<0.05);虽然SrCl2联合各培养液对核移植胚胎体外发育影响不大,但SrCl2联合CB组囊胚细胞计数(45.40±2.23)较未联合组(30.15±1.12)、联合6-DMAP组(34.95±1.38)、联合6-DMAP+CB组(37.45±1.43)均显著增多(P<0.05)。结论:10 mmol/L SrCl2单独处理6 h或联合CB均能较好地激活小鼠体细胞核移植胚胎。     

缺血预处理对大鼠移植肝脏保存再灌注损伤的保护及机制探讨

目的探讨缺血预处理 (ischemicpreconditioning ,IP)对大鼠移植肝脏保存再灌注损伤的保护作用及机理。方法采用SD大鼠原位肝移植动物模型 ,12 8只大鼠随机分成A(对照组 )、B(IP组 )、C(腺苷 ,Ado组 )、D(NO合成抑制剂 ,NAME组 )组 ,每组 32只。其中各组的半数用于观察存活率 ,另一半用于移植肝脏再灌注 2h后取血及肝脏检测。结果IP组和Ado组的 1周存活率、血清NO水平及肝组织腺苷含量分别为 88% (7/ 8)和 88% (7/ 8) ,(33 0± 6 1) μmol/l和 (2 9 1± 6 5 ) μmol/l,(7 2± 1 8) μmol/g和 (5 7± 1 3) μmol/g ,均高于对照组的 38% (3/ 8) ,(15 4± 3 0 )mol/L和 (3 6 9±0 5 4 ) μmol/g (P <0 0 5 ) ,血清ALT及TNF含量分别为 (2 87± 82 )IU/L和 (35 7± 93)IU/L ,(1 15± 0 2 3)ng/ml和 (1 14± 0 2 7)ng/ml,均低于对照组的 (5 88± 5 8)IU/L及 (1 5 9± 0 35 )ng/ml(P <0 0 5 ) ,组织的病理学改变也轻于对照组 ;NAME组的 1周存活率、血清NO及ALT含量等分别为 2 5 % (2 / 8)、(13 74± 3 11) μmol/l及 (6 34± 6 5 )IU/L ,与对照组相近 (P >0 0 5 ) ,而肝组织腺苷含量为 (5 5 6± 1 19)μmol/g ,与对照组差异有显著意义 (P <0 0 5 )。 结论IP对大鼠移植肝脏的保存再灌注损伤具有保护     

依托咪酯对大鼠海马脑片突触长时程增强的影响

目的 评价依托咪酯对大鼠海马脑片突触长时程增强(LTP)的影响.方法 雄性SD大鼠,断头后取出海马组织,制备厚400 μm的海马脑片.采用细胞外微电极记录技术,记录海马脑片CA1区细胞外群体峰电位(PS).取42张脑片,随机分为6组(n=7):用正常的人工脑脊液(ACSF)灌流海马脑片记录正常的PS,待其稳定后,对照组继续灌流ACSF,不同浓度依托咪酯组分别用含依托咪酯1μmol/L(依托咪酯 1 μol/L组)、2/μmol/L(依托咪酯2 μmol/L组)、5 μmol/L(依托咪酯5 μmol/L组)、10μmol/L(依托咪酯10 μmol/L组)、20 μmol/L(依托咪酯20 μmol/L组)的ACSF灌流,记录PS幅值.另取84张脑片,随机分为12组(n=7):用正常ACSF灌流海马脑片,记录稳定正常的PS 30 min,LIT组继续灌流ACSF,其余各组分别用含依托咪酯l μmol/L(LTP-依托咪酯 1 μmol/L组)、2 μmol/L(LTP-依托咪酯2μmol/L组)、5 μmol/L(LTP-依托咪酯 5 μmol/L组)、10μmol/L(LTP-依托咪酯 10 μmol/L组)、20 μmol/L(LTP-依托咪酯20 μmol/L组)、印防己毒素50 μmol/L(印防己毒素组)、荷包牡丹碱10 μmol/L(荷包牡丹碱组)、CGP35348 5 μmol/L(CGP35348 组)、印防己毒素50 μmol/L+依托咪酯10 μmol/L(印防己毒素+依托咪酯组)、荷包牡丹碱10 μmol/L+依托咪酯10 μmol/L(荷包牡丹碱+依托咪酯组)、CGP35348 5 μmol/L+依托咪酯10 μmol/L(CGP35348+依托咪酯组)的ASCF灌流,记录PS 30 min后,施以100 Hz的高频刺激(HPS),记录PS幅值.结果 与LTP组比较,LTP-依托咪酯2 μmol/L组、LTP-依托咪酯5 μmol/L组、LTP-依托咪酯10 μmol/L组、LTP-依托咪酯20 μmol/L组和CGP35348+依托咪酯组HIS后PS幅值降低(P＜0.05或0.01),印防己毒素组、荷包牡丹碱组、CGP35348组HFS后PS幅值差异无统计学意义(P＞0.05);与依托咪酯LTP 10μmol/L组比较,印防己毒素+依托咪酯组和荷包牡丹碱+依托咪酯组HIS后PS幅值增加(P＜0.01).结论 依托咪酯可通过激活大鼠海马GABAA受体抑制LTP的形成,从而影响学习和记忆功能.     

一氧化氮对岛状肌皮瓣缺血再灌注损伤的影响

目的　观察NO对岛状肌皮瓣I/R损伤的影响并探讨其作用机制。方法　选用白色小家猪 15只 ,随机分为I/R组、I/R +NO供体L -arg组及对照组。制作猪腹直肌岛状肌皮瓣I/R模型 ,于再灌注前后给予L -arg ,检测I/R不同时相皮瓣静脉血中NO的间接含量、皮瓣NTR渗出 ,计算再灌注完毕后肌肉存活比例。结果　①I/R +L -arg组再灌注 0 .5小时、1小时NO间接含量 ( 75 .0 7± 12 .5 4 ) μmol/L、( 86.86± 2 0 .15 ) μmol/L ,明显高于I/R组 ( 4 6.75± 11.77) μmol/L、( 4 0 .3 8± 10 .78) μmol/L(P <0 .0 1)。②再灌注 1小时、4小时I/R +L -arg组皮瓣NTR计数 ( 66.5 0± 17.3 3～ 15 3 .80± 3 8.5 3 ) / 2 0个高倍视野明显低于I/R组 ( 171.5 0± 4 4 .5 0 ,3 16.80± 5 2 .85 ) / 2 0个高倍视野 (P <0 .0 1)。③再灌注完毕后 ,I/R +L -arg组皮瓣肌肉的存活比例 ( 83 .70± 15 .60 ) %明显高于I/R组 ( 2 4 .0 7± 12 .3 5 ) % (P <0 .0 1)。结论　于缺血后再灌注前及再灌注早期给予L -arg ,适当增加内源性NO的产生 ,能有效减轻肌皮瓣缺血再灌注损伤。     

男性不育患者精浆尿酸的检测及临床意义初探

目的 :检测男性不育患者精浆尿酸的含量 ,并探讨其与不育的关系。　方法 :2 0 0 3年 2～ 8月就诊的男性不育患者 1 6 3例 ,分为 4组 :梗阻性无精子症组 ,1 5例 ;非梗阻性无精子症组 ,36例 ;少精子症组 ,4 3例 ;弱精子症组 ,6 9例。 2 0例正常生育男性为正常对照组。上述各组均作精液参数分析及精浆尿酸含量的测定。　结果 :正常对照组精浆尿酸含量为 (396 .9± 5 3.1 ) μmol/L ,显著高于梗阻性无精子症组 [(79.5± 1 8.1 ) μmol/L]、非梗阻性无精子症组[(2 4 5 .8± 76 .5 ) μmol/L]、少精子症组 [(2 6 2 .2± 79.2 ) μmol/L]和弱精子症组 [(2 5 1 .4± 75 .4 ) μmol/L](P均 <0 .0 1 )。其中 ,梗阻性无精子症组精浆尿酸含量又显著低于其他各不育症组 (P均 <0 .0 1 ) ,其余各不育症组间精浆尿酸含量差异无显著性 (P >0 .0 5 )。　结论 :精浆中尿酸作为生殖系统中的一种重要抗氧化物 ,可能在男性生殖中具有一定意义。     

卵母细胞激活技术在辅助生殖技术中的临床应用

目的观察辅助激活技术对辅助生殖技术中受精低下或失败患者成熟卵母细胞的激活效果及其胚胎发育情况。方法回顾性分析2014年10月至2016年10月在山西省儿童医院妇幼保健院生殖医学中心助孕治疗、至少有1次ICSI受精失败或受精低下(受精率30%),再次行ICSI助孕时采用成熟卵母细胞激活处理的12名患者资料。12名患者共收集105枚成熟卵母细胞,全部采用钙离子载体A23187联合6-甲基氨基嘌呤(6-DMAP)进行激活处理,观察卵母细胞激活后的原核形成及胚胎发育情况。结果激活周期的受精率及卵裂率分别为63.81%(67/105)和88.06%(59/67),较既往周期的受精率[23.96%(23/96)]和卵裂率[69.57%(16/23)]均显著升高(P0.05);激活周期中可移植胚胎及优质胚胎数量较既往周期均显著提高,分别为(3.02±2.51)vs.(1.41±0.58)枚和(1.70±1.36)vs.(0.31±0.52)枚(P0.05);既往ICSI受精低下或失败的12例患者中,卵母细胞激活处理后5例患者获得临床妊娠。结论辅助激活技术可以改善ICSI受精失败或受精低下患者的受精率及胚胎发育质量。     

自噬在吗啡预处理减轻小鼠原代皮层神经元氧糖剥夺/复糖复氧损伤中的作用及其与JNK的关系

目的评价自噬在吗啡预处理减轻小鼠原代皮层神经元氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)的关系。方法选择出生24 h内的C57BL/6乳鼠, 培养原代皮层神经元, 采用随机数字表法分为9组(n=24):对照组(C组)、OGD/R组、吗啡预处理组(M组)、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(3-MA组)、3-MA+吗啡预处理组(3-MA+M组)、自噬抑制剂氯喹组(Ch组)、氯喹+吗啡预处理组(Ch+M组)、JNK抑制剂SP600125组(SP组)和SP600125+吗啡预处理组(SP+M组)。吗啡预处理:OGD/R前加入吗啡3 μmol/L孵育2 h。3-MA组、Ch组和SP组分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP6001252 5 μmol/L, 孵育150 min。3-MA+M组、Ch+M组和SP+M组于吗啡预处理前30 min时分别加入3-MA 5 mmol/L、氯喹50 μmol/L、SP600125 25 μmol/L。随后氧糖剥夺1 h, 复糖复氧24 h。采用CCK-8法测定神经元活力;Western b...     

白藜芦醇对人胰腺癌PANC-1细胞增殖与侵袭的影响

目的 探讨白藜芦醇对人胰腺癌PANC-1细胞增殖与侵袭能力的影响.方法 实验分为空白对照组,0.1%DMSO组,白藜芦醇组(50、100、200 μmol/L).MTT法检测白藜芦醇对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期变化;Transwell侵袭小室检测白藜芦醇对细胞侵袭的影响;荧光实时定量PCR和Western blot检测白藜芦醇对细胞Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9表达的影响.数据以-x±s表示,多组比较采用方差分析.结果 (1)空白对照组抑制率为0;0.1%DMSO组细胞抑制率为3.25%±0.42%;白藜芦醇50 μmol/L组细胞抑制率为13.23%±1.68%;白藜芦醇100μmol/L组细胞抑制率为42.25%±3.20%;白藜芦醇200μmol/L组细胞抑制率为56.94%±5.31%.各组比较,差异有统计学意义(F=460.10,P<0.05).(2)空白对照组细胞凋亡率为0.05%±0.03%;0.1%DMSO组细胞为凋亡率为3.39%±1.77%;白藜芦醇50 μmol/L组细胞凋亡率为6.92%±1.85%;白藜芦醇100 μmol/L组细胞凋亡率为19.05%±2.01%;白藜芦醇200 μmol/L组细胞凋亡率为27.17%±6.43%.各组比较,差异有统计学意义(F=38.84,P<0.05).(3)0.1%DMSO组对细胞周期无显著影响.白藜芦醇引起PANC-1细胞G0/G1期和S期阻滞,G2/M期细胞减少.(4)空白对照组平均穿膜细胞数为61±13;0.1%DMSO组为54±13;白藜芦醇50 μmol/L组为48±15;白藜芦醇100 μmol/L组为23±6;白藜芦醇200 μmol/L组为18±7.各组比较,差异有统计学意义(F=69.08,P<0.05).(5)白藜芦醇可使PANC-1细胞Bax表达升高,Bcl-2表达下调.MMP-2、MMP-9的表达明显受到抑制,mRNA和蛋白水平变化一致.结论 白藜芦醇可明显抑制胰腺癌PANC-1细胞增殖,诱导细胞凋亡并抑制其侵袭能力.     

脊髓阿片受体在异丙酚对大鼠抗伤害性效应中的作用

目的 探讨脊髓阿片受体在异丙酚对大鼠抗伤害性效应中的作用.方法 雄性SD大鼠,体重220～280 g,选取鞘内置管成功的大鼠90只,随机分为9组(n=10):P组、D组和A组分别鞘内注射异丙酚10μg、二甲基亚砜(DMSO)5μl,人工脑脊液5μl;PN组和DN组分别鞘内注射异丙酚10μg、DMSO 5μl,5 min后均鞘内注射纳洛酮15 μg;PC组和DC组分别鞘内注射异丙酚10 μg、DMSO 5 μl,5 min后均鞘内注射高选择性μ受体拮抗剂CTOP 1 μg,PI组和DI组分别鞘内注射异丙酚10μg和DMSO 5 μl,5 min后均鞘内注射高选择性δ受体拈抗剂ICI 174,864 1μg.于首次给药前(T0)、首次给药后10 min(T1)、20 min(T2)、40 min(T3)时采用热水缩尾法测定痛阈,并计算痛阈提高百分率.结果 与T0时比较,T1,2时P组、PN组、PI组和PC组痛阈升高(P<0.05);P组痛阈高于D组,PN组痛阈高于DN组,PI组痛阈高于DI组,PC组痛阈高于DC组(P<0.05);与T1和T2时比较,T3时P组、PN组、PC组和PI组痛阈提高百分率降低(P<0.05);与P组和PC组比较,PN组和PI组首次给药后痛阈提高百分率降低(P<0.05).结论 异丙酚通过大鼠脊髓δ受体介导产生抗伤害性效应.     

小鼠孤雌胚胎干细胞系的建立

目的利用化学激活的技术,建立小鼠孤雌胚胎干细胞系。方法用钙离子载体A23187和6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）处理小鼠卵母细胞,待囊胚形成后,分离内细胞团,细胞传代、扩增。待传至37代时,核型检测查染色体,用微卫星技术进行纯合性鉴定,用免疫荧光技术检测胚胎干细胞表面标记Oct-4、SSEA-1及SSEA-4的表达情况,并用畸胎瘤试验检测其多向分化能力。结果该细胞株为孤雌来源,表现为正常二倍体核型,表达ALK,表面标志物Oct-4、SSEA-1阳性,SSEA-4阴性。体内注射后,在局部形成含三个胚层组织的畸胎瘤。结论通过钙离子载体A23187和6-DMAP化学激活小鼠卵母细胞,可以得到具有胚胎干细胞特性的细胞株。     

p38MAPK信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在七氟烷后处理减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 健康新生SD大鼠,日龄1～3 d,处死后取心室肌组织,培养心肌细胞,随机分为7组:对照组(C组)于CO2培养箱中持续培养3 h;缺氧复氧组(AR组)细胞缺氧2 h,复氧1 h;七氟烷后处理组(SP组)细胞缺氧2 h,复氧开始即刻更换为3%七氟烷饱和的DMEM培养液,孵育20 min,再更换为无血清DMEM培养液,继续复氧40 min;七氟烷后处理+SB203580组(SP+SB组)于七氟烷后处理同时加入SB203580(p38MAPK特异性抑制剂)至5 μmol/L,孵育20 min;七氟烷后处理+二甲亚砜组(SP+DMSO组)于七氟烷后处理同时加入0.1%DMSO,孵育20 min;SB203580组(SB组)于复氧开始时加入SB203580至5 μmol/L,孵育20 min;二甲亚砜组(DMSO组)于复氧开始即刻加入0.1%DMSO,孵育20 min.各组细胞分别接种于24孔培养板(1 ml/孔)、35 mm培养皿(5 mlnd/皿)和50 ml培养瓶(8 ml/瓶)中,每组12孔、6皿和6瓶.于复氧结束后,采用比色法测定细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用台盼蓝排斥实验测定细胞存活率;采用流式细胞仪测定细胞凋亡率;采用Western blot法测定磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,AR组、SP组、SP+SB组、SP+DMSO组和DMSO组p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与AR组比较,SP组、SP+SB组和SP+DMSO组LDH活性降低,细胞存活率升高,细胞凋亡率降低,p-p38MAPK表达上调(P<0.05);与SP组比较,SP+SB组、SB组和DMSO组LDH活性升高,细胞存活率降低,细胞凋亡率升高,p-p38MAPK表达下调(P<0.05).结论 七氟烷后处理可通过激活p38MAPK信号转导通路减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

细胞外信号调节蛋白激酶介导醛固酮诱导的肾小球系膜细胞增殖

Objective To determine the role of extracellular signal-regulated kinases (ERK1/2) in aldosterone-induced rat mesangial cells (RMCs) proliferation. Methods RMCs were obtained from intact glomeruli of 4- to 6-week-old Sprague-Dawley rats and characterized according to published methods. RMCs between passages 5 and passages 10 were used. Protein levels of mineralocorticoid receptor(MR) in RMCs were analyzed by Western blotting. The cells were divided into the following groups: control group, PD98059(10 ?滋mol/L) group, eplerenone (1 ?滋mol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) group, aldosterone (100 nmol/L) ＋PD98059 (10 ?滋mol/L) group, aldosterone(100 nmol/L)＋eplerenone (1 ?滋mol/L) group. ERK1/2 activity was measured by Western blotting. Cell proliferation of RMCs was evaluated by [3H]-thymidine uptake measurements. Results MR protein expression in RMCs was confirmed by Western blotting. Aldosterone activated ERK1/2, and the maximal ERK1/2 activation induced by aldosterone was at a concentration of 100 nmol/L. Aldosterone (100 nmol/L)-induced activation of ERK1/2 peaked at 10 minutes (P<0.05). Pretreatment with a selective MR antagonist eplerenone (1 ?滋mol/L) significantly attenuated aldosterone-induced ERK1/2 phosphorylation. Aldosterone (100 nmol/L) treatment for 30 hours increased [3H]-thymidine incorporation of RMCs (135%±8% of controls, P<0.05). Cellular proliferation induced by aldosterone could be prevented by pretreatment with eplerenone or an ERK (MEK) inhibitor PD988059. Conclusion Aldosterone induces RMCs proliferation through MR and ERK1/2 activation, which may contribute to the pathogenesis of glomerular mesangial injury.     

Phalloidin对钙离子载体A23187诱导的人精子顶体反应的作用

目的:探讨F-肌动蛋白在人精子顶体反应(AR)过程中的重要作用及可能机制。方法:将每例标本分为A、B、C、D、E 5组,共30例。以链球菌溶血素O(SLO)、Phalloid in、钙离子载体A23187分别处理各实验组人精子,其中A:A23187 3μmol/L;B:Phalloid in 40μmol/L+A23187 3μmol/L;C:SLO 0.5 U/m l+A23187 3μmol/L;D:SLO0.5 U/m l+Phalloid in 40μmol/L+A23187 3μmol/L;E:不添加任何试剂。分别采用罗丹明标记山豌豆凝集素(Rhodam ine-PSA,10μg/m l)荧光染色检测其AR,计算各组AR发生率(AR%)。结果:在5个实验组中,除A组与B组比较差异无显著性(P>0.05)外,其余各组两两比较差异均具有显著的统计学意义(P<0.01)。结论:Phalloid in对质膜完整的人精子AR发生率无影响。而在添加SLO的人精子模型中,Phalloid in较对照组能显著降低人精子AR发生率,提示F-肌动蛋白的聚合作用对人精子AR的发生具有重要意义,并且主要发生在精子顶体的内部。     

褪黑素对老化卵母细胞体外发育能力的改善效果评价

目的探讨体外培养阶段(IVC)添加褪黑素(MT)对卵母细胞老化引起发育受损的改善效果。方法采用不同浓度的过氧化氢(H_2O_2)处理小鼠MII期卵母细胞诱导老化,浓度分别为0(对照组)、10、50、100、150μmol/L,体外受精(IVF)后统计各组二细胞率、囊胚形成率,检测老化卵母细胞的线粒体活性及丰度(Mitotracker Red、JC-1)、活性氧(ROS)水平、线粒体拷贝数等指标;在100μmol/L H_2O_2处理条件下,老化卵母细胞在IVF后的培养阶段分别添加不同浓度褪黑素(10-5、10-7、10-9 mol/L),统计二细胞率、囊胚率,并且分别检测各组获得囊胚的细胞数及凋亡率。结果不同浓度H_2O_2诱导卵母细胞老化后,囊胚发育率随H_2O_2浓度的升高而降低,50μmol/L和100μmol/L H_2O_2组囊胚形成率分别为(26.27±0.06)%和(28.46±3.45)%,相比对照组的(34.90±1.77)%显著降低,差异有统计学意义(P0.05);在H_2O_2诱导老化卵母细胞中,100μmol/L、150μmol/L H_2O_2浓度时,ROS水平相比对照组显著升高,差异具有统计学意义(P0.05);而活性线粒体的丰度及拷贝数呈现下降趋势,膜电位呈上升趋势,但相比对照组无显著性差异(P0.05);100μmol/L H_2O_2处理诱导卵母细胞老化后,在培养液中添加10-9 mol/L褪黑素组与老化对照组相比,囊胚率[(29.42±2.39)%vs.(20.87±4.12)%]、囊胚细胞数(39.36±9.78vs.37.91±4.25)均显著升高,凋亡率显著下降(2.57%vs.3.18%),差异均有统计学意义(P0.05);并且这些指标均达到与未经老化处理组的相似发育水平。结论老化卵母细胞体外受精后发育率和发育质量偏低的现象,可以通过在受精后体外培养阶段添加褪黑素得到改善。     

不同浓度七氟醚预处理对大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡的影响及线粒体ATP敏感型钾通道在其中的作用

目的 探讨不同浓度七氟醚预处理对大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡的影响及线粒体ATP敏感型钾通道(mito-KATP通道)在其中的作用.方法 新生(出生＜24 h)SD大鼠,雌雄不拘,体重5～6 g,原代培养海马神经元,接种于培养孔或培养皿中,采用随机数字表法,将其随机分为7组,每组48孔和12皿,正常对照组(C组):不予任何处理;缺氧复氧组(HR组):缺氧4 h复氧24 h;6%七氟醚预处理组(S1 组)、4%七氟醚预处理组(S2 组)、2%七氟醚预处理组(S3 组):分别经6%、4%、2%七氟醚预处理后行缺氧复氧;5-羟葵酸100 μmol/L预处理组(5-HD组):经mito-KATP通道阻断剂5-羟葵酸(终浓度100 μmol/L)预处理后进行缺氧复氧;5-羟葵酸100 μmol/L+6%七氟醚预处理组(5-HD+S组):同时行5-羟葵酸和6%七氟醚预处理后进行缺氧复氧.各组以上处理结束后,测定神经元活力、凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白的表达水平.结果 与C组比较,其余6组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2和Bax蛋白表达上调(P＜0.01);与HR组比较,S1组～S3组海马神经元活力增强,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白表达上调,Bax蛋白表达下调(P＜0.01),5-HD组和5-HD+S组上述指标比较差异无统计学意义(P＞0.05);与S1组比较,S2组、S3组和5-HD+S组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调(P＜0.01);与S2组比较,S3组海马神经元活力降低,细胞凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达下调,Bax蛋白表达上调(P＜0.01).结论 七氟醚预处理可抑制大鼠海马神经元缺氧复氧时细胞凋亡,从而减轻神经元损伤,且呈浓度依赖性,机制可能与开放神经元mito-KATP通道,上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达有关.

Abstract：

Objective To investigate the effect of preconditioning with different concentrations of sevoflurane on hypoxia-reoxygenation(H/R)-induced apoptosis in rat hippocampal neurons and the role of mitochondrial KATP(mito-KATP)channels.Methods Primary cultured hippocampal neurons isolated from newborn SD rats(＜24h)of both sexes,weighing 5-6 g,were randomly divided into 7 groups with 48 wells and 12 dishes in each one:control group(C group),H/R group,preconditioning with 6%,4%and 2% sevoflurane groups(S1-3 groups),5-hydroxydecanoate(5-HD,mito-KATP channel blocker)100 μmol/L preconditioning group(5-HD group)and preconditioning with 5-HD 100 μmol/L+6% sevoflurane group(5-HD+S group).The neurons were exposed to 4 h hypoxia followed by 24 h reoxygenation. In S1-3 groups, preconditioning was performed with 6% , 4% and 2% sevoflurane respectively before H/R. In 5-HD group, preconditioning was performed with 5-HD (final concentration 100 μmol/L) before H/R. In 5-HD + S group, preconditioning was performed with 5-HD 100 μmol/L and 6% sevoflurane before H/R. The neuronal viability, apoptosis rate and expression of Bcl-2 and Bax were determined after 24 h reoxygenation.Results The neuronal viability was significantly lower,while the apoptosis rate and expression of Bcl-2 and Bax were significantly higher in the other 6 groups than in group C(P＜0.01).The neuronal viability and expression of Bcl-2 were significantly higher,while the apoptosis rate and Bax expression were lower in S1-3 groups than in group H/R. There was no significant difference in the parameters mentioned above between 5-HD and 5-HD + S groups(P＞0.05).The neuronal viability and expression of Bcl-2 were significantly lower, while the apoptosis rate and Bax expression were higher in S2, S3 and 5-HD + S groups than in group S1, and in group S3 than in group S2(P＜0.0l) .Conclusion Sevoflurane preconditioning can inhibit H/R-induced apoptosis in rat hippocampal neurons and reduce the injury to neurons in a concentration-dependent manner, and the underlying mechanism may be related to activation of mito-KATP channels, up-regulation of Bcl-2 expression and down-regulation of Bax expression.