灭活流感疫苗接种后人体血清中的自身抗体

已知一些活病毒疫苗和灭活病毒疫苗能诱生自身抗体。作者曾报告,从流感病人和用纯化流感病毒免疫的动物可检出自身抗体。本文系对首次、再次和三次免疫接种灭活流感疫苗的人群血清作自身抗体检测的研究报导。从下述三组人群采集血清:A组(9人)为首     

检测黑猩猩腺病毒68型抗原的双抗体夹心ELISA的建立

目的  建立定量黑猩猩腺病毒68型（chimpanzee adenovirus type 68，AdC68）含量的双抗体夹心ELISA，并验证其可行性。方法  用表达绿色荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）的非复制型AdC68（AdC68GFP）感染HEK293细胞，收获病变细胞并进行超速离心纯化AdC68GFP。用纯化AdC68GFP免疫家兔制备抗AdC68GFP抗体。以抗AdC68GFP抗体为包被抗体，辣根过氧化物酶标记的抗腺病毒HEXON IgG为酶标抗体，建立双抗体夹心ELISA，确定该法的线性范围，并验证该法的准确度、精密度、专属性和适用性。结果  纯化AdC68GFP的蛋白浓度为38.8 µg/ml，其中HEK293细胞的蛋白浓度低于0.3 µg/ml。双抗体夹心ELISA的最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为1∶50和1∶500。该法的线性范围为0.06~3.88 µg/ml，线性相关系数为0.999 6。高、低浓度AdC68GFP样品的回收率分别为93.17%和94.33%，变异系数分别为6.72%和3.44%。该法可特异性检测AdC68GFP抗原，未发现与HEK293细胞蛋白发生交叉反应。应用该法检测AdC68GFP纯化过程中的样品可反映病毒的纯化效果。结论  建立的双抗体夹心ELISA具有良好的准确度、精密度和特异性，可用于AdC68纯化工艺过程中对病毒蛋白含量的快速检测。     

按两种程序接种DTaP-IPV-Hib联合疫苗的安全性和免疫原性

作者将液体白喉-破伤风-无细胞百日咳菌苗-脊髓灰质炎灭活疫苗（DTaP-IPV）和冻干b型流感杆菌（Hib）结合菌苗混合制成五价DTaP-IPV/Act-HIB联合疫苗。每0.5ml疫苗含白喉类毒素（DT）≥30IU、破伤风类毒素（TT）≥40IU、戊二醛灭活的百日咳类毒素（PT）25μg、天然丝状血凝素（FHA）25μg以及1、2、3型脊髓灰质炎病毒40、8、32D抗原单位、与24μg纯化TT结合的Hib荚膜多糖10μg。按2、4、6月龄初免、13月加强免疫或3、5月龄初免、12月龄加强免疫的程序,对236名婴儿进行免疫,于每次接种后3日内记录各类不良反应,并于初免后、加强免疫前后采血。用ELISA检测抗DT、TT抗体以及抗PT、FHA抗体;用中和试验（NT）检测抗各型脊髓灰质炎病毒抗体;用放射免疫法检测抗Hib荚膜多糖抗体。同时用NT检测抗DT抗体和抗PT抗体。     

对RSV F蛋白亚单位疫苗(PFP-1)接种者的第二年监测:评价抗体持久性和可能的疾病加剧作用

作者选择26名18～36月龄感染过呼吸道合胞病毒(RSV)的健康儿童,用双盲法随机分为两组,疫苗组肌注0.5ml(50μg蛋白)疫苗,含90％～95％纯化的RSVF蛋白(PFP-1),对照组注射等量盐水,于接种后不同时间采血,用ELISA检测抗RSV糖蛋白F、Ga和Gb抗体,用空斑中和试验测定中和抗体,分析血清抗体应答与监测期间感染RSV的关系。     

登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白多克隆抗体的制备

目的制备登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白的小鼠多克隆抗体并进行鉴定。方法利用SDS-PAGE电泳的方法将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,切割目的条带并研磨制成抗原,皮下多点分次注射BALB/c小鼠,采用Western-Blot、间接免疫荧光法对小鼠血清多克隆抗体进行鉴定。结果经SDS-PAGE电泳成功地将纯化后的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白浓缩,并获取了抗登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核表达蛋白的多克隆抗体。结论本实验中所用到的登革Ⅱ型病毒M株、NGC株E基因部分序列原核蛋白为可溶性抗原,通过切胶研磨制成颗粒性蛋白抗原能获得良好的免疫效果,该方法制备的抗原浓度及纯度高,由此获得了高效价高特异性的多克隆抗体。     

由杆状病毒重组体在昆虫幼虫中产生的甲型流感病毒N2神经氨酸酶的免疫原性

甲型流感病毒有两种主要的表面糖蛋白:血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)。NA诱导产生的抗NA特异性抗体无中和能力,但能使病毒的复制降低到致病性阈值以下,从而能预防人与小鼠发病。本文作者对野型流感病毒(A/Udorn/72)纯化的N2-NA及由杆状病毒重组体在昆虫中产生的N2-NA的免疫原性进行了比较。     

应用固相化抗体免疫吸附法浓缩和提纯脊髓灰质炎病毒

抗脊髓灰质炎病毒(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型)抗体与 sepbarose-4B 相偶联,所制得免疫吸附剂对活病毒及灭活病毒都具有高结合容量。结合的抗原用高浓度硫氰酸铵洗脱。洗脱后立即用凝胶过滤法脱盐,可得纯化和浓缩的抗原。本免疫吸附法具有特异性强和简单快速等优点,可用于大规模分离和纯化脊髓灰质炎病毒以供制备灭活疫苗之用。     

免疫吸附剂类型对狂犬病抗体酶免疫测定的影响:纯化的糖蛋白优于全病毒

近年来,酶免疫测定(EIA)已用于狂犬病病毒抗体的测定。为确定最适当的免疫吸附剂,作者用3种不同的体外法来测定人二倍体细胞(HDC)疫苗和神经组织[乳鼠脑(SMB)和羊脑(SB)]疫苗免疫的人和小鼠血清中的狂犬病病毒抗体:(1)用3种类型免疫吸附剂(完整狂犬病病毒、纯化的糖蛋白和纯化的核衣壳)作EIA;(2)快速荧光灶抑制试验(RFFIA)测定中和抗体;(3)快速的细胞内抗原酶免疫滴定法(REITICA)测定中和抗体。3种试验结果经最小平方直线回归分析进行比较。用标准离差法来比较相关系数。     

脊髓灰质炎病毒衣壳多肽VP1、VP2、和VP3诱导中和抗体

作者证明了脊髓灰质炎病毒的3个重要衣壳多肽VP1、VP2和VP3有诱导中和抗体的能力。采用提纯的脊髓灰质炎清病毒或福尔马林灭活病毒(Ⅰ型Mahoney株、Ⅱ型MEF株和Ⅲ型Saukett株)作为分离衣壳多肽的原材料。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离农壳多肽。每隔3～6周给Wistar鼠及新英格兰兔重复肌肉注射50～100μg多肽以制备抗多     

用ELISA测定抗狂犬病病毒包膜糖蛋白抗体

狂犬病病毒包膜糖蛋白(G蛋白)能诱导具有保护作用的中和抗体.G蛋白从提纯的病毒中溶解下来,再用不同的蔗糖密度梯度离心,最后做高效液相层析.溶解和纯化G蛋白的条件可用免疫印迹和ELISA法确定.纯化的G蛋白与常规抗血清和单克隆抗体的反应证明,G蛋白基本上不含病毒内部蛋白.以纯化的G蛋白包被微量稀释板,检测狂犬病疫苗免疫的人血清中的抗狂犬病病毒抗体,检查结果与标准的快速荧光灶抑制试验(RFFIT)结果比较.结果表明ELISA简单,     

脊髓灰质炎病毒中和抗体检测血清参考品的制备及稳定性

目的 制备抗脊髓灰质炎(脊灰)病毒血清作为检测参考品,并研究其稳定性.方法 用1、2、3型脊灰病毒分别接种非洲绿猴肾细胞,收获病毒液,超滤浓缩后纯化病毒抗原,并进行蛋白含量和纯度检测.用纯化的病毒抗原免疫新西兰白兔获得分别抗3个型别的血清,过滤、分装、冻干后,进行无菌检验、支原体检验、水分测定,用微量细胞病变抑制法进行特异性检测.3名实验员各标定5次候选参考品的中和抗体效价,计算变异系数.血清放置于-20℃进行稳定性分析.结果 纯化的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白含量分别为12.3、10.4、9.8μg/ml.电泳蛋白条带的相对分子质量与文献报道一致.高效液相色谱法检测的1、2、3型脊灰病毒抗原蛋白纯度分别为100％、99％和96％.抗各型脊灰病毒血清仅可中和对应型别,而不能中和另两个型别脊灰病毒或肠道病毒.无菌检验、支原体检验结果及水分含量(均低于3％)均符合药典要求.血清参考品的抗1、2、3型脊灰病毒中和抗体效价分别为73 587、3 264、34 857.候选参考品在-20℃放置5年后中和抗体效价未降低(t=-1.25,P=0.225).结论 制备的抗1、2、3型脊灰病毒冻干血清参考品稳定性好,适用于检测Sabin株脊灰灭活疫苗免疫原性及脊灰病毒特异性中和抗体.     

抗-HBc阳性个体的免疫状态

Tabor等人曾经指出,乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)所诱导的抗体(抗-HBc)可能是保护性抗体。用纯化的HBcAg免疫黑猩猩,能使黑猩猩抵抗病毒的攻击。这种见解有助于了解仅有抗-HBc阳性的个体的乙型肝炎的免疫状态。作者对抗-HBc 阳性志愿者接种乙型肝炎疫苗时,获得一些可疑结果。14名仅有抗-HBc阳性的志愿者,每月接受1次5μg HBs     

合成的HIV-l gp120V3区环状肽偶联物免疫原的免疫原性

一种成功的预防性1型人类免疫缺陷症病毒（HIV-1）疫苗必须能激发阻止病毒长期感染的免疫应答,这方面唯一有效的应答是产生抗HIV-lgp120高度变异的V3环区的病毒中和抗体。研究发现V3区有一个高度保守区域,包括氨基酸序列G-P-G-R中典型的Ⅱ型β转角处的肽部分。本文作者研究了     

小鼠口服轮状病毒疫苗候选株RRV或WC3后的轮状病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞应答

轮状病毒(RV)WC3株(6型)能保护婴幼儿抵抗1型RV疾病,但并不产生1型病毒特异性中和抗体;RRV株(3型)仅对同类病毒有特异性防御作用,而不能抵抗1型RV感染.显然,RV的这种异型保护作用难以用体液免疫应答解释清楚.为了进一步探讨RV的这种异型保护作用机理,本文作者用WC3和RRV株分别免疫小鼠,通过对免疫     

Balb/c小鼠接种呼吸道合胞病毒融合蛋白后的肺免疫应答

为了确定局部浸润的肺单个核细胞（PMC）在清除下呼吸道病毒中的作用,作者研究了与氢氧化铝佐剂混合的纯化呼吸道合胞病毒（RSV）融合(F）蛋白（5μg）接种Balb/c小鼠的效果。 作者在0及3周对小鼠肌肉接种F蛋白以诱导保护性免疫力,同时与实验感染RSV（1～2×10~6 pfu）的小鼠进行比较,末次免疫或感染后3或4周用1×10~7pfu病毒作鼻内攻击,测定攻击后4和8天每克肺组织的病毒效价,并检测初次免疫后3和6周混合血清样本的中和抗体效价。 结果表明,F蛋白诱生的免疫应答与实验感染相似,能抑制攻击后4～8天的病毒复制,而未免疫对照小鼠在攻击后8天才有抑制作用。接种组和实验感染组于6周后查到抗RSV中和抗体。作者用~(51)Cr释放试验检测了初次接种后3周及RSV攻击后5和7天肺组织中浸润PMC的杀细胞作用,发现有抗原依     

ALVAC-HCMV-gB候选疫苗的临床前评价

成功的人巨细胞病毒（HCMV）疫苗接种应能诱导中和抗体（NA）和细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答。纯化的HCMV糖蛋白B（gB）可诱导人和实验动物产生抗HCMVNA,表达gB的异种病毒重组体可诱导小鼠产生CTL应答。为提供HCMV候选疫苗Ⅰ期临床试验的临床前资料,本文作者检测了ALVAC-HCMV-gB（ALVAC-gB）重组体在     

一种简单的常规诊断狂犬病的快速酶免疫诊断技术

作者利用抗狂犬病病毒核衣壳IgG抗体,建立了狂犬病快速酶免疫诊断(RREID)技术,并将结果与直接免疫荧光法(IF)和从神经母细胞瘤细胞中分离病毒的结果进行了比较。ELISA微量板用1.0μg/孔纯化的抗狂犬病病毒核衣壳IgG抗体致敏。将可疑动物的小块(脑或唾液腺)组织加入4倍体积的小牛血清中,捣匀,3000转/分离心30分钟后去沉淀,样品上清以200μl/孔加入预先用抗病     

多包膜HIV疫苗对小动物和黑猩猩的安全性和免疫原性

作者评价了多包膜人类免疫缺陷症病毒(HIV)疫苗诱生 HIV特异性抗体的能力 ,证实了 DNA重组体 -痘苗病毒 (VV)重组体 -纯化蛋白三阶段免疫方案是诱导保护性免疫应答的较佳方案 ,同时还对单包膜疫苗和多包膜 VV重组疫苗进行了比较。　　为分析 HIV感染者的抗体应答 ,作者研究了单克隆抗体的决定簇和中和能力 ,结果显示 :大多数抗体具有一定程度的交叉反应性 ,但单一决定簇仅能诱生部分交叉反应性抗体。因此 ,或许只有寡聚包膜疫苗混合物才能更好地代表异源 HIV,表现各种中和决定簇 ,从而在志愿者中诱导保护性免疫。作者首先进行了 HI…     

重组gp160疫苗用于早期人类免疫缺陷症病毒感染者安全性和免疫原性的Ⅰ期临床评价

1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)虽然能刺激机体产生细胞免疫和体液免疫应答。但仍引起慢性进行性免疫功能失调,这可能是由于病毒调节蛋白或病毒对细胞致病力发生变化所致。为此作者用HIV gp160对HIV感染早期病人进行主动免疫来研究增强对HIV特异性免疫的可能性。30名志愿者均为HIV早期感染者,抗HIV抗体阳性,CD4细胞数不少于400/ml,年龄为18～50岁。疫苗来自HTLV-Ⅲ的亚单位糖蛋白gp160,此为杆状病毒表达的重     

疫苗诱导的抗天然及重组HIV-1包膜糖蛋白抗体

作者采用多中心、随机、双盲法,对以1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)LAV株gp160重组痘苗活病毒初免、再用杆状病毒表达的HIV-ILAV重组gp16O候选疫苗加强免疫所诱生的能识别感染细胞表面表达的天然外膜糖蛋白的抗体进行了测定.