沉默SEPT9基因对肝癌HepG2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨SEPT9基因与肝癌的关系,进一步揭示SEPT9基因在肝癌发生发展过程中的作用.方法 将构建的针对SEPT9基因的shRNA表达载体通过脂质体LipofectamineTM 2000转染人肝癌HepG2细胞,荧光显微镜下观察细胞的转染效率,RT-PCR、Western blot法分别检测SEPT9 mRNA和蛋白质的表达抑制情况,CCK-8检测细胞的生长抑制情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 荧光显微镜观察细胞的转染效率达到70％以上;SEPT9 mRNA及蛋白表达抑制率均受到明显抑制.CCK-8法检测结果显示,实验组HepG2细胞的生长受到明显抑制;流式细胞术检测结果显示实验组HepG2细胞凋亡明显(P＜0.05).结论 抑制SEPT9基因的表达可有效抑制HepG2细胞的增殖,并对细胞凋亡有明显的促进作用.     

长链非编码RNA LIMT调控TGF-β信号通路对肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:检测lncRNA LIMT在肺癌组织中的表达水平，探讨lncRNA LIMT表达对肺癌细胞增殖及凋亡的影响及其可能的分子作用机制。方法:利用荧光定量PCR（RT-qPCR）检测lncRNA LIMT在肺癌组织中的表达水平；在肺癌细胞A549中转染lncRNA LIMT过表达质粒pEGFP-C1-LIMT及敲减lncRNA LIMT的特异性siRNA-LIMT及其相关对照，RT-qPCR验证其转染效率；利用CCK-8法、流式细胞术检测转染lncRNA LIMT过表达质粒及siRNA-LIMT后肺癌细胞的增殖及凋亡能力变化；利用Western blotting检测TGF-β信号通路相关蛋白TGF-β1蛋白及Smad4蛋白的表达水平。结果:RT-qPCR结果显示:肺癌组织中lncRNA LIMT的表达水平显著低于配对癌旁组织（P＜0.05）；细胞转染实验结果显示:转染pEGFP-C1-LIMT后A549细胞中lncRNA LIMT的表达水平显著高于转染空载质粒（P＜0.001），转染siRNA-LIMT后A549细胞中lncRNA LIMT的表达水平显著低于转染对照siRNA-NC（P＜0.01）；CCK-8和流式细胞术实验结果显示:过表达lncRNA LIMT显著抑制了肺癌细胞的增殖、诱导细胞凋亡（P＜0.01），敲减lncRNA LIMT显著促进了细胞增殖、抑制细胞凋亡（P＜0.01）；Western blotting结果显示:lncRNA LIMT过表达的肺癌细胞中TGF-β1蛋白表达水平显著降低，Samd4蛋白表达水平显著升高（P＜0.05），敲减lncRNA LIMT的肺癌细胞中TGF-β1蛋白表达显著升高，Samd4蛋白表达显著降低（P＜0.05）。结论:lncRNA LIMT在肺癌组织中表达下调，过表达lncRNA LIMT抑制肺癌细胞增殖，诱导细胞凋亡，敲减lncRNA LIMT促进肺癌细胞增殖，抑制细胞凋亡，可能通过对TGF-β信号通路的调控来实现。     

lncRNA SUMO1P3诱导肝癌HepG2细胞对索拉菲尼耐药的分子机制

目的：探讨长链非编码RNA小泛素样修饰蛋白1假基因3（lncRNA SUMO1P3）促进肝细胞癌（HCC）HepG2细胞对索拉菲尼（SR）耐药的分子机制。方法：体外培养HCC细胞HepG2,采用持续接触浓度递增诱导法建立SR耐药细胞HepG2/SR,以HepG2细胞作为对照,qPCR 法检测 HepG2/SR 细胞中 SUMO1P3 的表达。利用脂质体转染技术,在 HepG2/SR细胞中分别转染si-SUMO1P3和si-NC;在HepG2细胞中分别转染pc-SUMO1P3和pc-DNA,后经5 μmol/L的SR处理24 h,qPCR法检测转染细胞中SUMO1P3表达水平,CCK-8法、Transwell实验和FCM分别检测转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力和凋亡水平,WB法检测细胞中cyclin D1、Bcl2、BAX、MMP-2和MMP-9的表达。结果：成功构建SR耐药细胞HepG2/SR,HepG2/SR细胞中SUMO1P3表达水平显著高于 HepG2 细胞（P<0.01）。在 HepG2/SR 细胞敲减 SUMO1P3 后 ,与 si-NC 组比较 ,si-SUMO1P3 组细胞中SUMO1P3的表达与细胞增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9表达均显著降低,细胞凋亡率和BAX的表达均显著升高（P<0.05或P<0.01）。HepG2细胞过表达SUMO1P3后,与pc-DNA组比较,pc-SUMO1P3组细胞的增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和BAX的表达均降低（P<0.05 或 P<0.01）;与pc-DNA+SR组比较,pc-SUMO1P3+SR组HepG2细胞的增殖、迁移、侵袭能力及cyclin D1、Bcl2、MMP-2和MMP-9蛋白表达均显著升高,细胞凋亡率和BAX的表达均显著降低（P<0.05或P<0.01）。结论：lncRNA SUMO1P3可通过调控HCC细胞的周期、凋亡等多种信号通路分子诱导细胞对SR的耐药,从而影响HepG2细胞的增殖、迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡与诱导细胞对SR的耐药。     

沉默EZH2基因表达对肾癌细胞生物学行为的影响

目的 研究RNA干扰靶向沉默EZH2基因表达对ACHN肾癌细胞株增殖、细胞周期和凋亡的影响。方法 应用Western blot法检测EZH2蛋白在人正常近端肾小管上皮细胞株HK-2和肾癌细胞株786-0和ACHN中的表达。脂质体法介导化学合成EZH2 siRNA转染ACHN细胞株,Western blot法检测转染后ACHN细胞EZH2蛋白的表达情况,CCK-8法检测转染后ACHN细胞增殖率,流式细胞术检测转染后ACHN细胞周期分布和凋亡情况。结果 肾癌细胞株786-0和ACHN中EZH2蛋白的表达水平明显高于人正常近端肾小管上皮细胞HK-2。RNA干扰EZH2基因可成功地敲减ACHN细胞EZH2蛋白的表达。EZH2-siRNA干扰后,实验组ACHN细胞生长明显受抑制,在转染后48和72 h细胞增殖受抑制效应著（P＜0.05）。细胞周期分析显示：siEZH2转染组G1期ACHN细胞比例呈增加趋势,而S期和G2期细胞比例呈减少趋势,其中在转染后48h G1期ACHN细胞比例显著增加,而S期和G2期细胞比例明显下降（P＜0.05）;凋亡分析显示：siEZH2转染组ACHN细胞凋亡率随转染后时间的延长而呈增加趋势,在转染后48和72 h细胞凋亡率增加最显著（P＜0.05）。结论 沉默EZH2基因表达可靶向肾癌ACHN细胞周期中G1/S限制点而阻滞细胞周期进展,同时可有效抑制肾癌细胞增殖和促进细胞凋亡。     

急性髓系白血病细胞中 DICER1 基因的表达及其功能研究简

目的：检测急性髓系白血病细胞株HL-60、KG-1细胞中DICER1基因的表达水平,研究DICER1基因沉默对HL-60、KG-1细胞增殖、凋亡的影响,探寻DICER1在白血病发病机制中的作用。方法：应用Real-time PCR和Western blot检测DICER1在白血病细胞株HL-60、KG-1中mRNA和蛋白的相对表达水平。用Lipofectamine TM LTX 将DICER-shRNA载体转染HL-60、KG-1细胞,Real-time PCR和Western blot的方法从mRNA和蛋白水平检测DICER1的干扰效率。CCK-8法检测DICER1干扰后对白血病细胞增殖的影响,流式细胞仪检测DICER1干扰后白血病细胞凋亡率。结果：以正常HEK293细胞为对照,白血病细胞株HL-60、KG-1中DICER1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于正常HEK293细胞（P＜0.05）。DICER1-shRNA转染HL-60、KG-1细胞5天后,DICER1 mRNA和蛋白表达水平显著下降,干扰效果显著（P＜0.05）;CCK-8实验结果表明：与对照组细胞相比,DICER1干扰后白血病细胞增殖力显著降低（P＜0.05）;流式细胞分析表明：与正常细胞和对照组细胞比较,DICER1干扰后白血病细胞凋亡显著增加（P＜0.01）。结论：DICER1在白血病细胞株HL-60、KG-1中高表达,具有促进白血病细胞增殖,抑制凋亡的作用。     

UBE2T基因通过调控ROS抑制结直肠癌细胞凋亡

目的:通过结肠癌细胞实验检测UBE2T对结肠癌细胞凋亡的影响。方法:细胞计数盒（CCK-8）法检测UBE2T基因转染对结肠癌细胞活力的影响；流式细胞仪检测UBE2T转染后对结肠癌细胞凋亡的影响；DCFDA染色流式细胞仪检测UBE2T转染对结肠癌细胞中ROS水平的影响；CCK-8法检测H2O2（增加ROS）对UBE2T基因转染降低结肠癌细胞活力的影响；流式细胞仪检测H2O2对UBE2T基因转染增加结肠癌细胞凋亡率的影响。结果:UBE2T转染能够明显增加结肠癌细胞活力（P＜0.05）；UBE2T基因转染抑制结肠癌细胞凋亡率（P＜0.05）；UBE2T转染减少结肠癌细胞ROS水平；预处理H2O2减弱UBE2T基因转染对结肠癌细胞活力的增加作用（P＜0.05）；预处理H2O2逆转UBE2T基因转染对结肠癌细胞凋亡率的抑制作用（P＜0.05）。结论:UBE2T基因转染能够抑制结肠癌凋亡，其机制是通过调节结直肠癌细胞中ROS水平。     

苦参碱对人类肝癌细胞HepG2增殖、细胞周期及凋亡的影响

 目的　探讨苦参碱（MT）对人类肝癌细胞株HepG2增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法　用不同质量浓度的MT（0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 g／L）对培养的HepG2细胞作用不同时间（24、48、72 h）,用四氮噻唑蓝（MTT） 比色法检测MT对细胞增殖的影响;流式细胞术（FCM）检测MT对HepG2细胞周期及凋亡的影响。结果　质量浓度≥0.1 g／L的MT有抑制HepG2细胞增殖的作用,且作用随药物质量浓度的增加及时间的延长而加强（P＜0.01）。FCM检测分析显示,0.8 g／L MT作用48 h能将HepG2细胞阻滞在G1期[（75.3±6.5）%对（64.1±6.3）%]（P＜0.05）,1.6 g／L MT作用48 h能将HepG2细胞阻滞在G2期[（29.1±9.1）%对（11.6±2.1）%]（P＜0.01）。0.4、0.8、1.6 g／L MT作用12、24、48 h对HepG2细胞都有诱导凋亡作用,且作用随药物质量浓度的增加及作用时间的延长而加强（P＜0.01）。结论　MT能够抑制HepG2细胞的增殖、诱导其凋亡并影响其细胞周期,呈时间和剂量依赖性。MT抗肝癌的机制可能与影响肝癌细胞周期、抑制细胞增殖及诱导凋亡有关。     

siRNA 干扰胰岛素样生长因子1 受体表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨siRNA技术干扰胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factors-1 receptors, IGF-1R）表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期和凋亡的影响。方法：采用氯化钴处理制备实验所需的肝癌缺氧细胞模型。设计并合成3 对siRNA序列和1 对阴性对照序列，转染缺氧的肝癌HepG2 细胞24 h 后以荧光显微镜观察转染效果，采用WB法检测IGF-1R蛋白表达筛选出干扰效率最高的siRNA序列。选用该序列再次转染缺氧肝癌细胞，以流式细胞术、MTT法检测细胞的周期、凋亡和增殖变化，以WB法检测HepG2 细胞中CDK1、CDK2 和Caspase-3 蛋白的表达。结果：成功建立缺氧HepG2 细胞模型，siRNA转染缺氧HepG2 细胞后以IGF-1R-siRNA-2 转染效率最高且敲减IGF-1R表达最明显（均P<0.01）。IGF-1R-siRNA-2 转染的HepG2 细胞的增殖被明显抑制（P<0.05 或P<0.01）、细胞周期被阻滞在G0/G1（P<0.05）、细胞凋亡率明显增加至（25.3±1.3）%（P<0.01），同时发现敲减IGF-1R后缺氧HepG2 细胞中CDK1、CDK2 蛋白表达明显降低而Caspase-3 表达则明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：siRNA干扰IGF-1R表达通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白而抑制缺氧环境中HepG2细胞的恶性生物学行为，IGF-1R可能是HCC潜在的治疗靶点。     

CUL4A促进人胃癌细胞增殖、侵袭和转移的机制

目的:探讨CUL4A基因在胃癌增殖、侵袭和转移中的机制。方法:siRNA干扰胃癌SCG-7901细胞中CUL4A基因的表达;CCK-8法检测各组细胞的增殖情况;Transwell小室观察各组细胞的侵袭能力;Annexin-V-FITC/PI法检测各组细胞的凋亡情况,分析CUL4A对细胞凋亡的影响;Real time-PCR分析上皮间质转化（EMT）相关基因的表达情况。结果:siRNA有效干扰了胃癌SCG-7901细胞中CUL4A基因的表达（P＜0.05）;干扰CUL4A基因有效抑制了胃癌细胞的增殖（P＜0.05）;Transwell小室结果显示,干扰CUL4A基因阻碍了SCG-7901细胞的侵袭能力（P＜0.05）;细胞凋亡结果显示,干扰CUL4A基因促进了细胞的凋亡（P＜0.05）;Real time-PCR结果显示,干扰CUL4A基因后Snail mRNA和ZEB1 mRNA的表达降低（P＜0.05）,E-cadherin mRNA的表达升高（P＜0.05）。结论:CUL4A基因促进胃癌细胞的增殖,抑制凋亡和侵袭,且影响了EMT相关基因的表达。     

硼替佐米对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响

目的:探讨硼替佐米（BTZ）对胰腺癌细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt通路的影响。方法:体外培养人胰腺癌细胞株PANC-1细胞,分别给予硼替佐米（0,2,10,50,250 nmol/L）作用24 h,采用MTT法检测PANC-1细胞活力,采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡情况,采用流式细胞术检测细胞周期,采用Western blot检测细胞凋亡及PI3K/Akt通路相关蛋白表达情况。结果:与0 nmol/L硼替佐米相比,不同浓度硼替佐米处理后,PANC-1细胞生长抑制率均显著升高（P＜0.05）,G0/G1期细胞比例均显著升高（P＜0.05）,细胞凋亡率显著升高（P＜0.05）,细胞中cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达增高（P＜0.05）,Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白表达降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;裸鼠成瘤实验中,不同浓度硼替佐米作用后,肿瘤瘤体质量显著降低（P＜0.05）,且呈剂量依赖性。结论:硼替佐米能抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖,诱导其凋亡,推测硼替佐米可能通过调节PI3K/Akt通路,激活凋亡蛋白基因表达,抑制抗凋亡蛋白基因的表达,诱导PANC-1细胞凋亡。     

沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的:探究沉默lncRNA TUG1对肾透明细胞癌（clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)细胞增殖、凋亡及迁移的影响。方法:选用37例ccRCC组织及癌旁组织样本，通过提取样本总RNA并行逆转录及转染，利用qRT-PCR检测lncRNA TUG1在ccRCC组织、细胞系及癌旁组织中的表达，并通过CCK-8法、流式细胞检测法及划痕实验检测沉默lncRNA TUG1对ccRCC细胞A704、A498增殖、凋亡及迁移的影响，采用统计软件进行数据处理，探究lncRNA TUG1在ccRCC中的表达及临床意义。结果:qRT-PCR检测lncRNA TUG1表达情况，结果显示:lncRNA TUG1在ccRCC组织中的表达显著高于癌旁组织，在肾细胞癌细胞系A704和A498中的表达明显高于正常细胞系HK2，差异有统计学意义（P＜0.05）；CCK-8检测细胞增殖情况，结果显示:A704和A498细胞经转染干扰后细胞增殖活性较对照组显著降低（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可抑制细胞增殖；流式细胞仪检测细胞凋亡情况，结果显示:A704和A498细胞凋亡比例较空白对照组明显增多（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可促进细胞凋亡；划痕实验检测细胞迁移能力，结果显示:A704和A498细胞迁移能力较空白对照组降低（P＜0.05），沉默lncRNA TUG1可抑制细胞迁移。结论:沉默lncRNA TUG1可诱导ccRCC细胞凋亡，抑制其增殖、迁移，可作为临床研究的新靶点。     

靶向递送携带HIF-2α siRNA的阳离子脂质体抑制肾透明细胞癌生长

目的:探索靶向缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factor-2α,HIF-2α)的阳离子脂质体-siRNA复合物（liposome-siRNA,Lipo-siRNA）是否可以有效干扰HIF-2α的表达并抑制肾透明细胞癌的生长。方法:使用ZetaSizer Nano及电镜鉴定Lipo-siRNA,荧光显微镜观察脂质体介导的siRNA转染786-O细胞的情况,CCK-8检测Lipo-siRNA对786-O细胞的抑制能力,Western blot检测Lipo-siRNA对HIF-2α表达的影响,活体成像检测Lipo-FAM-siRNA的体内转染情况,裸鼠皮下移植瘤模型检测Lipo-siRNA对肿瘤生长的抑制情况。结果:Zata电位、粒径大小及电镜观测结果均表明Lipo-siRNA构建成功;荧光显微镜观察表明脂质体可以有效介导FAM-siRNA对786-O细胞的转染（P＜0.05）;CCK-8实验表明Lipo-siRNA可以显著沉默HIF-2α表达（P＜0.01）并抑制786-O细胞的增殖（P＜0.05）;活体成像结果显示Lipo-siRNA可以显著富集于肿瘤部位（P＜0.001）;裸鼠皮下移植瘤模型显示Lipo-siRNA可以有效降低肿瘤组织中HIF-2α的表达（P＜0.05）,并抑制肿瘤生长（P＜0.05）。结论:携带靶向HIF-2α siRNA的阳离子脂质体可以在裸鼠体内外水平显著干扰HIF-2α的表达,抑制肾透明细胞癌细胞的生长,具有治疗肾透明细胞癌的潜力。     

下调SMAD1表达诱导胃癌细胞周期进展及促进细胞增殖抑制细胞凋亡的作用

目的:探讨下调SMAD1表达对胃癌细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法:将胃癌BGC-823细胞分为三组，以转染SMAD1 siRNA的细胞为SMAD1 siRNA组，转染SMAD1 control细胞为SMAD1 NC组，对照组不做任何处理。采用Western blot检测细胞的转染效果及PTEN、Bcl-xL 和p21蛋白的表达情况，CCK-8法检测细胞的增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡率。结果:转染48 h后，SMAD1 siRNA组细胞中SMAD1蛋白的相对表达量显著降低（P＜0.05）；细胞在G0/G1期所占比例显著降低，S期所占比例显著升高；SMAD1 siRNA组细胞的OD值、Bcl-xL蛋白的相对表达量显著升高，而细胞凋亡率及PTEN、p21蛋白的相对表达量显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:下调SMAD1表达能够诱导BGC-823细胞从G0/G1期进入S期，促进细胞增殖并抑制细胞凋亡，其作用机制可能与下调PTEN、p21蛋白表达及上调Bcl-xL蛋白表达有关。     

EGFR表达抑制对胃癌AGS细胞生物学行为及化疗敏感性的影响

目的:观察表皮生长因子受体（epithelial growth factor receptor,EGFR）表达抑制对胃癌AGS细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期及化疗药物敏感性的影响。方法:设计3条EGFR-siRNA,转染胃癌AGS细胞,CCK-8方法测定细胞增殖,Transwell方法检测细胞侵袭和转移能力,流式细胞术测定细胞凋亡与周期,RT-PCR方法检测EGFR mRNA表达,Western blot方法检测EGFR、ERK、p-ERK、AKT和p-AKT蛋白表达。结果:EGFR干扰能有效抑制胃癌AGS细胞中EGFR的基因和蛋白表达水平（P＜0.05）。与对照组、阴性siRNA转染组相比,EGFR-siRNA转染组AGS细胞增殖抑制显著增加,迁移、侵袭能力显著下降,细胞凋亡率显著增加（P＜0.05）,对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性显著增加（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,处于S期的细胞比例明显减少,G2/M期细胞比例明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。EGFR表达抑制后,AKT和p-AKT表达下调。结论:抑制EGFR表达可抑制胃癌AGS细胞增殖,降低细胞迁移和侵袭能力,增加细胞对顺铂、多柔比星、紫杉醇的化疗敏感性,其机制可能与AKT、p-AKT的表达下降有关。     

索拉菲尼抑制肿瘤细胞PKM2蛋白表达

目的:探讨索拉菲尼对肿瘤细胞中PKM2蛋白表达的影响。方法:以人肝癌细胞HepG2、人胆管癌细胞QBC939、人肺癌细胞NCI-H446、人宫颈癌细胞Hela为研究对象,体外培养上述肿瘤细胞;光镜下观察不同肿瘤细胞经不同浓度索拉菲尼处理后细胞形态学改变;CCK-8法检测索拉菲尼对上述肿瘤细胞增殖的影响。用Western blot 检测索拉菲尼对上述细胞的PKM2表达变化。结果:光镜下观察可见随着索拉菲尼浓度的增加,肿瘤细胞离巢、凋亡,并且随着浓度的增加而增加。细胞增殖实验可见,索拉菲尼显著抑制HepG2、QBC939、NCI-H446、Hela细胞的增殖,不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）的索拉菲尼处理上述细胞48 h后,各药物处理组与对照组比较（P均<0.01）,呈剂量效应关系;索拉菲尼处理上述肿瘤细胞48 h的IC50分别为10.61 μmol/L、13.88 μmol/L、15.66 μmol/L、12.86 μmol/L。Western blot检测结果显示,不同浓度的索拉非尼显著抑制HepG2、QBC939、NCI-H446、Hela细胞的PKM2的蛋白表达,并且表达与浓度呈剂量关系。蛋白表达半定量分析可见,各肿瘤细胞经过索拉菲尼处理后与对照组比较,蛋白表达差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:索拉菲尼能抑制人多种肿瘤细胞增殖并显著抑制PKM2蛋白表达。     

miR-18a对胶质瘤细胞增殖和自噬的影响

目的:探讨miR-18a在神经胶质瘤细胞增殖和自噬中的作用。方法:采用瞬时转染的方法将miR-18a inhibitor及其阴性对照(negative control inhibitor,NC inhibitor)分别转染大鼠C6胶质瘤细胞;实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测miR-18a在C6胶质瘤细胞中的表达;CCK-8法检测转染miR-18a inhibitor后C6细胞的增殖活性;mCherry-EGFP-LC3B质粒瞬时转染各组细胞,以动态监测自噬通量;Western blot检测敲低miR-18a后C6细胞中自噬相关蛋白LC3、p62、Beclin1的表达情况;RT-qPCR检测转染miR-18a抑制剂后C6细胞中自噬相关基因Beclin1和LC3B的相对表达水平。结果:RT-qPCR结果显示,与NC inhibitor组相比,miR-18a inhibitor组的miR-18a表达量显著降低（P＜0.05）。敲低miR-18a后显著抑制C6胶质瘤细胞的增殖（P＜0.05）。倒置荧光显微镜下观察到抑制miR-18a后可阻断自噬流,抑制自噬小体和溶酶体融合。抑制miR-18a可使胶质瘤细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin1蛋白的相对表达量显著降低（P＜0.05）,p62蛋白的相对表达量明显升高（P＜0.05）。敲低miR-18a后能抑制胶质瘤细胞中的Beclin1和LC3B mRNA表达（P＜0.05）。结论:miR-18a下调可抑制胶质瘤细胞的增殖和自噬。     

QRICH1介导NF-κB p65调控Bcl-2、Bax在砷致肝癌细胞凋亡中的作用研究

目的:探讨砷（AS）诱导肝癌细胞凋亡过程中QRICH1通过调控NF-κB p65表达水平调控Bcl-2、Bax的作用机制。方法:体外培养人的肝癌细胞(HepG2细胞）,采用慢病毒转染的方式,构建过表达/敲低QRICH1稳定表达HepG2细胞株。分为对照组、加砷组、砷+QRICH1过表达阴性对照组、砷+QRICH1过表达组、砷+QRICH1敲低阴性对照组、砷＋QRICH1敲低组。在细胞对数生长期时,加入40 μmol/L 亚砷酸钠（NaAsO2）作为终浓度处理24 h。对照组加入与NaAsO2同等体积的磷酸缓冲盐溶液（PBS）处理。采用细胞计数（CCK-8）检测细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果:CCK-8结果显示与对照组比较,砷处理组增殖率比例明显降低（P<0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞增殖率明显上升（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞增殖率明显下降（P＜0.05）,差异具有统计学意义。流式细胞术结果显示与对照组比较,砷处理组总凋亡率比例明显升高（P＜0.05）;与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组细胞总凋亡率比例明显下降（P＜0.05）,与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组细胞总凋亡率比例明显上升（P＜0.05）。蛋白免疫印迹法结果显示与对照组比较,砷处理组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）。与砷+QRICH1过表达阴性对照组比较,砷+QRICH1过表达组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较高,Bax的蛋白表达水平较低（P＜0.05）。与砷+QRICH1敲低阴性对照组比较,砷+QRICH1敲低组QRICH1、NF-κB p65及Bcl-2蛋白表达水平较低,Bax的蛋白表达水平较高（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论:砷致HepG2凋亡过程中,QRICH1通过调节NF-κB p65的表达,进而影响了Bcl-2、Bax的表达。提示QRICH1可能是促进肝癌细胞凋亡的潜在作用靶点。