TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用

目的探讨人恶性胶质瘤细胞株LN215细胞对TRAIL的敏感性及TRAIL与环磷酰胺诱导LN215细胞凋亡的作用。方法培养LN215细胞,在倒置显微镜下观察细胞的形态及生长特性,应用酸性磷酸酶法检测LN215细胞对TRAIL单独及联合环磷酰胺作用诱导凋亡的程度。结果 LN215细胞在TRAIL低浓度时无明显的凋亡发生,甚至出现轻微的增殖现象;TRAIL浓度达到1 ng/ml时,细胞开始出现凋亡;随TRAIL浓度升高,凋亡水平逐渐升高,在300 ng/ml时,凋亡率可达到12%。TRAIL与环磷酰胺联合作用组(0.11±0.01)与对照组(0.29±0.02)相比具有显著性差异(P﹤0.01)。结论 LN215是TRAIL耐药细胞株,与环磷酰胺联合后可发挥协同作用,引起细胞发生明显的凋亡反应。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导胃癌细胞凋亡机制的研究

背景：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）可诱导不同胃癌细胞株的凋亡，但凋亡的途径尚不清楚。目的：通过研究TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的作用机制，为TRAIL的临床应用提供理论依据。方法：应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）法检测SGC-7901胃癌细胞TRAIL受体（TRAILR），包括死亡受体TRAILR1、TRAILR2和诱惑受体TRAILR3、TRAILR4的表达；应用免疫组化法检测SGC-7901胃癌细胞Bcl-2和caspase-3的表达．并观察两者在不同浓度（50ng／ml和500ng／ml）的TRAIL处理后的变化。结果：SGC-7901胃癌细胞仅表达TRAILR1和TRAILR2，不表达TRAILR3、TRAILR4。TRAIL可引起SGC-7901胃癌细胞Bcl-2阳性表达，不同浓度的TRAIL作用12h、24h、48h其表达无影响；与对照组比较，不同浓度的TRAIL作用24h后SGC-7901胃癌细胞caspase-3表达均有显著增加（P〈0．01）。结论：TRAIL诱导胃癌细胞凋亡是因胃癌细胞仅表达TRAILR1、TRAILR2，不表达TRAILR3、TRAILR4。TRAIL是通过TRAILR1、TRAILR2增加细胞内caspase-3的表达而导致胃癌细胞凋亡，其诱导胃癌细胞凋亡的作用不受Bcl-2的影响。     

rsTRAIL诱导白血病细胞系HL60凋亡及其作用机制

用不同浓度可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（rsTRAIL）处理白血病HL60细胞系,采用AO/EB双重荧光染色法、MTT比色法、流式细胞分析术、染色体核型分析等多种细胞及遗传学方法检测rsTRAIL诱导白血病HL60细胞凋亡的作用。结果rsTRAIL处理后HL60细胞可见典型的凋亡特点,细胞生长抑制率和凋亡率从50 ng/ml的8.4%和21.4%上升到5 000 ng/ml的70.0%和86.5%,具显著的剂量和时间效应;高浓度rsTRAIL（3 200 ng/ml、5 000 ng/ml）作用HL60细胞后,出现体积增大,染色体多倍化（130~144条）的细胞,流式分析结果提示细胞出现裂亡。认为rsTRAIL对白血病细胞系HL60的细胞及遗传学影响非常显著,可通过诱导凋亡的方式杀伤肿瘤细胞。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肝癌耐药细胞株阿霉素化疗敏感性的影响

目的 研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合阿霉素(ADM)处理肝癌耐药细胞株HePG2／ADM对化疗敏感性的影响。方法 通过培养液中ADM的浓度梯度增加法长期筛选培养，建立肝癌HepG2／ADM耐药细胞株，荧光定量PCR检测多药耐药(MDR)1的表达，TRAIL联合化疗药物ADM处理HePG2／ADM，MTT比色法检测细胞增殖，细胞凋亡采用流式细胞仪和TUNEL法检测观察HePG2／ADM对化疗药物的敏感性变化。结果 HepG2／ADM细胞是一个明确的多药耐药细胞模型，联合TRAIL(100ng／L) ADM(0．1mg／L)后，MTT显示HepG2／ADM细胞的增殖明显抑制，流式细胞术、TUNEL法检测TRAIL联合ADM处理HePG2／ADM细胞诱导的凋亡，与对照组相比，凋亡指数显著增加。结论 MDR1不参与TRAIL耐受。TRAIL可部分逆转HepG2／ADM对ADM的耐药，增加其对化疗药物的敏感性。联合TRAIL和亚毒剂量化疗药物可望克服肿瘤细胞中存在的化疗耐药和TRAIL耐受。     

紫杉醇对TRAIL诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的影响

目的探讨紫杉醇对TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响。方法采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡、Western blot检测蛋白表达。结果在胃癌SGC7901细胞中,100 ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL（100 ng/ml）联合紫杉醇（7.19μg/ml,24 h的IC50剂量）引起明显的细胞增殖抑制和诱导凋亡作用（P〈0.05）。TRAIL单药没有改变死亡受体5（DR5）的蛋白表达,而7.19μg/ml紫杉醇作用于胃癌SGC7901细胞后明显上调了DR5的蛋白表达。TRAIL和紫杉醇联合作用后,也有DR5蛋白的明显上调。结论紫杉醇通过上调DR5的蛋白表达增强了TRAIL诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡。     

紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制

目的 探讨紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制。方法胃癌BGC823细胞传代堵养后,取对数生长期细胞用于实验。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测Akt、p-Akt蛋白表达。结果在胃癌BGC823细胞中,100ng／ml的TRAIL可致少量的细胞凋亡,同时检测到Akt的磷酸化。紫杉醇作用胃癌BGC823细胞24h,IC50剂量为8．97μg／ml。与单药TRAIL和紫杉醇相比,TRAIL（100ng／m1）联合紫杉醇（8．97μg／ml,24h的IC50剂量）对细胞的诱导凋亡作用明显增强（P〈0．05）。免疫印迹结果显示,TRAIL（100ng／ml）作用BGC823细胞24h,活化了Akt蛋白,而8．97μg／ml的紫杉醇抑制了Akt的磷酸化。TRAII（100ng／ml）联合紫杉醇（8．97μg/ml）作用后,TRAIL引起的Akt磷酸化被抑制。结论紫杉醇通过抑制TRAIL引起的Akt磷酸化,从而增强了TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合阿糖胞苷诱导急性髓细胞性白血病细胞凋亡的研究

目的：探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合阿糖胞苷(Ara-C)诱导急性髓细胞性白血病(AML)细胞凋亡的作用。方法：分离39例AML患者的骨髓单个核细胞，每例分为4组进行观察：空白对照组、TRAIL组、Ara-C组、TRAIL加Ara-C组，共同培养12、24和48h。通过MTT比色法测定细胞杀伤率及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：TRAIL和Ara-C可协同降低AML细胞活力，抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强。结论：TRAIL与Ara-C具有协同作用，能高效杀灭肿瘤细胞，可能是一种有临床应用潜能的新型抗白血病的生物制剂。     

XAF1增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性

背景:肿瘤坏死因子(TNF)相关凋亡诱导配体(TRAIL)可特异性诱导肿瘤细胞凋亡,但部分肿瘤细胞对TRAIL不敏感甚至耐药。目的:探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)相关因子1(XAF1)是否可增加TRAIL诱导的肝癌细胞株凋亡的敏感性。方法:重组人TRAIL(rhTRAIL)因子分别加入3株肝癌细胞株SMMC7721、HepG2和Bel-7404中培养,联合或不联合相同感染复数(MOI)的重组腺病毒Ad5/F35-XAF1和对照空病毒Ad5/F35-Null。作用48h后,以MTT法检测细胞活力,以Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡率。结果:随着TRAIL浓度的增加,3株肝癌细胞株的细胞活力均不同程度降低。TRAIL与Ad5/F35-XAF1联合作用后,其细胞活力显著低于单独TRAIL组,而Ad5/F35-Null组细胞活力与单独TRAIL组无明显差异。与空白对照组和Ad5/F35-Null组相比,TRAIL组和Ad5/F35-XAF1组3株肝癌细胞株的凋亡率均显著增加。TRAIL与Ad5/F35-XAF1联合作用后,细胞凋亡率显著高于Ad5/F35-XAF1组或TRAIL组。结论:XAF1可明显增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡的敏感性,两者联合应用对诱导不同肝癌细胞凋亡具有协同作用。     

携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡

目的: 评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法: CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力, 并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效, 流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果: CNHK500-h TRAI L能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖; 感染72 h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22 ng/L; 在MOI = 0.1时, CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞, 并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL; 而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论: 携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达, 明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体, 应用前景广阔.     

人端粒酶逆转录酶干扰对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的影响

目的研究人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰对肝癌．HepG2、SMMC-7221细胞生物学形为的影响和对肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导凋亡的影响。方法将HepG2细胞和SMMC-7721细胞分为转染组 (转染重组质粒真核表达载体)、对照组(转染空载体质粒)和未转染组。采用聚合酶链反应方法检测hTERT干扰序列, 逆转录聚合酶链反应方法检测hTERT表达,HE染色、生长曲线和流式细胞术方法分别检测细胞形态、增殖情况和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色方法检测细胞状态,Armexin V／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡。结果转染组细胞内均存在hTERT干扰序列,HepG2和SMMC 7221细胞hTERT干扰率分别为100％和43．3％;与未转染组细胞相比, 转染细胞核质比明显缩小,增殖率下降差异有统计学意义(P<0．05),老化细胞和G2-M期细胞明显增加(P<0．05)。细胞老化率分别由未转染组的0增加到转染组的20．4％,由3．60%,增加到10．O％;G2-M期分别由未转染组的7．1％、6．9％增加到转染组的10．6％、7．9％。hTERT干扰显著增加肝癌细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡敏感性(P<0．05)。两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的3．5％、4．8％增至转染组的5．2%、7．9％;100 ng／ml TRAIL作用24 h后两株肝癌细胞凋亡率分别由未转染组的5．3％、13．9％增加到转染组的10．4％、77．2％,而对照组细胞各指标均无显著变化。结论 hTERT干扰明显影响肝癌细胞的生物学行为,显著增加细胞凋亡和TRAIL诱导凋亡的敏感性。     

肿瘤坏死因子相关配体与阿司匹林合用对肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响

目的 观察肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)与阿司匹林合用对肝癌SMMC-772l细胞的作用。方法 氨甲喋呤法检测SMMC-772l细胞存活分数；流式细胞仪检测SMMC-772l细胞的凋亡率和细胞周期；WesternBlot法检测凋亡相关基因的表达。结果 单用300ng／ml TRAIL、3、10mmol／L阿司匹林SMMC-772l细胞存活分数分别为82．76％、81．34％和71．29％，合用的存活分数分别为43．5％、37．8％。3、l0mmol／L阿司匹林与300ng／ml TRAIL合用诱导的细胞凋亡率明显大于单用两药诱导的细胞凋亡率之和(单用300ng／ml TRAIL、3mmol／L和10mmol／L阿司匹林凋亡率分别为21．25％、1．89％和6．08％，合用的凋亡率分别34．76％，38．56％)并使G0/Gl期细胞增加l3、10mmol／L的阿司匹林使SMMC-772l细胞Bcl-2的表达明显减弱，但对Bax的表达无影响。结论 TRAlL与阿司匹林合用对肝癌SMMC-772l细胞有明显的协同杀伤作用，其机制可能与阿司匹林抑制Bcl-2的表达有关。     

可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体重组腺病毒载体的构建及其在肝癌细胞株中的表达

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）能诱导30余种人类肿瘤细胞凋亡，在抗肿瘤治疗中具有广阔应用前景。目的：构建携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体，鉴定其在肝癌细胞株中的表达。方法：以重叠延伸聚合酶链反应（PCR）扩增白细胞介素（IL）-2信号肽和TRAIL膜外区融合片段，克隆于腺病毒穿梭质粒pAdTrack—CMV，转化含复制缺陷型腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的大肠杆菌pAdBJ5183，经细菌内同源重组产生重组腺病毒Ad-IL-2-TRAIL，以脂质体法转染HEK293细胞包装病毒，感染肝癌细胞株HepG2．荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的表达。结果：成功构建了携带可溶性TRAIL基因的复制缺陷型重组腺病毒载体。病毒感染HepG2细胞48h后，超过95％的细胞中出现绿色荧光。结论：所构建的复制缺陷型重组腺病毒Ad—IL-2-TRAIL可在肝癌细胞中高效表达可溶性TRAIL，为进一步行肿瘤TRAIL基因冶疗提供了实验依据。     

Melanoma differentiation-associated gene-7, MDA-7/IL-24, selectively induces growth suppression, apoptosis in human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 by replication-incompetent adenovirus vector

AIM: To investigate the effect of replication-incompetent adenovirus vector expressing MDA-7/IL-24 on tumor growth and apoptosis in human hepatoceliular carcinoma (HCC) cell line HepG2 and normal liver cell line L02. METHODS: We constructed the recombinant replication-incompetent Ad.mda-7 virus vector and infected it into the human HCC cell line HepG2 and normal liver cell line L02. RT-PCR was performed to detect the mRNA expressing in cells. by ELISA was used to detect MDA-7/ IL-24 protein expression in the culture supernatant. The effect of apoptosis induced by Ad.mda-7 was confirmed by Hoechst staining and flow cytometry assay with An-nexin-V and PI staining. MTT assay was used to determine growth inhibition of HepG2 cells, and cell-cycle and hypodiploidy analyses were performed by flow cytometry. RESULTS: Recombinant replication-defective virus expressing MDA-7/IL-24 was constructed successfully. RT-PCR showed that the Ad.mda-7 could mediate the expression of the exogenous gene MDA-7/IL-24 into HepG2 and L02. The concentration of MDA-7/IL-24 protein in supernatant was 130 pg/mL and 110 pg/mL in Ad.mda-7-infected L02 and HepG2 cells, respectively. Ad.mda-7 infection obviously induced apoptosis (from 2.60±0.72% to 33.6±13.2%, P= 0.00012) and growth suppression in HepG2 (inhibition ratio IR = 68%) and an increase in the percentage of specific cancer cell types at the G2/M phase of the cell cycle (from 6.44% to 32.29%, P<0.01), but not in L02 cells. CONCLUSION: These results confirm selectively induction of apoptosis and growth suppression by the mda-7/ IL-24 gene with replication-incompetent adenovirus vector in human hepatocellular carcinoma cell line HepG2.     

人端粒酶逆转录酶干扰增强肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体诱导肝癌细胞凋亡的机制

目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)干扰增加肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)诱导肝癌HepG2和SMMC 7721细胞凋亡的分子机制。方法采用膜联蛋白V/碘化丙锭染色的流式细胞术方法检测细胞凋亡;采用Western blot方法检测凋亡相关蛋白Procaspase-8、9、-3及Bax、Bcl-2和hTERT表达;采用端粒重复扩增法和端粒数量和长度测定法检测端粒酶活陛和端粒长度。结果hTERT干扰显著增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡。100 ng/ml TRAIL作用24 h后,HepG2细胞凋亡率由5.53%增加至10.35%;SMMC 7721细胞凋亡率由14.73%增加至77.24%。hTERT干扰明显增加Procaspase-8、-9和Bcl-2表达,显著降低Bax表达,明显促进TRAIL作用后Procaspase-8、-9、-3活化,并且hTERT干扰后端粒酶活性显著降低,端粒长度明显缩短,然而对照细胞与未转染细胞相比各指标均无明显变化。结论hTERT干扰明显增加TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡,其机制可能与Procaspase-8、-9表达增加,端粒酶活性降低和端粒长度缩短有关,而与Bcl-2和Bax表达无关。     

Lipopolysaccharide (LPS)-induced cell death of C3H mouse peritoneal macrophages in the presence of cycloheximide: different susceptibilities of C3H/HeN and C3H/HeJ mice macrophages

Lipopolysaccharide (LPS) induced cytotoxicity toward mouse peritoneal macrophages from C3H/HeN mice but not C3H/HeJ mice in vitro in the presence of cycloheximide (CHX). More than 1 ng/ml LPS induced a significant time-dependent release of a cytoplasmic enzyme, lactate dehydrogenase (LDH), while even 1000 ng/ml LPS failed to induce it in LPS-non-responsive C3H/HeJ mouse macrophages. Although similar LPS-induced cytotoxicity was observed in a murine macrophage-like cell line, J774.1, but not in an LPS-resistant mutant of J774.1, the LPS1916 cell line, these results suggest that the induction of this cytotoxicity is linked to the LPS-sensitivity of mouse macrophages. A recombinant TNF-alpha (rTNF-alpha) at 100 ng/ml augmented LDH release from both C3H/HeN and C3H/HeJ macrophages treated with LPS and CHX, while rTNF-alpha alone or in combination with LPS or CHX failed to induce LDH release. These results suggest that this cytotoxicity might be partially regulated by high concentrations of exogenous TNF-alpha in both C3H/HeN and C3H/HeJ macrophages, implying a possibility of paracrine regulation of TNF-alpha in mice toward LPS-treated macrophages under impaired protein synthesis.     

人肝癌多药耐药细胞株的建立及超声波诱导凋亡的研究

目的 建立人肝癌细胞系HepG2多药耐药模型并探讨低频脉冲式超声对其凋亡的影响及其机制。 方法 以人肝癌细胞株HepG2为研究对象,用阿霉素(ADM)浓度梯度递增诱导法,建立人肝癌细胞多药耐药模型(简称HepG2/ADM)。将研究对象分为HepG2/ADM、HepG2/ADM ADM、HepG2/ADM 超声波、HepG2/ADM ADM 超声波4组,以频率为0.8 MHz,声强为0.5 w/cm2,时间10 min的脉冲式超声波作用于研究对象。荧光显微镜观察细胞变化;DNA片段化分析检测染色体断裂情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。 结果 HepG2/ADM细胞对多种化疗药耐药,对阿霉素的耐药倍数为26,其耐药性与P-糖蛋白(P-GP)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)及谷胱甘肽转移酶(GST)的过表达相关。实验组经超声波作用10 min后,HepG2/ADM细胞死亡具有细胞凋亡的形态学特征;HepG2/ADM ADM和HepG2/ADM 超声波组细胞凋亡率分别为3.47％和12.23％;HepG2/ADM ADM 超声波联合治疗能显著增加细胞凋亡率,为18.81％,与对照组比较差异有显著性,t值分别为1.46、2.67、5.36,P<0.01。结论 人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM具有多药耐药特性;低频脉冲式超声可诱导人肝癌多药耐药细胞株HepG2/ADM凋亡,联合化疗药物治疗,可显著增加细胞凋亡比例。     

Increased apoptosis in HepG2.2.15 cells with hepatitis B virus expression by synergistic induction of interferon‐γ and tumour necrosis factor‐α

Background: Interferon‐γ (IFN‐γ) and tumour necrosis factor‐α (TNF‐α) were thought to be important immune mediators in host defence against hepatitis B virus (HBV) infection. Aims: To examine the synergistic effect of IFN‐γ and TNF‐α on HBV‐expressing HepG2.2.15 cells and its potential mechanisms. Methods: Cell viability was quantitatively measured by 3‐[4,5‐dimethylthiazol‐2‐yl]‐2,5‐diphenyl tetrazolium bromide assay. Cell morphology was captured using light microscopy. The typical DNA ladder test was performed using agarose gel electrophoresis. HBsAg and HBeAg titre changes were quantified by the enzyme‐linked immunosorbent assay method. Gene expression was analysed using cDNA macroarrays. Results: Interferon‐γ (1000 U/ml) alone or combined with TNF‐α (5 ng/ml) treatment resulted in apoptosis in HepG2.2.15 cells, but no significant apoptosis in the parent non‐virus expressing HepG2 cells. IFN‐γ‐ and TNF‐α‐mediated apoptosis was reduced by lamivudine treatment in HepG2.2.15 cells. IFN‐γ combined with TNF‐α reduced the titre of hepatitis B surface antigen and hepatitis B e antigen in the HepG2.2.15 cell line. For apoptosis‐related gene changes, IFN regulatory factor 1 (IRF‐1) (12.2‐fold), c‐myc (V00568 4.7‐fold, L00058 2.4‐fold) and caspase 7 (2.3‐fold) genes were upregulated in the combination treatment group. Conclusion: Interferon‐γ and TNF‐α play a role in the cell death of HBV‐expressing HepG2.2.15 cells. Expression of HBV leads to IFN‐γ‐ and TNF‐α‐mediated apoptosis in the cells. Increased IRF‐1, c‐myc and caspase 7 gene expression may be responsible for the synergistic induction of apoptosis by IFN‐γ and TNF‐α.     

Toll样受体4与大鼠肺泡巨噬细胞内毒素耐受性的实验研究

目的　观察大鼠肺泡巨噬细胞对内毒素 (LPS)重复刺激的耐受性与其Toll样受体 4(TLR4)表达的变化 ,研究两者之间的联系。方法　将 30只Wistar雄性大鼠分离所得肺泡巨噬细胞 ,用随机数字表法分为正常对照组 (A组 ) ,LPS单次刺激组 (B组 )和LPS 2次重复刺激组 (C组 )。用酶联免疫吸附测定 (ELISA)法和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)法分别检测各组大鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF α)及TLR4、白细胞介素 1 0 (IL 1 0 )、IL 1 8mRNA表达的变化 ,WesternBlot检测TLR4蛋白表达的变化。结果　大鼠肺泡巨噬细胞TNF α分泌和TLR4、IL 1 0、IL 1 8mRNA表达及TLR4的蛋白表达水平 ,A组分别为 (0 4 5 0± 0 0 1 0 ) μg/L、1 1 6± 0 0 4、0 97± 0 0 3、1 32 0± 0 0 2 0、5 8 1± 0 4 ;B组分别为 (0 76 0± 0 0 30 ) μg/L、2 1 8± 0 0 9、1 83± 0 0 7、2 0 6 0± 0 0 6 0、1 4 8.3± 1 4 ;B组与A组比较差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;C组分别为 (0 4 90± 0 0 5 0 ) μg/L、1 2 3± 0 0 3、1 1 5± 0 0 5、1 1 70± 0 0 4 0、96 5±0 7;C组与B组比较差异也有显著性 (P <0 0 5或 <0 0 1 )。结论　LPS重复刺激可使大鼠肺泡巨噬细胞对LPS产生耐受性 ;LPS耐受性的产生与TLR4表达