体外长期培养对脐血造血干/祖细胞细胞周期及凋亡的影响

目前造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)已成为难治性血液病、免疫缺陷病及恶性肿瘤等的主要治疗手段。脐血是造血干 /祖细胞 (ＨＳＰＣ)的一种重要来源 ,由于单份脐血中细胞数量有限而限制了其临床应用 ,故脐血造血干 /祖细胞的体外扩增越来越引起人们的关注。我们观察了体外长期培养对脐血ＨＳＰＣ细胞周期及凋亡的影响 ,以了解脐血ＨＳＰＣ在体外扩增过程中某些生物学特性的变化。材料和方法1　脐血来源　 6份肝素抗凝脐血均来自我院妇产科健康产妇 ,采集量为 5 0～ 10 0ｍｌ,于采集后 4ｈ内分离单个核细胞(ＭＮＣ) ,洗涤 ,备用。2　ＣＤ3 4+细胞…     

脐血干/祖细胞的生物学特点

脐血是一重要的造血干 /祖细胞 (ＨＳＰＣ)来源 ,可用作临床干细胞移植 ,目前有关脐血的研究主要集中于ＨＳＰＣ的比例、细胞亚群的划分、对造血因子刺激的反应能力、增殖 /扩增潜能的控制及ＨＳＰＣ体外扩增的条件等。研究表明 ,脐血和成人骨髓来源的ＨＳＰＣ功能有显著不同 ,我们力图在细胞和分子水平论述其生物学特点。1　脐血中ＨＳＰＣ的比例　研究表明 ,1ｍｌ脐血中大约有原始红系祖细胞 (ＢＦＵ Ｅ) 80 0 0个 ,髓系祖细胞 (ＣＦＵ ＧＭ) 130 0 0～2 40 0 0 ,多能祖细胞 (ＣＦＵ ＧＥＭＭ) 10 0 0～ 10 0 0 0。由于培养条件的不同 ,各…     

促进脐血造血干细胞应用于成人移植的研究进展

脐血造血干细胞移植(UCBT)因来源丰富、HLA相合程度要求低、移植物抗宿主病(GVHD)发生率及严重程度低等优点,已成为重要的造血干细胞来源,但由于单份脐带血(UCB)细胞有限,应用于成人移植还有一定的局限性.为促进脐血造血干细胞应用于成人移植需从通过改良收集和冷冻复苏、体外扩增、双份UCB移植的方法,从而增加UCB造血干细胞数,弥补干细胞自身缺陷,添加辅助细胞提高干细胞植入效率.     

脐血CD34＋细胞扩增和改善其移植效率的实验研究

目的：探讨脐血ＣＤ３４＋细胞对造血生长因子的扩增效应及其植入成人骨髓基质的能力。方法：利用免疫磁珠法（ＭＡＣＳ）分离纯化脐血ＣＤ３４＋细胞，在液体培养体系中对其进行体外扩增，并利用铺展贴壁实验研究其移植效率。结果：脐血ＣＤ３４＋ＣＤ３８－细胞亚群的比例明显高于骨髓和外周血；在干细胞因子、白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒细胞集落刺激因子、红细胞生成素存在的情况下，１０～１４天造血祖细胞可扩增近１００倍，细胞总数超过５００倍；但经２小时铺展贴壁后，仅有３６％的脐血ＣＤ３４＋细胞植入经照射预处理的成人骨髓基质，若经粒－巨噬系集落刺激因子和ＩＬ－３预处理６～８小时后则有６８．０％～８９．６％的ＣＤ３４＋细胞植入基质。结论：细胞因子有可能在体外扩增脐血ＣＤ３４＋细胞数量，改善其移植效率，使脐血祖细胞在“质”和“量”上满足临床移植的需要。     

造血干细胞移植术及护理

造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)是对患者进行超大剂量放疗或化疗预处理后 ,将正常血干细胞 (ＨＳＣ)植入患者体内 ;使其重建正常造血及免疫功能的治疗方法。这项技术治疗恶性血液病的疗效明显优于化疗 ,是目前治疗恶性血液病最有效的措施 ,为此类患者带来了希望。1　ＨＳＣ的来源1 1　按ＨＳＣ的来源可分 :自体造血干细胞移植和异基因造血干细胞移植 ,前者来自患者自体 ,后者来自非单卵双胞胎的借者。1 2　按采集的部位可分 :骨髓移植、成人外周血干细胞移植、脐血干细胞移植等。2　适应症及禁忌症2 1　除儿童急性 (ＡＬＬ)因其化疗预后较好…     

人脐血造血细胞体外扩增的研究进展

单份脐血所含的干细胞数难以满足成人移植的需要[1] 。对脐血造血细胞进行体外培养和扩增有望克服这一障碍。我们就脐血造血细胞体外扩增的实验室研究最新进展作一介绍。1　脐血造血细胞的生物学特征　ＣＤ3 4 细胞是具有多系分化潜能的前体细胞 ,人的造血干细胞主要存在于ＣＤ3 4 细胞群中。如何进一步从脐血ＣＤ3 4 细胞群中纯化造血干细胞进行扩增 ,ＤｉＧｉｕｓｔｏ等[2 ] 发现大约 1%的脐血单个核细胞 (ＭＮＣ)在细胞表面有高度的ＣＤ3 4抗原表达 ,无系分化抗原的标志(Ｌｉｎ阴性 ) ,说明它们可能是未定向分化的造血前体细胞 ,并提…     

脐血及白血病缓解期骨髓中CD34+细胞筛选及体外扩增

脐血及白血病缓解期骨髓中ＣＤ３４＋细胞筛选及体外扩增姜容韩明哲赵英新韩俊领冯四洲李成文严文伟造血干细胞体外扩增对于造血干细胞移植、基因治疗等研究有着重要的意义。脐血干细胞的有效扩增可望将脐血用于成人移植［１］，可使骨髓移植患者在移植后快速渡过造血危相...     

脐带血造血干细胞的采集、分离、保存、扩增及其临床应用

脐血移植已显示了广阔的临床应用前景。如何采集脐血,分离和保存脐血单个核细胞,以缩小体积,降低费用;扩增脐血造血干细胞以适用于成人是建立脐血库的基本内容。     

脐带血造血干细胞的采集,分离,保存,扩增及其临床应用

脐血移植已显示了广阔的临床应用前景，如何采集脐血，分离和保存脐血单个核细胞，以缩小体积，降低费用；扩增脐血造血干细胞以适用于成人是建立脐血库的基本内容。     

脐血间充质干细胞鉴定及其生物学特性研究

脐血来源丰富 ,其造血干细胞增殖能力强 ,是造血干细胞的来源之一。但是到目前为止 ,国内外对脐血中间充质干细胞 (MSC)的争议较大[1 5] 。从骨髓中分离培养的MSC ,CD34表达阴性 ,对造血有促进作用。研究MSC与脐血造血干细胞共移植促进脐血移植后造血植入等方法成为临床脐血移植的热点课题。因此 ,我们从脐血单个核细胞 (MNC)中分离培养MSC ,研究其生物学特性及从表达细胞因子角度阐明其促进造血的潜在作用。材料和方法1　脐血MNC制备　脐血标本 37份 ,每份 78～ 14 0ml,取自健康妊娠产妇分娩的胎儿脐带血。脐血采集后在 4～ 12h内…     

不同造血生长因子对脐血有核细胞体外扩增作用的实验研究

目的：探讨造血生长因子不同组合方式对脐血有核细胞的扩增作用以及脐血扩增后Ｔ淋巴细胞和ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞变化情况。方法：在脐血有核细胞体外培养体系中分别加入不同组合的细胞因子，观察细胞数、ＣＤ３４＋细胞、ＣＦＵ－ＧＭ、Ｔ４（ＣＤ４＋ＣＤ８－ＣＤ３＋）细胞、Ｔ８（ＣＤ４－ＣＤ８＋ＣＤ３＋）细胞以及ＨＬＡ－ＡＢ、ＤＲ阳性细胞的变化。结果：脐血有核细胞在体外液体培养体系中，经重组人干细胞因子（ｒｈＳＣＦ）、白细胞介素（ＩＬ）－３、ＩＬ－６、粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）和红细胞生成素（Ｅｐｏ）的作用下扩增效果最佳。结论：脐血有核细胞在各种造血生长因子的协同作用下可以在体外扩增。脐血扩增后Ｔ４、Ｔ８细胞减少，可能会降低脐血移植急性ＧＶＨＤ发生，但ＨＬＡ－ＡＢ和ＨＬＡ－ＤＲ阳性细胞数急剧上升，增加了免疫排斥的可能性。     

慢性髓细胞白血病骨髓的体外净化

慢性髓细胞白血病骨髓的体外净化王立生综述裴雪涛吴祖泽审校慢性髓细胞白血病（ＣＭＬ）是一种造血干细胞起源的恶性血液疾病。异基因骨髓移植（ａｌｌｏ－ＢＭＴ）虽可根治ＣＭＬ，但由于供者来源困难及移植后严重移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）的产生等原因使其应用受到一...     

成人无关脐血移植病人的护理1例

造血干细胞移植是治疗恶性血液病及恶性肿瘤的最佳方法之一。但近年来独生子女增加 ,异基因骨髓移植寻找ＨＬＡ相合的供者越来越困难 ,限制了其广泛应用。脐血移植因脐血易取得 ,发生急性移植物抗宿主病 (ａＧＶＨＤ)危险性降低等优点 ,使得脐血移植在全世界广泛开展[1～ 5] 。目前 ,国内儿童进行脐血移植较多 ,成人无关脐血移植也已开展但尚少。我科 2 0 0 0年 10月成功进行了 1例成人无关脐血移植 ,现将护理体会报告如下。1　病例介绍患者 ,女 ,2 6岁 ,自 1996年因乏力、腹胀在当地医院检查 ,经骨穿确诊为慢性髓性白血病 (ＣＭＬ)。给予干…     

HLA相合同胞脐血移植治疗急性髓系白血病成功——国内首例报告

目的 研究脐血移植（ ＵＣＢＴ） 对恶性血液病的根治性治疗; 观察其长期造血重建和移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ） 及移植并发症发生情况。方法 给１ 例急性粒细胞白血病完全缓解期的１１ 岁男性患儿移植ＨＬＡ 配型相合的同胞脐血。预处理选用ＢＵ／ＣＹ 方案（ 马利兰４ ｍ ｇ ·ｋｇ －１ ·ｄ － １ ×４ ,环磷酰胺６０ ｍｇ ·ｋｇ － １ ·ｄ － １ ×２） 。ＧＶＨＤ 预防用环孢霉素Ａ（ＣｓＡ） 。移植有核细胞为０ ．３５ ×１０８／ｋｇ ,ＣＦＵＧＭ １ ．８２ ×１０４／ｋｇ ,ＣＤ３４ ＋ 细胞２ ．０４ ×１０５／ｋｇ 。结果 ＋ １４ 天骨髓显示造血重建;＋ ２１ 天中性粒细胞（ＡＮＣ） ＞ １ ．０ ×１０９／Ｌ;＋ ６０ 天ＤＮＡ 位点检测显示移植物植入成功;＋ １００ 天受者血型由Ｏ 型转为供者血型Ｂ 型。随访３３０ 天,患者情况正常,未发生急、慢性ＧＶＨＤ。结论本例为国内首例异基因脐血移植治疗急性粒细胞白血病获得成功;开展同胞ＨＬＡ 相合脐血移植安全、有效,适合中国国情,值得深入研究。     

造血干细胞移植后移植物抗宿主病患者CD158的表达

杀伤细胞抑制物受体 (Ｋｉｌｌｅｒｃｅｌｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒｓ,ＫＩＲ)主要表达于ＮＫ和Ｔ细胞表面 ,可与靶细胞ＭＨＣⅠ类分子特异性识别并产生负性信号 ,抑制对靶细胞的细胞毒活性[1 ,2 ] 。已在小鼠和人同种造血干细胞移植 (ＨＳＣＴ)中观察到ＮＫ细胞、Ｔ细胞表达ＫＩＲ与移植物抗宿主病 (ＧＶＨＤ)有关[3 ,4] 。外周血造血干细胞移植 (ＰＢＳＣＴ)和脐血移植 (ＵＢＣＴ)中 ,尽管是供受者间ＨＬＡ全相合 ( Ａ、 Ｂ、 ＤＲ、 ＤＱ) ,ＧＶＨＤ仍是同种ＨＳＣＴ的主要障碍。因此 ,探讨ＨＬＡ Ｃ位点特异性识别分子ＣＤ1…     

人混合脐血对SCID小鼠移植实验研究

目的：探讨人混合脐血移植的特性。方法：将人单个脐血或两个ＨＬＡ不相合的混合脐血输入经亚致死剂量照射后的严重联合免疫缺陷（ＳＣＩＤ）小鼠，观察两组脐血在ＳＣＩＤ小鼠体内的植入率和ＳＣＩＤ小鼠的造血重建及免疫功能的特性。结果：在输入造血干／祖细胞总量相等时，两组移植成功率无明显差异（Ｐ＞０．０５）；混合脐血组的植入率较单个脐血组的低［人ＣＦＵ－ＧＭ为２．８０±１．７９／２×１０５ＭＮＣｓ比１３．４０±８．１４／２×１０５ＭＮＣｓ（Ｐ＜０．０５）；ＣＤ４５＋细胞为０．９１％±０．６０％比８．９６％±１．７９％（Ｐ＜０．０１）］；混合脐血组ＳＣＩＤ小鼠的淋巴细胞转化率也较低（４．００％±４．１８％比２４．６０％±１８．３２％，Ｐ＜０．０５）。用多聚酶链反应－寡聚核苷酸单链构象多态性检测人ＨＬＡ－ＤＰＢ基因发现，两个脐血混合移植只有１个脐血植入ＳＣＩＤ小鼠，该脐血含造血干／祖细胞数（ＣＦＵ－ＧＭ、ＣＤ３４＋细胞）较多。结论：ＨＬＡ不相合的两个脐血混合移植ＳＣＩＤ小鼠可以重建其造血和免疫功能，但仅有含造血干／祖细胞较多、增殖活性较高的那个脐血植入ＳＣＩＤ小鼠。     

孕妇宫颈巨细胞病毒感染与宫内感染的关系

人巨细胞病毒(ＨＣＭＶ)感染的母婴传播问题,越来越引起人们的重视。近年来不少优生工作者进行了广泛、深入的研究[1,2]。本文采用聚合酶链反应技术(ＰＣＲ)检测孕妇宫颈分泌物,胎儿绒毛、羊水、出生婴儿脐血或尿液等组织中ＨＣＭＶ。探讨宫颈ＨＣＭＶ感染与宫内感染的相关性,为临床诊断宫内ＨＣＭＶ感染,寻找最佳途径。1　材料与方法1.1　标本来源　1996年6月至1998年9月从本院门诊和住院病人中抽取430例孕妇(其中早孕210例,中孕138例,晚孕82例)。采集每个孕妇的宫颈管分泌物和外周血,检测ＨＣＭＶＤＮＡ。凡宫颈分泌物或外周血ＨＣＭＶＤ…     

小鼠T细胞HSV-tk基因转移及其对GCV敏感性的实验研究

移植物抗宿主病(ＧＶＨＤ)是造血干细胞移植后的严重并发症之一。ＧＶＨＤ的发生与供体Ｔ细胞的数量有关。近年研究表明带有单纯疱疹病毒胸苷激酶(ＨＳＶｔｋ)基因的Ｔ细胞,既有Ｔ细胞的功能,又对抗病毒感染药物———更昔洛韦(ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ)敏感。将带有ｔｋ基因的Ｔ细胞与造血干细胞一起移植,不影响患者造血和免疫重建,当发生ＧＶＨＤ时,给予ＧＣＶ可以诱导此类Ｔ细胞“自杀”,从而减少Ｔ细胞量,控制ＧＶＨＤ的严重程度。我们将ＨＳＶｔｋ基因体外转导小鼠Ｔ淋巴细胞,并测定其对ＧＣＶ的敏感性,为应用基因治疗原理防治Ｇ…     

人脐血干,祖细胞研究现状及其应用前景

人脐带血是造血干／祖细胞的丰富来源，脐血移植具有早期祖细胞含量高，干／祖细胞体外增殖能力强和ＧＶＨＤ发生率低等优点。本文就脐血干／祖细胞的含量，免疫学特点，分离浓集方法，体外扩增潜力，再植能力及其在脐血移植和基因治疗中的临床应用等方面的最新进展做一综述。     

重组人肿瘤坏死因子α对脐血CD34+造血细胞体外扩增的调节作用

体外实验表明,在重组造血生长因子作用下,纯化的造血干/祖细胞(ＣＤ34 细胞)可获得大量的扩增。然而,造血细胞在体外扩增的同时,也明显地加速了其分化,造血负调控因子与不同细胞因子组合配伍,可提高扩增效率,并使扩增导致的细胞分化明显减缓。因此,我们观察了重组人肿瘤坏死因子α(ｒｈＴＮＦα)对脐血ＣＤ34 造血细胞体外扩增的调节作用。料和方法1　细胞来源　在无菌条件下,密闭式采集母体健康的正常足月顺产儿脐血,肝素抗凝(20Ｕ/ｍｌ),平均采血量(59±25)ｍｌ,样品在采集后24小时内处理,Ｆｉｃｏｌｌ(相对密度1077)梯度离心,收集界面层…