芝麻素通过抑制氧化应激以及抗凋亡作用 保护大鼠脊髓损伤

目的:探索芝麻素(SES)对大鼠脊髓损伤后神经功能的影响,及其对氧化应激反应及神经凋亡的相关作用。方法:Allen法制备脊髓损伤动物模型,SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、SES低浓度(10 mg/kg)组、SES中浓度(20 mg/kg)组、SES高浓度(40 mg/kg)组,每组12只。术后第3、7天进行下肢运动功能评分,1周后处死,干湿法测定脊髓组织含水量;Elisa法检测氧化应激因子丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT),Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达;免疫组织化学染色观察Caspase-3表达。结果:SES能显著降低脊髓损伤大鼠下肢运动功能评分以及脊髓组织水肿,并呈剂量依赖趋势(P均0.05);Elisa结果显示SES逆转MDA、CAT、SOD及GSH活性的表达,并呈剂量依赖趋势(P均0.05);Western-blot结果显示SES能显著抑制Bax表达,提高Bcl-2蛋白表达,并呈剂量依赖趋势(P均0.05);免疫组织化学染色显示,SES能显著抑制Caspase-3表达,并呈剂量依赖趋势(P0.05)。结论:SES可通过减轻脊髓损伤的水肿、抑制氧化应激以及抗细胞凋亡从而对脊髓损伤发挥神经保护作用。     

芒果苷对脑性瘫痪模型大鼠神经运动功能及皮质区神经细胞凋亡的影响

目的探索芒果苷(MAN)对脑性瘫痪模型大鼠神经运动功能及脑皮质区神经细胞凋亡的影响。方法建立大鼠脑性瘫痪模型后,60只大鼠随机分为5组:假手术组,模型组,芒果苷低浓度组,芒果苷中浓度组和芒果苷高浓度组。芒果苷组在造模后分别给予10 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg芒果苷治疗,于造模后第1、15和30天进行神经运动功能(BBB)评分,30 d后取出各组大鼠脑组织皮质区进行HE染色和caspase-3、Bax蛋白免疫组织化学染色,以及通过Western blotting检测Bax、Bcl-2蛋白表达。结果 BBB评分显示,第1天模型组和各浓度芒果苷组大鼠BBB评分无显著差异(P0.05),第15和第30天,芒果苷组BBB评分显著高于模型组,并呈剂量依赖趋势(P0.05);免疫组织化学染色显示,芒果苷组caspase-3、Bax蛋白平均光密度显著低于模型组,并呈剂量依赖趋势(P0.05);Western blotting结果显示,芒果苷组Bax蛋白灰度值显著低于模型组(P0.05),而Bcl-2蛋白灰度值显著高于模型组,并呈剂量依赖趋势(P0.05)。结论芒果苷能显著改善脑性瘫痪大鼠神经运动功能,抑制脑皮质区神经细胞凋亡,并其作用呈剂量依赖性。     

虾青素预处理对大鼠急性脑梗死神经功能的保护作用及机制研究

目的探讨虾青素(AST)预处理对大鼠急性脑梗死(ACI)后神经功能的影响及其机制研究。方法制作ACI动物模型前对大鼠进行不同浓度AST灌胃预处理3 d,40只大鼠随机分为5组:对照组、ACI组、ACI+AST(25 mg/kg)、ACI+AST(50 mg/kg)、ACI+AST(100 mg/kg)组,每组8只,对照组只切开皮肤暴露颈总动脉,不进行ACI造模。24 h后对大鼠进行神经功能缺损评分,检测大鼠脑组织梗死面积,利用Western blot检测APQ4蛋白表达,干湿法检测脑组织水肿情况,利用酶联免疫吸附(ELISA)法检测氧化应激因子丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)含量,利用免疫荧光检测脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)表达。结果 ACI组大鼠神经功能缺损评分、梗死面积、脑组织水肿指数、APQ4蛋白、MDA含量显著高于对照组,SOD、CAT、GSH-px、BDNF和NGF表达显著低于对照组; AST能有效降低ACI大鼠神经功能缺损评分,并减小脑组织梗死面积,并呈剂量依赖趋势; Western blot显示AST能有效降低APQ4蛋白表达,干湿法显示AST能减小脑组织水肿指数,并呈剂量依赖趋势; ELISA结果显示AST能有效抑制MDA含量,提高SOD、CAT和GSH-px表达,并呈剂量依赖趋势;免疫荧光显示AST能有效提高BDNF和NGF表达。结论虾青素呈剂量依赖性抑制急性脑梗死后氧化应激,并上调脑组织BDNF和NGF表达。     

丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤保护作用及对MMP-9、TIMP-1及Caspase-3表达的影响

目的探讨丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响以及对基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达水平的影响。方法将54只KM小鼠随机均分为假手术组、模型组、丁苯酞低剂量组(20 mg/kg)、丁苯酞中剂量组(40 mg/kg)、丁苯酞高剂量组(80 mg/kg)。模型组和丁苯酞组采用线栓法制备小鼠脑缺血再灌注损伤模型假手术组同样手术操作但不进行线栓。观察各组小鼠神经功能损伤、脑梗死、脑水肿、氧化应激、炎性反应、脑组织凋亡情况以及MMP-9、TIMP-1表达水平。结果与假手术组比较,模型组、丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、伊文思蓝(EB)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),超氧化物歧化酶(SOD)活性、Bcl-2蛋白水平明显降低(P<0.05);与模型比较,丁苯酞低剂量组、丁苯酞中剂量组、丁苯酞高剂量组小鼠神经功能评分、脑梗死体积百分比、脑组织含水量、细胞凋亡率、EB、MDA、NO、TNF-α、Caspase-3、Bax蛋白水平、MMP-9相对表达量明显降低(P<0.05),SOD活性、Bcl-2蛋白水平、TIMP-1相对表达量明显升高(P <0.05),呈剂量依赖性。结论丁苯酞对小鼠脑缺血再灌注脑损伤有保护作用,可能与调节小鼠脑组织氧化应激、细胞凋亡以及血脑屏障有关。     

栀子苷通过抑制细胞凋亡保护糖尿病大鼠胰岛细胞

目的探索栀子苷(GEN)对糖尿病大鼠胰岛细胞的影响及相关机制。方法利用链脲佐菌素(STZ)制作大鼠糖尿病模型,50只SD大鼠随机分为5组,对照组,模型组,栀子苷10 mg/kg,栀子苷25 mg/kg,栀子苷50 mg/kg,每组10只,连续栀子苷灌胃用药1周后,对照组和模型组只给与等量生理盐水灌胃处理。检测大鼠空腹血糖值;利用Western blot法检测凋亡因子NF-κB以及凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达;酶联免疫吸附(ELISA)法检测Caspase-3、Caspase-9活性。结果一周后,模型组血糖值显着高于对照组,而栀子苷组较模型组有明显降低(P0.05);Western blot显示,模型组NF-κB和Bax表达显着高于对照组,而栀子苷组则明显抑制NF-κB和Bax表达,并呈剂量依赖效应(P0.05),相反,模型组中Bcl-2表达则显着低于对照组,而栀子苷组则显着高于模型组(P0.05);ELISA显示,模型组Caspase-3、Caspase-9活性显着高于对照组,而栀子苷组则明显抑制Caspase-3、Caspase-9活性,并呈剂量依赖效应(P0.05)。结论栀子苷对糖尿病大鼠模型具有降糖作用,可能是通过抑制NF-κB和Bax,提高Bcl-2表达,同时还可能抑制Caspase-3和Caspase-9蛋白酶活性,从而减轻了胰岛细胞的凋亡来发挥作用。     

小檗碱对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织Bcl-2、Bax表达及凋亡活性影响

目的:观察小檗碱对大鼠脑缺血-再灌注损伤后神经保护作用及Bcl-2,Bax表达的影响,探讨小檗碱在脑缺血一再灌注损伤中的抗凋亡作用及机制.方法:线栓法建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血再灌注模型大鼠随机分为模型组、小檗碱低剂量组、小檗碱高剂量组、假手术组.脑缺血2 h再灌注24 h;分别在再灌注后3 h和24 h进行神经行为评分,并在再灌注24 h后断头取脑.采用连续切片观察组织形态学改变,免疫组织化学技术检测脑组织中Bcl-2、Bax表达的部位及数量.结果:小檗碱组神经功能评分明显低于模型组,且大鼠脑梗死体积较模型组明显缩小,小檗碱高剂量组及低剂量组调高Bcl-2阳性细胞数增多、Bax阳性细胞教减少,Bcl-2/bax的表达比例增加(P<0.05);大鼠额顶部皮质神经元凋亡数目与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05).小檗碱高剂量组大鼠额顶部皮质Bcl-2、Bax阳性细胞数,皮质神经元凋亡数目与低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论:小檗碱能明显减轻脑缺血再灌注损伤所致的行为障碍.缩小梗死体积,可能通过上调抑凋亡Bcl-2表达、抑制Bax表达,减少细胞凋亡发挥脑保护作用.     

香芹酚通过抑制氧化应激和细胞凋亡保护大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探索香芹酚在大鼠脑缺血再灌注损伤(CI/R)中的作用及相关的机制。方法 36只大鼠随机分为3组,假手术组,模型组和香芹酚组。每组12只。香芹酚组在脑缺血/再灌注模型制作后给予腹腔注射香芹酚50 mg/kg,每日一次。假手术组和模型组只注射等量0.9%氯化钠溶液。一周后处死各组大鼠,取出脑组织进行分析。术后7d对三组大鼠进行神经功能评分,并利用酶联免疫吸附法检测脑组织中氧化应激因子一氧化氮(NO)含量以及总一氧化氮合酶(NOS)含量,通过Western blot法检测蛋白Bax和Bcl-2以及内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的表达。结果与模型组比较,香芹酚组大鼠显著下调了神经功能评分(P0.05);香芹酚能显著降低氧化应激因子NO含量以及总NOS含量,与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05);而Western blot结果显示,香芹酚能显著提高Bcl-2蛋白表达,抑制Bax以及e NOS蛋白表达(P0.05)。结论香芹酚对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用可能与抗氧化应激以及抗细胞凋亡作用相关。     

二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后Bcl-2及Bax和Bcl-xl表达的影响

背景:中枢神经系统损伤后,神经细胞的凋亡在继发性损伤中发挥重要作用。近年来有研究表明二甲胺四环素抑制凋亡对脑组织缺血有明显的神经保护功能。目的:探讨二甲胺四环素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡和相关因子表达的影响及对损伤脊髓神经功能的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院。材料:实验于2003-11/2004-12在华中科技大学同济医学院附属同济医院完成。成年雄性SD大鼠36只,随机分成4组:①空白组6只。②损伤组10只。③二甲胺四环素治疗组10只。④甲基强的松龙治疗组10只。方法:建立脊髓损伤模型,空白组只暴露脊髓,不损伤;损伤组损伤脊髓,不治疗;二甲胺四环素治疗组大鼠伤后1h给予腹腔内注射二甲胺四环素(50mg/kg),24h后再次给予50mg/kg剂量注射,然后再给予5d的25mg/kg的剂量治疗。甲基强的松龙治疗组大鼠伤后1h予腹腔内注射甲基强的松龙(100mg/kg)。空白组和损伤组予生理盐水注射,给药方法同二甲胺四环素治疗组。主要观察指标:①各组大鼠神经功能评估结果。②免疫组化法检测损伤脊髓神经细胞凋亡因子(Bcl-2,Bcl-xl,Bax)的表达。③各组大鼠脊髓组织细胞凋亡指数。结果:36只大鼠均进入结果分析。①二甲胺四环素治疗组的神经功能较损伤组提高(P<0.05),与甲基强的松龙组差异无显著性意义(P>0.05)。②二甲胺四环素治疗组Bcl-2阳性表达细胞多于损伤组,差异有显著性(62.53±7.76)%,(35.14±3.70)%,P<0.05,Bcl-xl,Bax表达与损伤组差异无显著性(P>0.05)。③损伤组的凋亡阳性细胞多于二甲胺四环素治疗组和甲基强的松龙治疗组(44.63±5.90)%,(32.71±5.26)%,(34.31±6.84)%,P<0.05。结论:二甲胺四环素能上调Bcl-2的表达,改变Bcl-2/Bax的比值,从而抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能有保护作用。     

黄体酮对大鼠外伤性脑损伤后脑水肿及周围组织细胞凋亡和神经功能的影响

目的探究黄体酮对大鼠外伤性脑损伤后脑水肿及周围组织细胞凋亡和神经功能的影响。方法雄性Wistar成年大鼠随机分为假手术组(Sham组;开右侧顶部骨窗而无脑损伤)、脑损伤组(TBI组;开右侧顶部骨窗,且参照Freeney自由落体撞击致伤方法建造重型颅脑损伤模型)、脑损伤后接受黄体酮治疗组(P-TBI组;建立脑损伤模型后腹腔注射0.8 ml/kg黄体酮)、脑损伤后注射二甲基亚砜(DMSO)组(D-TBI组;建立脑损伤模型后腹腔注射0.8 ml/kg DMSO),每组24只,再将其分为损伤后1 d、3 d、5 d、7 d组,各6只。比较各组大鼠不同时间点环氧化物水解酶-2(COX-2)表达量,脑组织含水量、Bcl-2及Bax蛋白阳性细胞数及神经细胞凋亡情况。利用m NSS量表评价各组大鼠损伤后不同时间的神经功能。结果随着损伤时间延长,Sham组大鼠脑组织COX-2表达水平、脑组织含水量、神经细胞凋亡百分比及m NSS评分无明显变化(P>0.05)。TBI组大鼠随着损伤时间延长其脑组织COX-2表达水平、脑组织含水量、神经细胞凋亡百分比及m NSS评分均降低(P<0.05),且各时间点均高于Sham组(P<0.05)。D-TBI组及P-TBI组大鼠随着损伤时间延长其脑组织COX-2表达水平、脑组织含水量、神经细胞凋亡百分比及m NSS评分均降低(P<0.05),且P-TBI组高于TBI组(P<0.05)。损伤后7 d,TBI组大鼠脑组织Bcl-2、Bax阳性细胞数均高于Sham组(P<0.05);且P-TBI组大鼠脑组织Bcl-2阳性细胞数高于TBI组,Bax阳性细胞数低于TBI组(P<0.05)。结论黄体酮能有效缓解大鼠外伤性脑损伤后脑水肿情况、抑制周围组织细胞凋亡,对其神经功能有一定保护作用。     

香芹酚通过抑制氧化应激反应抑制大鼠急性肺损伤

目的探讨香芹酚(CAR)对大鼠急性肺损伤的作用,及其相关作用机制。方法 60只大鼠随机分为5组,对照组,模型组,香芹酚(10 mg/kg),香芹酚(20 mg/kg),香芹酚(40 mg/kg),每组12只。香芹酚组分别通过灌胃给药香芹酚10 mg/kg、20 mg/kg和40 mg/kg,每日一次,连续一周,末次给药1 h后进行造模。给予20%酵母混悬液5 ml/kg腹腔注射,12 h后再次注射20%酵母混悬液5 ml/kg诱导急性肺损伤模型。对照组只注射同等体积生理盐水。24 h后检测肺组织水肿指数,ELISA法检测丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH),化学定量法检测一氧化氮(NO)含量和总一氧化氮合酶(eNOS)活性;Western blot法检测eNOS蛋白相对表达。结果模型组大鼠肺水肿指数显著高于对照组,而香芹酚组则明显低于模型组(P0.05);模型组MDA、NO含量、eNOS活性显著高于对照组,香芹酚显著抑制MDA、NO含量剂eNOS活性,并呈剂量依赖趋势(P0.05);模型组CAT、SOD和GSH活性则显著低于对照组,香芹酚可明显提高其活性,呈剂量依赖趋势(P0.05);Western blot显示,香芹酚可显著抑制eNOS蛋白表达,呈剂量依赖趋势(P0.05)。结论香芹酚可通过抑制氧化应激反应从而发挥对大鼠急性肺损伤的保护作用。     

香芹酚对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及相关机制

目的探讨香芹酚(CAR)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(I/R)的保护作用及相关分子机制。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支制作心肌缺血(30 min)/再灌注(120 min)模型,将大鼠随机分为5组:对照组(A组),模型组(B组),香芹酚10 mg/kg组(C组),香芹酚25 mg/kg组(D组),香芹酚50 mg/kg组(E组)。A组大鼠麻醉后行开胸术,分离左前降支但不结扎,B组于心肌缺血前30 min通过股静脉注入0.5 ml生理盐水,后行缺血/再灌注术,C、D、E组于缺血前30 min分别通过股静脉注入10 mg/kg、25 mg/kg和50 mg/kg香芹酚溶剂,后行缺血/再灌注术。造模后检测心肌梗死面积、ELISA法检测心肌组织氧化应激因子丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH),Western blot法检测心肌细胞凋亡蛋白Bax及Bcl-2表达。结果造模后B组梗死面积明显大于A组(P0.05),而香芹酚预处理后,梗死面积逐渐减小,并呈剂量依赖性(P0.05);ELISA显示,造模后B组MDA含量明显提高(P0.05),CAT、SOD和GSH活性明显降低(P0.05),而香芹酚预处理后,MDA含量明显降低,CAT、SOD和GSH活性明显提高,并呈剂量依赖性(P0.05);Western blot显示,造模后B组Bax蛋白表达显著提高(P0.05),Bcl-2显著降低(P0.05),而香芹酚预处理后,Bax蛋白表达显著降低(P0.05),Bcl-2显著提高(P0.05)。结论香芹酚能通过抑制氧化应激反应及心肌细胞凋亡保护大鼠心肌缺血/再灌注损伤。     

缺血再灌注后心肌细胞凋亡及相关基因变化与不同剂量黄芩茎叶总黄酮的预处理效应

目的:黄芩茎叶总黄酮具有保护缺血再灌注心肌的作用,从细胞凋亡及相关基因的角度,观察黄岑茎叶总黄酮预处理对缺血再灌注大鼠心肌细胞的影响。方法:实验于2006-02/2006-12在承德医学院解剖学研究室(院级实验室)完成。①实验分组及方法:选择雄性Wistar大鼠40只,按随机数字表法分为5组(n=8),即黄岑茎叶总黄酮0.05g/(kg·d),0.1g/(kg·d),0.2g/(kg·d)组、缺血再灌注组和假手术组,分别于术前1周灌服黄岑茎叶总黄酮和等量生理盐水。假手术对照组只穿线不结扎,其余各组结扎大鼠左冠状动脉前降支40min,再灌注1h。②实验评估:实验结束后快速取大鼠心脏,石蜡切片,采用DNA末端标记技术观察心肌细胞凋亡指数;应用免疫组化抗生物素-生物素-过氧化物酶法检测Bcl-2,Bax基因蛋白反应强度。结果:40只大鼠全部进入结果分析。①与假手术组相比,缺血再灌注组、各黄岑茎叶总黄酮剂量组大鼠心肌细胞凋亡指数、Bcl-2和Bax表达均显著增高(P<0.01)。②与缺血再灌注组相比,各黄岑茎叶总黄酮剂量组凋亡指数和Bax基因表达降低(P<0.05￣0.01),黄岑茎叶总黄酮0.1,0.2g/(kg·d)组Bcl-2表达增高(P<0.05)。③黄岑茎叶总黄酮0.1,0.2g/(kg·d)组凋亡指数和Bax基因表达低于黄岑茎叶总黄酮0.05g/(kg·d)组(P<0.05),Bcl-2表达高于黄岑茎叶总黄酮0.05g/(kg·d)组(P<0.05),黄岑茎叶总黄酮0.1,0.2g/(kg·d)组差异无显著性意义(P>0.05)。结论:黄岑茎叶总黄酮预处理可能通过抑制心肌细胞凋亡,下调Bax基因蛋白表达,上调Bcl-2基因蛋白表达来保护缺血再灌注心肌细胞,不同剂量的黄岑茎叶总黄酮阻抑心肌细胞凋亡具有一定的剂量依赖效应。     

表儿茶素对大鼠缺血再灌注后神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响

目的:研究表儿茶素(EC)对大鼠缺血再灌注后缺血侧脑皮质神经元凋亡及Caspase-3、Bcl-2、Bax蛋白的影响。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(I/R组)、EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、依达拉奉(ED)3 mg/kg组,每组9只。除Sham组外,其余组采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2 h,于再灌注后0 h、12 h、24 h三个时间点给药,第12 h、24 h进行神经功能评分,第36 h取脑称重,应用缺口末端标记法(TdT-mediated d UTP nick end labeling,TUNEL)检测缺血侧脑皮质区神经元凋亡情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达情况。结果:与Sham组比较,I/R组神经功能评分显著升高(P0.05),脑指数无明显差异,凋亡指数明显增大(P0.05),Caspase-3、Bax蛋白表达显著增加(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著减少(P0.05)。与I/R组比较,EC5mg/kg组、EC10mg/kg组、EC20mg/kg组、ED3mg/kg组脑指数无明显差异,凋亡指数明显减小(P0.05),Caspase-3蛋白表达明显减少(P0.05),Bcl-2蛋白表达显著增加(P0.05),EC10 mg/kg组、EC20 mg/kg组、ED3mg/kg组神经功能评分显著降低(P0.05),Bax蛋白表达明显减少(P0.05)。结论:表儿茶素可增强大鼠脑缺血再灌注后抗凋亡能力,可能与减少Caspase-3、Bax蛋白表达,增加Bcl-2蛋白表达有关。     

人尿液干细胞定向移植治疗大鼠颅脑损伤

目的探讨人尿液干细胞(h USCs)对大鼠颅脑损伤(TBI)后神经运动功能及神经细胞凋亡的作用及其相关机制。方法体外获取h USCs进行增殖培养,利用流式细胞仪检测h USCs细胞表型。Feeney氏自由落体法制备大鼠TBI动物模型,45只大鼠随机分为3组:A组为正常对照组,B组为模型组,C组为实验组。实验组造模后利用h USCs定向移植治疗大鼠TBI。A组和B组注射等量高糖DMEM培养基。分别于10 d、20 d和30 d后进行神经功能评分,30 d后处死所有大鼠,取出损伤区域脑组织,利用Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2以及Caspase-3表达,并利用免疫组织化学染色检测Caspase-3表达。结果 h USCs细胞表型CD29表达率为(99.12±0.57)%,CD73表达率为(98.73±0.79)%,CD34表达率为(0.41±0.15)%,神经功能评分显示,B组大鼠颅脑损伤后神经功能评分较A组明显升高,C组经h USCs治疗10 d、20 d和30 d可显著改善降低颅脑损伤大鼠神经功能评分。Western blot结果显示,B组Bax、Caspase-3蛋白表达较A组明显增加,B组Bcl-2蛋白表达较A组明显下调,C组经h USCs治疗可显著抑制Bax和Caspase-3蛋白,提高Bcl-2表达。免疫组织化学染色结果显示,B组Caspase-3表达均显著高于A组,C组经h USCs治疗可显著降低Caspase-3在脑组织中平均光密度。结论 h USCs可提高大鼠颅脑损伤后神经运动功能,抑制颅脑损伤后神经细胞的凋亡。     

星状神经节阻滞对自发性高血压大鼠脑组织NF-κBp65与凋亡调节因子bcl-2/bax表达变化的影响

目的研究自发性高血压大鼠(SHR)脑组织核转录因子(NF-κBp65)与凋亡调节因子Bcl-2和Bax表达的变化,并探讨星状神经节阻滞对这一过程的影响。方法将32只10周龄雄性SHR随机分为四组,每组8只,即左侧星状神经节阻滞组(LS组)、右侧星状节阻滞组(RS组)、药物卡托普利组(D组)、手术对照组(C组)。实验结束后用3%戊巴比妥钠腹腔注射(45 mg/kg)麻醉自发性高血压大鼠,迅速取出脑组织,免疫组化检测脑组织Bcl-2、Bax表达,放射免疫法测定脑组织NF-κBp65的含量。结果 RS组和D组脑组织NF-κBp65的含量显著低于LS组和C组(P0.05),而LS组和C组,RS组和D组比较差异未见统计学意义(P0.05);与LS、D、C组相比,RS组SHR脑组织Bcl-2表达明显增强,Bax表达明显减弱,Bcl-2/Bax比值明显增高(P0.05)。结论右侧星状神经节阻滞可通过影响脑内NF-κBp65和凋亡调节基因的表达而在脑组织保护中发挥一定的作用。     

去甲斑蝥素介导NOD2/RIP2/NF-κB通路对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用

目的探究去甲斑蝥素(NCTD)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBI)的保护作用及其分子机制。方法将50只新生大鼠随机分为空白组、模型组及去甲斑蝥素低、中、高剂量组,每组各10只。空白组大鼠行假手术(不结扎、不缺氧),其他三组采用Rice-Vannucci法建立HIBI模型,去甲斑蝥素低、中、高剂量组分别灌胃0. 025 mg/(kg·d)、0. 05 mg/(kg·d)、0. 1 mg/(kg·d)的NCTD,连续灌胃7 d,空白组和HIBI组采用生理盐水灌胃。对大鼠神经功能缺陷评分并检测其脑积水量,采用TUNEL染色法检测大鼠脑组织凋亡情况,Western blot法检测脑组织中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)、核苷酸结合低聚域蛋白2(NOD2)、受体相互作用蛋白2(RIP2)和核因子-κB p65(NF-κB p65)的表达,生化试剂盒检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,免疫组化法检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)的表达,ELISA法检测炎症因子白介素-6(IL-6)、白介素-18(IL-18)和白介素-1β(IL-1β)的含量。结果与空白组相比,HIBI大鼠神经功能评分、脑积水量、脑组织细胞凋亡率、MDA、LDH、ICAM-1、IL-6、IL-18、IL-1β、Bax、NOD2、RIP2及p-NF-κB p65的表达显著上调,SOD水平显著下调; NCTD可剂量依赖性地下调大鼠神经功能评分、脑积水量、脑组织细胞凋亡率、MDA、LDH、ICAM-1、IL-6、IL-18、IL-1β、Bax、NOD2、RIP2及p-NF-κB p65的表达,并剂量依赖性地上调SOD水平(P 0. 05)。结论去甲斑蝥素可呈剂量依赖性减少缺氧缺血对新生大鼠造成的脑损伤,可能通过凋亡、氧化应激、炎症反应及NOD2/RIP2/NF-κB通路起到保护作用。     

西维来司钠联合脐带间充质干细胞移植对大鼠重型颅脑损伤的影响

目的:探讨西维来司钠联合脐带间充质干细胞(UCMSCs)移植对SD大鼠重型颅脑损伤的影响。方法:建立SD大鼠重型颅脑损伤模型,应用改良神经功能评分(mNSS)评价神经功能,纳入评分为12~16分(重度)的SD大鼠60只。将其随机分为模型组(颅脑损伤组)、西维来司钠组、UCMSCs组、联合组(西维来司钠+UCMSCs),分别给予相应治疗。应用Western-Blotting和定量荧光PCR法检测各组大鼠损伤部位脑组织中脑源性神经营养因子(BDNF)的蛋白及mRNA表达变化;取各组大鼠损伤部位脑组织行HE染色观察脑组织受损情况;免疫组化检测BDNF的阳性表达。结果:治疗后各时间点,与模型组比较,西维来司钠组、UCMSCs组、联合组的评分下降,联合组的评分低于西维来司钠组及UCMSCs组(P<0.05);联合组大鼠损伤部位脑组织中BDNF表达高于其他各组(P<0.05);联合组受损脑组织炎症浸润细胞明显减少,水肿程度明显减轻;联合组的BDNF阳性表达细胞多于西维来司钠组及UCMSCs组(P<0.05)。结论:西维来司钠联合UCMSCs移植可提高SD大鼠重型颅脑损伤后神经功能的恢复,能促进BDNF的表达。     

梓醇对脑缺血-再灌注大鼠神经功能、氧化应激和炎症反应的影响

目的探究梓醇对脑缺血-再灌注大鼠神经功能、氧化应激和炎症反应的影响。方法选取40只6周龄SPF级SD大鼠,采用改良线栓法制作脑缺血再灌注模型,并分为模型组、低浓度梓醇组(10 mg/kg)和高浓度梓醇组(20 mg/kg),另设空白对照组,每组10只。将其中低浓度梓醇组和高浓度梓醇组分别在术前3 d及术前30 min腹腔注射上述浓度的梓醇,空白对照组、模型组注射等量生理盐水。使用m NSS神经功能缺损评分评价大鼠神经功能;使用试剂盒检测大鼠脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)含量;使用ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α);使用试剂盒检测总一氧化氮合酶(t NOS)、诱导型一氧化氮合酶(i NOS)和一氧化氮(NO)的含量水平;使用Westen Bolt检测大鼠Bcl-2、Bax蛋白表达情况。结果 m NSS神经功能缺损评分结果显示,模型组评分显著高于高浓度梓醇组、低浓度梓醇组高于和空白对照组(P 0. 01);相比空白对照组,模型组MDA、ROS、IL-1β、IL-6、TNF-α、t NOS、i NOS、NO含量和Bax蛋白表达显著升高(P 0. 01); SOD、GPX含量和Bcl-2蛋白表达显著降低(P 0. 01)。相比模型组,低浓度梓醇组和高浓度梓醇组MDA、ROS、IL-1β、IL-6、TNF-α、t NOS、i NOS、NO含量和Bax蛋白表达显著降低,且高浓度梓醇组低于低浓度梓醇组,(P 0. 01); SOD、GPX含量和Bcl-2蛋白表达显著升高,且高浓度梓醇组高于低浓度梓醇组(P 0. 01)。结论梓醇可以有效缓解大脑缺血再灌注损伤,其作用机制与保护神经功能、降低氧化应激和炎症反应有关,且在一定浓度范围内呈浓度依赖性。     

甲强龙对环扎法所致大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的相关性研究

目的探讨甲强龙(MP)对大鼠脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响,以及相关分子机制研究。方法 45只SD大鼠随机分为3组,对照组(n=15),模型组(n=15)和实验组(n=15)。实验组于术后给与甲强龙尾静脉注射(30 mg/kg),模型组为SCI模型,对照组只切开椎板,不损伤脊髓。分别于7 d、14 d和21 d进行下肢功能评分(BBB评分);21 d后取出损伤脊髓,利用Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达;免疫组织化学染色及TUNEL染色检测Caspase-3阳性细胞数和神经细胞凋亡水平。结果各时间点BBB评分,模型组显著低于对照组,而实验组明显高于模型组(P0.05);Western blot法显示,甲强龙显著抑制Bax,提高Bcl-2表达(P0.05);组织学观察显示,甲强龙显著抑制Caspase-3表达,以及下调TUNEL阳性细胞数(P0.05)。结论甲强龙可通过抑制大鼠脊髓损伤Bax和Caspase-3表达,提高Bcl-2表达,从而抑制神经细胞的凋亡。     

草果知母汤对戊四唑慢性诱导癫痫模型大鼠脑内海马区凋亡调控因子Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:动态观察具有调理中焦脾胃气机作用的草果知母汤在阻抗癫痫形成中对大鼠海马区凋亡调控基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨其抗癫痫作用的分子生物学机制。方法:实验于2005-03/12在广西中医学院基础医学院中医实验中心完成。选择雄性SD大鼠82只,按随机数字表法分为4组:模型组26只,中药治疗组及西药治疗组各25只,正常对照组6只。除正常对照组外,其余各组均以戊四唑亚惊厥剂量35mg/kg腹腔注射诱导癫痫模型,1次/d,持续4周。正常对照组同法给予相同剂量的生理盐水。中药治疗组予草果知母汤(由草果、知母、厚朴、半夏、黄芩等组成)5g/(kg·d)灌胃;西药治疗组给予苯巴比妥混悬液60mg/(kg·d)灌胃;模型组和正常对照组胃饲双蒸水,2mL(kg·d),1次/d,持续5周。采用免疫组化PV-600二步法标记bcl-2、bax蛋白阳性细胞,动态观察各组大鼠海马区Bcl-2、Bax蛋白表达值在癫痫形成过程中的变化。结果:模型组2只因惊厥大发作抽搐致死,中、西药治疗组各死亡1只,解剖无特殊发现,死亡原因不明,共78只大鼠进入结果分析。①模型组大鼠1周后逐渐出现癫痫发作,并随着点燃次数的增加而不断增强,至第4周出现6级大发作;中、西药治疗组发作次数和级别明显降低,最高级别为4级,且两组间发作级别、次数相比差异不显著(P>0.05)②随着点燃周次的增加,Bcl-2蛋白表达呈不断减少的趋势,模型组与正常对照组比较,在实验第3,4,5周,明显低于正常对照组(P<0.05～0.01),中、西药治疗组大鼠海马区Bcl-2蛋白表达数量均明显高于模型组(P<0.05～0.01);在相同时间段(2、3、4、5周),中、西药治疗组间比较,差异不显著(P>0.05)。③bax蛋白表达数随着点燃次数增加呈不断增多的趋势,至实验第3,4,5周,模型组大鼠海马区Bax蛋白表达数量明显高于正常对照组(P<0.05～0.01),中、西药治疗组大鼠海马区Bax蛋白表达数量均明显高于模型组(P<0.05～0.01);在相同时间段(2、3、4、5周),中、西药治疗组间比较,差异不显著(P>0.05)结论:草果知母汤可有效地阻断癫痫发作,其抗痫作用可能与其干预癫痫形成中大鼠脑内凋亡调控因子Bcl-2、Bax蛋白表达有关。