孕酮和孕酮受体拮抗剂米非司酮对K562白血病细胞系增殖和分化的影响

目的: 观察孕酮和孕酮受体拮抗剂米非司酮(RU486)对K562白血病细胞增殖和分化的影响。方法: 用10^-5 mol/L 孚酮分别联合10^-5 mol/L、10^-6 mol/L和10^-7 mol/L RU486共同作用K562白血病细胞5 d,采用液体培养,XTT实验和集落培养实验观察K562细胞增殖能力;用流式细胞术检测K562细胞周期;通过Wright-Giemsa染色、联苯胺染色和表面分化抗原CD71表达观察孕酮和RU486对K562细胞分化的作用。结果: 液体培养,XTT实验和集落形成抑制实验均显示单独使用孕酮可显著抑制K562细胞增殖,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。孕酮联合RU486对K562细胞的增殖抑制作用减弱,与单独使用孕酮组比较有显著差异(P<0.01),呈剂量依赖关系。形态学观察孕酮处理组K562细胞体积变大,核浆比例减少,趋向成熟分化。联苯胺染色吸光度值升高,与对照组比较差异显著(P<0.01)。流式细胞术检测10^-5 mol/L 孕酮处理4 d后K562细胞膜上CD71表面标记表达阳性率为(85.72±2.31)%,显著高于对照组(P<0.01);但孕酮联合RU486对K562细胞的诱导分化作用减弱,与单独使用孕酮组比较有显著差异(P<0.01),并呈剂量依赖关系。细胞周期显示孕酮可将K562细胞周期阻滞在S期。但孕酮联合RU486组分布于S期的K562细胞百分比显著下降,与单独使用孕酮组比较差异显著(P<0.01),并呈剂量依赖关系。结论: 孕酮可抑制K562细胞增殖并诱导其向红系分化,而RU486可阻断P对K562细胞的增殖抑制与诱导分化作用。     

HMBA对人和小鼠3种红白血病细胞生长及分化的作用

本文通过绘制在六亚甲基双乙酰胺(HMBA)作用下人、小鼠红白血病细胞的生长曲线,计数其分裂指数及集落形成、联苯胺染色法检测其分化百分率等方法研究HMBA对人、小鼠红白血病细胞的抑制及诱导分化作用。红白血病细胞在HMBA作用下增殖能力下降,分裂指数减低,集落减少、MEL-DSl9细胞联苯胺染色阳性率可达76％。HMBA有一定的抑制MEL、MEL-DSl9、K562细胞增殖作用,但诱导MEL、K562分化活性作用较弱,而诱导MEL-DSl9细胞株的分化作用较强。     

U0126增强索拉非尼对K562细胞增殖抑制、凋亡及诱导分化作用

目的: 观察索拉非尼、索拉非尼联合MEK激酶抑制剂U0126对人慢性粒细胞白血病K562细胞株增殖、凋亡及分化的影响,并初步探讨其机制。方法: CCK-8法观察索拉非尼、U0126单用及不同浓度索拉非尼联合10 μmol/L U0126作用K562细胞48 h后细胞增殖活力变化;PI单染法及Hoechst 33342染色法观察索拉非尼、U0126单用及索拉非尼联合U0126对K562细胞株的凋亡诱导作用;细胞周期分析及联苯胺染色观察索拉非尼、U0126单用及低浓度索拉非尼联合U0126是否诱导K562细胞株向红系分化;采用免疫印迹法检测c-Myc蛋白表达。结果: MEK抑制剂U0126增强了索拉非尼对K562细胞增殖抑制、促凋亡及诱导分化作用。两药联用显著下调K562细胞c-Myc蛋白水平。结论: MEK抑制剂U0126增强索拉非尼对K562细胞增殖抑制、凋亡及诱导分化作用,这可能与其协同下调c-Myc蛋白有关。     

蛇六谷提取物抑制K562细胞增殖并诱导分化的作用

目的:探讨蛇六谷提取物(TuAKe)抑制人慢性髓系白血病K562细胞增殖和诱导分化的作用机制。方法:不同浓度的TuAKe处理K562细胞,MTT比色法和半固体集落形成实验检测K562细胞的增殖能力;瑞氏-姬姆萨染色观察细胞形态;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b、CD14和CD42b的阳性表达率;Western blot法检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)和红系分化核转录因子GATA-1的蛋白表达水平。结果:TuAKe能够抑制K562细胞增殖,改变细胞形态,抑制K562细胞进入S期,并阻滞在G_2/M期,提高分化相关抗原CD11b、CD14和CD42b阳性表达率,上调GATA-1蛋白表达,同时下调CDK2和cyclin E1蛋白表达(P0.05)。结论:TuAKe可能通过调控细胞周期抑制K562细胞增殖,同时诱导K562细胞多向分化。     

低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制研究

目的 初步探讨低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成抑制作用的机制.方法 甲基纤维素集落形成实验检测低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞集落形成能力的影响;CCK-8法检测低浓度丰加霉素对K562细胞的生长抑制率;AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测低浓度丰加霉素作用下的K562细胞凋亡率;PI 单染流式细胞仪检测药物作用后细胞的周期分布改变;Western免疫印迹和实时定量PCR检测周期相关分子表达水平变化.结果 低浓度丰加霉素对人白血病K562细胞具有较强的集落形成抑制作用;可明显抑制K562细胞的生长,呈时间-剂量依赖性;尽管短时间(48 h)的药物处理仅出现轻度的细胞凋亡和周期阻滞,但10 nmol/L和30 nmol/L的丰加霉素长时间(7 d)作用后,K562细胞G0/G1期比例分别是(62.3±1.7)%和(76.9±0.7)%,与对照组(38.9±1.1)%相比差异具有高度统计学意义(P＜0.01);低浓度丰加霉素长时间作用后诱导K562细胞周期相关分子P16蛋白水平和转录水平的高表达.结论 丰加霉素在低浓度,长时间作用于人白血病K562细胞后,具有较强的集落形成抑制和生长抑制作用,此作用可能与诱导细胞周期相关分子p16高表达,导致细胞G0/G1期阻滞有关.     

地西他滨抑制K562白血病细胞增殖和诱导分化的作用

目的:观察地西他滨(DAC)抑制白血病K562细胞生长和诱导分化的作用。方法:不同浓度的DAC处理K562细胞。MTT法和半固体集落生成实验检测K562细胞增殖能力;瑞氏染色观察细胞形态;流式细胞术检测分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率;Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期蛋白E1(cyclin E1)、细胞周期负调控因子P27、红系分化核转录因子GATA-1及粒系分化核转录因子PU.1蛋白的表达水平。结果:DAC能够减少K562细胞集落形成的数量,降低细胞活力,减少核质比,抑制K562细胞进入S期,并阻滞在G_2/M期,提高分化相关抗原CD11b和CD42b阳性表达率,上调P27、GATA-1和PU.1蛋白表达,同时下调CDK2和cyclin E1蛋白表达。结论:DAC可能通过调控细胞周期抑制K562细胞增殖,同时诱导多向分化。     

人参皂苷Rg1诱导人白血病K562细胞复制性衰老的机制

目的 探讨人参皂苷Rg1(Rg1)诱导人白血病K562细胞复制性衰老特征性变化.方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法筛选Rg1对K562细胞增殖抑制的最佳浓度及时间,以此浓度和作用时间诱导K562细胞衰老.流式细胞术检测Rg1对细胞增殖周期的影响;衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测阳性细胞百分率;Southern blotting检测端粒长度;Western blotting检测复制性衰老信号通路相关P21、P53与Rb蛋白表达;透射电镜观察人白血病K562细胞衰老超微形态学改变.结果 Rg1在体外能明显抑制K562细胞增殖,其最佳作用浓度为20 μmol/L,时间为48h;诱导后的K562细胞阻滞于G2/M期;SA-β-Gal染色阳性细胞百分率增加(P<0.05);复制性衰老通路相关蛋白P21、P53和Rb表达上调(P<0.05);端粒长度缩短加速(P<0.05);经诱导细胞呈现胞体增大,溶酶体体积增大、数目增多,线粒体体积增大等衰老形态学变化.结论 Rg1可能经由p53-p21-Rb信号通路诱导K562细胞呈现复制性衰老特征.     

当归多糖诱导K562细胞向红系样细胞分化及其信号转导通路研究

目的 探讨当归多糖(APS)诱导K562细胞向红系样细胞分化相关的信号转导通路. 方法 实验分组:对照组采用常规方法培养;APS组在常规培养基础上加入APS(终浓度100～500mg/L),分别培养12h、1d、2d、3d.联苯胺染色与分光光度法检测经APS诱导后K562细胞向红系样细胞分化的血红蛋白表达;激光扫描共焦显微镜观察JAK_2、信号转导和转录激活因子5(STAT_5)在各组细胞内的分布;Western blotting检测细胞核、质蛋白中JAK_2、STAT_5的表达变化;免疫沉淀法检测质蛋白中JAK_2的磷酸化改变. 结果 经APS诱导后K562细胞的联苯胺染色阳性率增高,随着APS诱导浓度增加K562细胞合成血红蛋白也增加;APS诱导K562细胞12h、24h和48h,核蛋白中STAT_5表达较对照组增加,质蛋白中STAT_5表达减少;APS组与对照组K562细胞的JAK_2表达未见显著差异,但APS组的JAK_2磷酸化强于对照组. 结论 APS可诱导K562细胞向红系样细胞分化,其机制可能与APS启动JAK_2的酪氨酸磷酸化,继而引起STAT_5核转位,通过信号转导通路的调控影响细胞的增殖分化.     

慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养对伊马替尼耐药的影响

背景：伊马替尼耐药是慢性髓细胞白血病治疗的一个主要问题,研究证实白血病细胞可通过与骨髓基质细胞黏附而获得耐药表型,但对于黏附功能缺陷的慢性髓细胞白血病而言,骨髓基质细胞在伊马替尼耐药形成中的作用及其机制尚不清楚。 目的：体外模拟慢性髓细胞白血病患者骨髓微环境,探讨其对伊马替尼敏感性的影响及可能机制。 方法：分离、培养确诊但未经治疗的慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞,与白血病细胞株K562细胞共培养构建慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞-K562细胞共培养模型。MTT法检测0.2-3.2 μmol/L伊马替尼作用  48 h对K562细胞的增殖抑制率;将K562细胞暴露于0.5 μmol/L伊马替尼72 h,流式细胞术检测K562细胞凋亡率及CXCR4表达。将0.5 μmol/L伊马替尼作用4 h并以Calcein-AM荧光标记的K562细胞接种于基质细胞层培养24 h,去除悬浮细胞,收集黏附的K452细胞通过检测荧光强度计算细胞黏附率。 结果与结论：慢性髓细胞白血病骨髓基质细胞与K562细胞共培养减弱了0.2-3.2 μmol/L伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用;0.5 μmol/L伊马替尼处理72 h,共培养组K562细胞凋亡率显著低于悬浮组(P=0.020)。悬浮组和共培养组伊马替尼作用后K562细胞CXCR4表达阳性率均显著高于作用前(P=0.001)。0.5 μmol/L伊马替尼作用4 h使K562细胞与骨髓基质细胞的黏附率由(32.18±6.17)%提升至(68.97±11.08)%,差异有显著性意义(P=0.022)。结果表明慢性髓细胞白血病患者骨髓基质细胞与K562细胞共培养,能介导对伊马替尼耐药,可能与共培养及伊马替尼诱导K562细胞CXCR4的表达有关,但更多的机制还需深入研究。     

熊果酸促进K562细胞凋亡

本研究旨在探讨熊果酸在体外对人红白血病K562细胞系的作和机制。采用MTT法和流式细胞术检测熊果酸对K562细胞的增殖抑制和杀伤效应;用慧星电泳分析熊果酸对K562细胞DNA的损伤;Hoechst33258荧光染色观察DNA片段化：细胞免疫化学染色检测Bcl-2和Bax的表达;Western blotting检测K562细胞内Caspase-3和磷酸化酪氨酸的表达和活性。结果显示熊果酸存在体外对K562细胞具有中度增殖抑制效应,并呈浓度和时间依赖性。在熊果酸作用下K562细胞呈现凋亡征象,同时细胞内Bcl-2表达下降,Bax表达升高,Caspase-3被激活,磷酸化酪氨酸表达下降,说明熊果酸存体外对K562细胞有诱导凋亡作用,而提高Bax的表达、诱导Caspase-3活化及降低BCR／ABL的酪氨酸激酶活性可能足其作用机制之一。     

生长抑素对人红白血病K562细胞的抑制作用

目的　研究生长抑素对人红白血病K5 6 2细胞的抑制作用。　方法　采用 8肽生长抑素———奥曲肽(octreotide ,SMSZOL 1995 ,SMS)在体外作用于K5 6 2细胞 ,经光镜、电镜观察、3H TdR掺入法和TdT缺口末端标记(TUNEL)技术检测K5 6 2细胞增殖、凋亡的变化。　结果　光镜下观察到 ,加SMS组培养 72h与空白对照组比较 ,细胞碎片增多 ;电镜下可见 ,SMS处理组中部分细胞核染色质靠核膜边集 ,呈块状或新月形 ,部分细胞胞浆中见核碎裂团块与空泡 ,线粒体基质深染、空泡样变和髓样变 ;3H TdR掺入法显示 ,SMS呈浓度依赖性地抑制K5 6 2细胞增殖 ,抑制范围为 2 0 %～ 5 0 % ,以 10 - 6 mol L最有效。在 10 - 1 0 ～ 10 - 6 mol L范围内 ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;TUNEL检测见核深染的阳性细胞 ,10 - 6 mol L组与对照组比较 ,凋亡细胞明显增多 (P <0 0 1)。　结论　生长抑素可抑制K5 6 2细胞增殖 ,诱导凋亡。     

全反式维甲酸抑制微血管内皮细胞增殖

目的：研究不同浓度的全反式维甲酸（all-trans retinoic acid,atRA）对体外培养的小鼠脑微血管内皮细胞株bEnd.3增殖的影响。 方法： 将体外培养的bEnd.3细胞随机分为五组：空白对照组（加入atRA溶剂二甲亚砜, DMSO）、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L atRA组。分别在24 h、48 h和72 h收集细胞，通过流式细胞术、MTT法检测不同浓度的atRA对bEnd.3增殖的影响，并采用免疫细胞化学法检测bEnd.3增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。在作用明显的时点（20 h）做小鼠血管新生相关基因芯片检测。 结果： 10-6mol/L atRA组在24 h明显抑制细胞增殖；PCNA表达明显降低；20 h时11种血管新生相关基因表达明显下调。 结论： 在体外细胞培养中，10-6mol/L 的atRA作用20-24 h 时，通过部分血管新生相关基因表达下调和PCNA的表达减少抑制bEnd.3细胞增殖。     

盐霉素抑制耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv增殖并诱导其凋亡

目的: 探讨盐霉素对耐格列卫的人慢性粒细胞白血病细胞株K562/Glv抑制增殖和诱导凋亡的作用及其机制。方法: 采用CCK-8的方法检测盐霉素对K562/Glv细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡、活性氧、细胞内Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)和线粒体膜电位(ΔΨ_m);比色法检测caspase-3、-8和-9活性;Western blotting 分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对K562/Glv细胞生长具有剂量依赖性抑制作用,0.2 μmol/L时细胞增殖抑制率为(36.70±2.31)%,细胞凋亡率为(19.66±2.43)%;0.2 μmol/L盐霉素作用于K562/Glv细胞,ΔΨ_m显著下降,24 h时下降至对照组的(19.8±2.4)%,细胞内活性氧和[Ca²⁺]_i在短期显著升高。Caspase-3、-8和-9活性均显著增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。Bcl-2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。同时,盐霉素也减少K562/Glv细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素不仅通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导耐格列卫人慢性粒细胞白血病细胞K562/Glv的凋亡,而且通过抑制Wnt信号途径抑制K562/Glv细胞增殖。     

顺铂和阿霉素联合抑制舌鳞癌Tca8113细胞增殖

目的 观察顺铂和阿霉素联合作用对人舌鳞癌Tca8113细胞生长的抑制作用,以及对细胞周期和凋亡的影响.方法 不同浓度顺铂、阿霉素及两者联合作用于人舌鳞癌Tca8113细胞,用MTT法观察细胞增殖情况以及药物对细胞生长的抑制效应.用流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期.结果 顺铂(r=0.538,P<0.01)和阿霉素(r=0.642,P<0.01)呈剂量和时间依赖性抑制Tca8113细胞生长.单独用1.25 μmol/L阿霉素作用24 h,对Tca8113细胞的生长无显著影响.不同浓度顺铂(2～10mg/L)单独作用24 h,仅10 mg/L浓度可显著抑制Tca8113细胞的生长(P<0.01).1.25 μmol/L阿霉素与顺铂联合应用24h后,4、6、8、10mg/L顺铂均可显著抑制Tca8113细胞生长,且与相应浓度的单独用药组比,差异均有统计学意义(均为P<0.001).1.25 μmol/L阿霉素、6 mg/L顺铂以及阿霉素1.25 μmol/L+顺铂6 mg/L均显著改变G_0～G_1期(50.00±0.32%,43.53±2.026%.50.77±3.83%)和s期(36.5±1.05%.40.8±2.52%,30.87±2.65%)细胞百分比(均为P<0.01),联合用药的作用较单一用药组更显著(P<0.05).上述药物对细胞凋亡的作用均不明显,联合用药后坏死细胞比例明显增加.结论 顺铂和阿霉素联合作用,可显著地抑制人舌鳞癌细胞分化增殖,并增强药物的细胞毒性作用.     

抑制白血病K562细胞FoxM1表达可增强细胞对高三尖杉酯碱的敏感性

目的:探讨抑制白血病K562细胞叉头框蛋白M1(Fox M1)是否增强细胞对高三尖杉酯碱(HHT)的敏感性。方法:HHT以不同浓度(0、0.015、0.030和0.045μmol/L)和最低起效浓度不同时间(0.015μmol/L,0、24、48和72 h)作用于K562细胞,real-time PCR和Western blot检测Fox M1 mRNA和蛋白表达;以0.015μmol/L HHT作用K562细胞后转染Fox M1 siRNA,观察沉默K562细胞Fox M1后细胞对HHT的敏感性、细胞增殖和凋亡效应以及Fox M1相关靶分子c-Myc和Sp1表达状况。结果:随着HHT浓度增加和时间延长Fox M1表达逐渐降低,说明HHT抑制K562细胞Fox M1表达;HHT处理K562细胞后转染Fox M1 siRNA,细胞生长和克隆形成显著下降,细胞凋亡增加,因此抑制Fox M1可增加K562细胞对HHT的敏感性;Fox M1 siRNA组c-Myc和Sp1表达显著降低,表明Fox M1可正性调控c-Myc和Sp1表达。结论:HHT可以抑制白血病K562细胞Fox M1表达,干扰Fox M1可增强细胞对HHT的敏感性。     

植物雌激素α-玉米赤霉醇对内皮祖细胞的促增殖效应

目的:观察植物雌激素α-玉米赤霉醇(α-ZAL)对内皮祖细胞(EPCs)增殖能力的影响并探讨其机制。方法:密度梯度离心法获取大鼠外周血单个核细胞,加用内皮细胞培养基EGM-2培养,免疫荧光染色和流式细胞术等进行EPCs鉴定,培养2～3代后用于实验。分别用10-5mol/LH2O2和磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)及下游靶蛋白Akt(PI3K/Akt)抑制剂LY294002处理细胞,并加用10-6和10-7mol/Lα-ZAL进行干预。检测EPCs上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性以反映细胞损伤情况,用MTT法、EPCs克隆数及细胞总数计数反映EPCs增殖情况,Westernbloting法检测Akt及磷酸化Akt(phosphor-Akt)蛋白表达。结果:经鉴定培养细胞为EPCs;10-5mol/LH2O2及PI3K/Akt抑制剂LY294002可明显降低EPCs存活率(P<0.05),减少细胞克隆,增加LDH活性(P<0.01);而加入10-6和10-7mol/Lα-ZAL干预后能减轻以上作用(P<0.05),同时10-6mol/Lα-ZAL能减少LY294002抑制EPCsAkt的表达和磷酸化。结论:α-ZAL能促进EPCs的体外增殖能力,其机制可能与激活PI3K/Akt信号通路有关。