组织芯片及其在肿瘤病理学研究中的应用

组织芯片是一类新型生物芯片，它可以快速、高效地对大量组织样本进行分析，在肿瘤病理学研究中已得到有效的应用。本就组织芯片的制备及其应用进行了综合讨论。     

组织芯片的Feulgen反应和免疫组化染色

组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissue microarray)技术，由Kononen等于1998年首先建立并报道，是将数十至上千个小组织整齐有序地排列在一张载玻片上而形成的缩微组织切片。组织芯片体积小，信息含量大，一次实验可获得大量结果，能用于HE常规染色、特染、免疫组化和原位杂交等各种染色技术，有广阔的应用前景。     

便携式组织点样仪在肿瘤病理诊断中应用

组织芯片（tissuechip）又称组织微阵列（tissue micmafray TMA）,是近年来新兴的一种标准化和高通量的组织学样本检测的生物芯片技术。由于组织阵列仪价格昂贵,我们尝试自己手工制作组织芯片,取得了一些经验,并完成“便携式组织点样仪和磁性平台组织点样仪”2项发明。现将其在肿瘤组织学研究中的应用介绍如下。     

组织芯片技术在原位杂交中的应用

组织芯片 (ｔｉｓｓｕｅｃｈｉｐ)是近年来新兴的一项生物芯片技术。本研究应用这一技术和原位杂交技术 (ｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａ ｔｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ,ＩＳＨ)检测 2 30例人体多种常见肿瘤中端粒酶ｈＴＥＲｍＲＮＡ和ｈＴＥＲＴｍＲＮＡ的表达。1　材料与方法1.1　标本来源　 2 30例标本均取自 1999年西安交通大学第二医院病理科外检人体标本 ,其中恶性肿瘤 2 0 7例 ,良性肿瘤 13例 ,正常对照组织 10例。1.2　组织芯片制备　按照本研究室建立的制备方法制备 4× 6规格的组织芯片 (容量为 2 3份组织样本 /张 )。其制备方法…     

不同保存条件下石蜡切片乳腺癌PR、ER和HER-2状态的变化

<正>在临床及科研工作中,经常要对石蜡组织进行预切片,其组织抗原性必然受到外界的影响。临床工作中,为了减少组织浪费,尤其是一些微小病变,进行组织切片时会保存一些未染色的切片;再者在利用组织芯片进行科研工作时,科研工作者也习惯将组织芯片连续切片,贴好片后保存。本文通过观察三种不同条件下长期保存的乳腺癌石蜡切片PR、     

细胞和细胞核微阵列的制作及其应用

组织微阵列（TMA）又称组织芯片（tissue chip）技术。基于其优点,新近学者们考虑能否将细胞也同样制成相似的阵列进行研究。我们利用打过孔的石蜡为模具,将培养悬浮的细胞和从石蜡包埋组织中提取的细胞核制成细胞和细胞核的微阵列,并将其用于荧光原位杂交（nuorescent in situ hybridization,FISH）、mRNA原位杂交、免疫细胞化学基因蛋白的检测,证明其效果良好,具有组织微阵列的优点。     

骨桥蛋白mRNA与转录因子OCT2 mRNA在胃癌组织中表达的组织芯片研究

我们应用组织芯片技术,通过原位杂交方法检测胃癌组织中骨桥蛋白（osteopontin,OPN）及转录因子OCT2的表达水平,探讨它们与胃癌各临床病理指标及预后的关系。     

胃癌组织中Snai2 mRNA的表达及意义

目的 检测Snai2 mRNA在正常胃黏膜及胃癌组织中的差异表达并探讨其意义.方法 新鲜胃癌组织30例, TRIzol法抽提总RNA,逆转录后Real-time荧光定量PCR检测Snai2 mRNA的表达;制备mRNA探针,在包含有100例胃癌和20例正常胃黏膜组织的芯片上进行Snai2 mRNA原位杂交,并对结果进行统计分析.结果 Real-time PCR显示在不同分化的胃癌组织中表达量不同,随分化程度降低,Snai2 mRNA表达量增加(P<0.05);组织芯片原位杂交结果表明Snai2 mRNA在癌组织中的阳性率(54.2%)高于正常胃组织(27.8%),其差异有统计学意义(P<0.05),在不同分化的胃癌组织中Snai2 mRNA的表达也随分化程度的降低,Snai2 mRNA的阳性率逐渐增加,但差异无统计学意义(P>0.05) .结论 Snai2可作为一个在分子水平上确定胃癌恶性程度和疾病进展及预后的生物学标志.     

肝细胞癌中microRNA-375调控的基因网络分析

 目的: 探讨肝细胞癌中miR-375的表达及其调控的相关靶基因和信号通路。方法: 采用原位杂交检测miR-375在人肝癌组织芯片的表达情况;人全基因组表达谱芯片检测4株肝癌细胞株;MAS生物信息学软件筛选miR-375调控靶基因及相关信号通路。结果: 原位杂交结果显示miR-375在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P < 0.05);人全基因组表达谱芯片结果分析显示4株转染miR-375的肝癌细胞的共上调基因有20个,共下调基因有17个;MAS生物信息学软件分析显示4株转染miR-375的肝癌细胞共有的上调信号通路有54条,下调信号通路有48条。结论: miR-375与肝细胞癌有密切的关系。对miR-375调控的肝细胞癌相关靶基因与信号通路进行多元化筛选,为后续全面深入的研究肝细胞癌发生发展的机制提供了便利。     

miR-145在乳腺癌中表达及意义

目的 研究一种微小RNA(miR-145)在人乳腺癌及乳腺良性病变组织中的表达,分析miR-145的表达与乳腺癌临床病理特征的关系及其对乳腺癌发生发展的意义.方法 采用组织芯片平台,应用原位杂交方法 检测91例乳腺癌和38例乳腺良性病变组织(包括21例纤维腺瘤,17例乳腺腺病)miR-145表达.结果 乳腺癌miR-145高表达率较乳腺良性病变降低(31.9%和60.5%,P<0.01);乳腺癌miR-145高表达率与肿瘤腋淋巴结转移(P<0.01),TNM高分期(P<0.05),c-erbB-2过表达(P<0.01)状况均相关;乳腺癌miR-145表达与患者年龄、肿瘤大小、组织学分级、ER、PR均无相关性(均P>0.05).结论 miR-145表达异常可能参与了乳腺癌的发生、发展过程,是一个潜在的乳腺癌分子标记物.     

白蛋白RNAscope原位杂交检测在肝细胞癌诊断及鉴别诊断中的价值

目的:探讨白蛋白RNAscope原位杂交检测在肝细胞癌诊断及鉴别诊断中的价值。方法:选取上海交通大学医学院附属瑞金医院病理科2013年1月至2019年12月病理数据库中存档的152例肿瘤组织（包括肝细胞癌及组织形态与其相似的肿瘤）和33例不同部位肿瘤旁正常组织蜡块,制成组织芯片,使用RNAscope原位杂交法检测白蛋白...     

大鼠脑组织原位杂交染色的几点体会

近年来，原位杂交技术的发展和方法的不断改进，已广泛地应用于组织内的靶RNA定量定位分析。但由于组织的来源不同，进行原位杂交染色组织的各期处理也不尽相同，尤其是脑组织中其含大量磷脂成分，质地柔软，原位杂交染色一直难以取得令人满意的结果。本实验室采用大鼠脑缺血模型进行caspas-3原位杂交染色，结果较为理想。     

乳腺癌miRNAs表达谱的检测

目的检测人乳腺癌石蜡组织及人乳腺癌细胞株中miRNAs的表达情况,初步筛选人乳腺癌miRNAs表达谱。方法(1)应用组织微阵列平台,采用原位分子杂交技术对91例人乳腺癌和26例癌旁乳腺组织标本42种miRNA进行检测;(2)培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和正常乳腺上皮细胞株HBL-100,分别抽提细胞总RNA,分离小分子RNA,荧光标记后与miRNAs微阵列杂交,通过芯片扫描和数据分析,获得人乳腺癌miRNAs表达谱。结果(1)与癌旁乳腺组织相比,14种miR-NAs在乳腺癌组织中的表达发生了显著变化(P0.05),其中9种表达上调,5种表达下调。(2)利用miRNAs微阵列,筛选获得71种与人乳腺癌相关miRNAs,与正常乳腺上皮细胞相比,34种miRNAs表达上调,37种表达下调。结论筛选出与乳腺癌相关的差异表达miRNAs,为进一步研究其在乳腺癌中的作用奠定基础。     

应用组织芯片技术研究甾体类受体共激活因子3基因在卵巢癌的扩增与表达

目的 应用组织芯片技术研究甾体类受体共激活因子3(SRC-3)基因在卵巢癌组织中的扩增与蛋白表达及其临床意义.方法 选取1995-2005年间在中山大学附属肿瘤医院和附属第一医院妇科接受手术治疗的卵巢癌患者150例,回顾分析患者临床病理资料.使用两点法制作含有150例卵巢癌的组织芯片.同时选取30例正常卵巢组织作为实验对照组.运用荧光原位杂交、免疫组化方法,对组织芯片中的组织库进行SRC-3基因的扩增与蛋白表达检测,结合肿瘤的临床病理学资料,分析它们之间的关联.结果 在150例卵巢癌组织芯片中,有128例肿瘤成功进行了免疫组化检测,其中46例(35.9%)出现SRC-3蛋白的过度表达,而且与肿瘤的Silverberg氏分级和FIGO分期均有显著的关联(P<0.05),其中45.1%的Silverberg氏G2/3级和46.0%的FIGOⅢ/Ⅳ期卵巢癌出现SRC-3蛋白的过度表达,其阳性率明显高于G1级(13.5%)和FIGO Ⅰ/Ⅱ期(14.6%)的肿瘤.在FISH检测中,9.1%的卵巢癌出现SRC-3基凶扩增,且全部出现SRC-3蛋白的过度表达;而在SRC-3基因无扩增的卵巢癌中,仍有28.6%的肿瘤检测到SRC-3蛋白的过度表达.结论 组织芯片技术是基因扩增与蛋白表达分析的高效准确可靠手段.SRC-3蛋白的过度表达可以作为预示该卵巢癌恶性程度的分子标记之一;在SRC-3的蛋白表达调控中,可能存在着SRC-3基因扩增以外的其它调节机制.     

胃肠道间质瘤中Ezrin过表达的临床病理学意义

目的应用组织芯片技术检测Ezrin在胃肠道间质瘤(gastrointe stinals tromal tumors,GIST)中的过表达情况,并分析其临床病理学意义。方法采用免疫组化及原位杂交法检测组织芯片中42例GIST组织Ezrin蛋白和mRNA的过表达情况,并进行数据统计分析。结果在42例GIST组织中,21例有Ezrin蛋白的过表达(50%),16例有Ezrin mRNA的过表达(38%);Ezrin蛋白和mRNA在发生于非胃部位的GIST及出现浸润转移的患者中过表达更明显(P0.05);此外Ezrin蛋白的过表达在肿瘤大小分组及恶性潜能分级、临床分期中有差异,差异有统计学意义(P0.05);Ezrin蛋白和mRNA表达呈正相关(r=0.392,P0.05)。结论 Ezrin可能参与了GIST的浸润转移过程,并可能成为预测GIST转移的重要指标;免疫组化检测Ezrin蛋白的过表达可以作为评估GIST恶性潜能及肿瘤进展的指标。     

肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨

目的：探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法，以及在基因表达分析中的应用。方法：选取肺癌石蜡包埋组织90例，新鲜液氮冻存肺癌及癌旁组织20例，常规切片HE染色下确定穿刺部位，石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法（1998），每例穿取0.6mm组织柱2条，制备180点阵组织芯片；而新鲜组织芯片参考Fejzo等方法（2001），并略作改良，制备50点阵组织芯片。所有组织芯片模块，经4цm切片、常规组织学染色和免疫组化染色，以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性。结果：180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片，组织排列整齐，HE染色后组织形态可观察率在98%以上；p53、c-myc、bcl-2、bax和Ki-67等免疫组化染色后，肺癌组织可见不同程度的抗原表达，组织点阵的形态可观测率在89%-95%之间。新鲜组织芯片经HE染色后，形态可观测率和基因表达可分析率在70%左右。结论：手工法组织芯片制备简便易行，使用组织少，不破坏原蜡块；实验均一性、可比性好，且节省试剂。与常规组织切片相比，2点0.6mm组织可以获得原蜡块95%以上的信息，完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析；新鲜组织芯片技术已经初步建立，但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA分析方法。     

宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒DNA的原位杂交研究

应用地高辛标记的ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ探针分别在４８宫颈癌组织上进行原位杂交检测ＨＰＶＤＮＡ，结果ＨＰＶＤＮＡ阳性２３例，其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ例，ＨＰＶ１８ＤＮＡ４例，未见ＨＰＶ６ＤＮＡ和ＨＰＶ１１ＤＮＡ阳性，ＨＰＶＤＮＡ主要见于凹空细胞和癌细胞的细胞核中，少部分见于癌细胞浆中，我们的结果表明原位杂交可用来研究宫颈组织中ＨＰＶ的存在及分型，同时也证实了宫颈癌的发生和某些     

应用非同位素原位杂交检测肝组织中丙型肝炎病毒…

为了研究丙型肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因的分布，我们应用地高辛标记的ＨＣＶ基因５’端非翻译区的探针（长度为３２个寡核苷酸）。对２４例急、慢性丙型肝炎患者活检的肝组织石蜡包埋切片进行了原位核酸杂交检测。结果显示：ＨＣＶ基因阳性的肝组织标本有１１例，检出率是４５．８％（１１／２４）。ＨＣＶ基因主要分布于肝细胞浆，偶见于肝细胞核内。此外在肝血窦的ｋｕｐｆｆｅｒ细胞，小血管内皮细胞和汇管区附     

荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用

荧光原位杂交（fhorescenceinsituhybridization．FISH）是近几年来由细胞遗传学、分子生物学及免疫学技术相结合而产生的一种新技术。由于其兼备了细胞遗传学与分子生物学技术，克服了使用单一细胞遗传学技术的局限性，故在产前诊断、基因定位、肿瘤细胞遗传学、临床遗传病检测等研究领域显示出重要应用价值。下面就有关荧光原位杂交的原理及在产前诊断中的应用作一简单介绍。所谓FISH即利用生物素（biotin）等标记的已知外源核酸作为探针，通过特定的碱基互补序列与玻片（包括组织切片、细胞滴片、染色体制片）上待测核酸进行原位杂交…     

血清HBV标志物阴性肾炎肾组织中HBV-DNA的原位杂交检测

目的 对血清HBV标志物阴性肾炎患者肾组织进行HBV—DNA的检测，为临床诊疗提供理论依据。方法 应用原位杂交（ISH）技术检测37份血清HBVAg阴性和18份血清HBVAg阳性的肾炎患者肾活检石蜡包埋组织切片中的HBV—DNA。结果 在血清HBVAg阳性的18例标本中HBV-DNA的检出率为88．9％（16／18），血清HBVAg阴性37例中检测出HBV—DNA5例（13．5％）。原位杂交显示两组检出的HBV-DNA均以肾小管上皮细胞质分布为主，与组织中HBVAg阳性颗粒的分布基本一致。结论 血清HBVAg阴性的HBV相关性肾炎临床上并非少见，应给予足够的关注。HBV—DNA在肾组织中的检出，表明HBV在HBV相关性肾炎的发病机理中有着重要作用。