人肝细胞癌组织中黄曲霉毒素定量分析的方法学研究

人肝细胞癌组织中黄曲霉毒素定量分析的方法学研究周元平１彭文伟１姚集鲁１何光耀２倪尔葭３胡萍春黄曲霉毒素（ＡＦ）是一组真菌毒素，自六十年代发现以来，已一再在动物实验中证实ＡＦ可诱发肝癌，其中致癌性最强的是黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）［１，２］。本研究试图...     

去黄曲霉毒素灵在肝癌高发现场的试用

去黄曲霉毒素灵在肝癌高发现场的试用涂文升刘宗河黎远冬黎丹戎陈艳华杨寅中关键词黄曲霉毒素Ｂ１去黄曲霉毒素灵肝癌高发区中图号Ｒ７３０．２３Ｒ７３－３１黄曲霉毒素Ｂ１（简称ＡＦＢ１）与肝癌发生的关系十分密切。已为大量的流行病学调查资料和动物实验所证实。广...     

铜锌-超氧化物歧化酶在肝癌组织中的异常表达及意义

目的：观察铜锌-超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）mRNA和蛋白在黄曲霉毒素B1（AFB1）诱发树的肝细胞癌（HCC）形成过程中的表达变化，并对其在人肝癌组织中的表达情况进行验证和对比，探讨CuZn-SOD在肝癌形成中的作用。方法：应用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）和免疫组化方法检测35例AFB1诱发的树鼩肝癌、癌旁以及这些动物癌发生前自身的活检肝组织和相应对照组织中CuZn-SOD基因在mRNA水平和蛋白水平的表达情况，并且在35例人肝癌和癌旁组织进行验证。结果：CuZn-SOD mRNA和蛋白在树鼩肝癌组织的表达水平不仅明显低于癌旁及癌前组织，也明显低于实验组虽经AFB。处理但最终未发生肝癌的动物以及正常对照动物的同期活检肝组织。人肝癌组织的CuZn-SOD mRNA和蛋白表达情况与树鼩相似，癌组织的阳性表达率和表达水平均明显低于癌旁组织，并且分化较低的肝癌组织的蛋白表达水平下调更显著。结论：CuZn-SOD可能是肝癌发生的相关基因之一，它在mRNA水平和蛋白水平的表达下降与肝癌的发生发展可能互为因果。     

单剂量黄曲霉毒素B1致大鼠肝癌作用的短期实验模型

本文报告单剂量黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）致大鼠肝癌作用短期实验模型的研究。６周龄、雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠，经腹腔一次性注射不同剂量（０、０．５０、０．７５、１．００和１．５０ｍｇ／ｋｇ体重）的ＡＦＢ１，作为启动剂，两周后，饲以含０．０１５％的２－乙酰氨基芴（２－ＡＡＦ）饲料４周，实验第三周末，施行肝大部分切除术（ＰＨ）。所有动物于实验第６周处死，取肝组织作Ｇａｍｍａ－谷氨酰转肽酶（ＧＧＴ）化学染色，     

人c－myc基因辅助黄曲霉毒素B1体外转化大鼠肝上皮细胞

人ｃ－ｍｙｃ基因辅助黄曲霉毒素Ｂ１体外转化大鼠肝上皮细胞袁宝珠，孙宗棠我们利用基因转染技术，探索黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）在人ｃ－ｍｙｃ基因辅助下，转化体外原代大鼠肝上皮细胞的可能性。首先，我们利用ＥｃｏＲＩ和ＫｐｎＩ将人ｃ－ｍｙｃ基因从ｐＢＲ３２２...     

启东肝癌病人GSTu基因缺失频度初步观察

启东肝癌病人ＧＳＴｕ基因缺失频度初步观察励雁峰，吴万垠，张学理，旷双远，万曙光，钱耕荪（上海市肿瘤研究所上海２０００３２上海医科大学肿瘤医院上海２０００３２）启东是我国肝癌高发区，黄曲霉毒素（ＡＦＢ１）污染被认为是重要因素之一，并认为ＡＦＢ１是造成启...     

华北地区肝细胞癌中抑癌基因P＿（53）的突变

华北地区属黄曲霉毒素低含量区，而乙肝病毒感染则普遍，本实验对该地区２４例石蜡包埋人肝癌和癌旁组织的Ｐ５３蛋白（突变型）进行了免疫组化（ＡＢＣ法）检测。结果显示３３．３％（８／２４）肝癌及其癌旁组织为阳性。说明肝癌抑癌基因Ｐ５３的突变不仅仅发生在黄曲霉毒素高含量区病人，其可能与乙肝病毒感染有关。     

原发性肝癌雄性激素受体的分布及其临床意义

为了进一步探讨雄性激素受体作为肝癌标志物的意义，作者用受体放射性配基结合分析法（ＲＢＡ）测定了６３例行手术治疗的肝癌组织、癌周组织及７例无肝硬化的非肝癌肝组织的雄性激素受体含量，并结合临床资料进行统计分析。结果显示：（１）肝癌组织、癌周组织和非肝癌肝组织中存在雄性激素受体。（２）肝癌组织与癌周组织中雄性激素受体含量无显著差别，但肝癌组织和癌周组织分别与非肝癌肝组织相比，雄性激素受体含量明显增高。（３）肝癌根治术后１年复发组的肝癌组织中，雄性激素受体含量较未复发组明显增高。实验结果提示，肝癌的发生可能与肝癌组织中雄性激素受体含量的升高有关，雄性激素受体与肝癌术后的复发有一定的关系。     

黄曲霉毒素人血清白蛋白加合物水平与肝癌的分子流行病学研究

目的探讨黄曲霉毒素人血清白蛋白加合物（ＡＦＴ－ＨＳＡ）水平与肝癌危险的关系。方法对１９９６年在江苏省海门市进行的以人群为基础的病例对照研究对象６４对血清、一般人群中１９８７年和１９９２年分别采集的血清１２份和２４份，应用夹心酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）法测定黄曲霉毒素血清白蛋白加合物水平。结果病例组中加合物水平明显高于对照组（ｔ＝３．５０９８，Ｐ＜０．００１），且肝癌危险度随加合物水平升高而明显增高（χ２趋势＝１５．１４２，Ｐ＝０．０００１）。比较１９８４年、１９９２年和１９９６年当地居民加合物水平，１９９２年和１９９６年明显下降。结论改粮使得当地居民摄入黄曲霉毒素量有所下降，但黄曲霉毒素污染仍可能是当地肝癌高发的危险因素之一。     

HBV和AFB1在树Qu肝癌发生中的作用

目的：探讨乙肝病毒（ＨＢＶ）和黄曲霉素素Ｂ１（ＡＦＢ１）在肝癌形成中的作用及机理。方法：用免疫组化、原位杂交及印迹杂交检测树Ｑｕ肝和肿瘤组织。结果：两次实验中,感染ＨＢＶ又摄入ＡＦＢ１的Ａ组树Ｑｕ肝细胞癌（ＨＣＣ）发生率分别为５２．９４％和６６．７％,单纯感染ＨＢＶ的Ｂ组分别为１１．１％和０,只摄入工的Ｃ组分别为１２．５％和３０％,空白对照组Ｄ均无ＨＣＣ发生。Ａ组ＨＣＣ的发生率均显著高于各组（Ｐ〉     

逆转录病毒介导人细胞色素p450IA＿2cDNA在V79细胞中稳定表达及其代谢活化黄曲霉毒素B＿1

逆转录病毒介导人细胞色素ｐ４５０ＩＡ＿２ｃＤＮＡ在Ｖ７９细胞中稳定表达及其代谢活化黄曲霉毒素Ｂ＿１袁宝珠，孙宗棠目前认为黄曲霉毒素Ｂ１（ＡｆｌａｔｏｘｉｎＢ１，ＡＦＢ１）是肝细胞致癌剂，它经肝细胞内微粒体细胞色素ｐ４５０代谢活化成最终致癌剂。为了加强...     

转化生长因子在原发性肝癌的表达及其意义探讨

目的：探讨转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）与原发性肝癌（ＰＨＣ）发生发展的关系。方法：采用ＴＧＦ－β１多克隆抗体对２９例人原发性肝癌组织进行ＡＢＣ免疫组化标记,并做半定量分析。结果：在２５例肝细胞肝癌中ＴＧＦ－β１表达显著高于正常肝组织及癌旁组织。高危转移组患者其表达明显高于低危转移组。     

OLT对AFB1致树Qu肝癌前病变的化学预防作用

目的：应用树Ｑｕ进行Ｏｌｔｉｐｒａｚ（ＯＬＴ）对黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）的化学预防研究。方法：实验树Ｑｕ按不同处理方法分为４组：Ａ组：正常对照;Ｂ组：ＡＦＢ１;Ｃ组：ＡＦＢ１＋药１（ＯＬＴ７次／周,共５周）;Ｄ组：ＡＦＢ１＋药２（ＯＬＦ１次／周,共５周）。动物处死后肝细胞作低温石蜡连续切片,分别染γ－ＧＴ、ＧＳＴ－Ｐ及ＨＥ。结果：Ｃ组与Ａ组树Ｑｕ肝内均有较多沿汇管区分布的γ－ＧＴ阳性肝细胞群;而     

CYP3A4在黄曲霉毒素B1诱发大鼠肝癌过程中的表达及意义

探讨CYP3A4在黄曲霉毒素B1（AFB1）实验诱发大鼠肝癌过程中的活性变化及其在肝癌发生过程中的意义。方法:雄性、4周龄、Wistar大鼠随机分为AFB1组和对照组;AFB1组腹腔注射AFB1,对照组则给与溶媒二甲基亚砜。在诱发肝癌过程中,分别于第13、23、33、43、53、63周对大鼠进行肝活检;实验至第73周处死全部动物取肝组织;利用大鼠肝组织微粒体混合酶体外代谢体系,采用荧光分光光度定量法动态检测肝标本中CYP3A4酶活性。结果:AFB1组肝细胞癌发生率为58.8%（10/17）;对照组肝细胞癌发生率为0（0/16）,两组间肝癌发生率比较,AFB1组显著高于对照组（P=0.001）。两组大鼠肝组织代谢酶CYP3A4活性都有不同程度的变化。肝组织CYP3A4活性从13 w开始逐渐升高,至23 w达顶峰,然后逐渐降低,到43 w又升高,出现双波峰变化;从13 w至53 w不同时段AFB1组肝组织CYP3A4活性显著低于对照组（P<0.01）。但是至63 w时AFB1组肝组织CYP3A4活性基本接近对照组（P=0.5086）。结论:CYP3A4活性在AFB1诱癌过程中受到抑制,可能是由于癌变早期的细胞减少对致癌物质的活化有关;CYP3A4活性在AFB1诱癌过程中的表达起伏变化,是由于基因多态性较大程度上影响蛋白表达水平的结果。      

肝癌组织中细胞间粘着分子—1的表达与肝癌侵袭转移关系的研究

目的研究肝癌组织中细胞间粘着分子－１（ＩＣＡＭ－１）的表达与肝癌侵袭转移的关系。方法采用斑点印迹方法测定ＩＣＡＭ－１在肝癌组织、癌旁组织及正常肝组织中的表达，分析其与肿瘤生长转移状态和肿瘤特性的关系。结果肝ＩＣＡＭ－１的含量在肝癌组织中明显高于癌旁组织（Ｐ＜０．０１）和正常组织（Ｐ＜０．０１），而与肿瘤大小和有无包膜无关（Ｐ＞０．０５）。有转移组肝癌组织中ＩＣＡＭ－１的表达明显高于无转移组，而癌旁组织中两组无差别。结论ＩＣＡＭ－１有可能作为预测肝癌转移、复发及预后的指标。     

MCM7蛋白在人大鼠树鼩肝癌组织中的表达和意义

  目的  应用跨种属策略研究MCM7蛋白在人、大鼠、树鼩3个不同种属肝癌、癌旁组织及正常肝组织中的表达,探讨MCM7与肝癌发生发展的关系及临床意义。  方法  应用Western blot及免疫组织化学技术检测MCM7蛋白在人、大鼠、树鼩的肝癌、癌旁组织及正常肝组织中的表达并进行临床病理因素分析。  结果  Western blot结果显示,MCM7蛋白在人和大鼠肝癌组织中的表达水平显著高于对应癌旁及正常肝组织（P均 < 0.05）,在树鼩肝癌组织中MCM7蛋白的表达水平亦高于其癌旁组织及正常肝组织,但差异无统计学意义（P均>0.05）。免疫组织化学结果显示,MCM7蛋白主要在细胞核中表达,其在人、大鼠、树鼩肝癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁及正常肝组织（P均 < 0.05）;MCM7蛋白的表达水平与患者肝癌分期、肝外转移及术后复发相关（P均 < 0.05）。而3种属的癌旁组织与正常肝组织相比,两种技术检测结果显示差异均无统计学意义（P均>0.05）。  结论  MCM7蛋白在肝癌发生发展中可能起着关键分子的作用,并与人肝癌的临床分期,肝外转移及术后复发密切相关,有可能成为肝癌治疗的新靶点。      

黄曲霉毒素与肝癌关系

本文综述黄曲霉毒素与肝癌的关系,黄曲霉毒素暴露与p^53基因突变一致,AFB1解毒酶变异、AFB1加成物、p^53基因突变与肝癌发生有关。     

乙肝病毒和黄曲霉毒素与肝癌发生的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）和黄曲霉素素（ＡＦ）与肝癌发生的关系。方法 对５６２例ＨＢｓＡｇ阳性的肝癌高危人群和７１９例ＨＢｓＡｇ阴性的对照人群进行１０年前瞻观察,同时采用抗ＡＦＭ１高亲和力的单克隆抗体系统,以免疫浓和高压液相（ＨＰＬＣ）系列测定由２５例肝癌和１２５例非肝癌对象组成的病例对照人（１：５）尿中ＡＦＭ１排出量。结果 （１）ＨＢｓＡｇｂｊ ｎｔｇ ｘｅｇ ｅｆｈ ｕｋｋｍｗ ｒｈ ｆ     

LIVER TUMOUR PORMOTION BY MICROCYSTIN LR ANDAFLATOXIN B1 IN TWO-STAGE MEDIUM-TERM ANIMALTEST

为评价微囊藻毒素ＬＲ（ＭＣＬＲ）和黄曲霉毒素Ｂ＿１（ＡＦＢ＿１）对大鼠肝脏的促癌作用,采用二阶段中期动物试验模型进行了研究。６周龄雄性Ｆｉｓｈｅｒ３４４大鼠腹腔注射二乙基亚硝胺（ＤＥＮ,２０Ｏｍｇ／ｋｇ）作为起始剂,在第２周未腹腔注射ＡＦＢ＿１（０.５ｍｇ／ｋｇ）,第３周至第８周每周２次腹腔注射ＭＣＬＲ（ｌ或１０μｇ／ｋｇ）。所有大鼠在第３周末进行２／３部分肝切除,第８周末全部处死,通过在肝切片上测量单位面积肝组织中胚胎型谷胱甘肽８转移酶（ＧＳＴ－Ｐ）阳性灶的数量和面积作为肝脏癌前病变的指标。结果表明ＭＣＬＲ和ＡＦＢ＿１在ＤＥＮ起始下能显著增加ＧＳＴ－Ｐ阳性灶的数量和面积,ＭＣＬＲ单独作用也能显著增加ＧＳＴ－Ｐ阳性灶的面积,提示ＭＣＬＲ为大鼠肝脏的促癌剂,并且ＭＣＬＲ与ＡＦＢ＿１具有协同促癌作用。这对肝癌高发区动员居民改饮沟塘水为深井水有现实意义。     

茶多酚在树鼩肝癌形成中的化学预防作用

目的探讨茶多酚对黄曲霉素B1(AFB1)和乙型肝炎病毒(HBV)诱发树鼩肝细胞癌作用的影响.方法成年树鼩分成三组:A组(AFB1 HBV 茶多酚组)、B组(AFB1 HBV组)和C组(空白对照组),实验期间定期抽血检查HBV感染标志和进行剖腹手术取肝组织活检,观察各组肝癌发生率、肝癌出现时间、HBV感染持续时间,并采用免疫组化方法检测肝癌形成过程中p53、bcl-2、bax、survivin、GSTA1、SOD1、IL-2和SCF等蛋白在各组各时段的表达情况.结果在实验第90、105、120、135、150、165周各个时段中,A组的肝癌发生率均低于B组;A组首例肝癌出现时间及肝癌平均出现时间均晚于B组;A组HBV感染标志(HBsAg,HBeAg和HBcAb)的平均持续时间短于B组;在诱癌中期(实验第60周)及肝癌组织内突变型p53、凋亡抑制基因bcl 2和survivin蛋白的表达率均为A组低于B组.但上述差异在统计学上大部分无显著性.结论茶多酚对黄曲霉毒素B1和HBV诱发树鼩肝癌有一定程度的保护作用;可以促进树鼩体内的HBV感染标志的消除.茶多酚可能是通过促进终致癌物的解毒、抗氧化作用、提高免疫功能、诱导肿瘤细胞凋亡等途径起到预防树鼩肝癌的作用.