益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠Notch3和Frizzled2 mRNA及蛋白表达的影响

 目的： 探讨益气活血方和补肾生髓方对脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达及这2种蛋白在海马CA1区表达的影响。方法：线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,脑缺血2 h,再灌注1周,随机分为假手术组、缺血再灌注组、益气活血方组和补肾生髓方组。采用Notch信号通路基因芯片PCR Assay检测额顶叶皮质Notch3和Frizzled2 mRNA表达,免疫组化EnVision两步法检测海马CA1区Notch3和Frizzled2蛋白表达。结果：缺血再灌注组Frizzled2 mRNA表达显著高于假手术组（P<0.05）,益气活血方组Notch3 mRNA表达显著高于缺血再灌注组（P<0.05）,补肾生髓方组Frizzled2 mRNA表达显著低于模型组（P<0.05）,益气活血方组Frizzled2 mRNA表达显著高于补肾生髓方组（P<0.05）。缺血再灌注组Notch3 和Frizzled2蛋白表达均高于假手术组（P<0.05）,2种中药复方组Notch3和 Frizzled2蛋白表达均高于缺血再灌注组（P<0.05）,补肾生髓方组Notch3蛋白表达高于益气活血方组（P<0.05）。结论：益气活血方和补肾生髓方能通过增强额顶叶或海马CA1区Notch3 mRNA及蛋白表达,降低Frizzled2 mRNA及蛋白表达,调节Notch信号转导通路,促进脑损伤修复。     

姜黄素降低局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质缺血半暗带神经元丢失

目的探讨姜黄素减轻局灶脑缺血/再灌注损伤的可能机制。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(tMCAO)和姜黄素组(Cur,100 mg/kg腹腔注射)(n=15)。于再灌注后24 h,用Longa评分评价大鼠神经功能;RT-qPCR检测大脑皮质缺血半暗带内Shh、Ptc和Smo mRNA含量;免疫荧光共聚焦检测大脑缺血半暗带内NeuN阳性细胞数量和Gli蛋白在细胞内分布。结果再灌注后24 h,Cur组大鼠Longa评分明显低于tMCAO组(P0.05);Cur组大脑皮质缺血半暗带内NueN阳性神经元较tMCAO组明显增多(P0.05);与sham相比,tMCAO组大脑皮质半暗带内Shh、Ptc和Smo mRNA表达明显升高(P0.05),Cur组上述mRNA进一步升高(P0.05);sham组缺血半暗带内Gli-1蛋白主要分布在细胞质,缺血后Gli-1蛋白部分转位至细胞核,Cur组Gli-1蛋白主要分布在细胞核。结论姜黄素治疗可促进局灶脑缺血/再灌注模型大鼠神经功能恢复,减少大脑皮质缺血半暗带内神经元丢失。     

羟基红花黄素A对脑缺血再灌注后缺血半暗带自噬活性的调节作用

目的:探讨脑缺血再灌注后羟基红花黄素A(hydroxysafflor yellow A,HYSA)对缺血半暗带自噬活性的调控机制。方法:构建雄性SD大鼠脑缺血90 min再灌注模型,分为假手术组、脑缺血再灌注(cerebral ischmia/reperfusion,I/R)组、I/R+HSYA组和假手术+HSYA组,分别在再灌注后6 h、1 d、3 d和7 d对大鼠进行改良神经功能缺损评分(modified neurological severity score,m NSS),同时检测缺血半暗带的自噬活性、凋亡及干扰素β(IFN-β)表达。结果:与假手术组比较,I/R组缺血半暗带在6 h~7 d内可见LC3-Ⅱ蛋白表达增高及SQSTM1/P62蛋白降解,提示自噬激活;与I/R组比较,I/R+HSYA组的自噬活性在1 d和3 d时明显升高(P0.05),7 d时则明显降低(P0.05)。同时,I/R组的IFN-β表达较假手术组在6 h时升高(P0.05),1 d和3 d时降低(P0.05),7 d时恢复正常;而I/R+HSYA组的IFN-β表达在1 d和3 d时明显高于假手术组和I/R组(P0.05),并且3 d时的细胞凋亡少于I/R组,m NSS评分自4 d起明显低于I/R组(P0.05)。结论:HSYA可动态调节缺血半暗带的自噬活性和IFN-β表达,从而改善脑缺血再灌注损伤。     

脑络欣通及其拆方对脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Fas、Fas L蛋白及皮质Fas mRNA表达影响的实验研究

目的： 探讨脑络欣通及其拆方对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA1区Fas、FasL蛋白及皮质Fas mRNA表达的影响。方法： 采用线栓法大鼠大脑中动脉阻塞复制局部脑缺血再灌注模型,缺血2 h分别再灌注 1 d、3 d、7 d，随机分为假手术组、模型组、益气药组、活血药组和脑络欣通组。应用免疫组化和原位杂交法,观察缺血侧海马CA1区Fas、FasL蛋白及额顶叶皮质Fas mRNA表达。结果： 局灶性脑缺血再灌注后,缺血侧海马CA1区Fas、FasL蛋白表达平均吸光度值比假手术组增强(P＜0.01），额顶叶皮质Fas mRNA表达平均吸光度和阳性面积值强于假手术组(P＜0.01），脑络欣通组Fas、FasL蛋白和Fas mRNA表达各时段均显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01)；其拆方益气药、活血药组于3 d、7 d显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01)；脑络欣通组于3 d或/和 7 d 显著低于其拆方益气药、活血药组(P＜0.05或P＜0.01)。结论： 脑络欣通及其拆方益气药、活血药可通过抑制海马CA1区Fas、FasL蛋白和Fas mRNA表达，抗局部脑缺血再灌注神经细胞的凋亡，减轻病理性损伤。     

醒脑静注射液对全脑缺血再灌注大鼠血脑屏障ZO-1表达的影响

目的:探讨醒脑静(XNJ)注射液对大鼠全脑缺血再灌注后血脑屏障通透性及紧密连接蛋白1(ZO-1)表达的影响。方法:采用改良Pulsinelli四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血再灌注模型。将雄性Wistar大鼠随机分为4组,即假手术组、全脑缺血再灌注模型组、溶剂对照组和XNJ组。每组均在缺血再灌注后24 h、48 h和72 h处理。用干湿重法测定脑组织中水含量,分光光度计法检测脑组织伊文思蓝(EB)含量,Western blot检测大脑皮层的ZO-1蛋白含量。结果:缺血再灌注后24 h,模型组、溶剂对照组和XNJ组的脑组织含水量均显著高于假手术组(P0.05),但在缺血再灌注后48 h和72 h,模型组和溶剂对照组脑组织含水量显著高于XNJ组和假手术组(P0.05)。缺血再灌注后24 h,模型组、溶剂对照组和XNJ组大鼠脑组织内EB含量均高于假手术组(P0.05),缺血再灌注后48 h和72 h,假手术组和XNJ组的EB含量显著低于模型组和溶剂对照组(P0.05)。缺血再灌注后24h,模型组、溶剂对照组和XNJ组大鼠脑皮层中的ZO-1蛋白表达水平显著低于假手术组(P0.05),同样缺血再灌注后48 h和72 h,假手术组和XNJ组皮层中ZO-1蛋白含量显著高于模型组和溶剂对照组(P0.05)。结论:在缺血再灌注后的48 h和72 h,醒脑静注射液对血脑屏障具有保护作用,可能与醒脑静注射液上调ZO-1蛋白的表达有关。     

Notch-1/NICD信号在普罗布考保护大鼠急性脑缺血后再灌注损伤中的作用

目的:研究普罗布考对大鼠急性脑缺血再灌注损伤后大脑的保护作用及其与Notch--1/Notch胞内域(NICD)蛋白信号通路的关系。方法:SD大鼠随机分为假手术组、缺血组及普罗布考组。采用大脑中动脉闭塞(MCAO)法建立局灶性脑缺血再灌注模型,经普罗布考腹腔注射处理后,采用转角试验判断神经功能,2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法测量脑梗死体积,干湿法测定脑组织含水量,免疫印迹检测Notch-1和NICID蛋白的表达,免疫酶联反应检测血清中炎症因子白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:普罗布考可改善急性脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能,减轻脑水肿;与缺血组相比,普罗布考治疗组Notch-1/NICD蛋白表达降低,IL-8和TNF-α分泌也相应减少。结论:普罗布考可激活Notch-1/NICD信号通路,进而调节IL-8和TNF-α的表达,发挥对急性脑缺血再灌注损伤脑的保护作用。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质IL-1β表达的调控作用

目的:探讨外源性神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响.方法:线栓法制作大鼠局灶性腩缺血再灌注模型,应用免疫组织化学显色、免疫印迹分析方法,结合图像分析技术检测大鼠缺血侧顶叶皮质 IL-1β蛋白表达变化.结果:假手术组大鼠顶叶皮质IL-1β没有表达,缺血再灌注组顶叶皮质IL-1β蛋白在各时间点明显表达,IL-1β蛋白阳性产物的光密度值高于假手术组;NGF组IL-1β蛋白阳性产物的光密度值低于缺血冉灌注组.结论:脑缺血再灌注损伤后诱导 IL-1β蛋白表达,NGF 明显降低缺血再灌注大鼠顶叶皮质IL-1β蛋白表达,这可能是 NGF发挥神经保护作用的分子机制之一.     

Apelin-13对局灶性脑缺血再灌注后大鼠皮质Akt和磷酸化Akt表达的调节

目的探讨外源性Apelin-13对局灶性脑缺血再灌注大鼠皮质Akt及p-Akt表达的影响。方法 Wistar大鼠132只,按随机数字表法均分为假手术组、脑缺血再灌注组、脑缺血再灌注后Apelin-13干预组。线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,Moor VMS-LDF1激光多普勒血流仪检测模型组脑缺血前、后脑血流变化,免疫组织化学显色、免疫印迹分析方法检测顶叶皮质Akt和p-Akt表达变化。结果模型组大鼠脑缺血后脑血流量明显低于缺血前,脑缺血模型建立成功。缺血再灌注组皮质Akt表达较假手术组少,Apelin-13干预组皮质Akt表达高于缺血再灌注组。缺血再灌注组皮质pAkt表达高于假手术组,Apelin-13干预组p-Akt表达高于缺血再灌注组。结论外源性Apelin-13上调了脑缺血再灌注损伤大鼠皮质Akt和p-Akt蛋白表达。     

黄芪注射液抑制脑缺血再灌注大鼠海马组织Apaf-1表达

 目的： 观察黄芪注射液对脑缺血再灌注大鼠海马组织凋亡蛋白酶激活因子1（Apaf-1）蛋白及其mRNA表达的影响。方法： 将健康雄性SD大鼠120只随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、黄芪注射液干预组和溶剂对照组。采用四血管阻断法制备大鼠脑缺血再灌注模型,除假手术组外其余3组根据再灌注不同时点再分为0 h、0.5 h、2 h、6 h、24 h、72 h和120 h 7个亚组,于再灌注相应时点提取脑组织。采用免疫组织化学和Western blotting检测大鼠海马组织Apaf-1蛋白的表达,RT-PCR法检测Apaf-1 mRNA的表达。结果： 除0 h和120 h外,脑缺血再灌注组各个时点Apaf-1蛋白及mRNA表达均较假手术组增加 (P<0.05);与脑缺血再灌注组相比,黄芪注射液干预组各个时点Apaf-1蛋白及mRNA表达均显著减少 (P<0.05),而溶剂对照组各时点与脑缺血再灌注组相比则均无显著变化 (P>0.05)。结论： 黄芪注射液能抑制大鼠海马组织Apaf-1蛋白及mRNA表达,从而抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元的凋亡。     

大鼠脑缺血/再灌注过程中葡萄糖转运体1在缺血半影区的表达

目的:研究局灶性脑缺血大鼠在不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体1(GLUT1)转录水平和蛋白水平的表达。方法:用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用KontronIBAS2.5全自动图像分析系统进行图像分析脑梗塞体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),测定GLUT1mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化。结果:脑缺血1h后再灌注脑梗塞体积明显小于缺血3h再灌注。GLUT1mRNA自1h即开始升高,24h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3h再灌注组在3h开始升高,24h到高峰,1周后仍高于正常,但升高幅度不及MCAO1h/R组。MCAO1h/R组GLUT1蛋白水平自3h开始升高,24h达到高峰,1周时接近正常;MCAO3h/R组GLUT1在3h下降,继之升高,24h到高峰,1周时接近正常。结论:GLUT1在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血损伤的保护性反应。     

葡萄糖转运体3在脑缺血/再灌注后半影区表达的变化及意义

目的:研究大鼠局灶性脑缺血不同缺血时间和不同再灌注时间的脑梗塞体积比、皮质半影区葡萄糖转运体3(GLUT3)转录水平和蛋白水平的表达。方法:用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,用Kontron IBAS2.5全自动图像分析系统检测脑梗塞体积比;剥取缺血半影区皮质组织,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定GLUT3 mRNA水平的变化;用免疫组织化学方法半定量测定GLUT3蛋白水平的变化。结果:脑缺血1 h后再灌注组的脑梗塞体积明显小于缺血3 h再灌注组梗塞体积。GLUT3自3 h即开始升高,24 h到达高峰,1周时仍高于假手术对照组;缺血3 h再灌注组在3 h有一下降点,然后升高,24 h到高峰,1周时接近正常水平。GLUT3蛋白水平的表达与mRNA相符合。结论:GLUT3在缺血半影区的表达上调,可能是机体对缺血／再灌注的保护性反应。     

CGRP对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和p-CREB的上调作用

目的：探讨外源性降钙素基因相关肽（CGRP）对局灶性脑缺血再灌注大鼠顶叶皮质CREB和磷酸化CREB（p-CREB）表达的影响。方法:用线栓法阻塞大鼠右大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型，应用免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧顶叶皮质CREB和p-CREB表达。结果:缺血再灌注组大鼠顶叶皮质CREB表达少于假手术组，CGRP组大鼠顶叶皮质CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。假手术组右侧顶叶皮质p-CREB表达很少，缺血再灌注组顶叶皮质p-CREB表达多于假手术组，CGRP组p-CREB表达多于缺血再灌注组（P<0.05）。结论:CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠右侧顶叶皮质CREB和p-CREB的表达，CGRP对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的。     

bFGF对大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡及fractalkine表达的影响

目的: 观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠脑缺血再灌注缺血半暗带侧皮质区fractalkine表达的影响,进一步探讨bFGF的神经保护机制。方法: 应用栓线法建立大鼠脑缺血再灌注模型,36只实验大鼠随机分为3组:假手术组、缺血再灌注组和bFGF组,缺血1 h再灌注24 h后行神经功能评分,TTC染色测梗死面积,TUNEL法检测细胞凋亡数目,免疫组化检测fractalkine表达,并进行图像分析。结果: 缺血再灌注组及bFGF组的神经功能评分分别为3.18±0.65和2.23±0.59,两组比较P<0.05;假手术组、缺血再灌注组及bFGF组凋亡细胞数目分别为0.91±0.65、17.28±1.01及13.22±1.35,bFGF组的凋亡细胞数目较缺血再灌注组明显减少(P<0.05);假手术组、缺血再灌注组及bFGF组fractalkine表达量分别为101.26±1.13、113.17±1.35及107.25±3.25,与假手术组相比,缺血再灌注组fractalkine表达减少,bFGF组fractalkine表达量显著高于缺血再灌注组(P<0.05)。结论: bFGF的神经保护作用可能与其上调fractalkine表达水平有关。     

Pretreatment with simvastatin upregulates expression of BK-2R and CD11b in the ischemic penumbra of rats

Inhibitors of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductases, collectively known as statins, have been shown to minimize cerebral ischemic events in patients. We assessed the mechanisms of simvastatin pretreatment in preventing cerebral ischemia/reperfusion injury in rats using a model of middle cerebral artery occlusion (MCAO). Rats were pretreated with simvastatin 14 days prior to MCAO induction. At 3, 24, and 48 hours after reperfusion, bradykinin levels in the ischemic penumbra were assayed by ELISA, mRNA levels of bradykinin B2 receptors (BK-2Rs) and CD11b were measured by fluorescent quantitative real-time PCR (RT-PCR), and co-expression of microglia and BK-2Rs was determined by immunofluorescence. Simvastatin had no effect on bradykinin expression in the ischemic penumbra at any time point. However, the levels of BK-2R and CD11b mRNA in the ischemic penumbra, which were significantly decreased 3 hours after ischemia-reperfusion, were increased in simvastatin-pretreated rats. Moreover, the co-expression of BK-2Rs and microglia was confirmed by immunofluorescence analysis. These results suggest that the beneficial effects of simvastatin pretreatment before cerebral ischemia/reperfusion injury in rats may be partially due to increased expression of BK-2R and CD11b in the ischemic penumbra.     

阿托伐他汀对大鼠缺血再灌注脑组织中NADPH氧化酶源性超氧阴离子的抑制作用

目的：脑组织在缺血再灌注的早期，超氧阴离子的大量生成加重了脑组织损伤，本实验研究阿托伐他汀对缺血再灌注脑组织保护作用的可能机制。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠经线栓法阻断大脑中动脉建立脑缺血再灌注模型，再灌注前经腹腔给予阿托伐他汀（立普妥）治疗。脑梗死灶体积用四唑氮蓝染色后测量；NADPH氧化酶酶活性和超氧阴离子水平使用光泽精增强化学发光法定量测定；NADPH氧化酶膜亚基gp91phox、膜易位亚基p47phox和小GTP酶Rac-1蛋白的表达用蛋白质印迹分析。结果:缺血半暗区的NADPH氧化酶活性和超氧阴离子水平增高，于再灌注2 h达到高峰，但缺血中心区的NADPH氧化酶活性和超氧阴离子水平无明显增高。阿托伐他汀预治疗能抑制再灌注2 h后缺血半暗区的NADPH氧化酶活性和超氧阴离子增高，减少膜亚基gp91phox蛋白的表达和预防细胞质亚基p47phox蛋白易位至细胞膜。结论:阿托伐他汀对缺血再灌注脑组织NADPH氧化酶源性超氧阴离子的抑制作用，是其脑保护作用机制之一。     

高血糖和脑缺血对树鼩皮层不同区域VEGF表达的影响

目的：研究高血糖及局灶性脑缺血条件下,树鼩皮层不同区域VEGF表达的变化,探讨脑缺血、高血糖与VEGF之间的相互关系。方法：用链脲佐菌素复制树鼩高血糖模型,并建立光化学诱导皮层局灶性脑缺血,观察缺血4 h、24 h及72 h的病理形态学改变并计数海马神经元密度,用免疫组化法测定上述时间树鼩缺血中心区、半暗带、对侧皮层VEGF表达的动态变化。结果：形态学观察显示,光化学反应后4 h照射区皮层可见梗塞灶;24 h病损达高峰;72 h伴随胶质细胞增生等修复性反应。相应时点高血糖加缺血组的损伤大于缺血组,以缺血后24 h(P<0.01)和72 h(P<0.05)尤为显著。免疫组化染色表明,缺血后4 h皮层缺血半暗区可见VEGF表达增加, 24 h达高峰,72 h减弱;单纯高血糖也使VEGF表达上调;高血糖加缺血组VEGF表达强于单纯高血糖组(P<0.05),但高血糖加缺血组与缺血组的同期值比较,无显著差异。结论：(1)在低等灵长类动物树鼩体内注射链脲佐菌素,并结合血栓性局部脑缺血方法学的应用能成功复制出实验性高血糖及脑缺血模型;(2)实验证明高血糖对局灶性脑缺血有恶化加重作用;(3)脑缺血及高血糖均可分别作为独立因素诱导VEGF的表达;但缺血与高血糖相加对VEGF表达未显示出叠加效应。     

局灶性脑缺血预处理上调大鼠梗死区周围巢蛋白的表达

目的 观察局灶性脑缺血预处理(IP)对巢蛋白(NESTIN)表达的影响,探讨NESTIN与脑缺血耐受(BIT)的关系及可能的内源性神经保护机制.方法 45只SD雄性大鼠随机分为脑缺血预处理(CIP)组、大脑中动脉阻塞(MCAO)组、假手术(sham)组.采用TTC染色测定脑梗死体积,光镜下观察脑组织病理改变,免疫组织化...