血吸虫病免疫诊断抗原研究进展

血吸虫病仍然是我国重要的公共卫生问题之一，诊断抗原一直是血吸虫病诊断研究热点。随着分子生物学技术的发展，血吸虫病的诊断抗原已由最初的粗抗原发展成为组分抗原及由基因重组的方法生产合成的重组抗原。本文综述了近年来血吸虫免疫诊断抗原的研究进展，并分析了诊断抗原存在的问题及将来的发展趋势。     

抗巨细胞病毒pp65抗原单克隆抗体的制备及临床初步比对检测

目的：制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体并建立外周血巨细胞病毒抗原血症免疫荧光检测方法。方法 CM V AD169感染人胚胎肺成纤维细胞M RC‐5后24、48、72h ,超声波破碎和甲醛灭活制备CM V抗原,以及CMV pp65重组抗原免疫BALB／C小鼠,标准方法制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体。利用所得单克隆抗体建立检测外周血巨细胞病毒抗原血症检测的实验方法,并与进口试剂盒CM V BriteTM Kit进行比对。结果共有两株杂交瘤细胞产生特异性抗体,克隆名称为13D1‐3和29F1‐1,免疫球蛋白亚型分别是IgG1型和IgG2a型,制备的腹水抗体纯化后仍具有良好的免疫学特性。单克隆抗体13D1‐3与 CM V BriteTM Kit试剂盒比对,阳性符合率为88．8％,阴性符合率为98．9％,总符合率为97．3％,Kappa值为0．895,吻合度较高。结论成功制备抗巨细胞病毒pp65单克隆抗体,建立以13D1‐3单克隆抗体为基础的检测外周血巨细胞病毒抗原血症方法,与CM V BriteTM Kit试剂盒比对具有良好的符合性。     

以合成多肽为抗原检测EB病毒抗体的酶免疫测定法

用固相合成肽方法合成了３ 个ＥＢＶ多肽抗原， 建立了测定ＥＢ病毒抗体的酶免疫测定法。共测定４５ 份鼻咽癌病人血清标本， 阳性率为８９％ 。本方法观察结果方便， 操作简单， 试剂稳定。     

人工抗原提呈细胞研究进展

人工抗原提呈细胞(AAPC)多采用人工载体或异种动物细胞，化学交联或基因重组表达MHC：抗原肽复合物及共刺激分子，模拟T淋巴细胞活化信号在体外或体内活化T淋巴细胞。并通过人为控制AAPC上MHC：抗原肽复合物及共刺激分子的种类和数量，来实现对T淋巴细胞活化的调控，可用于对肿瘤或病毒感染性疾病的过继性细胞治疗、抗原提呈和T淋巴细胞活化信号的研究等。     

加热灭活对下呼吸道病毒抗原检测结果影响的初步研究

目的探讨采用56℃、30 min, 56℃、60 min, 60℃、30 min, 70℃、15 min加热灭活标本对直接免疫荧光法(DFA)检测7项下呼吸道病毒抗原检测结果的影响。方法收集2020年1月5日至4月29日64例因下呼吸道感染住院患儿的痰液标本进行7项呼吸道病毒抗原DFA检测,采用未灭活常规方法同56℃、30 min, 56℃、60 min, 60℃、30 min, 70℃、15 min加热灭活方法进行检测结果比较。结果通过未灭活常规方法检出39份阳性标本、25份阴性标本,同时采用56℃、30 min, 56℃、60 min, 60℃、30 min, 70℃、15 min加热灭活进行检测,阳性标本结果符合率为100.0%(39/39),阴性标本结果符合率为100.0%(25/25),加热灭活后与未灭活常规方法检测标本的结果具有极好一致性;对荧光显微镜下形态进行比较,阳性结果标本采用56℃、30 min, 56℃、60 min, 60℃、30 min加热灭活后与未灭活常规方法检测结果比较,阳性细胞荧光状态、阳性细胞数基本一致,采用70℃、15 min加热灭活后,阳性细胞数明显减少、阳性细胞荧光强度明显下降。结论采用加热灭活标本后再进行DFA检测下呼吸道病毒抗原实验,既能保证检测结果的一致性,同时可降低检验人员感染风险,保障实验室生物安全。     

人巨细胞病毒被膜磷蛋白pp65重组抗原酶联免疫吸附法的建立与两种方法的比较分析

目的用我们研制的一种新人巨细胞病毒(HCMV)重组被膜磷蛋白pp65为抗原，建立快速、简便和特异的检测HCMVIgM的间接酶联免疫吸附法(REC—EL．ISA)。方法用自行设计、表达的新的HCMV pp65重组抗原，建立REC—ELISA，并检测100份临床疑似为HCMV感染者血清中HCMV—IgM，同时与全病毒为抗原的间接ELISA法(简称全病毒一ELISA法)和美国BioCheck试剂盒(简称BioCheck法)检测结果进行比较。结果REC—ELISA法重组抗原最适量为3．5μg／孔，HRP标记二抗为1：800，血清稀释度为1：100；稳定性试验阳性变异系数(CV)为9．5％，重复性试验平均CV值：批内CV 4．5％，批间CV 9．6％。REC—ELISA法、全病毒-ELISA法和BioCheck法检测HCMV IgM的阳性率分别为44％、50％和45％；REC—ELISA法的敏感性为95．6％，其特异性(98．2％)高于全病毒-ELISA法(90．9％)；正确指数为92．8％，与BioCheck法一致性为97．0％。结论用pp65重组抗原建立的REC—ELISA法具有高度特异性与敏感性，且操作简单、快速，重复性好；与全病毒抗原相比，重组抗原可规模化、标准化生产，且更安全、经济，具有良好的临床应用前景。     

巨细胞病毒抗原性肽段的固相合成及其抗原性的初步评价

目的合成巨细胞病毒结构蛋白的强抗原性表位肽段,并对其抗原性进行初步评价。方法根据巨细胞病毒结构蛋白的抗原性表位,以Fmoc基团保护的氨基酸为原料,用固相多肽合成技术(SPPS)合成了具有强抗原性的部分肽段,以高效液相色谱技术鉴定纯化,并用酶联免疫吸附剂试验对其抗原性进行了初步评价。结果成功合成了包含巨细胞病毒的结构蛋白强抗原性表位的两个肽段,纯度达95%以上,并且具有很高的抗原性。结论固相多肽合成技术可以用于制备巨细胞病毒的抗原性表位肽段,并且所合成肽段具有良好的抗原活性,可以作为抗原用于巨细胞病毒感染的检测。     

EB病毒早期抗原合成的诱导

EB病毒早期抗原(EA)的抗体(EA—IgA和EA—IgG)测定,对鼻咽癌具有诊断和预后意义。为了建立EA抗体检测方法,特别是ELISA法,需激活EB病毒,诱导携带EB病毒基因组的非增殖性细胞株(Raji细胞)EA抗原的大量合成,增加其EA阳性细胞数。许多化学物质如正丁酸钠,抗人Ig、BUDR、IUDR、PHA、TPA和血清因子,均能诱导EA合成。其中以TPA合并正丁酸钠,IUDR及血清因子效果最好。TPA     

巨细胞病毒抗原性肽段的固相合成及其抗原性的初步评价

目的合成巨细胞病毒结构蛋白的强抗原性表位肽段,并对其抗原性进行初步评价.方法根据巨细胞病毒结构蛋白的抗原性表位,以Fmoc基团保护的氨基酸为原料,用固相多肽合成技术(SPPS)合成了具有强抗原性的部分肽段,以高效液相色谱技术鉴定纯化,并用酶联免疫吸附剂试验对其抗原性进行了初步评价.结果成功合成了包含巨细胞病毒的结构蛋白强抗原性表位的两个肽段,纯度达95%以上,并且具有很高的抗原性.结论固相多肽合成技术可以用于制备巨细胞病毒的抗原性表位肽段,并且所合成肽段具有良好的抗原活性,可以作为抗原用于巨细胞病毒感染的检测.     

人巨细胞病毒糖蛋白gp52的原核表达及初步应用

目的探讨以表达人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）中抗原性较强的蛋白片断代替全病毒抗原建立ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒的可行性。方法以聚合酶链反应扩增ＨＣＭＶ聚合酶辅助糖蛋白（ｇｐ５２）的有效抗原基因序列，导入带有高效转录启动子ｐＴｒｃ和６个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中表达，经金属鏊和亲和层析（ＩＭＡＣ）法纯化后，用酶联免疫吸附法检测新生儿血清，并与全病毒抗原检测进行比较。结果重组ｇｐ５２占大肠杆菌总蛋白的４０％，ＩＭＡＣ纯化后纯度达９４．５％。在４３份疑似ＨＣＭＶ感染的新生儿血清中阳性检出率为５１．２％，而用全病毒抗原检测阳性率只有２５．９％。结论ＨＣＭＶｇｐ５２蛋白具有良好的抗原性，可用于建立新一代的检测试剂盒。     

人巨细胞病毒糖蛋白gp52的原核表达及初步应用

目的 探讨以表达人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）中抗原性较强的蛋白片断代替全病毒抗原建立ＨＣＭＶ ＩｇＭ检测试剂盒的可行性。方法 以边反应扩增ＨＣＭＶ聚合酶辅助糖蛋白（ｇｐ５２）的有效抗原基因序列，导入带有高效转录启动子ｐＴｒｃ和６个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ，在大肠杆菌中表达，经金属鏊和亲和层析（ＩＭＡＣ）法纯化后，用酶联免疫吸附法检测新生儿血清，并与全病毒抗原检测进行比较。结果 重组ｇｐ５     

SARS病毒不同基因区抗原与SARS患者血清反应性的研究

目的研制非典型肺炎病毒(SARS病毒)不同基因区抗原,探讨SARS病毒感染机体不同基因区抗体免疫应答。方法根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质,运用计算机抗原表位预测技术,筛选4种SARS病毒主要抗原表位。合成抗原表位基因,克隆到表达载体pBVILl,在E．coli中表达S蛋白和N-蛋白,E-蛋白和M-蛋白为合成肽。结果用SARS病毒编码的S(Spike)蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白分别与46份SARS患者恢复血清反应,检测血清中IgG抗体,结果S蛋白、N-蛋白、E-蛋白和M-蛋白检出率分别为71．7％(33／46),89．13％(41／46),30．43％(14／46),52．17％(24／46)。结论感染SARS病毒病人血清中S蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白的免疫应答有显著差异。     

人工抗原提呈细胞研究进展

人工抗原提呈细胞(AAPC)多采用人工载体或异种动物细胞,化学交联或基因重组表达MHC:抗原肽复合物及共刺激分子,模拟T淋巴细胞活化信号在体外或体内活化T淋巴细胞。并通过人为控制AAPC上MHC:抗原肽复合物及共刺激分子的种类和数量,来实现对T淋巴细胞活化的调控,可用于对肿瘤或病毒感染性疾病的过继性细胞治疗、抗原提呈和T淋巴细胞活化信号的研究等。     

GFP标记的重组腺病毒在消毒效果评价中的应用研究

目的研究GFP标记的复制缺陷型腺病毒在消毒剂灭活病毒试验中应用的可行性。方法采用商品化Ad-easy系统经同源重组包装GFP标记的复制缺陷型腺病毒,扩增后进行荧光计数和复制缺陷性能检测,其作为指示病毒进行病毒灭活试验。结果腺病毒基因同源重组后转染AD-293细胞出现绿色荧光和细胞病变,成功包装出病毒颗粒,扩增后经荧光计数病毒滴度为4.20×10~6gfu/ml。盲传3代后,感染Vero细胞未出现荧光和细胞病变,表明无子代病毒的产生。以有效氯含量200 mg/L消毒剂作用于腺病毒20 min后,杀灭对数值为4.10。结论荧光标记的复制缺陷型腺病毒在含氯消毒剂对病毒杀灭能力检测评价中具有一定的可行性,更为高效和安全。     

流行性出血热病毒抗体酶免试剂盒的应用

流行性出血热（epidemic hemorrhagic fever，EHF）的实验室诊断主要是检测病人血清中的特异性抗体。采用EHF病毒重组抗原建立了测定EHF病毒抗体的ELISA方法，并对方法进行了考核。与用病毒提取物作抗原的酶免试剂盒对比检测临床标本，灵敏度与特异性均优于后者，精密度和稳定性均符合试剂盒的要求。该方法操作简单、试剂稳定，已制备成试剂盒在国内应用。     

T7噬菌体表达巨细胞病毒PP65蛋白抗原的初步研究

目的利用噬菌体展示技术构建巨细胞病毒基质蛋白PP65的抗原，初步评价其抗原性。方法PP65的基因片段经酶切后，与T7噬菌体的基因组相应酶切位点结合．借助包装蛋白组裴成为完整的噬菌体。PP65目的蛋白以融合蛋白的形式表达在T7噬菌体的头蛋白部位，每个噬菌体颗粒表面可表达5～15个拷贝。噬菌体可以在宿主细胞中快速繁殖，并且能够迅速裂解宿主细胞，使目的蛋白的富集达到很高的效率。人巨细胞病毒基质蛋白PP65可以激发机体强烈的免疫反应，运用T7噬菌体载体展示系统表达PP65的部分肽段，扩增噬菌体，以SDS—PAGE电泳和western—blot鉴定所表达的抗原特性。结果获得了重组T7-PP65噬菌体，通过鉴定，噬菌体表达在其头蛋白上的PP65抗原可以被天然PP65的单克隆抗体所识别。结论噬菌体展示技术可以有效地进行病毒蛋白抗原的表达，为抗原筛选和疫苗的研制提供科学依据。将PP65表达在T7噬菌体表面，可以研究其免疫原性及评估其作为疫苗的可能性。     

以合成肽为抗原检测人巨细胞病毒抗体的酶联免疫吸附试验的建立及评价

目的以合成多肽为抗原建立用于人巨细咆病毒（HCMV）抗体检测的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法以固相多肽合成技术合成了HCMV7个抗原性肽段，并对其抗原性进行了初步评价，选择高抗体反应的肽段为抗原，建立检测HCMV特异性抗体的间接ELISA。结果7个肽段中，抗体反应性较高肽段有4个；以合成多肽为抗原的间接ELISA对HCMV IgG抗体检测的敏感性和特异性分别为90．9％和100．0％，对于IgM抗体检测的敏感性和特异性分为90．0％和100．0％；与国外试剂盒测定结果有良好的符合性；该方法的精密度及稳定性良好。结论合成的HCMV多肽片段可作为抗原用于HCMV的检测，以此多肽为抗原建立的间接ELISA可用于临床HCMV特异性抗体的检测。     

中药抗流感病毒实验研究进展

流感病毒属正粘科病毒，是一类对粘蛋白具有特殊亲和性的RNA病毒。根据病毒抗原所在部位不同分为内部抗原和外层抗原两类：内部抗原的核心为单链核糖核酸蛋白；外层抗原为糖蛋白，包括血凝素（Hemagglutinin，H）和神经氨酸酶（Neuramindase，N）。根据其抗原性质不同，流感病毒分为甲（A）、乙（B）、丙（C）型；又将其病毒分为若干亚型（Hl-H15，N1-N9）。B型和C型流感病毒抗原性较稳定，A型是造成流行的主要病原，其病毒表面抗原HA和NA较易发生变异。     

重组抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用

目的探讨重组抗原在戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）感染诊断中的应用。方法用ＨＥＶ重组抗原建立酶免疫试验（ＥＩＡ）检测肝病患者和健康人群血清中抗戊型肝炎病毒抗体（抗－ＨＥＶ）。结果５５份用新加坡ＤＢＬ公司抗－ＨＥＶ诊断试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阳性的肝炎患者血清中，５３份（９６．４％）用本方法检测也为阳性；４５份ＤＢＬ试剂盒检测为抗－ＨＥＶ阴性的血清中，本法检测有３份为抗－ＨＥＶ阳性。检测甲、乙、丙型肝炎患者血清各３０份，抗－ＨＥＶ阳性率分别为１３．３％（４／３０）、１３．３％（４／３０）和１０．０％（３／３０）。健康人抗－ＨＥＶ阳性率为５．０％（８／１６０）。重组抗原与合成肽抗原混合用于ＥＩＡ，可以检出两种抗原单独阳性的抗－ＨＥＶ。结论以重组抗原为基础的ＥＩＡ特异性强、灵敏度高、快速简便，是戊型肝炎血清学诊断及流行病学调查的一种可靠方法     

肾综合征出血热病毒抗体酶免测定方法的建立及临床应用

肾综合征出血热(Hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)的实验室诊断主要是检测病人血清中的特异性抗体.本文从国外引进HFRS病毒重组抗原建立了测定HFRS抗体的ELISA方法,对方法进行了考核,并与用病毒提取物作抗原的酶免试剂盒对比检测临床标本.本法具有较高的灵敏度与特异性.