干扰素调节因子4及Th17细胞在梅毒血清固定患者外周血中的表达

目的检测梅毒血清固定患者外周血中干扰素调节因子4(IRF4)、辅助性T细胞17(Th17细胞)及其相关细胞因子的表达,初步探讨IRF4和Th17在梅毒血清固定形成中的作用。方法梅毒血清固定患者32例,同时以32例健康体检者为对照,分别应用实时荧光定量PCR法检测外周血单一核细胞(PBMC)中IRF4、白细胞介素17(IL-17)和维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)信使核糖核酸(mRNA)的表达;流式细胞术检测Th17与IRF4在CD4+T淋巴细胞中的比例以及IRF4在Th17细胞中的比例。结果梅毒血清固定组PBMC中IRF4mRNA的表达和CD4+IRF4+T细胞的比例,分别为(3.04E-3±5.20E-4);(44.95±2.68)%,与健康对照组的(4.17E-3±2.01E-3)、(46.76±5.13)%相比,差异均无统计学意义(P0.05)。血清固定组IL-17和RORγt mRNA的表达分别为(3.13E-5±1.18E-5)、(2.21E-4±3.47E-5),与健康对照组的(1.30E-4±4.09E-5)、(5.59E-4±8.39E-5)相比,显著下降,差异有统计学意义(P0.05);CD4+T淋巴细胞中Th17比例及Th17中IRF4+T细胞比例,血清固定组为(1.35±0.17)%、(50.51±4.06)%,与健康对照组的(1.91±0.19)%、(65.72±4.61)%相比,显著降低,差异具有统计学意义(P0.05)。结论 Th17可能参与了梅毒血清固定形成的免疫应答。IRF4在梅毒血清固定中可能不发挥直接作用,而是通过作用于Th17而发挥间接作用。     

Th17细胞在严重全身性感染患者外周血中的表达及临床意义

目的:检测严重全身性感染患者外周血Th17/CD4+T细胞的比例及单个核细胞(PBMC)中RORγtmRNA和IL-17 mRNA的表达水平,探讨Th17细胞在严重全身性感染患者外周血中的临床意义。方法:采用流式细胞分析法检测20例严重全身性感染患者、20例感染性休克患者及20例健康体检者外周血Th17/CD4+T细胞比例,RT-PCR法检测PBMC中RORγt mRNA及IL-17 mRNA的水平。结果:严重全身性感染组及感染性休克组外周血Th17/CD4+T细胞比例、RORγtmRNA及IL-17 mRNA水平均高于健康对照组,且严重全身性感染组高于感染性休克组(均P0.05)。结论:严重全身性感染及感染性休克患者外周血Th17/CD4+细胞比例增加,RORγt及IL-17蛋白表达水平升高,Th17细胞参与了炎症的发生、发展。     

原发性非小细胞肺癌患者外周血中Th17的检测及其临床意义

目的通过检测非小细胞癌(NSCLC)患者与健康对照组外周血中Th17细胞及相关因子的表达水平,探讨其在NSCLC中的临床意义。方法流式细胞术检测外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例;RT-PCR检测外周血单个核细胞(PBMC)中IL-17及孤独核受体γt(RORγt)mRNA的表达水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测外周血浆中IL-17的水平。结果 NSCLC患者外周血Th17细胞占CD4+T淋巴细胞的比例较对照组显著升高(P<0.01);PBMC中IL-17及RORγt mRNA表达水平显著高于对照组(P<0.01);外周血浆中IL-17的水平显著高于对照组(P<0.01)。不同病理类型之间Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平无统计学差异(P>0.05)。Ⅲ期患者Th17细胞比例、IL-17 mRNA及IL-17的表达水平较Ⅰ^Ⅱ期患者显著增高(P<0.01)。结论 Th17细胞可能通过RORγt和IL-17参与NSCLC的发生,Th17相关指标对NSCLC的治疗及预后有指导意义。     

美托洛尔对慢性心力衰竭患者外周血Th17细胞及其相关因子表达水平的影响研究

目的探讨美托洛尔对慢性心力衰竭(CHF)患者外周血Th17细胞及其相关因子表达水平的影响。方法选择2014年1—6月在福建省晋江市医院心血管内科住院的CHF患者60例,随机分成常规治疗组和美托洛尔组,各30例;另选取30例体检健康者作为健康对照组。常规治疗组患者给予常规治疗;美托洛尔组患者在常规治疗组基础上加用美托洛尔,两组患者均治疗6个月。采用流式细胞术检测各组受试者治疗前后外周血单核细胞(PBMC)中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率,采用实时荧光定量PCR技术检测PBMC中正调控Th17细胞分化的核转录因子视黄酸相关核孤独受体γt(RORγt)、负调控Th17细胞分化的细胞因子信号传送阻抑蛋白3(SOCS3)和Th17细胞相关炎性因子白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)、白介素23(IL-23)及CX型趋化因子配体1(CXCL1)、CXCL5、CXCL8的mRNA表达,采用心脏彩超仪检测CHF患者左心室功能,包括左心室射血分数(LVEF)和左心室舒张末期直径(LVEDD)。结果治疗前常规治疗组和美托洛尔组患者PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率高于健康对照组(P0.05);常规治疗组和美托洛尔组患者PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率比较,差异无统计学意义(P0.05)。治疗后美托洛尔组患者PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率低于常规治疗组(P0.05)。治疗前常规治疗组和美托洛尔组患者PBMC中RORγt、IL-6、IL-17、IL-23及趋化因子CXCL1、CXCL5、CXCL8 mRNA表达水平高于健康对照组,SOCS3 mRNA表达水平低于健康对照组(P0.05);而常规治疗组和美托洛尔组患者RORγt、IL-6、IL-17、IL-23及趋化因子CXCL1、CXCL5、CXCL8 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P0.05)。治疗后美托洛尔组患者PBMC中RORγt、IL-6、IL-17、IL-23、CXCL1、CXCL5、CXCL8 mRNA表达水平均低于常规治疗组,SOCS3 mRNA表达水平高于常规治疗组(P0.05)。CXCL1、CXCL5、CXCL8与IL-17 mRNA表达水平均呈正相关(r值分别为0.438、0.345、0.423,P0.01)。两组CHF患者治疗前LVEF和LVEDD比较,差异无统计学意义(P0.05);治疗后美托洛尔组患者LVEF高于常规治疗组,LVEDD小于常规治疗组(P0.05)。结论 CHF患者存在强烈的Th17细胞免疫反应,而美托洛尔能降低PBMC中CD+3CD+4IL-17+Th17细胞百分率及RORγt、IL-6、IL-17、IL-23、CXCL1、CXCL5、CXCL8的表达,升高SOCS3的表达,具有抑制Th17细胞分化、下调Th17细胞功能、改善慢性炎症的作用,这可能是美托洛尔从机体免疫方面改善CHF患者心功能的作用机制之一。     

白细胞介素-38抑制原发性胆汁性胆管炎患者调节性T细胞向辅助性T17细胞转分化

目的观察原发性胆汁性胆管炎(PBC)患者中IL-38的水平, 评估IL-38对PBC患者调节性T细胞(Tregs)向辅助性T细胞(Th)17转分化的调控作用。方法入组46例PBC患者和24名健康对照者, ELISA测定血清IL-38、IL-35、IL-17水平, 流式细胞术检测PMBCs中CD4+CD25+CD127dim/-Tregs和CD4+IL-17A+Th17细胞比例, 实时定量PCR法测定转录因子叉头盒蛋白P3(FoxP3)和维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)mRNA表达。纯化的Tregs使用重组IL-38刺激后与自体PBMCs共培养, 通过测定细胞增殖和上清细胞因子表达评估Tregs功能。将Tregs向Th17细胞极化培养, 并加入重组IL-38刺激, 通过检测CCR4、CCR6表达以及IL-17分泌、RORγt mRNA评估IL-38对Tregs向Th17表型转分化的影响。组间比较采用独立样本t检验或Mann-WhitneyU检验。结果 PBC组血清IL-38水平低于健康对照组, 差异有统计学意义[68.0(48.5, 96.7)pg/ml与89.6(58.0, 265...     

Th17及调节性T细胞及相关因子在颈动脉粥样硬化发生过程中的作用及其机制

目的探讨T辅助性17(Th17)细胞及CD4+CD25+Foxp3+调节性T(Treg)细胞及相关因子在颈动脉粥样硬化(AS)患者外周血中的表达水平及Th17细胞影响AS发病的机制。方法选取2012年7月至2014年7月来该院治疗的AS患者(60例)为研究组,选取同期来该院体检的健康人群为对照组(40例),采用流式细胞术检测AS患者及正常人外周血中Th17细胞及Treg细胞水平,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测两组人群外周血中白介素(IL)-17以及转化生长因子(TGF)-β的水平;采用RT-PCR法检测两组人群外周血中转录因子RORγT及Foxp3的mRNA水平。结果 AS患者中Th17细胞比例,血清IL-17水平及外周血RORγT mRNA水平显著高于AS对照组;Treg细胞比例、血清TGF-β水平及外周血Foxp3mRNA水平显著低于对照组(P0.01)。结论 Th17细胞及相关因子可能参与促进AS的产生,Treg细胞及相关因子可能参与抑制AS的产生,阻断AS患者体内的IL-17可能作为治疗AS的潜在手段。     

强直性脊柱炎CD4+T细胞白细胞介素-17核孤儿受体的表达及意义

目的 探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血CD4+T细胞白细胞介素(IL)-17蛋白水平和IL-17、核孤儿受体(RORγt)mRNA水平及意义.方法 取AS患者和健康人外周血单个核细胞(PBMCs),免疫磁珠分选CD4+T细胞,加佛波脂(PMA)腐子霉素(Ion)作用,经固定/透膜处理进行细胞内染色,流式细胞术(FCM)检测CD4+T细胞IL-17蛋白水平;用或不用非特异性刺激剂[抗CD3单抗(A-CD3)、抗CD28单抗(A-CD28)]刺激CIM+T细胞12 h和24 h后,应用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-17、RORγt mRNA水平.组间比较采用方差分析,相关性分析采用Pearson相关分析.结果 CD4+T细胞IL-17蛋白水平AS活动组(1.26±0.44)较稳定组(0.56±0.21)和对照组(0.45±0.13)显著增高(P<0.01),同时IL-17、RORγt mRNA水平活动组较稳定组和对照组显著增高(P<0.01). 用A-CD3/A-CD28刺激后,AS患者CD4+T细胞IL-17、RORγtmRNA水平显著高于未刺激组(P<0.05),12 h刺激组又高于24 h刺激组(P<0.01).结论 AS患者外周血CD4+T细胞IL-17、RORγt表达水平显著增高,IL-17、RORγt表达水平可能与AS病情活动相关.     

胶原诱导关节炎模型中髓系来源抑制细胞通过白细胞介素-1β促进Th17细胞分化的作用

目的通过胶原诱导关节炎模型探讨MDSCs对Th17细胞分化的作用及可能的机制,为阐明自身免疫性关节炎发病机制和寻找新的治疗靶点提供研究依据。方法 SPF级雄性DBA1/J小鼠20只随机分为胶原诱导关节炎(CIA)组和正常对照组,每组10只。采用CIA法制备自身免疫性关节炎小鼠模型。收集各组小鼠脾脏中骨髓来源抑制细胞(MDSCs)和Th17细胞的频率,分别采用流式细胞术和ELISA法测定小鼠血浆中炎性因子白细胞介素(IL)-β、IL-17及抑炎因子IL-10水平,采用实时荧光定量PCR技术测定细胞中Th17分化相关因子STAT3 mRNA、视黄酸相关孤儿受体(ROR)αmRNA、RORγt mRNA相对表达量。采用在Th17细胞分化培养条件下[添加IL-6+转化生长因子β(TGF-β)] MDSCs与小鼠幼稚CD4+T细胞共培养评估CIA小鼠中MDSCs对Th17细胞分化的影响,在培养过程中采用IL-1β中和抗体(IL-1βm Ab)和拮抗剂(IL-1ra)阻断IL-1β信号的方法以观察MDSCs对Th17细胞分化影响。结果与正常对照组小鼠比较,CIA组小鼠MDSCs比例明显升高[(20. 1±2. 6)%vs.(2. 6±1. 7)%],血浆炎症因子IL-17水平明显升高[(1. 3±0. 2)%vs.(0. 3±0. 1)%], CIA组血浆IL-β水平明显升高,抑炎因子IL-10水平明显降低,RORγtmRNA相对表达量明显增加,差异均有统计学意义(均P 0. 01)。CIA组小鼠MDSCs比例及Th17细胞比例变化呈明显正相关。CIA小鼠中MDSCs抑制CD4+T细胞增生并减少细胞分泌的γ干扰素(IFN-γ),但体外MDSCs和CD4+T细胞共培养结果显示MDSCs促进T17细胞分化,且使细胞上清液中IL-17A质量浓度升高,STAT3和RORγtmRNA相对表达量上调,培养液中IL-1β质量浓度升高。阻断IL-1β信号可以减少MDSCs对Th17细胞分化的作用。结论自身免疫性关节炎小鼠MDSCs具有促炎症反应的作用,MDSCs依靠IL-1β上调RORγt的作用而促进Th17细胞分化,这可能是自身免疫性关节炎发病过程中的一个关键因素。     

CD4+白细胞介素-17+辅助性T细胞对香烟暴露小鼠肺部炎症及肺气肿的作用

目的 观察香烟烟雾暴露小鼠肺实质中CD4+白细胞介素(IL)-17+辅助性T细胞(Th17)数量及活性的表达,探讨其在香烟暴露小鼠肺部CD4+ γ-干扰素+(Th1)炎症及肺气肿中的作用及相关机制.方法 将40只雄性Balb/c小鼠按随机数字表法分为4组:对照12周(C12)组、对照24周(C24)组、烟雾暴露12周(S12)组、烟雾暴露24周(S24)组,每组10只.香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型.HE染色观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔和肺泡破坏指数(DI);流式细胞术检测小鼠肺实质中CD4+IL-17+T(Th17)细胞、CD4+γ-干扰素+T(Th1)细胞、CD4+IL-17+γ-干扰素+T(Th17/Th1)细胞、CD8+γ-干扰素+T(Tc1)细胞、CD8+IL-21R+细胞及CD4+IL-17+IL-21+细胞比例;荧光定量PCR法检测小鼠肺实质中维甲酸相关孤独受体(RORγt)和IL-17的mRNA表达,并分析这些指标的相互关系.结果 S12组和S24组的平均内衬间隔[(39±4)μm和(47±7)μm]和DI(39.1±1.6和45.2±3.1)明显高于C12组[(32±4)μm和28.2±1.6]和C24组[(33±3)μm和28.9±2.1],且以S24组的增高更为明显,差异均有统计学意义(t值为4.378～15.188,均P＜0.05);S12组和S24组Th17细胞比例[(3.3±1.1)%和(7.2±2.2)%]均明显高于C12组和C24组[(1.8±0.8)%和(2.0±0.6)%];S12组和S24组RORγtmRNA表达量[(25±4)和(35±3)]及IL-17的mRNA表达量[(26±3)和(36±3)]亦明显高于C12组[(10±5)和(13±5)]和C24组[(11±7)和(8±6)],以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05);S12组和S24组Th1细胞比例[(10.0±3.7)%和(26.2 ±6.0)%]、Th17/Th1细胞比例[(0.61±0.30)%和(1.82±0.52)%]及Tc1细胞比例[(17.0±4.5)%和(26.8±8.5)%]均明显高于C12组[(3.8±1.7)%、(0.27±0.17)%和(4.8±1.9)%]和C24组[(4.2±1.3)%、(0.28±0.11)%和(5.2±1.0)%],以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05);S12组和S24组小鼠Th17细胞与Th1、Tc1细胞比例、平均内衬间隔、DI值均呈显著正相关(r值为0.519～0.797,均P＜0.01);Th17/Th1细胞比例与平均内衬间隔、DI值呈显著正相关(r值分别为0.742和0.802,均P＜0.01);S12组和S24组CD4+IL-17+IL-21+细胞比例[(0.19±0.04)和(0.55±0.24)]明显高于C12组和C24组[(0.07±0.03)和(0.08±0.03)],S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05).S12组和S24组的CD8+IL-21R+细胞比例[(2.94±1.26)和(4.12±2.26)]高于C12组和C24组[(1.22±0.31)和(1.34±0.18)](P＞0.05);S12组及S24组小鼠CD4+IL-17+IL-21+细胞比例与Th1、Tc1细胞比例、平均内衬间隔和DI值均呈显著正相关(r值为0.694～0.754,均P＜0.05);S12及S24组小鼠CD8+IL-21R+细胞比例与平均内衬间隔和DI呈显著正相关(r值分别为0.516和0.725均P＜0.05).结论 香烟暴露导致肺气肿小鼠肺内Th17细胞数量及活性上调,并随烟雾暴露时间延长而增强;Th17细胞通过IL-21及IL-21R在肺部Th1/Tc1炎症中起重要促进作用;这对探讨COPD肺部炎症和肺气肿发生机制以及新的治疗靶点具有重要意义.

Abstract：

Objective To evaluate the expression and the role of Th 17 in cigarette smoke-induced lung inflammation and emphysema in mice.Methods Forty male BALB/c mice were randomly divided into 4 groups, including a control group C12, a control group C24, a smoke-exposure 12 week group (S12) and a smoke-exposure 24 week group S24 (n = 10 each).Morphological changes were evaluated by mean linear intercepts and destructive index (DI).The proportion of CD4+ IL-17 + Th17, CD4+ IFN-γ+ Th1, CD4+ IL-17 +IFN-γ+ T( Th17/ Th1 ), CD8+ IFN-γ+ Tc1, CD8+ IL-21R + and CD4+ IL-17 + IL-21 + T cells in lungs of mice was determined by flow cytometry.The mRNA expressions of RORγt and IL-17 were evaluated by real-time PCR.Results Mean linear intercepts and DI were significantly higher in S12 and S24 groups [(39 ± 4)μm, (47 ±7) μm], (39.1 ± 1.6, 45.2 ±3.1 ) as compared to C12[(32 ±4) μm,28.2 ± 1.6] and C24groups [(33 ± 3 ) μm ,28.9 ± 2.1], all P ＜ O.05.The percentage of Th17 of S12 and S24 groups [(3.3 ±1.1 )%, (7.2 ±2.2)%] was significantly increased as compared with that of C12 and C24 groups [( 1.8± 0.8) %, (2.0 ± 0.6) %], all P ＜ 0.05.The mRNA levels of RORγt [( 25 ± 4), ( 35 ± 3 )] and IL-17 [(26 ± 3), (36 ± 3 )] in S12 and S24 groups were higher than in C12 [(10 ± 5 ), (13 ± 5 )] and C24 groups [( 11 ± 7 ), (8 ± 6)], all P ＜ 0.05.The percentage of Th 1, Th17/Th1 and Tc1 cells of S12 and S24 groups [(10.0 ±3.7)%, (26.2 ±6.0)%], [(0.61 ±0.30)%, (1.82 ±0.52)%], [(17.0±4.5 ) %, ( 26.8 ± 8.5 ) %] was significantly increased as compared with that of C12 [( 3.8 ± 1.7 ) %,(0.27±0.17)%, (4.8 ±1.9)%] and C24 groups [(4.2±1.3)%, (0.28±0.11)%, (5.2±1.0)%], all P＜0.05.Moreover, the frequency of Th17 cells had a positive correlation with Th1, Tc1 cells and emphysematous lesions ( r =0.519 - 0.797, all P ＜ 0.01 ).In addition, a positive correlation between Th17/Th1 cells and emphysematous lesions was also found (r =0.742, 0.802, all P ＜0.01 ).The percentage of CD4+ IL-17+ IL-21 +T cells was significantly increased in S12 and S24 groups [(0.19 ±0.04) %, (0.55 ± 0.24) %] compared to controls [(0.07 ± 0.03 ) %, (0.08 ± 0.03 ) %], all P ＜ 0.05.Meanwhile, as compared with that of the controls [( 1.22 ± 0.31 ), ( 1.34 ± 0.18 )], the percentage of CD8+ IL-21 R + T cells was also increased in SI 2 and S24 groups [( 2.94 ± 1.26 ), (4.12 ± 2.26 )], but there were no differences among smoke-exposure groups ( P ＞0.05 ).The frequency of CD4+ IL-17 + IL-21 + T cells had a positive correlation with Th 1, Tc1 cells and emphysematous lesions (r = 0.694 -0.754, all P ＜0.05).And the frequency of CD8+ IL-21R+ T cells also had a positive correlation with emphysematous lesions ( r = 0.516, 0.725, all P ＜ 0.05).Conclusions Cigarette smoke increased the expression and the activity of Th17 in mice.Th17 may play a potential (active) role in the development of lung inflammation through IL-21/IL-21R pathway.     

猪带绦虫抗原刺激囊虫病患者PBMC Th1/Th2细胞因子的表达及其免疫调节

目的检测猪带绦虫不同虫期抗原刺激囊虫病患者外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2细胞因子的表达水平,并分析其在囊虫病免疫调控中的作用。方法用流式细胞仪检测囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群,并以猪带绦虫六钩蚴抗原或囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC,分别在刺激的第0d、5d、10d和15d时检测Th1/Th2细胞因子(IFN-γ及IL-4),对分泌IFN-γ或IL-4的不同细胞群体进行数据分析。结果囊虫病患者新鲜血T淋巴细胞亚群CD3+与CD4+细胞较正常人升高,CD4+/CD8+较正常人升高,分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率较正常人升高;猪囊尾蚴抗原刺激囊虫病患者PB-MC第0d、5d、10d和15d时,分泌IFN-γ的CD3+细胞百分率分别为25.42%±5.53%,30.46%±4.94%,36.52%±4.73%,38.69%±5.58%;分泌IL-4的CD3+细胞百分率分别为2.52%±0.52%,3.00%±0.57%,3.81%±0.70%,5.03%±0.73%。六钩蚴抗原刺激囊虫病患者PBMC分泌IFN-γ及IL-4的CD3+细胞百分率亦呈现相同的变化趋势。结论囊虫病患者与正常人相比PBMC中存在T淋巴细胞的极化水平异常,CD3+与CD4+细胞百分率均显著升高,T细胞亚群比例失调,免疫功能紊乱;随着囊尾蚴抗原刺激外周血PBMC时间延长,分泌IFN-γ和IL-4的CD3+细胞百分率逐渐升高。     

从Th1/Th2、Treg/Th17之间的平衡研究轻、中度慢性乙型肝炎患者CD4~+T淋巴细胞的免疫失衡状态

目的从Th17及其相关细胞因子与Th1、Th2、Treg的相互关系,探讨轻、中度CHB患者CD4~+T淋巴细胞的整体免疫失衡状态。方法选择轻、中度CHB患者,与健康志愿者进行比较,观察其外周血各免疫细胞(Th17、Th1、Th2、Treg、Th1/Th2、Treg/Th17)、相关细胞因子(IL-17、IL-6、TGF-β、IFN-γ、IL-4)、主要效应分子(穿孔素、颗粒酶B)和核转录因子(孤独核受体RORγt、Foxp3等)的变化及其相互关系。结果与健康志愿者相比,CHB患者CD8~+T淋巴细胞比例更高,CD4~+/CD8~+比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th1细胞比例更高,Th1/Th2显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th17细胞比例更高,Treg/Th17比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者穿孔素和颗粒酶B的表达更高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者FOXP3、IL17mRNA和RORγt的表达差异无统计学意义(P0.05);与健康志愿者相比,CHB患者TGF-B1、IL-6、IL-17显著增高,差异有统计学意义(P0.01);IFN-γ和IL-4的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论轻、中度CHB患者在免疫细胞及其相关细胞因子、效应分子等各环节,尤其是Treg/Th17比例,均处于严重的免疫失衡状态。     

类风湿关节炎患者外周血Th17细胞的检测及意义

目的 探讨Th17细胞在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的水平及意义.方法 分离RA患者和健康者外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠阴选CD4~+T细胞,用或不用非特异性刺激剂(A-CD3、A-CD28),然后加佛波酯/离子霉素(PMA/Ion),经固定,透膜处理进行细胞内染色,流式细胞术(FCM)检测CD4~+T细胞内白细胞介素(IL)-17~+/干扰素(IFN)-γ~+、IL-17~+/IL-6~+水平.分组:①健康对照组;②RA病情稳定组;③RA病情活动组.结果 免疫磁珠阴选CD4~+T细胞纯度>90%.RA病情活动组IL-17表达水平(1.54±0.41)显著高于RA病情稳定组(0.70±0.21,P<0.01),二者又显著高于健康对照组(0.42±0.12,P<0.01).用A-CD3、A-CD28、IL-23刺激后,CD4~+T细胞IL-17胞内表达水平较无刺激组显著增加(P<0.05).CD4~+T细胞IFN-γ表达水平呈现与IL-17表达相似的特点,而RA患者与健康对照组IL-6表达水平差异无统计学意义.RA患者IL-17胞内表达水平与IFN-γ、IL-6无显著相关.结论 RA患者外周血CD4~+T细胞中存在异常增高的Th17细胞,且其水平与病情活动相关,有望作为判断RA患者病情活动的指标之一.     

Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病的关系

背景:免疫功能紊乱是炎症性肠病发病的关键环节,研究发现Th1、Th2和Th17细胞比例失衡与肠道免疫失调相关。目的:探讨Th1、Th2和Th17细胞失衡与克罗恩病(CD)的关系。方法:收集2013年1月—2014年12月温州医科大学附属第二医院收治的CD患者36例,同期行肠息肉摘除术患者40例作为对照组,分别取病变部位肠组织和正常肠组织,采用real-time PCR和免疫组化法检测Th1、Th2、Th17细胞相关转录因子(T-bet、GATA-3、RORγt)和细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表达。结果:与对照组相比,CD组肠组织中T-bet、RORγt mRNA表达、IFN-γ、IL-17A mRNA和蛋白表达以及代表Th1/Th2、Th17/Th2比例的T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值均显著增高(P0.05),各转录因子与相应细胞因子表达呈显著正相关(P0.05)。IFN-γ和IL-17A免疫阳性物质均定位于细胞质,在CD患者中阳性细胞主要分布于上皮层和黏膜固有层。分层分析显示活动期CD的上述指标均显著高于缓解期(P0.05);活动期CD代表Th17/Th1比例的RORγt/T-bet比值亦较缓解期显著增高(P0.05)。结论:肠组织中Th1、Th2和Th17细胞失衡与CD密切相关,Th1、Th17细胞极化可能在其中起重要作用,活动期CD以Th17细胞极化为著。     

日本血吸虫感染小鼠肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答

目的观察C57BL/6小鼠感染日本血吸虫后肠系膜淋巴结Th17细胞的免疫应答。方法 20只C57BL/6小鼠随机分为感染组和对照组,每组10只,感染组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴,每鼠(40±5)条。感染后5~6周分离小鼠肠系膜淋巴结的淋巴细胞,分别用抗小鼠CD3单克隆抗体(anti-CD3,1μg/ml)和抗小鼠CD28单克隆抗体(anti-CD28,1μg/ml)刺激,培养4 h后收集细胞,RT-PCR检测小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞中白细胞介素17(IL-17)和维甲酸相关孤独受体(ROR-γt)mRNA的转录水平;培养72 h后,ELISA检测细胞培养上清液IL-17和γ干扰素(IFN-γ)的含量。同时用佛波酯(PMA,10 ng/ml)和离子霉素(1μg/ml)刺激淋巴细胞5 h后,胞内细胞因子染色,流式细胞术检测Th17细胞的含量和其他细胞因子的产生。结果 ELISA检测结果显示,感染小鼠肠系膜淋巴结培养物上清液中IFN-γ[(214.3±62.6)pg/ml]和IL-17[(176.8±62.1)pg/ml]的含量明显高于健康小鼠[(46.7±13.9)和0 pg/ml](P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,IL-17和ROR-γt mRNA转录水平也明显高于健康小鼠。感染小鼠肠系膜淋巴细胞CD4+T细胞中,Th17细胞的比例为(0.55±0.03)%,明显高于健康小鼠[(0.16±0.01)%](P<0.05)。在CD4+T细胞中,IL-17+IL-4+细胞占0.06%,IL-17+IFN-γ+和IL-17+IL-5+细胞各占0.02%,IL-17+IL-9+细胞占0.01%,未检测到IL-17+IL-10+和IL-17+Foxp3+细胞。结论日本血吸虫感染C57BL/6小鼠的肠系膜淋巴结能诱导Th17细胞产生。Th17细胞能分泌IL-4,及少量的IFN-γ、IL-5和IL-9,不分泌IL-10,也不表达Foxp3。     

梅毒血清固定患者外周血Treg细胞和Th17细胞及其调节因子的相关性研究北大核心

目的分析梅毒血清固定患者外周血Treg细胞和Th17细胞及其调节因子的表达情况,以探讨细胞免疫功能与梅毒血清固定的关系。方法采用流式细胞仪检测不同组别(固定组、转阴组、梅毒组和对照组)人群外周血中Treg细胞、Th17细胞、TGF-β和IL-6的水平,并进行相关性分析。结果在所有患者外周血中,固定组CD+4Treg细胞(28.71±4.53)、TGF-β(6.69±1.12)比例明显高于转阴组(24.95±4.12)、(4.85±1.08),梅毒组(22.83±4.48)、(3.98±1.07)和对照组(20.29±4.97)、(3.16±1.04);而Th17细胞(2.98±1.89)、IL-6(1.50±0.54)比例则明显低于转阴组(4.23±1.36)、(1.94±0.63),梅毒组(5.40±1.17)、(2.57±0.61)和对照组(6.52±1.21)、(2.97±0.87);差异均有统计学意义(P<0.01)。结论梅毒血清固定患者可能存在Treg细胞和Th17细胞失衡,从而影响细胞免疫功能,造成血清固定。     

多房棘球蚴感染小鼠辅助Th17细胞,转录因子RORγτ及相关细胞因子的实验研究

目的探讨多房棘球蚴感染小鼠脾脏细胞中辅助性T细胞17比例,转录因子RORγτ和IL-17因子的表达及其意义。方法选用6~8周龄BALB/c小鼠共30只,随机分为多房棘球蚴感染组(Em)、多房棘球蚴感染阿苯达唑治疗组(Em+Albendazole,Em+ABZ)和健康对照组(healthy controls,HC),每组10只。通过腹腔注射法建立泡型包虫病小鼠模型。Em+ABZ治疗组给予灌胃阿苯达唑治疗(100μl/d,35d)通过流式细胞术检测小鼠脾脏细胞中辅助性T17细胞(CD4+IL-17+Th17细胞/CD4+T细胞)比例,采用实时荧光定量PCR检测脾脏细胞中维甲酸孤独受体(retinoid acid orphan receptor-γτ,RORγτ)mRNA的表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测IL-17水平。结果 CD4+IL-17+Th17细胞/CD4+T细胞比例,Em组为(2.10±1.00)%,与HC组(0.85±0.71)%比较,差异有统计学意义(F=3.07,t=2.66,P<0.01)。Em+ABZ组为(1.54±1.19)%,与HC组和Em组比较,差异无统计学意义(F=3.07,P>0.05);脾脏细胞RORγτmRNA在Em组中的表达(6.1×10-4±5.8×10-4)高于在Em+ABZ组(6.0×10-4±3.5×10-4)和HC组(3.4×10-4±2.4×10-4)中的表达,但差异无统计学意义(F=0.66,P>0.05)。Em+ABZ组与HC组比较,差异亦无统计学意义(F=0.66,P>0.05)。脾脏细胞培养上清液中IL-17A,Em组为(10.71±1.85)ng/ml,明显高于Em+ABZ组[(5.58±3.56)ng/ml]和HC组[(7.31±1.22)ng/ml],差异有统计学意义(F=9.82,t1=3.12,t2=5.57,P<0.01)。Em+ABZ组与HC组比较差异无统计学意义(F=9.82,t=0.84,P>0.05)。结论 Th17细胞参与BALB/c小鼠多房棘球蚴感染免疫和炎性应答过程,阿苯达唑治疗能够减轻免疫损伤和炎症反应。Th17细胞及IL-17A可能是潜在的多房棘球蚴病新的分子免疫干预靶点。     

梅毒血清固定患者外周血Treg细胞和Th17细胞及其调节因子的相关性研究

目的分析梅毒血清固定患者外周血Treg细胞和Th17细胞及其调节因子的表达情况,以探讨细胞免疫功能与梅毒血清固定的关系。方法采用流式细胞仪检测不同组别(固定组、转阴组、梅毒组和对照组)人群外周血中Treg细胞、Th17细胞、TGF-β和IL-6的水平,并进行相关性分析。结果在所有患者外周血中,固定组CD+4Treg细胞(28.71±4.53)、TGF-β(6.69±1.12)比例明显高于转阴组(24.95±4.12)、(4.85±1.08),梅毒组(22.83±4.48)、(3.98±1.07)和对照组(20.29±4.97)、(3.16±1.04);而Th17细胞(2.98±1.89)、IL-6(1.50±0.54)比例则明显低于转阴组(4.23±1.36)、(1.94±0.63),梅毒组(5.40±1.17)、(2.57±0.61)和对照组(6.52±1.21)、(2.97±0.87);差异均有统计学意义(P0.01)。结论梅毒血清固定患者可能存在Treg细胞和Th17细胞失衡,从而影响细胞免疫功能,造成血清固定。     

支气管哮喘并发过敏性鼻炎患儿外周血Th17细胞及其相关细胞因子表达

目的分析哮喘、鼻炎、哮喘并发鼻炎患儿以及健康儿童外周血辅助性T细胞(T helper cell,Th)17及其相关细胞因子介导的免疫应答差异。方法流式细胞术检测哮喘组患儿(AS组,n=41)、鼻炎组患儿(AR组,n=40)、哮喘并发鼻炎组患儿(ASR组,n=52)和健康对照组儿童(HC组,n=45)外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Th1细胞(CD4~+IFN-γ~+T)、Th17细胞(CD4+IL-17A+T)比例差异;酶联免疫吸附法测定血清及螨蛋白抗原刺激后PBMC培养上清中IL-17A、IL-17E和IL-17F水平。检测Th17细胞亚群及其细胞因子与患儿呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)水平、外周血嗜酸粒细胞(eosinophils,EOS)计数间相关性关系。结果外周血Th1细胞比例在哮喘并发鼻炎组、鼻炎组和哮喘组分别为13.2%±5.3%、12.2%±6.7%和12.1%±4.1%,均低于健康对照组(17.0%±5.1%),四组间Th1细胞比例差异具有统计学意义(P0.05)。外周血Th17细胞比例分别为哮喘并发鼻炎组1.8%±0.7%、哮喘组1.2%±0.5%、鼻炎组1.1%±0.6%和健康对照组0.5%±0.4%,四组间差异有统计学意义(P0.05)。三组患儿外周血IL-17A、IL-17E水平均显著高于健康对照组,差异具有统计学意义(均P0.05)。尘螨蛋白抗原刺激后,哮喘并发鼻炎组、哮喘组、鼻炎组患儿PBMC中IL-17E水平显著升高。哮喘组、鼻炎组、哮喘并发鼻炎组患儿外周血IL-17E水平与Fe NO水平、外周血EOS呈正相关关系(均P0.05),仅发现哮喘并发鼻炎组患儿外周血Th17细胞比例与FeNO水平、外周血EOS增多存在正相关关系(P0.05)。结论 Th17细胞及其产生的前炎症因子IL-17E参与了哮喘、鼻炎以及哮喘并发鼻炎等气道过敏性疾病的免疫病理过程。     

Analysis for expression and significance of interleukin-17, RORγt in CD4+ T cells from patients with ankylosing spondylitis

Objective To study the expression of IL-17, RORγt in CD4+T cells from patients with ankylosing spondylitis (AS). Methods The specimens of venous blood PBMC were collected from 28 patients with AS and 15 healthy subjects. Intracellular flow cytometry detection of IL-17 was established after isolation of human CD4+ T cells from PBMC. The expression level of IL-17, RORγt mRNA in CD4+ T cells was determined from 28 AS patients and 15 healthy controls by real-time fluorescence quantitative RT-PCR using Anti -CD3/Anti -CD28 as stimulators or not. Analysis of variance and Pearson correlation were selected. Results The isolation of human CD4+ T cells from PBMC was effective and its purity reached 90%. The percentage of intracellular IL-17 in CD4+ T cells from AS pati-ents in the AS active group was higher than that of the AS stable group and healthy control group (P<0.01). The expression level of IL-17, RORγt mRNA in CD4+ T cells was significantly higher in patients with AS than in controls. After stimulated with anti-CD3/ anti-CD28 stimulation, the percentage of IL-17, RORγt mRNA was increased significantly (P<0.01). The percentage of IL-17, RORγt mRNA in the 12 h group was higher than that of the 24 h group, while both of them were higher than those without stimulation (P<0.05). Conclusion There is an abnormal expression of IL-17, RORγt in human CD4+ T cells from AS patients. Our results indicate that the abnormal expression of IL-17 might play a role in the development and progression of AS.