儿童急性淋巴细胞白血病及阿霉素所致Jurkat细胞凋亡时WAVE1表达研究

目的：初步探讨WASP家族Verprolin同源蛋白1（WAVE1）在急性淋巴细胞白血病（ALL）发病中可能的作用及意义。方法：运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量法和蛋白质印迹（Western blotting）分别检测40例ALL初治患儿、15例化疗完全缓解半年、4例复发、10例非白血病患儿BMMCs中WAVE1 mRNA和蛋白的表达水平。以不同浓度阿霉素处理Jurkat细胞：①采用MTT法测细胞增殖;②采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;③采用RT-PCR和Western blotting检测WAVE1表达。结果：ALL初治和复发患儿BMMCs均有WAVE1 mRNA和蛋白的表达,对照和缓解组BMMCs中mRNA和蛋白低表达或无表达,初治和复发组的WAVE1 mRNA和蛋白的表达表达水平显著高于化疗后缓解组和对照组（P<0.01）。阿霉素明显抑制Jurkat细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应（P<0.05）;阿霉素作用24 h后,细胞凋亡随药物浓度增增高而增加,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);细胞WAVE1 mRNA和蛋白表达水平随阿霉素处理浓度的增高而降低,与对照组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论：WAVE1在ALL患儿BMMCs中高表达;WAVE1可能与儿童ALL病程相关,它可能成为动态检测儿童ALL病情的一个新指标。     

GYPC和TRIP3基因表达水平与儿童急性淋巴细胞白血病预后的关系

目的研究儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）复发及缓解的分子生物学机制,探讨GYPC、TRIP3基因的表达水平与儿童ALL预后的关系。方法应用半定量逆转录 聚合酶链反应(RT-PCR)的方法,检测儿童ALL初治患者、缓解患者、复发患者及正常对照儿童GYPC基因、TRIP3基因的表达。结果儿童ALL GYPC基因表达：①GYPC基因表达水平在复发患者中最高,不仅高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）,也高于初治组（P<0.01）。②初治患者中,GYPC基因阳性表达者的完全缓解(CR)率与阴性表达者差异无显著性,但未缓解患者治疗前GYPC基因表达水平高于完全缓解患者（P<0.05）。儿童ALL TRIP3基因表达：①TRIP3基因在初治组ALL中的表达水平与复发组ALL中的表达水平相比差异无显著性,在缓解组ALL中表达水平明显高于复发组及初治组（P<0.01）及正常对照组;②在初治的ALL患儿中,TRIP3基因表达阳性者其治疗后的完全缓解率高于表达阴性者（P<0.05）。完全缓解患者治疗前TRIP3基因表达水平高于未缓解患者（P<0.05）。结论GYPC可能是儿童ALL的不利因素,GYPC高表达者疗效差,易复发。TRIP3基因高表达者对化疗药物反应敏感,易于缓解。［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：29-32］     

儿童急性淋巴细胞白血病nm23-H1基因表达及其与免疫分型的关系

目的：探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL) nm23-H1基因的表达水平及其与免疫分型的关系。方法：应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测儿童ALL初治、缓解、难治、复发患儿及正常对照儿童nm23-H1基因的表达水平,观察nm23-H1基因与免疫表型的关系。结果：①初治患儿nm23-H1表达水平明显高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）;完全缓解组nm23-H1表达水平与对照组差异无显著性（P>0.05）,复发组nm23-H1表达水平高于正常对照组（P<0.01）和完全缓解组（P<0.01）,与初治差异无显著性(P>0.05);难治组均为高表达。 ②T-ALL的nm23-H1阳性率高于B-ALL(P<0.05),且T-ALL的nm23 H1表达水平高于B-ALL（P<0.05）。结论： nm23-H1的表达水平随儿童ALL的病情发展而变化,在初治、复发及难治ALL具有高表达,nm23-H1高表达者预后差,易复发;nm23-H1在T-ALL具有高表达,可能是T-ALL的缓解率低、预后差的原因之一。［中国当代儿科杂志,2009,11-11）：881-884］     

儿童急性白血病Notch1和Jagged1的基因表达

目的：探讨儿童急性白血病（AL）骨髓或外周血单个核细胞中Notch1和Jagged1基因表达及其在AL发病中的可能作用。方法：收集2009年2月至2011年7月初诊的47例AL患儿和20例正常或非恶性血液病儿童（对照组）骨髓或外周血单个核细胞,采用二步法半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测骨髓或外周血中Notch1和Jagged1基因表达情况。47例AL患儿中,急性淋巴细胞白血病（ALL）32例,其中B-ALL 26例,T-ALL 6例;急性髓细胞白血病（AML）15例。结果：ALL组及AML组Notch1基因阳性率高于对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。T-ALL患儿Notch1 基因表达水平高于B-ALL患儿,差异有统计学意义（P<0.01）。ALL组及AML组Jagged1基因阳性率与对照组比较差异无统计学意义,但ALL组及AML组Jagged1表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Notch1在儿童不同类型ALL中的表达有明显差异,T-ALL 患儿中的Notch1表达明显高于B-ALL患儿;在儿童AL细胞中,普遍存在Notch1信号的活化;Notch1在AML儿童中异常表达,提示Notch1在AML儿童中也起着重要作用。Jagged1在ALL及AML儿童中异常表达,但需要收集更多资料论证。     

儿童急性淋巴细胞白血病nm23-H_1基因表达及其与免疫分型的关系

目的探讨儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)nm23-H1基因的表达水平及其与免疫分型的关系。方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测儿童ALL初治、缓解、难治、复发患儿及正常对照儿童nm23-H1基因的表达水平,观察nm23-H1基因与免疫表型的关系。结果①初治患儿nm23-H1表达水平明显高于正常对照组(P<0.01)和完全缓解组(P<0.01);完全缓解组nm23-H1表达水平与对照组差异无显著性(P>0.05),复发组nm23-H1表达水平高于正常对照组(P<0.01)和完全缓解组(P<0.01),与初治差异无显著性(P>0.05);难治组均为高表达。②T-ALL的nm23-H1阳性率高于B-ALL(P<0.05),且T-ALL的nm23-H1表达水平高于B-ALL(P<0.05)。结论nm23-H1的表达水平随儿童ALL的病情发展而变化,在初治、复发及难治ALL具有高表达,nm23-H1高表达者预后差,易复发;nm23-H1在T-ALL具有高表达,可能是T-ALL的缓解率低、预后差的原因之一。     

实时荧光定量PCR检测细胞周期蛋白C在小儿急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：应用实时荧光定量PCR（RQ-PCR）法检测人细胞周期蛋白C(CCNC)在儿童急性淋巴细胞白血病（ALL）中的表达，以探讨CCNC基因与儿童ALL的关系。方法：提取正常儿童、初治儿童ALL骨髓组织及ALL细胞系6T-CEM的总RNA并逆转录为cDNA，应用RQ-PCR法检测CCNC的表达。结果：在正常儿童、初治儿童ALL骨髓及6T-CEM细胞系的CCNC的阳性表达率均为100%，在正常儿童CCNC基因平均相对表达强度为13.5±0.30，而在初治儿童ALL中为2.35±0.83，两者比较有统计学意义（P＜0.05）。结论： CCNC在初治ALL患儿中低表达，提示其有可能是一个抑癌基因。     

急性特发性血小板减少性紫癜患儿外周血淋巴细胞PPAR-γ mRNA表达变化及其与血浆IL-13的相关性

目的：PPAR-γ与免疫细胞分化、凋亡、增殖和细胞因子分泌调控均密切相关,该实验旨在研究急性特发性血小板减少性紫癜(ITP)患儿外周血淋巴细胞PPAR-γ mRNA表达变化及其与血浆IL-13的相关性。方法：序贯收集2007年9月至2008年7月符合试验入选标准的急性ITP患儿53例,同时收集相匹配的同期体检儿童50例作为对照。RT-PCR法检测ITP患儿外周血淋巴细胞PPAR-γ mRNA的表达,ELISA 法检测血浆中IL-13水平。结果：急性ITP患儿外周血淋巴细胞PPAR-γ mRNA表达显著高于正常对照组［（0.78±0.03） vs （0.52±0.05）,P<0.05］;急性ITP患儿血浆中IL-13的含量显著高于正常对照组［(160.21±34.26)pg/mL vs (121.42±12.69)pg/mL,P<0.05］。急性ITP患儿血浆中的IL-13含量与外周血淋巴细胞PPAR-γ mRNA表达变化呈正相关(r=0.89,P<0.05)。结论：急性ITP患儿外周血淋巴细胞PPAR-γ mRNA表达上升,并与IL-13水平呈正相关,PPAR-γ与IL-13可能均参与了急性ITP的发病过程。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：367-370］     

核因子-κB/抑制蛋白-κB售号通路介导的激素敏感型单纯性肾病患儿病毒基因友式激活

目的研究核因子-κB（NF-κB）／抑制蛋白-κB（IκB）信号通路在激素敏感型单纯性肾病（SRSNS）患儿病毒基因反式激活中的作用。方法采用电泳迁移率改变实验、逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和酶标记免疫吸附分析法（ELISA）分别测定SRSNS．肾炎性肾病、继发性肾小球疾病、毛细支气管炎和正常儿童外周血单个核细胞（PBMCs）NF-κB活性、呼吸道病毒基因和血浆病毒抗体；同时采用Western blot和ELISA分别检测SRSNS和正常儿童IxB0蛋白质表达和血浆IL-8水平。结果与SRSNS缓解期和其他组比较，SRSNS活动期组NF-κB活性明显增加。NF—κB活性与呼吸道病毒检出阳性率呈正相关趋势。SRSNS活动期血浆IL-8水平增高，且与NF-κB活性呈正相关（r=0．88，P〈0．001）。SRSNS活动期患儿IκBα蛋白质明湿低于SRSNS缓解期和正常儿章，IκBα蛋白质水平与NF-κB活性呈负相关（r=-0884，P〈0．05）。结论NF—κH／IκB信号通路介导的病毒基因反式激活过程，可能足呼吸道病毒触发SRSNS的主要机制之一。     

过敏性紫癜病儿树突细胞分泌白细胞介素-12水平与T_H1/T_H2的变化

目的：观察过敏性紫癜(HSP)病儿外周血树突细胞(DC)产生IL12的变化,并探讨其对TH1/TH2平衡的影响及在HSP发病机制中的意义。方法：应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测60例HSP病儿(HSP组)及21例健康儿童(对照组)血浆干扰素γ(IFNγ)、白细胞介素4(IL4)、白细胞介素12(IL12)水平。并对其中22例HSP病儿及21例健康儿童外周血单个核细胞(PBMC)进行体外培养以诱生出DC,用ELISA法检测培养上清液中IL12水平,同时应用间接免疫荧光法检测CD1a+细胞表达率。结果：①HSP组血浆IFNγ水平低于对照组(30.59±11.27pg/mLvs43.38±19.19pg/mL,P<0.01),IL4水平高于对照组(45.08±9.19pg/mLvs32.95±7.10pg/mL,P<0.01),IFNγ/IL4比值低于对照组(0.70±0.28vs1.33±0.57,P<0.01),IL12水平低于对照组(153.95±91.88pg/mLvs323.06±162.34pg/mL,P<0.01);HSP组和对照组各自血浆中IL12水平与IFNγ水平呈正相关(P<0.01,0.05),与IL4水平无相关性(P>0.05),与IFNγ/IL4比值呈正相关(P<0.01)。②HSP组培养上清液IL12水平低于对照组(357.06±153.56pg/mLvs489.80±213.45pg/mL,P<0.05),且与血浆IL12水平呈正相关(P<0.01)。③HSP组CD1a+细胞表达率低于对照组(27.42±10.75)%vs(35.68±12.18)%,(P<0.05),与培养上清液和血浆IL12水平皆呈正相关(P<0.01)。结论：HSP病儿存在TH1/TH2平衡失调,TH1功能的下降与血浆IL12水平低下呈正相关,而后者又与DC数量减少和/或功能低下关系密切,表明HSP病儿外周血DC数量减少和/或功能低下间接导致了TH1/TH2平衡的失调。     

哮喘儿童吸入糖皮质激素疗效与白三烯水平的相关性探讨

目的：探讨哮喘儿童半胱氨酰白三烯合成与分泌水平与吸入糖皮质激素（ICS）疗效个体差异的相关性。方法：32例5～12岁已规律使用ICS 6个月以上非急性发作期哮喘儿童,按病情控制程度分为ICS控制良好组（14例）与ICS控制不良组（18例）,取10例健康儿童作为对照组,比较3组儿童外周血多形核白细胞(PMNL)白三烯C4合成酶（LTC4S ）mRNA表达与尿白三烯E4（LTE4）分泌水平。LTC4S mRNA表达水平以qCt值表示,qCt值与基因表达水平呈负相关。结果：哮喘儿童组PMNL LTC4S mRNA 表达（qCt值:1.12±0.27）明显高于对照组（qCt值:1.42±0.12）,P<0.05。ICS控制不良组PMNL LTC4S mRNA表达水平最高（qCt值:1.03±0.17）,与ICS控制良好组（qCt值:1.24±0.33）和健康对照组(qCt值:1.42±0.12)比较差异均有显著性意义（分别P<0.05和P<0.01）。3组间尿LTE4比较差异无显著性意义。结论：哮喘儿童外周血LTC4S mRNA表达水平增高,且规范使用ICS控制不良患儿显著高于ICS控制良好患儿,提示体内白三烯水平增高可能与ICS控制不良有关。［中国当代儿科杂志,2009,11（6）：441-444］     

儿童急性髓细胞性白血病WAVEl基因对耐药相关基因表达影响的研究

目的 探讨儿童急性髓细胞性白血病(AML)中WASP家族Verprolin同源蛋白1(WAVE1)基因参与P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRPl)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)表达和调控的机制.方法 将52例患儿依据是否在随访期内持续缓解(CCR)分为难治/复发组和缓解组,应用实时定量PCR(RQ-PCR)法和蛋白印迹(Western blot)分别检测52例AML患儿治疗前及疾病发展过程中骨髓单个核细胞(BMMCs)中WAVE1、p-gp、MRPl、LRP及BCRP蛋白和基因mRNA的表达水平.将PCDNA3.1-WAVE1真核表达质粒转染HL60细胞构建WAVE1高表达HL-60细胞,将WAVE1基因的特异性小片段干扰RNA(WAVE1 siRNA)转染HL60/ADR构建WAVE1低表达HL60/ADR细胞;Western blot和RQ-PCR法检测基因转染前后白血病细胞系WAVE1、MRPl及BCRP蛋白及基因的表达水平.结果 ①复发/难治组病例的WAVE1及耐药相关基因水平明显高于缓解组患儿WAVE1基因表达水平(P<0.05);②同一患儿初治及复发时的WAVE1基因水平明显高于缓解期表达水平(P<0.05);③与HL60细胞相比较,HI.60/ADR细胞WAVE1 mRNA及蛋白表达水平增加3.53倍及95%;④转染WAVE1后HL60细胞系MRPl mRNA和蛋白表达水平分别增加16.54倍、129%,BCRP mRNA和蛋白表达水平分别增加4.93倍及96%,而转染WAVE1 siRNA的HL60/ADR细胞MRPl mRNA和蛋白的表达水平为干扰前的0.11倍及43%,BCRP mRNA和蛋白的表达水平为转染前的0.14倍及71%.结论 WAVE1与儿童AML的病程及预后相关,参与了髓系白血病细胞多药耐药的形成并可影响MRP及BCRPl等多个重要的耐药相关基因的表达和作用.     

哮喘儿童细胞因子信号转导抑制因子mRNA表达与Th1/Th2的关系

目的：细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)对JAK-STAT途径的细胞因子如白介素、干扰素等的调节起重要作用,目前SOCS与哮喘的关系仍在研究中。本研究观察SOCS1和SOCS3 mRNA在哮喘儿童外周血单个核细胞（PBMC）中的表达水平与CD4+ T细胞IFN-γ/IL-4平衡及特异性IgE（sIgE）的关系。方法：采集44例4~14岁过敏性哮喘患儿及30例健康儿童PBMC,分别用流式细胞仪分析CD4+ T细胞IFN-γ/IL-4比值,另提取总RNA,采用SYBR Green I逆转录荧光定量PCR的方法检测每组SOCS1和SOCS3 mRNA的表达。结果：哮喘组患儿外周血IFN-γ阳性的CD4+T细胞百分比［（15.7±2.0）%］及IFN-γ/IL-4比值（3.4±1.5）均低于对照组［分别为（19.1±2.7)%、4.8±2.9］;而SOCS1 mRNA（⊿Ct值11.1±1.9）表达显著高于对照组（⊿Ct值12.6±2.8）。两组儿童SOCS1 mRNA表达均与外周血分泌IFN-γ的CD4+ T细胞百分比呈负相关（P<0.05）。SOCS1和SOCS3与sIgE均无相关性。结论：SOCS1 mRNA在哮喘组患儿外周血中高表达,并与Th2占优势的免疫失衡有关。     

Serum lysozyme level in children with acute leukemia and malignant diseases

Serum lysozyme activity was measured in samples from 65 children with acute lymphatic and myelogenous leukemia, solid tumors and malignant lymphoma in comparison with 45 healthy children. All children with acute lymphatic leukemia (ALL) had significantly reduced levels of lysozyme before starting therapy compared with a control group (p less than 0,01). Children with ALL in complete remission had lysozyme levels comparable to normal children, while children with ALL in relapse showed pathological low levels again. Children with acute myelogenous leukemia (AML), solid tumors and malignant lymphomas had higher lysozyme concentration before therapy than healthy children. Determination of lysozyme activity in children with acute leukemia and malignant tumors is of value for diagnosis and to control the effect of therapy.     

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目的分析髓系抗原阳性儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的临床特点及预后关系。方法根据国际白血病欧洲协作组(EGIL)标准将1999—2004年上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心收治的33例髓系抗原阳性表达的ALL(My+ALL)分为双表型、双系列型给予正规治疗。对其预后进行观察。结果(1)My+ALL患儿,双表型26例(78.8%,26/33),其中B系ALL伴髓系表达17例(65.4%,17/26),T系ALL伴髓系表达6例(23.1%,6/26),T系B系伴髓系表达3例(11.5%,3/26)。双系列ALL患儿7例(21.2%,7/33)。(2)26例双表型ALL患儿治疗35d,缓解率80.7%。7例双系列型ALL仅1例达缓解(14.3%)。(3)生存状态双表型26例中20例处于缓解状态(76.9%),双系列型7例中仅1例(14.3%)。(4)复发情况双表型6例复发(23.1%,6/26),双系列7例中6例复发(85.7%)。结论髓系抗原阳性表达在儿童ALL时不能作为预后不良的因素,但双系列白血病患儿预后差,复发率高,长期生存机会少。     

凋亡抑制蛋白1和促凋亡蛋白第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂在急性淋巴细胞白血病患儿中的表达

目的 通过检测细胞性凋亡抑制蛋白1(c-IAP1)和促凋亡蛋白第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂(Smac)在儿童ALL中的表达,分析和探讨二者的关系及临床意义.方法 采用病例对照研究,研究对象为48例ALL患儿.其中初治组23例,缓解组21例,复发组4例;对照组为12例骨髓象正常的非恶性血液病患儿.应用SP免疫组织化学方法分别检测各组患儿骨髓中c-IAP1、Smac蛋白表达情况.采用SPSS 12.0软件进行统计分析.结果 c-IAP1蛋白在初治组骨髓中阳性表达率为60.9%,缓解组阳性表达率为28.6%,复发组阳性表达率为75.0%,对照组阳性表达率为16.7%.Smac蛋白在初治组骨髓中阳性表达率为 56.5%,缓解组阳性表达率为19.0%,复发组阳性表达率为75.0%,对照组阳性表达率为16.7%.c-IAP1、Smac蛋白在初治组ALL患儿骨髓中表达水平均分别高于缓解组(P<0.008)和对照组(P<0.008);初治组和复发组两因子比较,差异均无统计学意义(Pa＞0.05);复发组中c-IAP1、Smac表达水平均高于对照组(Pa＜0.008).结论 c-IAP1、Smac可能参与了儿童ALL的发生与发展.