可移植性Balb/c小鼠急性红白血病动物模型的建立

目的建立稳定的可移植性Balb/c小鼠的急性红白血病动物模型。方法将2×106个的EL9611红白血病细胞通过尾静脉输注每只Balb/c(H-2d)小鼠(n=10),体内传代建立EL9611红白血病动物模型,通过15代的连续传代观察模型的可靠性,以健康BALB/c鼠(n=4)作为正常对照。观察小鼠腹部、肝脾重量,计数实验组和正常对照组的外周血白细胞数,取发病晚期小鼠的外周血涂片行Giemsa染色观察,肝脾组织经10%甲醛固定、石蜡切片、HE染色检查,计算小鼠平均生存时间、发病率和死亡率。结果接种2×106个EL9611白血病细胞后实验组平均生存时间(MST)为(14.5±2.1)d,生存时间与正常对照组相比,P<0.01,经15代的连续传代,未见自发缓解,发病率和死亡率均为100%,无性别选择性,发病晚期小鼠出现肝脾肿大和外周血WBC升高等典型白血病的表现,死亡时肝重(2.40±0.48)g,脾重(0.84±0.20)g,与正常对照组相比,P<0.01,死亡前外周血WBC计数为(3.33±0.27)×107/mL,与正常对照组比,P<0.05,外周血中可见多量异形白血病细胞,病理检查示肝脾正常组织结构破坏,大量白血病细胞浸润。结论采用EL9611红白血病细胞2×106静脉输注体内传代的方式可建立起稳定的可移植性Balb/c小鼠的急性红白血病动物模型。     

阿霉素预处理的小鼠红白血病细胞降低红白血病细胞的成瘤性

目的: 研究阿霉素(ADM)处理的小鼠红白血病(MEL)细胞是否可以发生免疫原性死亡,预先输注此细胞是否可以降低MEL细胞在昆明(KM)小鼠体内的成瘤性。方法: 用ADM诱导MEL细胞发生约70%凋亡率,即发生免疫原性死亡。 30只KM小鼠分3组,分别为小鼠红白血病模型组(模型组)、ADM诱导治疗组(ADM组)和空白对照组(对照组)。模型组经尾静脉输注PBS给KM小鼠,8 d后输注MEL细胞1×10⁶/只;ADM组经尾静脉输注ADM处理的MEL细胞给KM小鼠,9×10⁶/只,8 d后输注MEL细胞1×10⁶/只;对照组未行任何人为干预。观察各组小鼠的生存时间、濒死或第80 d 时外周血白细胞数目和体重。结果: 在体外使用4 mg/L 阿霉素作用于MEL细胞24 h后,诱导MEL细胞约70%凋亡率,发生了免疫原性死亡。在小鼠体内,观察80 d,对照组小鼠全部存活, 模型组全部成瘤死亡,ADM组有1只长期生存。ADM组与模型组相比较,生存时间延长(P<0.01),濒死或第80 d 时外周血白细胞数目降低(P<0.01),濒死或第80 d 时体重增加(P<0.01)。结论: 将发生免疫原性死亡的MEL细胞预先输注到KM小鼠体内,KM小鼠产生抗肿瘤免疫应答,降低了活性MEL细胞在KM小鼠体内的成瘤性,改善KM小鼠生存时间和生存质量。     

不成熟CD8α+DC经同种白血病抗原冲击后移植物抗白血病效应的体外研究

目的: 观察不成熟CD8α⁺树突状细胞(DC)体外经同种异基因白血病细胞全抗原冲击后的移植物抗白血病(GVL)效应。方法: C57BL/6(H-2^b)小鼠的骨髓细胞以GM-CSF +IL-4 +SCF +Flt3L体外诱导不成熟CD8α⁺DC,第3 d加入0 mg/L、2.5 mg/L、5 mg/L、10 mg/L和20 mg/LBALB/c(H-2^d)小鼠来源的同种异基因EL9611红白血病细胞抗原冲击,冲击后DC与同系(H-2^b)T细胞按DC/T 1∶1、2∶1、4∶1比例共培养,MTT法观察T细胞增殖情况,ELISA法检测上清中IFN-γ和IL-10的含量,LDH释放法检测T细胞对EL9611细胞的杀伤活性。以成熟DC为对照,观察同种异基因不成熟CD8α⁺DC体外对EL9611白血病细胞的GVL效应。结果: 同种红白血病全抗原冲击后不成熟CD8α⁺DC可有效刺激同系T细胞增殖,作用随DC/T比例增加而增加,增殖效应在 小剂量抗原(≤5 mg/L)冲击时更明显(P<0.05);Ag冲击后不成熟CD8α⁺DC刺激T细胞分泌IFN-γ和IL-10明显增高(P<0.05),IL-10的分泌与不成熟CD8α⁺DC发挥GVL效应存在一定的负相关关系,Ag冲击浓度较低而IL-10分泌少时,T细胞增殖活性较强。杀伤实验结果显示,白血病特异性T细胞对EL9611靶细胞的杀伤活性随抗原冲击浓度的增加而升高,浓度为2.5 mg/L时,杀伤率即可达90%,非特异性杀伤实验显示白血病特异性T细胞对同种异基因正常脾细胞的杀伤活性低于对照组(P<0.05),表明杀伤作用为抗原特异性杀伤,对正常细胞无明显杀伤。结论: 经同种异基因白血病抗原冲击后不成熟CD8α⁺DC体外能刺激同系T细胞产生一定的GVL效应。     

骨髓间充质干细胞对致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入的影响

目的: 前期的研究已经证实致敏小鼠造血干/祖细胞移植植入失败率高。本研究拟通过骨髓间充质干细胞(MSCs)进行干预,观察能否提高造血干、祖细胞移植的植入率。方法: 应用贴壁培养法体外培养正常小鼠骨髓MSCs,并分为6个实验组,包括实验组1:d11 MSCs干预的致敏组;实验组2: d0 MSCs干预的致敏组;实验组3:d11和d0 2次MSCs干预的致敏组;实验组4: 无MSCs干预的致敏小鼠对照组;实验组5:无MSCs干预的正常小鼠(非致敏小鼠)移植对照组;实验组6:无MSCs干预的正常小鼠不移植对照组。观察指标包括生存分析、移植效果分析(血象改变、骨髓细胞恢复及嵌合分析等)和移植物抗宿主病(GVHD)检测,最终评估MSCs干预对各实验组异基因造血干/祖细胞移植植入率的影响效果。结果: 与对照组(实验组4、5、6)比较,MSCs干预(实验组1、2、3)在2次异基因脾细胞注射法致敏的动物模型进行异基因造血干/祖细胞移植时,未能促进骨髓造血干/祖细胞移植的植入,也未能延长致敏动物移植后的生存时间。结论: 体内应用1×10⁶ MSCs干预,未能促进2次异基因1×10⁶ C57BL/6小鼠脾细胞输注法建立的重度致敏模型异基因造血干/祖细胞移植的植入。     

NK细胞在小鼠异基因骨髓移植中的作用

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在异基因骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)、移植排斥、骨髓植入及造血重建的影响。方法:以近交系小鼠C57/6j(H-2^b)为供鼠、BALB/c(H-2^d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和/或NK细胞进行异基因骨髓移植,用流式细胞仪检测受鼠的CD₃₄^＋细胞计数和H-2K^b＋细胞表达水平,血细胞自动分析仪检测外周血白细胞计数,并结合临床表现和病理检查,比较不同移植组的存活率、GVHD、植入水平及造血重建等。结果:增加NK细胞组的小鼠存活率显著大于不增加NK细胞组,小鼠出现GVHD的数量少、程度轻,外周血白细胞及骨髓CD₃₄^＋细胞恢复快、H-2K^b＋细胞表达水平高。结论:NK细胞抑制小鼠异基因骨髓移植中的GVHD和移植排斥,促进骨髓植入及造血重建。     

胎肝来源Sca - 1+细胞在体内分化为神经细胞研究

目的:为了了解胎肝干细胞是否具有向神经组织细胞分化的潜能。方法:PCR检测sry基因分析孕145d胚胎鼠性别；采用免疫磁珠法分离雄性胎鼠肝的Sca-1⁺细胞，尾静脉注射Sca-1⁺细胞(2.0×10³个/小鼠)到致死剂量放射线照射的雌性小鼠。移植60、120、180d后采用免疫组化和FISH双染色检测受体小鼠脑组织中供体来源细胞特性。结果:受体雌鼠脑组织内存在大最Y染色体阳性细胞。免疫组化分析显示，部分Y染色体阳性细胞表达神经组织特异标志，如神经元核特异蛋白(NeuN,Neuron-specificnucleiprotein)、部分Y染色体阳性细胞表达星形胶质细胞特异标志，如胶质纤维酸性蛋白(GFAP,Glialfibrillaryacidicprotein)等。结论:移植的胎肝Sca-1⁺细胞，含造血干细胞，能分化成神经细胞和星形胶质细胞。     

hTERT基因反义核酸促进顺铂诱导原代急性淋巴细胞白血病细胞凋亡的研究

目的:利用人类端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的反义寡核苷酸(ASPS-ODN)抑制人原代急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞hTERT基因表达后,观察顺铂对ALL细胞凋亡的影响。方法:采用间接免疫荧光标记法通过流式细胞仪检测hTERT蛋白表达量的变化;以台盼蓝拒染法计数细胞数,确定细胞的增殖情况;Hoechst33258和PI双染色法观察凋亡细胞的形态变化;通过流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果:hTERT反义核酸作用于ALL细胞72hhTERT蛋白表达阳性率为(32.17±3.00)%,与空白对照组(66.31±2.84)%及正义核酸作用组(62.56±6.11)%比有显著差异(P<0.05);而正义核酸作用组与空白对照组比无显著差异(P>0.05)。hTERT反义核酸作用于ALL细胞24h加入顺铂,再共同作用48h,ALL活细胞均数为1.750×10⁸cells/L,与单用顺铂组(2.090×10⁸cells/L)及hTERT正义核酸联用顺铂组(1.990×10⁸cells/L)相比,对细胞抑制明显增强(P<0.05)。hTERTASPS-ODN作用于ALL细胞24h再加入顺铂作用48h,细胞出现典型的凋亡形态学改变。hTERTASPS-ODN与25μmol/L顺铂联合作用于ALL细胞48h的凋亡细胞百分率(37.85±2.44)%分别同SPS-ODN与顺铂联合作用组(15.16±2.8)。     

术前输注供者CD80low/CD86low树突状细胞，延长小鼠同种异体移植心脏存活

目的:应用B7-1和B7-2反义寡核苷酸(ASB7-1/ASB7-2oligo)抑制CD80(B7-1)、CD86(B7-2)在供体小鼠骨髓树突状细胞(DC)上的表达,观察这类DC对同种异体小鼠心脏移植存活时间的影响并探讨其机理。方法:小鼠B7-1和B7-2反义寡核苷酸在lipofectamine协助下分别转染供体鼠C57BL/10J(B10)小鼠骨髓DC,流式细胞仪检测其CD80/CD86的表达,证实为CD80^low/CD86^low。将各组DC经尾静脉输注到受体小鼠C3H/HeJ(C3H)体内,1周后进行心脏移植术,观察存活时间;体外实验观察各组DC对同种异体T细胞的激活作用,包括混合淋巴细胞反应、细胞毒性效应、及IL-2的产生。结果:ASB7-1和ASB7-2分别显著抑制DC表达CD80/CD86;转输这些CD80^low/CD86^lowDC可使小鼠心脏移植物存活时间显著延长,分别为(18.6±0.89)d和(23.67±10.73)d,与转输成熟骨髓DC(IL-4DC)组和生理盐水注射组(6.22±0.97)d、(11.17±1.72)d比较,均有显著差异(P<0.01);CD80^low或CD86^lowDC对异体T细胞激活作用较弱,表现为T细胞增殖能力、IL-2产生及细胞毒杀伤均明显低。结论:应用反义寡聚核苷酸转染供者DC,降低其CD80或CD86的表达,可以抑制供者特异性的免疫应答,延长移植物存活时间。     

PGK驱动逆转录病毒载体介导HSV-TK/GCV控制GVHD的研究

目的：研究磷酸甘油酸激酶（PGK）启动子驱动的逆转录病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦（HSV-TK／GCV）系统在小鼠异基因骨髓移植（allo-BMT）后能否减轻移植物抗宿主病（GVHD）。方法：将转HSV-TK基因的逆转录病毒感染供鼠（C57BL/6鼠）脾淋巴细胞，感染后细胞与供鼠骨髓细胞混合移植给Coγ7射线照射后的受鼠（BALB／c鼠）。移植后腹腔注射GCV，用药1周，按移植后首次给药时间，分为GCV0d组、GCV7d组、GCV12d组。观察移植后受鼠生存期、存活率、GVHD发生率及严重程度、T细胞免疫重建（CD3、CD4、CD8）及异基因嵌合等指标。结果：TK／GCV0d组、TK／GCV7d组小鼠平均生存时间分别为（26.90±4.88）d、（27.00±4.80）d，较TK／GCV12d组（21.504±3.26）d和移植对照组（15.10±O.43）d明显延长（P〈0.05），TK／GCV0d组与TK／GCV7d组之间比较差异无统计学意义（P〉0.05）。对照组小鼠12～14d100％发生Ⅲ～Ⅳ级GVHD，实验组死亡小鼠有Ⅱ～Ⅳ级GVHD病理学改变，而长期生存小鼠仅出现Ⅰ～Ⅱ级GVHD。TK／GCV0d组、TK/Gcv7d组、TK／GCV12d组在移植后5、10、15d3个时间点检测CD4^＋ T细胞均高于对照组（P〈0.05），CD8^＋ T细胞均低于对照组（P〈0.05）。移植后30d检测10只受鼠异基因嵌合率均在95％～100％。结论：PGK启动子驱动的逆转录病毒载体介导HSV-TK／GCV系统能有效控制小鼠allo-BMT后GVHD，移植后早期预防性用药效果优于发生GVHD后治疗性用药。     

小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

目的：建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病（GVHD）模型，为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法：以C57BL/6 (H-2^b) 小鼠为供鼠、BALB/c (H-2^d) 小鼠为受鼠，在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD，20%的小鼠长期存活（超过120 d），无急性GVHD表现；混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异，其中骨髓与外周淋巴细胞1:1混合组小鼠全部在移植后5-14 d出现典型的弓背体位，存活期6-24 d，临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论：以供鼠骨髓与外周淋巴细胞1:1混合进行的异基因骨髓移植，100%引出致死性的急性GVHD。     

慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞对小鼠移植物抗宿主病的作用研究

目的 通过慢病毒载体介导的鼠叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因表达构建鼠基因工程调节性T细胞(Tr),探讨输注基因工程Tr细胞对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠Foxp3基因转导入BALB/c小鼠的CD4+CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Tr细胞.建立小鼠异基因骨髓移植模型,在移植时联合输注基因工程Tr,通过受鼠移植后生存期、组织病理学改变、炎性细胞因子浓度等指标评价其防治GVHD的作用.并与单纯照射组、移植对照组、空载体对照组相比较.结果 单纯照射组、移植对照组、工程Tr组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(8.8±0.6)d、(36.7±2.5)d、(51.6±4.0)d和(34.1±2.3)d,工程Tr组小鼠存活时间明显长于其他各组(P＜0.05).移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变,工程Tr组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常,未见GVHD病理表现.移植后移植对照组、工程Tr组、空载体对照组受鼠血清IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度在21～28 d时达高峰,工程Tr组在21 d时IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度高峰较其他两组为低(P＜0.05).结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Tr细胞可通过减少受鼠移植后炎性细胞因子的分泌有效减少GVHD的发生,减轻其严重程度.     

雷公藤多甙对急性移植物抗宿主病小鼠细胞因子的影响

目的:观察雷公藤多甙对骨髓移植时移植物抗宿主病(aGVHD)小鼠血清IL-2、TNFα、IL-4和IL-10浓度的影响, 探讨雷公藤多甙抗aGVHD的作用机制。方法:应用直线加速器排空C₅₇BL/6小鼠骨髓后, 注入BALB/C小鼠骨髓与脾淋巴细胞的混合液, 复制出aGVHD模型。应用ELISA法检测经雷公藤多甙、环孢素A(CsA)+氨甲喋呤(MTX)和雷公藤多甙+CsA处理后, 受鼠血清中IL-2、TNFα、IL-4和IL-10浓度。结果:①雷公藤多甙组小鼠11d的生存率(9/10)高于异基因骨髓移植组(8/19);②雷公藤多甙组小鼠血清中IL-2、TNFα的浓度明显低于异基因骨髓移植组(P＜0.05);IL-10的浓度明显高于异基因骨髓移植组(P＜0.05), IL-4的浓度变化不明显(P＞0.05)。结论:雷公藤多甙可能通过调节促炎/抑炎细胞因子的分泌, 而发挥其明显的抗aGVHD作用。     

Combination of intra-bone marrow-bone marrow transplantation and subcutaneous donor splenocyte injection diminishes risk of graft-versus-host disease and enhances survival rate

The combination of allogeneic bone marrow transplantation (allo-BMT) and donor lymphocyte infusion (DLI) is a useful method for establishing donor chimerism and preventing a relapse of leukemia/lymphoma. However, there is a risk of inducing uncontrollable fatal graft-versus-host disease (GVHD). In fact, allo-BMT plus intravenous (IV)-DLI using donor splenocytes induces fatal GVHD in recipient mice. In this study, we examined the effects of the combination of intra-bone marrow (IBM)-BMT and the subcutaneous injection of donor splenocytes (SC-DLI) on the allo-BMT system. Recipient BALB/c mice were conditioned by sublethal irradiation (5 Gy), followed by IBM-BMT plus IV-DLI or SC-DLI in C57BL/6 mice. The IV-DLI group showed better engraftment of donor hemopoietic cells than the control group (without DLI) but showed fatal GVHD. The SC-DLI group, however, showed good reconstitution and mild GVHD. These results suggest that the combination of SC-DLI and IBM-BMT promotes the reconstitution of hemopoiesis and helps reduce the risk of GVHD.     

小鼠异基因造血干细胞移植后使用G-CSF对aGVHD的影响

 目的: 探讨小鼠异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后使用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响及其可能的机制。方法: 以雄性C57BL/6小鼠(H-2^b)为异基因供鼠,雄性BALB/c小鼠(H-2^d)为同基因供鼠;以接受8 Gy[⁶⁰Co] γ射线全身照射(TBI)预处理雌性BALB/c小鼠为受鼠,并随机分为7组:单纯TBI组、同基因骨髓+脾细胞移植(Syn-BMST)组、异基因骨髓移植(allo-BMT)组、异基因骨髓+脾细胞移植(allo-BMST)组、Syn-BMST后G-CSF给药(Syn-BMST+G-CSF)组、allo-BMT后G-CSF给药(allo-BMT+G-CSF)组和allo-BMST后G-CSF给药(allo-BMST+G-CSF)组,各G-CSF给药组从移植后第1天(+1 d)开始皮下注射G-CSF 2 μg/d,观察至+60 d。比较各组生存时间、aGVHD发生情况和病理改变,流式细胞术检测骨髓H2-Kb⁺细胞百分率(异基因嵌合率),比较allo-BMST和allo-BMST+G-CSF组+10 d时血清细胞因子(IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α)水平、脾总有核细胞数(SpTNC)和脾细胞免疫表型的差异。结果: 单纯TBI组小鼠于照射后9~15 d死于造血衰竭,其余各组+10 d时均100%获得造血重建,随机抽取2只异基因骨髓移植受鼠,+30 d供者细胞嵌合率分别为99.8%和99.4%,表明清髓性allo-HSCT模型建立成功。Syn-BMST、Syn-BMST+G-CSF、allo-BMT和allo-BMT+G-CSF组小鼠观察至+60 d均未发生aGVHD。与allo-BMST组相比,allo-BMST+G-CSF组受鼠出现aGVHD时间早、程度重、病理改变严重、存活时间明显缩短(P<0.05)、+10 d SpTNC明显增加(P<0.05)、脾脏NK细胞显著扩增 (P<0.01)、DC1/DC2比值减低(P<0.05),而2组血清IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α水平差异无统计学意义。结论: 移植后使用G-CSF对小鼠异基因单纯骨髓移植后aGVHD无明显影响,但能显著加重allo-BMST后aGVHD的严重程度并缩短受鼠生存时间,该效应可能与G-CSF诱导供鼠NK细胞扩增有关,提示临床allo-HSCT后早期使用G-CSF可能触发或加重aGVHD的风险。     

Progressive Accumulation of Bacterial Lipopolysaccharide In Vivo During Murine Acute Graft-Versus-Host Disease

In a previous report the authors demonstrated that acute graft-versus-host disease (GVHD) was associated with pathologic amounts of tumour necrosis factor alpha (TNF-α) and the appearance of lipopolysaccharide (LPS) in the blood of GVH reactive mice just prior to death. In this study the authors have investigated the kinetics of LPS accumulation in different organs during the course of acute GVHD using a murine model. Unirradiated C57BL/6×AF1 (B6AF₁) mice were transplanted with C57BL/6 (B6) lymphoid cells and killed at predetermined times after transplantation for LPS analysis. Control animals were injected with either 60×10⁶ B6AF1 lymphoid cells (syngeneic) or 60×10⁶ irradiated (2000 rad) CBA lymphoid cells (allogeneic). Lipopolysaccharide began to appear in the liver and the spleen of GVH reactive mice from day 2 post-transplant and by day 10 all GVH reactive mice tested positive for hepatic and splenic LPS. Low levels of LPS were detected in some control mice from days 2 to 10 post-transplant but LPS was never detected after day 10 in control groups. Total hepatic and splenic LPS in acute GVH reactive mice peaked at a time coincident with the appearance of LPS in the serum and with the onset of mortality. These results demonstrate that tissue levels of LPS increase throughout the course of acute GVHD and are sufficient to trigger the release of pathologic amounts of TNF-α from primed macrophages resulting in the cachexia and mortality associated with acute GVHD in this model.     

Activity of ciprofloxacin and levofloxacin in experimental pneumonia caused by Klebsiella pneumoniae deficient in porins, expressing active efflux and producing QnrA1

The objective of this study was to evaluate the activities of ciprofloxacin and levofloxacin in a murine model of pneumonia caused by Klebsiella pneumoniae C2 (with altered GyrA, deficient in porins and expressing active efflux of quinolones) and the transconjugant C2pMG252 derived from it and expressing the qnrA1 determinant. MICs and MBCs of the two quinolones were determined according to CLSI guidelines. Time-kill curves (at 1× and 4× MIC) were also performed to assess bactericidal activity. An experimental model of pneumonia in mice was evaluated. Groups of 15 mice were infected with either strain and treated with ciprofloxacin (80 mg/kg/day) or levofloxacin (100 mg/kg/day). Control non-treated animals were also evaluated. In the case of strain C2, log₁₀ CFU/g of lung in non-treated animals was 9.16 ± 2.16. This value was reduced to 3.53 ± 1.04 (p <0.001) and 3.38 ± 0.46 (p <0.001) in animals treated with ciprofloxacin or levofloxacin, respectively. Percentages of surviving mice were 26.7% (control group) and 100% (both ciprofloxacin and levofloxacin; p <0.001 vs. controls). Bacterial counts (log₁₀ CFU/g) in lungs of animals infected with strain C2pMG252 were 9.65 ± 2.49 in non-treated animals and 7.74 ± 2.67 and 7.57 ± 3.84 for those treated with ciprofloxacin or levofloxacin, respectively (p >0.05 vs. control group). Of non-treated animals infected with strain C2pMG252, 14.3% survived. Ciprofloxacin and levofloxacin improved the survival in these mice (53.3% for both antimicrobials, p 0.03). In conclusion , the expression of qnrA1 in K. pneumoniae with additional mechanisms of resistance causes decreased efficacy of fluoroquinolones in a pneumonia model in mice.     

丙戊酸协同伊马替尼诱导K562细胞凋亡并下调Bcr/Abl mRNA和磷酸化蛋白激酶B的表达

 目的：探讨丙戊酸联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞株K562凋亡的影响,同时探索其可能的作用机制。方法：K562细胞分别用丙戊酸、伊马替尼以及两药联合处理。检测各组细胞在药物处理后的细胞周期、细胞凋亡、Bcr/Abl mRNA 水平、总蛋白激酶B（PKB）以及磷酸化PKB （p-PKB）水平。结果：丙戊酸组、伊马替尼组和两药联用组K562细胞凋亡率分别为(11.47±0.25)％、(28.43±1.70)％和(57.73±4.38)% (P<0.05),对于细胞周期各指标,两药联用组与单药组无明显差异。Bcr/Abl mRNA以及p-PKB在丙戊酸组、伊马替尼组和两药联用组的水平分别为(0.00±0.00)、(64.17±12.27)和(0.00±0.00)×10 9 copies/(g total mRNA)以及0.25±002、0.17±0.01和0.08±0.01(均P<0.05),总PKB 3组细胞间无明显差异。结论：丙戊酸能协同伊马替尼促进K562细胞凋亡,其作用机制可能与降低Bcr/Abl mRNA和p-PKB水平有关。