赖氨大黄酸通过抑制HER-2信号通路诱导乳腺癌SK-Br-3细胞凋亡

为研究赖氨大黄酸(rhein lysinate，RHL)对人乳腺癌细胞株SK-Br-3细胞增殖、凋亡的影响及HER-2信号通路在其中的作用。应用MTT法检测赖氨大黄酸对SK-Br-3细胞增殖的影响；应用流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡；应用Western blotting检测HER-2信号通路蛋白表达水平及蛋白磷酸化水平；应用RT-PCR和免疫化学方法分别检测HER-2 mRNA和蛋白表达水平。结果显示， 赖氨大黄酸能有效抑制乳腺癌SK-Br-3细胞增殖， 作用48 h的IC₅₀值为85 μmol·L^{-1，并能诱导其凋亡，随药物浓度的增加，细胞凋亡率也逐渐升高；Western blotting结果显示，赖氨大黄酸抑制HER-2蛋白表达和蛋白磷酸化，抑制NF-κB蛋白表达，升高p53和p21蛋白表达；RT-PCR和免疫化学结果表明，赖氨大黄酸能抑制HER-2 mRNA的转录水平，从而抑制其蛋白表达。因此，赖氨大黄酸能有效抑制SK-Br-3细胞增殖，并诱导其凋亡，HER-2/NF-κB/p53/p21参与了赖氨大黄酸诱导SK-Br-3细胞凋亡的过程。赖氨大黄酸解决了大黄酸不溶于水的难题，并且能够通过HER-2信号通路诱导细胞凋亡，有望成为临床肿瘤辅助化疗药物。}     

环孢菌素A阻断人HL-60抗药性细胞于G1期而诱导敏感细胞凋亡

进一步研究了抗三尖杉酯碱的HL-60细胞(HR20)抗细胞凋亡的机制及该抗性和抗药性的关系。结果表明,环孢菌素A(CsA)20,10μg·ml^-1诱导HL-60细胞发生凋亡,而阻断HR20细胞于G₁期,就不能诱导细胞发生凋亡。低浓度的CsA明显增加柔红霉素在HR20细胞内的积聚,其逆转抗药性作用与阻断细胞周期运行无关。CsA10μg·ml^-1处理HR20细胞,可引起50kDa的蛋白质高度磷酸化。结果提示:环孢菌素A阻断抗三尖杉酯碱的HL-60细胞于G₁期,而诱导敏感的HL-60细胞发生凋亡,其阻断作用与抗药性无关。     

大黄素对血管生成的抑制作用

目的研究大黄素对血管生成的抑制作用及相关作用机制。方法用鸡胚观察药物对血管生成的影响;用培养的内皮细胞检测大黄素抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡作用。结果大黄素150和300 μg/egg对鸡胚的血管生成的抑制率分别为37.6%和63.2%。大黄素抑制内皮细胞增殖，在有bFGF、无bFGF、有VEGF的条件下，其IC₅₀值分别为5.56，8.40和6.91 mg·L^-1。大黄素可诱导内皮细胞凋亡，并可干扰内皮细胞周期，出现G₂/M期阻滞；可导致Cyclin B1,P34^cdc2和Bcl-2等蛋白的表达下调，但对Bax的表达无影响。结论大黄素有抑制血管生成作用，有可能应用于肿瘤治疗。     

白藜芦醇通过抑制Akt/mTOR信号通路活性促进肺癌细胞自噬发挥抗肿瘤效应的研究

目的 探讨白藜芦醇对肺癌细胞生长活性的抑制效应及可能的机制。方法 稳定培养肺癌细胞系H292,分别加入含10、20、40 μmol·L^-1白藜芦醇的培养基进行干预,采用CCK-8、流式细胞术、细胞集落形成实验检测白芦藜醇对H292细胞生长活性的影响,采用免疫荧光、Western blotting检测白藜芦醇对细胞Akt/mTOR信号通路相关蛋白的影响。结果 （1） CCK-8检测结果显示,白藜芦醇对H292细胞增殖有明显抑制作用（P<0.05）,且呈时间和剂量依赖性,同时对H292细胞周期有明显影响,能阻滞细胞周期于G₂/M期。（2）白藜芦醇可明显抑制H292细胞集落形成（P<0.05）,并呈剂量依赖性。（3） Western blotting检测结果显示,白藜芦醇以剂量依赖的方式诱导H292细胞中LC3-II的累积。免疫荧光检测发现,白藜芦醇可诱导细胞核和线粒体中GFP-LC3显著增加。（4）自噬抑制剂3-MA能有效减弱白藜芦醇对H292细胞活力的抑制作用,溶酶体酸化抑制剂Bafilomycin A1则可促进白藜芦醇导致的LC3-II累积。（5）白藜芦醇可下调H292细胞中p-Akt、p-P70S6K、p-mTOR蛋白的表达（P<0.05）,而对Akt、P70S6K、mTOR蛋白的表达无明显影响（P>0.05）。结论 白藜芦醇可通过抑制Akt/mTOR信号通路抑制肺癌细胞的增殖。     

牛磺酸对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

观察牛磺酸(taurine，Tau)在血管紧张素II(angiotensin II，Ang II)诱导新生大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblast，CFb)增殖过程中对一氧化氮(nitric oxide，NO)及蛋白激酶C alpha(p-PKCα)的影响，以探讨牛磺酸抑制CFb增殖的信号转导途径。胰酶消化法分离培养新生大鼠CFb，用Ang II诱导促进其增殖，采用MTT法检测细胞增殖；ELISA法测定I型胶原、 III型胶原的含量；流式细胞仪检测细胞周期；硝酸还原酶法检测细胞上清液NO含量；Western blotting法检测p-PKCα含量。牛磺酸(40、 80和160 mmol·L^-1)可抑制Ang II诱导的CFb增殖及I型胶原、III型胶原合成增加(P<0.05，P<0.01)，并使细胞G₀/G₁期百分率增加，S期细胞百分率降低(P<0.05，P<0.01)。牛磺酸明显抑制p-PKCα的蛋白表达， 提高CFb NO含量， 与Ang II组比较差别具有明显统计学意义(P<0.05， P<0.01)。牛磺酸通过降低p-PKCα的表达而提高CFb NO的含量，使CFb的增殖和胶原合成受到抑制。     

紫杉醇诱导人乳腺癌MCF-7细胞周期阻断及凋亡的基因表达谱分析

目的研究紫杉醇诱导人MCF-7细胞周期阻断及凋亡的分子机制。方法用流式细胞仪分析紫杉醇对MCF-7细胞周期变化的影响，用自制的含9 984个已知基因和EST的高密度基因芯片检测MCF-7细胞在不同浓度紫杉醇作用下的基因表达变化。结果MCF-7细胞在100 nmol·L^-1紫杉醇作用24 h，流式细胞仪结果显示77.8%细胞阻断在G₂/M期和1.3%细胞发生凋亡；基因表达谱分析发现：在12.5 nmol·L^-1 (IC₅₀)及100 nmol·L^-1紫杉醇作用下，分别有27及77个基因差异表达。结论紫杉醇可诱导MCF-7细胞周期阻断在G₂/M期并引起部分细胞凋亡，该作用与药物浓度有关。基因表达谱分析显示部分差异表达基因参与细胞微管及骨架结构、细胞周期调控、以及DNA损伤修复和凋亡过程。     

甘草次酸对胃癌细胞SGC7901增殖、凋亡及PI3K-Akt-mTOR通路的影响

目的 探究甘草次酸对胃癌SGC7901细胞增殖、凋亡及PI3K-Akt-mTOR通路的影响。方法 体外培养胃癌SGC7901细胞,分为对照组和甘草次酸低、中、高浓度（12.5、25.0、50.0 μmol/L）组,药物处理24、48、72 h后,CCK-8法检测细胞增殖情况;药物处理48 h后,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved Caspase-3以及PI3K-Akt-mTOR信号通路中磷酸化PI3K、Akt、mTOR蛋白表达水平。结果 甘草次酸低、中、高浓度组胃癌SGC7901细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量相关性（P<0.05）。与对照组比较,甘草次酸低、中、高浓度组胃癌SGC7901细胞G₀/G₁期细胞比例显著降低（P<0.05）,G₂/M期细胞比例及凋亡率显著升高（P<0.05）,Bax、cleaved Caspase-3蛋白表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平显著降低（P<0.05）。结论 甘草次酸可抑制胃癌SGC7901细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路激活有关。     

藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞协同抑制作用的研究

目的 探索藏红花素联合顺铂对人宫颈癌HeLa细胞的协同抑制作用及相关调控机制。方法 取对数生长期人宫颈癌HeLa细胞,设置空白对照组（DMSO）、藏红花素组（400 μg·mL^-1）、顺铂组（5 μg·mL^-1）、联合组（藏红花素400 μg·mL^-1+顺铂5 μg·mL^-1）。干预48 h后,CCK-8检测HeLa细胞增殖抑制率,采用CompuSyn软件计算藏红花素与顺铂的联合指数（CI）,Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡,流式细胞术检测细胞周期分布,Western blotting检测激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Cleaved Caspase-3）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞周期素D1（Cyclin D1）、周期蛋白依赖激酶2（CDK2）的表达。结果 与顺铂组比较,联合组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,CI为0.68,具有中度协同效应;细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,G₀/G₁期细胞比例显著升高（P<0.05）,而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.05）,Cyclin D1、CDK2蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。与空白对照组比较,藏红花素组G₀/G₁期细胞比例显著升高而G₂/M期比例显著降低（P<0.01）,Cleaved Caspase-3、Bax表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高（P<0.01）,Cyclin D1、CDK2表达水平显著降低（P<0.05）。结论 藏红花素联合顺铂可协同抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖和生长,其作用机制可能与调控凋亡相关蛋白的表达从而促进细胞凋亡、阻滞细胞周期进程有关。     

川芎嗪对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及机制研究★

目的 探讨川芎嗪（TMP）对人结直肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法 以DMSO（空白对照组）、不同浓度（50、100、200 μg·mL^-1）的TMP和奥沙利铂（L-OHP，25 μg·mL^-1）干预对数生长期人结直肠癌SW480细胞48 h。采用MTT法和EdU插入实验检测各组SW480细胞增殖率，细胞克隆实验观察SW480细胞克隆形成能力，流式细胞术、Western blotting检测细胞周期、凋亡和蛋白表达。结果 与空白对照组比较，经50、100、200 μg·mL^-1的TMP或25 μg·mL^-1的L-OHP干预可明显降低SW480细胞增殖率，提高细胞凋亡率；经100、200 μg·mL^-1的TMP或25 μg·mL^-1的L-OHP干预可明显抑制细胞克隆形成能力，阻滞细胞周期于G₀/G₁期，提高PTEN、Cleaved Caspase-3、Bax、P27表达量和Bax/Bcl-2比值，降低p-Akt、cyclin D1、Bcl-2表达量和Akt磷酸化率，差异均具有统计学意义（P<0.05）。与L-OHP 25 μg·mL^-1组比较，经TMP 200 μg·mL^-1干预能够明显降低SW480细胞增殖率、提高凋亡率，提高PTEN、Bax、P27表达量和Bax/Bcl-2比值，降低p-Akt、cyclin D1表达量和Akt磷酸化率，差异均具有统计学意义（P<0.05）。结论 TMP可能通过上调PTEN抑制PI3K/Akt通路，进而抑制SW480细胞增殖并促进其凋亡。     

四嗪二甲酰胺对肺癌细胞株A549的体内外作用

为了观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制肺癌细胞株A549增殖、诱导细胞凋亡和体内抗肿瘤活性的作用及其机制，将不同浓度的ZGDHu-1与A549细胞在体外培养，用台盼蓝染色、SRB法、5′-溴-2′脱氧尿苷-ELISA法，观察ZGDHu-1对A549细胞增殖的作用；用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin V/PI双标记、Hoechst 33258荧光染色等技术检测细胞凋亡。腹腔注射ZGDHu-1后观察其对裸鼠移植瘤生长的抑制作用。用RT-PCR和流式细胞术观察A549细胞bcl-2，bax，p53基因和蛋白质的表达改变。结果表明，ZGDHu-1能抑制A549细胞的增殖和活力，呈现作用时间和剂量的依赖关系。A549细胞经ZGDHu-1作用后，大部分细胞阻滞于G₂-M期；出现DNA片段化，亚G₁峰显著增加，Annexin V+/PI-表达升高，Hoechst 33258荧光染色后出现凋亡细胞的特征性改变等。ZGDHu-1以10，20及40 mg·kg^-1剂量给裸鼠体内用药14 d后，移植瘤生长抑制率分别为43.7%，56.9%和60.0%。A549细胞经ZGDHu-1作用后，bcl-2基因和蛋白有所下调，但主要是上调bax基因和蛋白，导致bax/bcl-2比值明显增高，p53基因和蛋白表达也上调，均呈现剂量依赖性。ZGDHu-1在体内能明显抑制移植瘤的生长，体外通过诱导细胞凋亡抑制A549细胞增殖，其机制可能与上调bax和p53基因的表达有关。     

PI3K/Akt信号通路抑制剂对人胃癌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路抑制剂渥曼青霉素对人胃癌细胞增殖、细胞周期与凋亡的影响以及相关基因蛋白激酶B(pAkt)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kip1蛋白表达的影响.方法 分别用不同浓度渥曼青霉素处理处于对数生长阶段的BGC823细胞12、24、48 h,利用MTT实验检测其对胃癌细胞增殖的影响,胃癌细胞凋亡及细胞周期的检测采用流式细胞术,Western-blotting检测p-Akt、p-AMPK、Skp2及P27kip1蛋白的表达变化.结果 渥曼青霉素可明显抑制BGC823细胞的增殖,在一定范围内具有时间和浓度依赖性.20 mmol/L渥曼青霉素作用细胞24 h时,细胞生长周期阻滞于G0/G1期,细胞凋亡率为(44.44±3.17)％;Western blot检测显示,pAkt、pAMPK及Skp2蛋白表达随着药物浓度的增加而减少,P27kip1蛋白表达随着药物浓度增加而增加.结论 PI3K/Akt信号通路抑制剂渥曼青霉素能够明显下调胃癌细胞的增殖活性,导致胃癌细胞周期被阻滞于G0/G1期并诱导细胞发生凋亡,进一步研究证实PI3K/Akt信号通路介导的Skp2及P27kip1蛋白调控在凋亡过程中发挥重要作用.     

Differential modulation of PI3-kinase/Akt pathway during all-trans retinoic acid- and Am80-induced HL-60 cell differentiation revealed by DNA microarray analysis

All-trans retinoic acid (ATRA) and Am80 are natural and synthetic derivatives of Vitamin A and have been used in the fields of oncology and dermatology for years. Their action was considered to be achieved mainly through binding to nuclear hormone receptors, retinoic acid receptors (RARs), although they have been observed to have different biological effects. For example, the two compounds have similar effects on differentiation but different effects on proliferation in human promyelocytic leukemia cell line HL-60 cells. To elucidate the genes responsible for this and other differences, we attempted for the first time to determine the genes whose expressions were differentially modulated during the time course of HL-60 cell differentiation by ATRA and Am80 treatment up to 72h utilizing DNA microarray and clustering analyses. As a result, the expressions of 204 genes were found to be modulated differentially by ATRA and Am80. Among them, we focused on two components of the PI3-kinase/Akt signal transduction pathway, phosphoinositide-3-kinase, beta-catalytic subunit and ribosomal protein S6 kinase polypeptide 1, which are related to the regulation of cell proliferation and apoptosis. Their expressions were specifically suppressed by ATRA, which coincided with the suppressive effects of ATRA on the HL-60 cell proliferation. Moreover, PI3-kinase inhibitors suppressed the proliferation of Am80-treated cells to the same extent as ATRA did. These results indicated that these gene products play a role in HL-60 cell growth suppression during the late stage of differentiation. The complete data and a list of the genes are available at .     

牡丹苷A诱导人肺癌A549细胞凋亡的作用和机制

目的:研究牡丹苷A对人肺癌A549细胞株的作用以及其诱导人肺癌A549细胞株凋亡机制。方法:本研究采用MTT法检测牡丹苷A对体外人肺癌细胞株A549增殖率的影响。Annexin V/PI双标法检测牡丹苷A对A549凋亡率,蛋白免疫印迹法和细胞免疫细胞化学法分别检测牡丹苷A对A549细胞株PI3K,Akt,NF-κBp65,Bax,Bcl-2的表达,并采用PI3K/Akt/NF-κB通路的激动剂IGF-1和抑制剂wortmannin进一步探讨牡丹苷A对PI3K/Akt/NF-κB信号通路的作用。结果:牡丹苷A能够抑制A549的增殖,上调Bax蛋白的表达量,下调Bcl-2蛋白的表达量,Bcl-2/Bax比值显著降低,同时降低PI3K, NF-κBp65的蛋白表达,抑制Akt磷酸化。结论:牡丹苷A能够阻碍A549增殖,并促进其凋亡,其诱导凋亡的机制可能与抑制PI3K/Akt/NF-κB通路有关。     

二氢青蒿素诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氢青蒿素对人早幼粒白血病细胞(HL-60)的治疗作用。方法采用台盼蓝染色法和MTT法测定二氢青蒿素对HL-60细胞存活的影响,吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)荧光双染色、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹分析凋亡相关蛋白的表达。结果二氢青蒿素可抑制HL-60细胞存活,诱导HL-60细胞凋亡,同时降低HL-60细胞Bcl-2蛋白的表达,增加Bax蛋白和凋亡执行蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,并呈浓度依赖性。结论二氢青蒿素可诱导HL-60细胞凋亡,其机制可能是通过对线粒体凋亡通路中Bcl-2,Bax和caspase-3蛋白表达的调控而发挥作用。     

Aloe-emodin induced in vitro G2/M arrest of cell cycle in human promyelocytic leukemia HL-60 cells.

In this study, we have evaluated the chemopreventive role of aloe-emodin in human promyelocytic leukemia HL-60 cells in vitro by studying the regulation of proliferation, cell cycle and apoptosis. Aloe-emodin inhibited cell proliferation and induced G2/M arrest and apoptosis in HL-60 cells. Investigation of the levels of cyclins B1, E and A by immunoblot analysis showed that cyclin E level was unaffected, whereas cyclin B1 and A levels increased with aloe-emodin in HL-60 cells. Investigation of the levels of cyclin-dependent kinases, Cdk1 and 2, showed increased levels of Cdk1 but the levels of Cdk2 were not effected with aloe-emodin in HL-60 cells. The levels of p27 were increased after HL-60 cells were cotreated with various concentrations of aloe-emodin. The increase of the levels of p27 may be the major factor for aloe-emodin to cause G2/M arrest in these examined cells. Flow cytometric assays and DNA fragmentation gel electrophoresis also confirmed aloe-emodin induced apoptosis in HL-60 cells. The levels of caspase-3 were increased after HL-60 cells were cotreated with 10 microM aloe-emodin for 12, 24, 48, and 72 hours. Taken together, aloe-emodin therefore appears to exert its anticarcinogenesis properties by inhibiting proliferation and inducing cell cycle arrest and apoptosis underwent activation of caspase-3 in human leukemia HL-60 cells.     

齐墩果酸对白血病HL-60细胞PI3K、Akt表达的影响

目的研究齐墩果酸(Oleanic acid,OA)对人白血病HL-60细胞PI3K、Akt表达的影响。方法 OA作用HL-60细胞后,采用透射电镜观察细胞形态,RT-PCR法检测HL-60细胞PI3K、Akt的mRNA表达。结果 OA作用于HL-60细胞后,细胞形态改变明显,出现凋亡小体,且PI3K、Akt的mRNA表达下调(P<0.01)。结论 OA可抑制HL-60细胞增殖,这可能与其下调HL-60细胞中PI3K、Akt的表达有关。     

Induction of caspase-3-dependent apoptosis in human leukemia HL-60 cells by δ-elemene

δ-Elemene, an antitumor component, is a chemical compound isolated from Curcuma wenyujin, a Chinese traditional herb. We examined whether δ-elemene could inhibit cell growth and cell cycle progression and induce apoptosis in human leukemia HL-60 cells. The results demonstrated that δ-elemene induces significant apoptosis of HL-60 cells, as shown by MTT assay, annexin V (AnV) binding of externalized phosphatidylserine (PS), and the mitochondrial probe JC-1 using flow cytometry. HL-60 cells treated with δ-elemene showed high percentages in the early apoptotic and late apoptoctic/necrotic stages, as well as caspase-3 activation of HL-60 cells. By monitoring the changes in cell cycle profiles, we confirmed that δ-elemene could interfere with the cell cycle in the G2/M phase and induce apoptosis in HL-60 cells in a time-dependent manner. Caspase-3 plays a direct role in proteolytic cleavage of the cellular proteins responsible for progression to apoptosis. Therefore we examined apoptosis in HL-60 cells after exposure to δ-elemene and measured caspase-3 activities with or without Z-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone (z-VAD-fmk, a broad-spectrum caspase inhibitor) pretreatment using flow cytometric analysis. The results showed that δ-elemene could induce caspase-3 activation as detected by the decrease in δ-elemene-induced caspase-3 activities after treatment with z-VAD-fmk. In the present study, δ-elemene activated typical caspase-dependent apoptosis in HL-60 cells, as demonstrated by an inhibitory effect of z-VAD-fmk on this cell death. During δ-elemene-induced apoptosis, cytochrome c and apoptosis-inducing factor were released into the cytosol and BAX was translocated from the cytosol to mitochondria. However, these were not prevented by z-VAD-fmk. In conclusion, our study demonstrated that δ-elemene could induce G2/M cell cycle transition and trigger apoptosis through a caspase-3-dependent pathway.     

Anti-proliferation,cell cycle arrest and apoptosis induced by a natural xanthone from Gentianopsis paludosa Ma,in human promyelocytic leukemia cell line HL-60 cells

1-hydroxy-3,7,8-trimethoxyxanthone (xanthone 1) was isolated from Gentianopsis paludosa Ma and identified by MS and NMR in our laboratory. In this study, the results showed that xanthone 1 is a potent inducer of anti-proliferation and apoptosis in HL-60 cells. When the cells treated with lower concentrations of xanthone 1 (12.4–74.4 μM), significant proliferation inhibition was detected by cell viability assay and morphological analyses, and conspicuous G1 and G2/M cell cycle arrest were observed by flow cytometric (FCM) analysis. However, when the cells treated with higher doses of xanthone 1 (82.7–330.8 μM), significant apoptosis was observed by double sequential AO/EB staining, DNA fragmentation assay and FCM analysis. In addition, conspicuous DNA damage was detected by comet assay. In short, all the results showed that xanthone 1 had a significant cytotoxic effect and could induce proliferation inhibition and apoptosis in HL-60 cells in a time- and dose-dependent manner. It was possible that xanthone 1 could induce DNA damage in HL-60 cells, which resulted in G1 phase arrest at the lower concentrations and G2/M phase arrest at the higher concentrations, thus inhibiting the cell proliferation, and irreparable DNA damage at the higher concentrations might be responsible for the occurrence of apoptosis.     

PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导影响的研究

目的探讨MEK1抑制剂PD98059对HL60细胞Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导以及细胞增殖的影响。方法四唑盐比色试验(MTT)法检测PD98059对HL60细胞增殖的抑制作用,流式细胞术观察PD98059对HL60细胞凋亡和G0/G1期阻滞的影响,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定PD98059对HL60细胞ERK2、p27、Skp2基因表达的影响,免疫组织化学SP法检测ERK2、p27、Skp2蛋白表达的改变情况。结果 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,该抑制作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05)。PD98059能够促进HL60细胞凋亡,该作用具有浓度及时间依赖性(P<0.05);PD98059作用HL60细胞48h,随着浓度的增加G0/G1期阻滞增强(P<0.05)。PD98059可使HL60细胞ERK2、Skp2的mRNA及蛋白表达量减少,p27的mR-NA及蛋白表达量增加(P<0.05)。结论 PD98059能够抑制HL60细胞的生长,诱导细胞发生G0/G1期阻滞,促进其凋亡,这可能是通过PD98059阻断Ras-MEK1/2-ERK1/2信号转导,影响了ERK2、Skp2、p27等的表达而实现的。     

大萼香茶菜甲素通过线粒体途径诱导HL-60白血病细胞凋亡

目的：观察大萼香茶菜甲素（macrocalyxinA,MA）体外诱导HL-60细胞凋亡,并探讨其作用机制。方法：不同浓度的MA与HL-60细胞进行培养,采用MTT比色法观察其对HL-60细胞增殖的抑制作用;细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin—V／PI双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析其促细胞凋亡效应;流式细胞术和RT-PCR分别检测Bcl-2、Bax、P53、Fas、线粒体膜蛋白（Ap02．7）、线粒体跨膜电位（AWm）与Bcl-2、Bax、P53、caspase-3 mRNA变化水平,研究其促凋亡机制。结果：MA呈现作用时间和剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖和活力;HL-60细胞经MA作用后,Wright—Giemsa染色和Hoechst荧光染色后细胞出现典型的凋亡小体,细胞阻滞于G0／G1期,DNA片段化,亚二倍体明显增高,Annexin—V／PI标记升高;MA诱导HL-60细胞凋亡过程中,Bcl-2、Fas、P53表达无明显变化,Bax、线粒体膜蛋白（Apo2．7）、caspase-3表达显著增加,Bax／Bcl-2比值升高,龇下降。结论：MA能抑制HL-60细胞增殖和细胞活力、诱导细胞凋亡,其机制通过上调Bax基因和Bax／Bcl-2比值,使线粒体膜电位下降、膜通透性增高,最终使caspase-3激活而促进凋亡。