14-3-3σ在中波紫外线诱导的HaCaT细胞增殖和周期中的作用

目的 初步研究14-3-3σ在中波紫外线(UVB)照射诱导的HaCaT细胞增殖和周期阻滞中的作用。方法 不同剂量UVB(0、10、20、30、40、50、60和80 mJ/cm²)照射HaCaT细胞和14-3-3σ稳定干扰细胞系(HaCaT^KD14-3-3σ,以下简称HaCaT^KD)。照后48 h,结晶紫染色法观察细胞生长密度。30 mJ/cm²UVB照射后,CCK-8法检测HaCaT和HaCaT^KD细胞的增殖变化,流式细胞术分析细胞G₂/M期细胞比例的变化,Western blot检测UVB照射后两种细胞的14-3-3σ、Cdc2、Cdc25c和Cyclin B1蛋白表达水平。结果 UVB照后48 h,两种细胞存活率均呈剂量依赖性下降,且HaCaT^KD在10 mJ/cm²即可出现明显下降(t=8.83~49.63,P<0.05)。HaCaT^KD细胞的增殖能力显著低于HaCaT细胞(F=32.89,P<0.05);30 mJ/cm²的UVB照射后,HaCaT细胞在24 h后恢复增殖能力,但HaCaT^KD细胞在72 h仍未见增殖变化。HaCaT^KD细胞在各观察点G₂/M期细胞比例均未改变(P>0.05);30 mJ/cm²UVB照射后,HaCaT细胞在6~18 h发生G₂/M期阻滞(t=7.41、9.22、9.16,P<0.05),HaCaT^KD细胞G₂/M期细胞比例未发生改变(P>0.05)。UVB照后6、12、18、24 h和照前相比,HaCaT细胞中14-3-3σ表达量上调(t=5.42~9.57,P<0.05);HaCaT和HaCaT^KD两种细胞中的Cdc25c和Cyclin B1的表达水平在照后均下调(t=3.95~11.21,P<0.05);Cdc2在HaCaT细胞中下调(t=4.93~5.37,P<0.05),在HaCaT^KD细胞中无变化(P>0.05)。结论 UVB照射或不照射,14-3-3σ的表达情况均能影响HaCaT细胞的增殖变化和细胞周期,UVB照射能诱导HaCaT细胞发生G₂/M期阻滞,这种阻滞可能是由14-3-3σ的表达所介导,进而引起周期相关蛋白Cdc2、Cdc25c和Cyclin B1的表达改变而引发的。     

褪黑素通过调控p53介导的细胞早衰抑制紫外线诱导的HaCaT细胞中黑色素合成

目的 探索褪黑素对中波紫外线（UVB）引起人永生化表皮角质形成（HaCaT）细胞黑色素合成的影响及机制,为褪黑素的皮肤保护机制提供理论基础。方法 80 mJ/cm² UVB照射10^-5 mol/L褪黑素预处理的HaCaT细胞,照后48和72 h,利用NaOH法检测细胞黑色素水平。照后72 h,利用β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测早衰阳性细胞并分析其比例,蛋白免疫印迹法检测衰老相关蛋白p53和酪氨酸酶（TYR）的表达变化。80 mJ/cm² UVB照射分别经毛细血管扩张性共济失调突变激酶/毛细血管扩张性共济失调Rad3相关激酶（ATM/ATR）抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理的HaCaT细胞,照后72 h检测细胞早衰阳性比例和黑色素水平变化。结果 褪黑素抑制UVB诱导的黑色素水平增加（t=56.65、13.39,P<0.05）,同时抑制UVB诱导的TYR表达增加（t=16.46,P<0.05）;并可缓解UVB诱导的HaCaT细胞早衰（t=6.37,P<0.05）,抑制UVB诱导的p53表达增加（t=19.08,P<0.05）;ATM/ATR抑制剂、p53抑制剂和褪黑素预处理均可抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平升高（t=13.88、7.86、8.96,P<0.05）。结论 褪黑素通过调控p53介导的细胞早衰,抑制UVB诱导的HaCaT细胞黑色素水平增加。     

miR-21在UVB照射的人角质形成细胞和人表皮鳞癌细胞中的差异表达

目的 方法 研究miR-21在紫外线B(UVB)照射的人角质形成细胞HaCaT和人表皮鳞癌细胞A431中的差异表达。方法 50 J/m² UVB照射HaCaT细胞和A431细胞后,通过实时荧光定量RT-PCR检验miR-21的表达水平;利用在线数据库PicTar等预测靶基因并用Gostat软件对靶基因基因进行功能分类。结果 miR-21在表皮鳞状细胞癌中的表达是正常角质形成细胞的4倍多;miR-21在经UVB照射后HaCaT细胞中,在2～4 h内,其表达水平是升高的,在随后的8 h,其表达水平与对照相比降低了2倍,到12 h后表达水平就不再变化;在照射后的A431细胞中,miR-21的表达水平没有明显改变。在对其靶基因预测后用Gostat进行功能分类发现,PIK3R1、BCL2、E2F3等基因参与细胞的分化及细胞的周期进程。结论 miR-21可能参与表皮鳞状细胞癌的致病机理,并可能在UVB诱导的损伤机制中发挥作用。     

Nrf2在姜黄素保护UVB所致细胞氧化损伤中的作用

目的 研究姜黄素对UVB导致的小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）活性氧（ROS）水平升高和细胞死亡的影响,并探讨转录因子Nrf2在其中的作用。方法 小鼠胚胎成纤维细胞经25 μmol/L的姜黄素预处理或无预处理,接受不同剂量的UVB辐射后培养12 h后采用MTT法、荧光探针法和免疫印迹法检测Nrf2敲除MEF细胞存活率、ROS水平和Nrf2、HO1等蛋白表达水平,并进行比较。结果 50 mJ/cm²的UVB照射导致MEF细胞内ROS水平在6 h内升高（t=16.65,P<0.05）,存活率则在24 h后降低（t=15.89,P<0.05）;而姜黄素预处理可以显著减轻UVB导致的ROS水平升高（t=11.88,P<0.05）和存活率降低（t=3.77,P<0.05）。UVB照射提高了Nrf2、HO1和磷酸化JNK、ERK的蛋白水平;姜黄素预处理则进一步增加了辐射诱导的Nrf2和HO1蛋白水平,但抑制了UVB照射导致的磷酸化JNK、ERK水平增加,而对p38没有明显影响。在Nrf2敲除的MEF中,UVB照射诱导的Nrf2和HO1蛋白水平被显著抑制,同时50 mJ/cm²的UVB照射导致ROS水平升高15倍（t=16.73,P<0.05）,细胞存活率降低至对照组的42.7%（t=-8.23,P<0.05）,且姜黄素的保护作用也显著降低。结论 Nrf2对UVB导致的细胞氧化损伤有保护作用,姜黄素可通过激活Nrf2信号来减轻UVB导致的细胞ROS水平升高和存活率降低。     

电离辐射对皮肤细胞铁死亡的影响及其抑制剂Ferrostatin-1的防护作用研究

目的 探讨电离辐射对皮肤细胞铁死亡的影响以及铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）对受照射皮肤细胞的保护作用及机制。方法 为检测Fer-1对人永生化角质形成细胞（HaCaT）辐照后的影响,按照射与给药方式分为对照组、Fer-1组、单纯照射组、照射+Fer-1组。采用CCK-8法和乳酸脱氢酶（LDH）释放检测X射线照射以及Fer-1处理对HaCaT细胞存活和细胞死亡的影响。采用流式细胞术检测X射线照射以及Fer-1处理后对HaCaT细胞脂质过氧化水平的影响。利用结晶紫染色法检测X射线照射以及Fer-1处理对HaCaT细胞克隆形成能力的影响。Western blot检测X射线照射以及Fer-1处理对铁死亡相关蛋白ACSL4和GPX4表达的影响。结果 单纯照射组经不同剂量的X射线照射后细胞存活率明显降低（t=5.63、8.74,P<0.05）,LDH的释放明显增加（t=3.98、5.08、9.27,P<0.05）,Fer-1能够提高受照射皮肤细胞存活率（t=5.79,P<0.05）,降低LDH的释放量（t=12.36、11.96、18.13、9.96,P<0.05）。单纯照射组经10 Gy的X射线照射后细胞的脂质过氧化水平明显升高（t=9.59,P<0.05）,克隆存活能力明显减弱（t=4.26,P<0.05）,而Fer-1能够降低X射线照射引起的脂质过氧化水平的升高（t=6.48、17.04,P<0.05）,增加受照射皮肤细胞的克隆存活能力（t=3.96,P<0.05）。10 Gy的X射线照射会导致ACSL4表达水平的升高和GPX4的表达水平的降低,而Fer-1的治疗能促进ACSL4和GPX4的表达水平恢复正常（t=5.23、7.16、4.78、8.29、6.43,P<0.05）。结论 铁死亡抑制剂Fer-1在细胞水平上能够通过抑制电离辐射后铁死亡的发生而保护皮肤细胞,为放射性皮肤损伤的防护提供了一种新的策略。     

Cks1表达对人食管癌EC9706细胞辐射敏感性的影响

目的 通过多种转染方法改变人食管癌细胞EC9706中Cks1的表达,探究Cks1的表达对细胞辐射敏感性的影响。方法 通过3种转染方式构建人食管癌EC9706细胞模型,分别为Cks1正义转染组（以亲本组和空载组为对照）、Cks1 RNAi组（以亲本组和阴性对照组为对照）和Rescue组（转染了抗Cks1 RNAi的突变载体,以亲本组和RNAi组作为对照）。Western blot法检测转染后EC9706细胞中Cks1蛋白的表达量;6 Gy γ射线照射转染后的EC9706细胞,MTT法和克隆形成实验检测EC9706辐射敏感性的变化。结果 Western blot检测结果表明,转染成功改变了Cks1的表达量。正义转染实验中,相对于亲本组和空载组,Cks1正义转染组Cks1表达量提高（t=17.10、14.95,P<0.05）;RNA干扰实验中,相对于亲本组和阴性对照组,RNAi组表达量降低（t=3.85、6.37,P<0.05）;Rescue实验中,Rescue组较RNAi组表达量明显回升（t=7.72,P<0.05）,接近亲本组的表达水平（P>0.05）。MTT实验结果表明,6 Gy γ射线照射后,Cks1正义转染组细胞的增殖能力显著高于亲本组（t=3.42、4.74、4.02,P<0.05）和空载组（t=3.39、4.44、4.37,P<0.05）。RNAi组细胞的增殖能力显著低于亲本组（t=7.33、8.27,P<0.05）和阴性对照组（t=6.98、7.34,P<0.05）。Rescue组细胞的增殖能力显著高于RNAi组（t=11.61、9.99,P<0.05）,与亲本组相近（P>0.05）。克隆形成实验结果表明,Cks1正义转染组细胞克隆形成能力显著高于亲本组（t=13.95,P<0.05）和空载组（t=14.72,P<0.05）,RNAi组细胞的克隆形成能力显著低于亲本组（t=20.14,P<0.05）和阴性对照组（t=10.01,P<0.05）,Rescue组细胞的克隆形成能力显著高于RNAi组（t=10.57,P<0.05）,与亲本组相近（P>0.05）。结论 Cks1的表达与食管癌细胞辐射敏感性密切相关,Cks1表达量越高,食管癌细胞辐射敏感性越低。     

中波紫外线照射后HaCaT细胞早衰和P53、P16表达研究

目的 探索不同剂量中波紫外线（UVB）对人永生化角质形成细胞HaCaT早衰的影响及其可能的分子机制。方法 采用0、20、50、80和100 mJ/cm²UVB分别照射HaCaT细胞,于照射后72 h采用姬姆萨染色观察细胞形态,通过克隆形成实验检测细胞增殖能力,β-半乳糖苷酶染色检测早衰细胞比例,利用溶酶体红色荧光探针Lyso-Tracker Red检测照射后24、48、72 h细胞内溶酶体数量变化,划痕实验检测照射后24、48 h细胞迁移能力变化。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测早衰相关蛋白P53和P16的表达变化。结果 20、50、80和100 mJ/cm²UVB照射后,HaCaT细胞出现早衰相关表型,照后72 h细胞体积增大（F=115.18,P<0.05）,增殖能力降低（F=410.32,P<0.05）,β-半乳糖苷酶活性增高（F=16.31,P<0.05）,照后24、48、72 h溶酶体数量增多（F=17.65、38.36、13.66,P<0.05）,照后24、48 h迁移能力降低（F=8.21、11.48,P<0.05）。照后72 h早衰相关蛋白 P53和P16表达增加。结论 UVB照射可诱导HaCaT细胞发生早衰,其机制可能通过引起HaCaT细胞P53和P16蛋白表达增加实现。     

miR-503对辐射诱导U937细胞CD40表达的调控作用

目的 探讨miR-503在U937细胞中与CD40的靶向关系,并观察其对辐射诱导U937细胞CD40表达的调控作用。方法 将miR-503序列插入载体pcDNA-DEST-47中构建真核表达质粒;同时构建CD40基因3’-UTR-荧光素酶报告质粒,与pcDNA-DEST-miR-503质粒共转染至U937细胞,分析miR-503对其调控作用;同时用miR-203和miR-29b作为对照,观察miR-503对CD40的靶向作用。采用Western blot方法,证实miR-503对CD40蛋白表达的抑制作用及照射后U937细胞CD40蛋白表达变化;采用Real-Time PCR方法检测 5 Gy电离辐射照射后U937细胞miR-503表达量。结果 psiCHECK2-CD40和pcDNA-DEST-miR-503两种质粒共转染组的荧光素酶表达明显低于单独转染的空载体和靶基因CD40组(t=3.16,P<0.05),miR-203和miR-29b不能抑制CD40荧光素酶活性,而miR-503明显抑制CD40荧光素酶活性(t=5.25,P<0.01);转染pcDNA-DEST-miR-503质粒后在U937细胞中,靶基因CD40蛋白的表达受抑制。5 Gy电离辐射照射后,U937细胞中miR-503表达量上调(t=3.63~17.00,P<0.01),而CD40蛋白表达下降。结论 miR-503与CD40可能是靶向关系,并参与其调控作用。辐射上调人急性白血病细胞株U937细胞的miR-503的表达量,而且抑制CD40蛋白表达,说明miR-503可能参与辐射对肿瘤细胞CD40蛋白表达的调控作用。     

125I粒子持续低剂量率照射对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用

目的 探讨¹²⁵I粒子持续低剂量率照射对人喉癌细胞Hep-2的抑制作用及其机制。方法 实验分为空白对照组、X射线单次高剂量率照射组（SDR组）、¹²⁵I粒子持续低剂量率照射组（¹²⁵I-CLDR组）。克隆形成实验检测Hep-2细胞在两种照射方式下的放射敏感性,并计算¹²⁵I-CLDR的相对生物学效应。锥虫蓝染色计数两种照射方式下Hep-2细胞的增殖情况。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期阻滞情况。Western blot检测细胞内总γ-H2AX的表达水平。结果 Hep-2细胞对¹²⁵I-CLDR的放射敏感性高于SDR,¹²⁵I-CLDR相对生物学效应约为1.61,且α/β比值高于SDR。SDR和¹²⁵I-CLDR均能抑制Hep-2细胞增殖（t=30.9、40.7,P<0.05）,且后者的抑制作用更为明显（t=9.8,P<0.05）。¹²⁵I-CLDR诱导细胞凋亡和G₂/M期细胞阻滞的效应强于SDR（t=5.8、19.8, P<0.05）。结论 ¹²⁵I-CLDR对Hep-2细胞的抑制作用高于SDR,主要机制是降低Hep-2细胞的DNA损伤修复能力,促进细胞死亡;诱导细胞凋亡和G₂/M期阻滞,抑制细胞再增殖。     

2Gy60Coγ射线照射诱导调节性T细胞的辐射凋亡机制

目的 分析2 Gy ⁶⁰Co γ射线照射对小鼠调节性T细胞存活率的影响,并初步探讨Treg细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax与CD39表达之间的关系。方法 用2 Gy ⁶⁰Co γ射线全身照射小鼠,分离胸腺、脾脏中的淋巴细胞,计数细胞数后利用流式细胞仪对Treg细胞亚群的凋亡率、CD39及凋亡相关因子的表达进行分析。结果 受照后Treg细胞较CD4+FOXP3-T细胞的存活率高,胸腺和脾脏中Treg细胞存活率的时间效应关系不同;受照后Treg细胞凋亡率增加,以照后4 d增幅最为显著(t=-3.6、-7.4, P<0.05);受照后胸腺与脾脏中Bax/Bcl-2的比值变化规律不同,前者中该比值增加,以照后4 d增加最为显著(t=-3.4, P<0.05),而脾脏中该比值于照后4 d减小(t=2.4, P<0.05);受照后4 d胸腺Treg细胞中CD39表达上调(t=-6.6, P<0.05),而脾脏中表达下调(t=2.6, P<0.05)。结论 受照后Treg细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值的变化规律与CD39的表达规律基本一致。     

西妥昔单抗对人舌癌细胞系Tca8113的放射增敏作用

目的 探讨西妥昔单抗( C225)对人舌癌Tca8113细胞系的放射增敏作用.方法 体外培养人舌癌Tca8113细胞系,C225组用西妥昔单抗(C225) 100 nmol/L处理后,6MVX射线不同剂量(0、2、4、6、8和10 Gy)照射C225组和单纯照射组,照射后用细胞计数法及四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖率,集落形成实验计算克隆数,采用流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡.结果 不同照射剂量时C225+照射组的细胞生长抑制率均高于单纯照射组(t=-15.6～-3.0,P ＜0.05);C225+照射组的放射生物学参数值(D0、Dq、N、SF2)较单纯照射组低.C225+照射组的SER为1.353;C225+照射组的G0/G1期细胞比例在4、6、8 Gy时均高于单纯照射组(t=-7.64、-7.89、-4.78,P＜0.05).随着照射剂量升高,C225+照射组和单纯照射组的细胞早期凋亡率皆先升高后下降,4 Gy时两组差异最大[(7.96±0.36)％和(4.13±0.29)％,t- 12.75,P＜0.01].结论 C225对人舌癌Tca8113细胞系具有放射增敏作用.C225可能通过Go/G.期阻滞和诱导凋亡来增加人舌癌Tca8113细胞系的放射敏感性.     

MiR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1表达增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-129-5p靶向抑制高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1放射敏感性的影响机制。方法 建立抗辐射细胞株MZ-CRC-1/R;克隆形成实验分析细胞存活分数;qRT-qPCR检测miR-129-5p在MZ-CRC-1和MZ-CRC-1/R细胞中的表达;噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光酶报告基因实验验证miR-129-5p与高迁移率族蛋白B1（HMGB1）之间的靶向关系;Western blot检测HMGB1和p-AKt的蛋白表达。结果 与MZ-CRC-1细胞相比,MZ-CRC-1/R细胞的细胞存活分数显著提高（t=3.038、4.330、4.885、4.568,P<0.05）;细胞活力增加（t=3.637、7.734、11.896、14.522,P<0.05）;与MZ-CRC-1细胞（1.00±0.06）相比,miR-129-5p在MZ-CRC-1/R细胞中的表达（0.26±0.03）显著降低（t=19.107,P<0.05）;与miR-NC-inhibitor组细胞相比,miR-129-5p-inhibitor组细胞的细胞活力显著增加（t=5.156、6.005、9.649,P<0.05）,细胞凋亡率降低（t=8.659,P<0.05）。与miR-NC组细胞相比,miR-129-5p mimic组细胞的细胞活力显著降低（t=3.118、5.034、6.005、7.488,P<0.05）,细胞凋亡率升高（t=6.362,P<0.05）;过表达miR-129-5p可抑制HMGB1及p-AKt信号通路的表达（t=9.325、10.614,P<0.05）;与miR-129-5p inhibitor组细胞相比,miR-129-5p inhibitor+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著升高（t=6.700,P<0.05）;与miR-129-5p mimic组细胞相比,miR-129-5p mimic+si-HMGB1组细胞的细胞凋亡率显著降低（t=7.073,P<0.05）。结论 miR-129-5p可靶向抑制HMGB1增加甲状腺髓样细胞MZ-CRC-1的放射敏感性。     

lncRNA CCAT1靶向miR-130b-3p对人胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA CCAT1和miR-130b-3p对体外培养的胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响。方法 采用Real-time PCR检测胰腺癌组织及其细胞系和2 Gy X射线照射后PANC-1细胞中CCAT1和miR-130b-3p的相对表达水平。沉默CCAT1表达、抑制miR-130b-3p表达后,应用流式细胞仪、Caspase 3活性检测试剂盒及克隆形成实验检测细胞凋亡率、Caspase 3活性和细胞存活分数,并绘制单击多靶模型拟合曲线;利用starBase v2.0在线预测、荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀实验（RIP）及Real-time PCR实验,验证CCAT1和miR-130b-3p的靶向关系。结果 在放射抵抗的胰腺癌组织、胰腺癌细胞系和2 Gy照射的PANC-1细胞中,CCAT1表达均上调（t=6.322~8.555,P<0.05）,miR-130b-3p表达下调（t=3.950~18.795,P<0.05）。2 Gy照射并沉默CCAT1,PANC-1细胞存活分数降低（t=2.929、5.047、5.234、5.125,P<0.05）,细胞凋亡率增加（t=6.953,P<0.05）,Caspase 3活性升高（t=6.836,P<0.05）。发现CCAT1能靶向调控miR-130b-3p表达,抑制miR-130b-3p表达,PANC-1细胞存活分数增大（t=4.564、6.736、8.656,P<0.05）,细胞凋亡减少（t=5.234,P<0.05）,Caspase 3活性降低（t=10.440,P<0.05）。结论 沉默CCAT1表达能够促进miR-130b-3p表达,从而增加PANC-1细胞放射敏感性。     

miR-141过表达增强人食管癌细胞的放射敏感性

目的 研究miR-141对食管癌细胞放射敏感性的影响及可能的作用机制。方法 将miR-141 mimic或miR-对照转染到食管癌KYSE-150细胞中,分别使用qRT-PCR和Western blot技术检测miR-141和增殖相关蛋白Ki67、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。CCK-8,流式细胞术及克隆形成实验检测放射处理后细胞的放射敏感性变化。结果 随放射剂量的增加,食管癌细胞中miR-141表达逐渐降低（t=2.57~8.96,P<0.05）。miR-141过表达抑制了细胞的增殖和克隆形成能力,促进了KYSE-150细胞凋亡,使得放射敏感性增高（t=3.24,P<0.05）。此外,与对照组相比,miR-141过表达显著抑制KYSE-150细胞中的Ki67和Bcl-2蛋白表达（t=6.56、8.24,P<0.01）,并促进Bax蛋白表达（t=3.24,P<0.01）,进一步证实了miR-141增强食管癌细胞的放射敏感性。结论 miR-141通过调控细胞增殖和凋亡相关蛋白表达增强食管癌细胞的放射敏感性。     

过表达miR-29c靶向抑制AKT2增强肝癌HepG2细胞放射敏感性的实验研究

目的 探讨miR-29c靶向AKT2对肝癌细胞HepG2放射敏感性的影响。方法 RT-PCR检测人正常肝THLE-3细胞和肝癌HepG2细胞中miR-29c表达。给予不同剂量（0、2、4、6和8 Gy）的X射线照射后,RT-PCR检测HepG2细胞中miR-29c表达变化。经生物信息学预测并采用双荧光素酶报告基因实验和Western blot检测miR-29c与AKT2的靶向关系。采用脂质体2000将miR-29c mimic/AKT2基因重组质粒和miR-29c inhibitor/慢病毒载体AKT2 shRNA转染至HepG2细胞中,并给予不同剂量X射线照射后,克隆形成实验和MTT实验检测miR-29/AKT2对HepG2细胞存活率和细胞活力的影响。结果 与THLE-3细胞相比,HepG2细胞中miR-29c明显降低,差异有统计学意义（t=17.816,P<0.05）;HepG2经2、4、6和8 Gy X射线照射后,细胞存活率较THLE-3细胞显著降低（t=4.541、6.823、7.218、9.363,P<0.05）,HepG2细胞中miR-29c表达显著下降（t=5.599、9.262、10.470、10.873,P<0.05）。miR-29c过表达可降低HepG2细胞存活率和细胞活力（t_存活率=4.307、7.668、7.668、6.894,P<0.05;t_细胞活力=3.443、8.116、13.434,P<0.05）;反之,抑制miR-29c表达则升高HepG2细胞存活率和细胞活力（t=4.003、6.713、7.141,P<0.05;t_细胞活力=4.282、5.113,P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验表明,AKT2是miR-29c的靶基因,Western blot检测结果显示,miR-29c可负向调控AKT2蛋白表达。沉默AKT2后,HepG2细胞的存活分数及细胞存活率趋势与miR-29c过表达相一致;反之,AKT2过表达则与抑制miR-29c表达相一致。结论 miR-29c可通过靶向AKT2增加肝癌细胞HepG2放射敏感性。     

沉默EZH2诱导舌癌Tca-8113细胞凋亡及其对放射敏感性的影响

目的 探讨zeste基因增强子同源物2（enhancer of zeste homolog 2,EZH2）对舌鳞癌细胞凋亡及放射敏感性的影响。方法 以舌鳞癌Tca-8113细胞为研究对象,细胞转染EZH2小干扰RNA（EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2）及小干扰RNA阴性对照（siRNA-NC）,RT-PCR和Western blot检测EZH2表达水平,筛选干扰效果较好的EZH2 siRNA2继续研究。将转染EZH2 siRNA2后的Tca-8113记为EZH2 siRNA2组,同时以不做处理的细胞为对照组,用8 Gy剂量照射转染siRNA对照组和EZH2 siRNA2细胞,并依次命名为照射组和联合组,四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测信号转导与转录因子3（STAT3）、磷酸化的STAT3（p-STAT3）、活性Caspase-3（Cleaved Caspase-3）表达。siRNA-NC组和EZH2 siRNA2组细胞用0、2、4、6、8 Gy剂量照射处理后,细胞克隆实验检测放射敏感性。结果 EZH2 siRNA1、EZH2 siRNA2均能够干扰舌鳞癌细胞中EZH2的表达,且EZH2 siRNA2干扰效果最好（t_mRNA=8.660,P_mRNA<0.01;t_蛋白=2.883,P_蛋白<0.05）。下调EZH2 siRNA2组细胞凋亡率为（29.90±1.64）%,联合组凋亡率为（38.17±1.59）%,二者比较,差异有统计学意义（t=4.742,P<0.05）,同时下调EZH2还可以降低p-STAT3水平,促进Cleaved Caspase-3蛋白表达。干扰EZH2表达后Tca-8113细胞辐射增敏比为1.668。结论 干扰EZH2表达能够协同放疗促进舌鳞癌细胞凋亡,抑制舌鳞癌细胞增殖,增加舌鳞癌细胞放射敏感性。     

miR-124靶向STAT3改善脑恶性胶质瘤细胞辐射敏感性

目的 研究miR-124在放射敏感及耐受的脑恶性胶质瘤细胞LN229和LN229R中的表达以及miR-124对细胞放射敏感性的影响,并深入探讨miR-124调控LN229R细胞放射敏感性的作用机制。方法 将miR-124模拟物（miR-124）及阴性对照（miR-NC）,STAT3过表达质粒（STAT3）及pcDNA3.1质粒（pcDNA）单独或共转染到放射抵抗的胶质瘤细胞LN229R中。qRT-PCR检测LN229和LN229R细胞中miR-124的表达;克隆形成实验分析不同放射剂量下LN229R细胞的生存率以及敏感性相关参数值;流式细胞术分析LN229R细胞的凋亡情况;生物信息学预测miR-124和STAT3的靶向关系,并利用双荧光素酶报告分析加以验证;Western blot分析STAT3的蛋白表达水平。结果 与LN229组（1.02±0.09）相比,miR-124在LN229R细胞中的表达水平（0.32±0.03）显著降低,差异有统计学意义（t=12.780,P<0.05）;与miR-NC组（0.95±0.06）相比,转染miR-124模拟物可促进LN229R细胞中miR-124的表达（4.02±0.39）（t=13.476,P<0.05）;8 Gy照射条件下,miR-124过表达组癌细胞的生存率（0.003±0.000 4）显著低于miR-NC组（0.033±0.005 0）（t=5.655,P<0.05）,细胞凋亡率（22.34±2.42）%显著高于miR-NC组（4.69±0.51）%（t=12.361,P<0.05）;STAT3是miR-124的靶基因;外源回补STAT3可逆转miR-124对LN229R细胞生存的抑制作用。结论 miR-124通过靶向STAT3改善LN229R细胞的放射敏感性。     

异常高氡温泉周围居民外周血中肺癌相关基因和miRNA的表达

目的 探讨四川省若尔盖县降扎乡异常高氡温泉对周围居民外周血中肺癌相关基因和miRNA表达的影响.方法 获取高氡温泉及对照地区居民外周血样,用实时RT-PCR检测肺癌相关基因( p53、k-ras)及血浆中相关miRNA(let-7a、miR-34a/b)的表达,用Western blot检测靶蛋白p53和k-ras的表达.结果 高氡温泉周围居民p53和k-ras基因mRNA表达分别是对照组的0.97和1.33倍,但差异无统计学意义(t=0.13、-1.12,P＞0.05);靶蛋白p53和k-ras的表达与基因表达变化趋势一致,分别是对照组的0.7倍和1.23倍,(t=0.72、0.46,P＞0.05).高氡组let-7a与对照相比有下降趋势(t=1.63,P＞0.05).值得注意的是,与对照组相比,高氡组miR-34a和miR-34b明显高表达(t=-3.20、-3.32,P＜0.05).结论 通过检测p53和k-ras基因以及miRNA的变化,推测高氡温泉周围居民受到了辐射损伤.