载基因壳聚糖纳米粒的制备及其相关性质的研究

目的：制备壳聚糖载基因纳米粒，并对其体外相关性质进行初步研究。方法：采用复凝聚法制备载基因纳米粒；用纳米粒度仪测量粒度分布，分散性和Zeta电位；用透射电镜观察粒子的形态；用紫外分光光度法和比色法测定包封率和载药量，并对主要影响因素进行考察。用凝胶阻滞分析和电性结合分析对载药方式进行初步推测。结果：所制备的载基因纳米粒形态规则，大多呈球形，纳米粒平均粒径为263．2nm，粒径分布较窄，多分散度为0．213，Zeta电位为19．8mV；包封率大于90％，载药量约30％；凝胶阻滞和电性结合分析结果表明，非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤的寡核苷酸链（CPG-ODN）与壳聚糖分子间可通过电性结合作用而完全结合。结论：采用复凝聚法可制备粒度分布均匀，形态规则，具有较高包封率和载药量的载基因壳聚糖纳米粒；电性结合作用是载基因壳聚糖纳米粒载药的主要方式。     

壳聚糖纳米粒用作基因递送载体的初步研究

目的初步研究基因壳聚糖纳米粒的性质和转染活性。方法用复凝聚法制备纳米粒;用透射电镜观察形态;用纳米粒度分析仪测定粒径、多分散度和zeta电位;用荧光分光光度法测定基因包封率;用凝胶阻滞分析和荧光扫描测定基因在纳米粒中的位置;用体外基因转染实验定性评价纳米粒的转染活性。结果纳米粒形态多呈球形,平均粒径为218.9 nm,多分散度为0.276,zeta电位为+21.2 mV;基因包封率为99.6%;凝胶阻滞分析和荧光扫描表明基因几乎全部被包裹在纳米粒内部,表面吸附很少;体外基因转染实验表明基因壳聚糖纳米粒能够转染人胚胎肾细胞(HEK293)和肝癌细胞(HepG2),基因能够在这两种细胞中表达。结论壳聚糖纳米粒能将基因递送到细胞内并且基因能够表达,因此可以用作基因药物载体。     

壳聚糖纳米粒Zeta电位与载药量关系初探

目的以壳聚糖作为载体材料、冬凌草甲素为模型药物,制备载药纳米粒,研究载药纳米粒Zeta电位与载药量的关系。方法采用离子交联法在系列pH下制备出不同Zeta电位的冬凌草甲素-壳聚糖纳米粒(Ori-CS-NPs)。测量粒径分布、多分散性和Zeta电位,用HPLC测定载药量,对数据进行回归分析。结果初步得出了ORI-CS-NPs(粒径242.01±11.45nm,PDI<0.3)的Zeta电位随pH升高而降低,载药量随Zeta电位的增高而降低。结论采用离子交联法在不同pH下可制备出粒径分布均匀、Zeta电位及载药量呈一定规律变化的载药纳米粒;纳米粒的Zeta电位与载药量呈线性关系。     

表面修饰的鼻用聚乳酸载药纳米粒的制备及体外性质研究

目的 研究壳聚糖盐酸盐、吐温80、聚乙二醇20000、冰片薄荷低共溶物多重修饰的茴拉西坦聚乳酸鼻腔给药脑靶向纳米粒的制备工艺,并初步评价其体外稳定性.方法 采用溶剂扩散-蒸发法制备多重修饰的载药纳米粒,筛选并优化了其处方,考察了粒径分布、Zeta电位、包封率、载药量、稳定性及体外累积释药百分率.结果 壳聚糖盐酸盐、吐温80、聚乙二醇20000三重修饰的纳米粒形态圆整,粒径分布141.5±30.4 nm,Zeta电位20.4 mV,包封率98.14％,载药量为11.57％.所制纳米粒在溶菌酶和大鼠鼻洗液中稳定,在pH7.4和pH4.0的磷酸盐缓冲液中的24 h内累计释药百分率小于88％.结论 壳聚糖盐酸盐、吐温80、聚乙二醇20000、冰片薄荷低共溶物多重修饰的载药纳米粒包封率较高,性质稳定.     

Preliminary study on the relationship between Zeta potential and drug loading of chitosan nanoparticles

目的 以壳聚糖作为载体材料、冬凌草甲素为模型药物,制备载药纳米粒,研究载药纳米粒Zeta电位与载药量的关系.方法 采用离子交联法在系列pH下制备出不同Zeta电位的冬凌草甲素-壳聚糖纳米粒(Ori - CS - NPs).测量粒径分布、多分散性和Zeta电位,用HPLC测定载药量,对数据进行回归分析.结果 初步得出了ORI - CS - NPs(粒径242.01±11.45nm,PDI ＜0.3)的Zeta电位随pH升高而降低,载药量随Zeta电位的增高而降低.结论 采用离子交联法在不同pH下可制备出粒径分布均匀、Zeta电位及载药量呈一定规律变化的载药纳米粒;纳米粒的Zeta电位与载药量呈线性关系.     

胰岛素纳米粒温敏凝胶的制备及体外释药性能

目的:制备胰岛素壳聚糖温度敏感型原位凝胶(INS-CS-NP-TISG)并进行体外释药动学考察。方法:采用离子凝胶化法制备胰岛素壳聚糖纳米粒;均匀设计法优化其处方及制备工艺,观察形态,测定粒径、表面电位、包封率和载药量;冷法配液的方法制备温度敏感型原位凝胶,改进透析袋-恒温水浴法研究胰岛素壳聚糖纳米粒温度敏感型原位凝胶溶液的体外释药动学。结果:优化制得的纳米粒呈类球形,均匀圆整,分散性好;平均粒径为(255.3±143.5)nm,在175.2~349.6nm范围内的纳米粒子达99.4%,大小均匀,分布较窄;高效液相色谱法(HPLC)测定胰岛素壳聚糖纳米粒平均包封率和载药量分别为75.84%与58.52%;表面电位(ζ)为+32.67;在人工鼻黏液中,胰岛素壳聚糖纳米粒温度敏感型原位凝胶的体外释药符合双相动力学方程,且持续释药24h。结论:选用合适的处方制备胰岛素壳聚糖纳米粒温度敏感型原位凝胶,方法简便,药物载药量高,具有较好的生物黏附性,并有一定的缓释作用。     

季铵化壳聚糖胰岛素纳米粒的制备、处方优化及其初步药效学实验

目的 采用正交设计试验优化载胰岛素季铵化壳聚糖纳米粒的处方工艺,并初步考察其降糖效果。 方法 用离子交联法制备载胰岛素的季铵化壳聚糖纳米粒,用正交试验确定其最佳处方工艺。用透射电子显微镜观察纳米粒的表面形态;用粒径/Zeta电位仪测定纳米粒的粒径和Zeta电位;用高效液相色谱(HPLC)法测定纳米粒的包封率、载药量及体外释放情况。对糖尿病大鼠皮下注射给药,对其药效学进行初步考察。 结果 制得的纳米粒呈球形,分布均匀;平均粒径(63.26±1.88) nm;Zeta电位(33.1±0.3) mV;包封率(37.92±2.11)%;载药量(5.42±0.3)%;24 h累计释放率63.83%。皮下注射给药8 h,糖尿病大鼠血糖较单纯注射胰岛素组下降平缓,且药效持久。 结论 优化后的载胰岛素的季铵化壳聚糖纳米粒形态较好、粒径较小,为研究胰岛素的新型给药途径奠定了基础。     

替尼泊苷磷脂复合物白蛋白纳米粒的制备与表征

目的 制备替尼泊苷磷脂复合物白蛋白纳米粒,并表征其理化性质.方法 以人血清白蛋白和蛋黄卵磷脂E80为辅料,替尼泊苷为主药,采用超声法制备替尼泊苷磷脂复合物白蛋白纳米粒及其冻干制剂.以粒径和多分散系数(PDI)为主要考察指标来优化纳米粒的处方及制备工艺;用激光粒度分析仪和透射电镜对其形态和结构进行表征;用葡聚糖凝胶柱法测定纳米粒的包封率和载药量.结果 成功制备了替尼泊苷磷脂复合物白蛋白纳米粒,平均粒径为182.3 ±11.7 nm,PDI为0.168 ±0.02,Zeta电位为-10.75±1.42 mV,包封率为82.27％±2.74％,载药量为4.29％±0.11％;冻干制剂的外观良好,复溶后的粒径和PDI均符合要求.结论 所用方法简单新颖,具有较好的应用前景.     

以叶酸修饰的乳酸-羟基乙酸共聚物为载体的紫杉醇靶向纳米粒的构建与评价

目的 以叶酸修饰的生物可降解材料乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-PEG-FOL)为载体,构建紫杉醇靶向纳米粒并进行评价。方法 采用乳化-分散法,以溶液稳定性、粒径和包封率为评价指标,通过考察乳化剂的用量、有机相种类、水相与有机相比例、聚合物分子量、药载比、剪切速度等因素对纳米粒制备的影响,确定最优处方和制备工艺,并对纳米粒的形态、粒径、Zeta电位、包封率及载药量进行评价。结果 合成了载体PLGA-PEG-FOL;制备的紫杉醇靶向纳米粒为均匀球形粒子,粒径为(88.2±6.7)nm,Zeta电位为(56.5±4.2)mV,包封率为(92.9±3.2)%,载药量为(4.8±1.3)%。结论 纳米粒制备方法简便易行,重现性好。制备的纳米粒大小均匀,粒度分布较窄,包封率和载药量较高。     

以PLGA-PEG-FOL为载体的紫杉醇靶向纳米粒的构建与评价

目的 以叶酸修饰的生物可降解材料乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA-PEG-FOL)为载体,构建紫杉醇靶向纳米粒并进行评价。方法 采用乳化-分散法,以溶液稳定性、粒径和包封率为评价指标,通过考察乳化剂的用量、有机相种类、水相与有机相比例、聚合物分子量、药载比、剪切速度等因素对纳米粒制备的影响,确定最优处方和制备工艺,并对纳米粒的形态、粒径、Zeta电位、包封率及载药量进行评价。结果 合成了载体PLGA-PEG-FOL;制备的紫杉醇靶向纳米粒为均匀球形粒子,粒径为(88.2±6.7)nm,Zeta电位为(56.5±4.2)mV,包封率为(92.9±3.2)%,载药量为(4.8±1.3)%。结论 纳米粒制备方法简便易行,重现性好。制备的纳米粒大小均匀,粒度分布较窄,包封率和载药量较高。     

RGD-FasL羟乙基壳聚糖缓释纳米粒制备及生物学研究

目的使用羟乙基壳聚糖制备纳米颗粒(NPs),用来包载RGD-FasL融合蛋白(RF),鉴定其功能并评估其在肝癌治疗中的作用。方法采用离子凝胶法制备RF羟乙基壳聚糖缓释纳米粒(RF-NPs);通过透射电镜、动态光散射法考察其理化性质;用紫外分光光度仪检测蛋白浓度来计算其载药率、包封率和体外释放度;通过MTT比色法检测对H22细胞增殖活性的影响,应用H22细胞建立小鼠肝癌模型进行体内抑瘤研究。结果制备的RF-NPs呈球形或类球形,平均粒径198.3 nm,Zeta电位+25 mV,包封率较高,且具有缓释效果,150 mg/L浓度时对H22细胞抑制率大于70%,并能在小鼠体内产生比较明显的抑瘤效果。结论离子凝胶法制备RF-NPs的条件缓和、方法简单,是癌症治疗中具有很好的前景的蛋白药物载体。     

载ACE-shRNA pGenesil质粒与壳聚糖纳米粒的结合及释放实验

目的制备适当粒径的壳聚糖纳米粒,并连接上质粒,研究壳聚糖纳米粒对质粒DNA的结合能力及在体外的释放。方法采用离子交联法制备壳聚糖纳米粒,通过喷金电镜观察其大小、形态及分布;经琼脂糖凝胶电泳分析纳米载体与质粒DNA的结合能力;在4种不同pH值的磷酸盐缓冲液(PBS)中观察壳聚糖质粒纳米粒的释放情况;通过紫外分光光度计检测其包埋率及释放率。结果喷金电镜证实壳聚糖纳米粒分布均匀,呈近似球形,平均粒径约5nm;琼脂糖凝胶电泳结果显示壳聚糖纳米粒能有效地结合质粒,当纳米粒与质粒的比例为10∶10时包埋率达98.7%;壳聚糖质粒纳米粒的性质较稳定,在pH值<7.5的PBS溶液能够平稳释放100h左右。结论制备出适当粒径且分布均匀的壳聚糖纳米粒,能有效地结合质粒,并且能够持续平稳地释放。     

小分子靶向肽修饰壳聚糖作为基因载体的研究

目的:将小分子靶向肽RGD(Arg-Gly-Asp)偶联到壳聚糖(CS)上,并包载质粒DNA(pDNA),制成一种具有靶向性的壳聚糖载基因纳米粒。方法:将RGD肽上的羧基和CS上的氨基通过酰化反应发生偶联,运用红外(FT-IR)和元素分析对RGD偶联壳聚糖(CS-RGD)的化学结构进行确证;采用复凝聚法制备CS-RGD/pDNA纳米粒(CS-RGD/pDNA);应用凝胶阻滞实验和DNA酶(DNase I)降解实验考察CS-RGD对pDNA的复合和保护能力;通过激光粒度仪和原子力显微镜对纳米粒的粒径分布和形态进行考察。结果:CS和RGD肽通过酰胺键偶联;CS-RGD/pDNA在N/P≥2时完全复合,在N/P≥4时具有抗DNase I酶降解能力,N/P=2～30的CS-RGD/pDNA复合物粒径在90～260 nm之间,Zeta电位在4～39 mV之间,原子力显微镜结果证明复合物为类球形且分布良好。具有良好的稳定性和易于进入细胞的性质。结论:CS-RGD是一种制备工艺简单,具有应用前景的非病毒基因载体。     

载柚皮素壳聚糖纳米粒的制备及其体外细胞评价

目的：制备柚皮素壳聚糖纳米粒,初步探讨其对人肺腺癌细胞A549的细胞毒性和细胞摄取。方法：以壳聚糖和鱼精蛋白作为载体材料,采用离子胶凝法制备柚皮素壳聚糖纳米粒,透射电镜（TEM）观察其形态,马尔文激光粒度仪测定其粒径、分散度（PDI）和Zeta电位,离心法测定其包封率和载药量,采用恒温振荡水浴法对柚皮素壳聚糖纳米粒进行体外释放度研究,最后采用人肺癌细胞系A549细胞进行了细胞毒性、细胞摄取研究。结果：柚皮素壳聚糖纳米粒为球形或类球形粒子,结构完整,大小均一、球形度好,分散均匀,PDI、粒径、Zeta电位和包封率分别为0.268,139 nm、+15.7 mV和83.34%,柚皮素壳聚糖纳米粒体外释放呈缓释,24 h累积释放量达到了80%以上,体外释药过程用Higuchi方程拟合较好。MTT试验显示不同浓度的壳聚糖纳米粒和细胞作用72 h后,细胞活力均大于95%,本文所制备的壳聚糖纳米粒无细胞毒性。细胞摄取试验表明载FITC的壳聚糖纳米粒和A549细胞作用3 h后,可明显看到大量带绿色荧光的纳米粒穿过细胞膜进入细胞。结论：离子凝胶法成功制得粒径较小的柚皮素壳聚糖纳米粒,具有缓释性好,毒性小,壳聚糖纳米粒摄取率较高,可大大提高药物的利用率,具有广泛的应用前景。     

Effect of processing parameters on the formation of spherical multinuclear microcapsules encapsulating peppermint oil by coacervation

The gelatin/gum arabic multinuclear microcapsules encapsulating peppermint oil were prepared by coacervation. The effect of various processing parameters, including the core/wall ratio, wall material concentration, pH value, as well as stirring speed on the morphology, particle size distribution, yield and loading was investigated. When the wall material concentration or the core/wall ratio increased, the morphology of multinuclear microcapsules changed from spherical to irregular and the average particle size increased, the optimal wall material concentration and the core/wall ratio were 1% and 2:1, respectively. The multinuclear spherical microcapsules with desired mean particle size can be manufactured by modulating the pH value and stirring speed. The ideal preparation conditions were pH 3.7 at 400 rpm of stirring speed. The yield of multinuclear microcapsules encapsulating peppermint oil by coacervation was approximately 90% and the processing parameters had very slight influence on the yield. When transglutaminase was used as the cross-linker instead of formaldehyde, morphology, mean particle size, yield and loading remained the same as that hardening with formaldehyde, but the particle size distribution became narrower.     

Effect of processing parameters on the formation of spherical multinuclear microcapsules encapsulating peppermint oil by coacervation

The gelatin/gum arabic multinuclear microcapsules encapsulating peppermint oil were prepared by coacervation. The effect of various processing parameters, including the core/wall ratio, wall material concentration, pH value, as well as stirring speed on the morphology, particle size distribution, yield and loading was investigated. When the wall material concentration or the core/wall ratio increased, the morphology of multinuclear microcapsules changed from spherical to irregular and the average particle size increased, the optimal wall material concentration and the core/wall ratio were 1% and 2:1, respectively. The multinuclear spherical microcapsules with desired mean particle size can be manufactured by modulating the pH value and stirring speed. The ideal preparation conditions were pH 3.7 at 400?rpm of stirring speed. The yield of multinuclear microcapsules encapsulating peppermint oil by coacervation was ～90% and the processing parameters had very slight influence on the yield. When transglutaminase was used as the cross-linker instead of formaldehyde, morphology, mean particle size, yield and loading remained the same as that hardening with formaldehyde, but the particle size distribution became narrower.     

芹菜素丝素蛋白纳米粒的制备及其安全性、抗肿瘤活性研究

目的制备芹菜素丝素蛋白(API@SF)纳米粒,并评价其安全性和抗肿瘤活性。方法采用纳米沉淀法制备API@SF纳米粒,并对其形态、粒径、Zeta电位、载药量、体外释放等进行表征;采用溶血实验和HE染色法评价该纳米粒的安全性;采用MTT法评价该纳米粒对小鼠乳腺癌4T1细胞的抑制作用。结果本研究所制得的API@SF纳米粒呈类球形,粒径分布均匀,平均粒径为406.61 nm,多分散性指数为0.154,Zeta电位为-18.4 mV,平均载药量为5.20%。体外释放结果显示,该纳米粒在pH 5.0的释放介质中释放速率相对较快,在pH 7.4的释放介质中释放速率相对较慢。溶血实验和HE染色结果显示,该纳米粒具有良好的生物相容性。MTT实验结果显示,API@SF纳米粒对4T1细胞的抑制作用显著高于API原料药(P<0.05),其作用机制可能与提高细胞中活性氧水平有关。结论本研究成功制备了API@SF纳米粒,该纳米粒具有良好的安全性和抗肿瘤活性。