骨髓间充质干细胞体外诱导向内皮和上皮细胞的分化

背景：骨髓来源的间充质干细胞在体外具有多系分化潜能,但其在体外向肺组织细胞的分化能力尚存在争议。 目的：体外诱导验证小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞和上皮细胞分化的能力。 方法：分离小鼠骨髓来源的间充质干细胞,以内皮诱导液向内皮细胞分化。另外将小鼠骨髓间充质干细胞分别在以下诱导培养基中进行上皮诱导3周：单纯上皮诱导培养液,上皮诱导培养液加10 μg/L 转化生长因子β1,并以未经诱导的小鼠骨髓间充质干细胞作为阴性对照,肺泡上皮作为阳性对照。 结果与结论：小鼠骨髓间充质干细胞在上皮诱导培养液中诱导培养3周后,部分细胞由梭形变为典型的卵石样上皮细胞形态,诱导后约60%细胞表达广谱上皮细胞标志pan-CK,RT-PCR结果显示分化后的细胞表达上皮细胞特异标志CK18,未经诱导的间充质干细胞未表达。小鼠骨髓间充质干细胞在内皮诱导24 h后即出现了典型的血管网状结构,vWF免疫荧光染色显示约70%的细胞呈阳性,RT-PCR显示分化后的细胞表达内皮细胞特异性标志CD31、vWF和CD34。提示骨髓来源的间充质干细胞体外诱导培养具有跨胚层多系分化能力。     

持续Wnt信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖

背景：如何提高胚胎干细胞诱导效率、促进胚胎干细胞源造血干细胞体外增殖成为目前急需解决的课题。目的：以外源性Wnt3a作为诱导剂,激活培养中的小鼠胚胎干细胞Wnt/β-catenin信号通路,观察该通路的激活是否促进胚胎干细胞向造血祖细胞的定向分化。方法：用外源性wnt3a(100 µg/L)持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21 d,通过细胞免疫荧光及蛋白免疫印迹检测细胞内β-catenin蛋白含量,QRT-PCR检测Wnt下游靶标基因的表达量来确定经典Wnt/β-catenin信号通路是否被激活,然后采用单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化,流式细胞仪检测造血发育相关表面标志CD34⁺/Sca-1⁺,同时以QRT-PCR法检测造血相关基因的表达情况。结果与结论：ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经wnt3a(100 µg/L)连续培养21 d后发现β-catenin蛋白在细胞内积累;Wnt信号通路的下游靶标基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表达量均出现不同程度的增加,可见经典Wnt/β-catenin信号通路有被激活;单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化的过程中检测到CD34⁺/Sca-1⁺细胞含量在14 d时占总细胞量高达20.2%,而对照组的仅占11.9%。造血相关基因骨形态发生蛋白4、FLK2及CD34的表达量均增加,而Smad5的表达则明显受到抑制。说明Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路,并促进ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的定向分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Aire对胸腺髓质上皮细胞异位基因表达影响的研究

目的：探讨自身免疫调节因子（Autoimmune regulator, Aire）对胸腺髓质上皮细胞（Medullary thymic epithelial cells, mTECs）异位基因表达的影响.方法：原代培养高纯度C57BL/6小鼠胸腺上皮细胞,脂质体法转染pEGFPC3/Aire质粒,RT-PCR法检测mTECs表达Aire及3种常见异位基因mRNA的水平.结果：（1）体外培养9天后胸腺上皮细胞占85%左右,转染pEGFPC3/Aire质粒可获得较高转染效率.（2）mTECs中Aire和异位基因表达随培养时间逐渐减弱,至第11天都完全消失.（3）Aire能在mTECs培养早期促进异位基因短期表达.（4）胸腺细胞可延长Aire-mTECs上异位基因表达时间.结论：（1）Aire对mTECs异位基因表达有明显的促进作用;（2）胸腺细胞是Aire和异位基因上游激活信号的重要来源.     

Shh/Ihh在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达

文题释义：Shh,Ihh：哺乳动物Hedgehog基因存在3种同源基因,分别为Sonic Hedgehog,India Hedgehog以及Desert Hedgehog,分别编码Shh,Ihh以及Dhh蛋白。它们在胚胎的发育、成体组织和器官干细胞的自我更新与增殖过程中发挥重要的作用。他莫昔芬：是一种选择性雌激素反应调节剂。当向CreER^T2小鼠体内注射他莫昔芬时,由他莫昔芬代谢所产生的雌激素类似物与ERT结合,从而使CreER^T2进入细胞核内发挥Cre重组酶活性。背景：研究表明,Sonic Hedgehog(Shh)在小鼠脊索细胞内有表达,India Hedgehog(Ihh)主要在小鼠胚胎椎体的软骨样细胞以及后期形成的终板中表达。但关于Shh以及Ihh在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达情况并不清楚。 目的：探究Shh和 Ihh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达。 方法：将雄性的Shh-CreER^T2; R26-mTmG/+小鼠与雌性R26-mTmG/+小鼠进行交配,获取不同时期(E8.5,E11.5,E12.5,E14.5,E16.5,E18.5)的孕鼠,注射10 g/L的他莫昔芬10 μL/g。当小鼠胚胎处于P0时,取小鼠胚胎椎间盘组织进行基因型鉴定;同时将雄性的C57BL/6小鼠与雌性的C57BL/6小鼠进行交配,获取不同时期(E11.5,E12.5,E14.5,E16.5,E18.5)的孕鼠,取小鼠胚胎椎间盘组织进行分析。通过免疫荧光法检测Shh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达;免疫组织化学法检测Ihh信号在小鼠胚胎椎间盘形成过程中的表达。所有涉及动物的相关实验均获得苏州大学动物伦理委员会的批准。 结果与结论：①经PCR扩增筛选出基因型为Shh-CreERT2; R26-mTmG/+小鼠胚胎;②免疫荧光染色结果显示,在椎间盘形成过程中,髓核细胞内Shh表达水平逐渐降低;③免疫组织化学染色结果显示,在椎间盘形成过程中,髓核细胞内Ihh表达水平逐渐升高;④结果表明Shh和Ihh在椎间盘形成过程中均发挥调控作用,在一定程度上为研究椎间盘退变的分子机制奠定基础。 ORCID: 0000-0001-9429-2339(巩婷婷) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

损伤肝组织匀浆与骨髓间充质干细胞的分化

背景：目前认为,骨髓间充质干细胞能否分化为肝细胞与微环境关系密切。 目的：探讨急性酒精性肝损伤组织匀浆对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用。 方法：分别用正常和损伤肝脏组织匀浆诱导骨髓间充质干细胞分化,在第0,3,7,10,14,21天用RT-PCR和Western blot法检测甲胎蛋白、白蛋白的表达。 结果与结论：骨髓间充质干细胞在正常及损伤的肝脏组织匀浆诱导下均表现为类上皮样改变。两组均从第3天开始检测到甲胎蛋白的表达,并在第7天左右达到高峰,之后表达逐渐减少,第14天时量很少;在第7天检测到白蛋白的表达,且随时间延长表达量逐渐增加,mRNA水平与蛋白水平表达一致。表明肝细胞在诱导培养下逐渐从幼稚到成熟。但正常和损伤肝组织匀浆诱导的肝细胞甲胎蛋白和白蛋白的表达量差异无显著性意义(P > 0.05)。结果说明急性酒精性肝损伤组织匀浆可以诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化,其诱导效果与正常肝脏组织匀浆相近。     

未羧化骨钙素对高糖条件下小鼠骨髓间充质干细胞成骨与成脂分化的调控效应

文题释义： 未羧化骨钙素：由成骨细胞分泌的一种含量丰富的非胶原蛋白,在骨矿化过程中起到重要作用。近几年研究表明未羧化骨钙素可作为激素调节糖脂代谢,对胰岛素抵抗具有缓解作用;作为糖尿病和骨骼疾病之间相互关联的一个重要因子,可显著改善2型糖尿病小鼠的葡萄糖耐量和胰岛素敏感性。 骨髓间充质干细胞：存在于骨髓中的一类可以自主更新且具有多向分化潜能的多能干细胞。作为脂肪细胞和成骨细胞的前体细胞,其分化方向直接影响骨髓内成分的相对含量以及骨组织的结构。糖尿病性骨质疏松患者的骨髓间充质干细胞受高糖的影响,偏向于向脂肪细胞分化,最终导致成骨细胞含量偏低,骨组织缺失。 背景：寻找高糖条件下促进骨髓间充质干细胞成骨分化而抑制其成脂分化的方法,可以为治疗骨代谢疾病如糖尿病性骨质疏松提供预防及治疗思路。 目的：探讨未羧化骨钙素对高糖条件下小鼠骨髓间充质干细胞成脂分化和成骨分化的影响,揭示未羧化骨钙素对骨髓间充质干细胞分化的作用机制。 方法：采用全骨髓细胞培养及贴壁纯化小鼠骨髓间充质干细胞,不同质量浓度(0,1,3,10,30 μg/L)未羧化骨钙素处理细胞,CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,确定最佳作用质量浓度。第3代骨髓间充质干细胞加入成脂(或成骨)分化诱导培养基并分成4组：对照组、高糖处理组、未羧化骨钙素处理组、高糖+未羧化骨钙素处理组,分别添加25.5 mmol/L外源葡萄糖,3 μg/L未羧化骨钙素进行处理。采用油红和茜素红染色检测脂滴和钙结节的形成,qRT-PCR检测成脂分化标志基因(Fabp4、PPARγ、Adipsin和FAS)和成骨分化标志基因(Runx2、Osx、ALP和COLⅠ)的相对表达水平,试剂盒检测碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原蛋白水平。另外,结合MEK和AMPK的特异性抑制剂(PD98059和BML),Western blot检测P-Erk和P-AMPKα的相对表达水平。 结果与结论：①3 μg/L未羧化骨钙素可显著促进细胞增殖(P < 0.01);②未羧化骨钙素促进高糖条件下骨髓间充质干细胞产生钙结节(P < 0.01)而抑制脂滴的形成(P < 0.05),下调成脂分化标志性基因(P_Fabp4 < 0.01;P_PPARγ < 0.05;P_Adipsin < 0.01;P_FAS < 0.01)而上调成骨分化标志性基因(P_Runx2 < 0.05;P_Osx< 0.05;P_ALP < 0.01;P_COLⅠ < 0.01)的表达,增加碱性磷酸酶活性(P < 0.01)和Ⅰ型胶原蛋白水平(P < 0.05);③高糖条件下,未羧化骨钙素上调P-Erk(P < 0.01)和P-AMPKα(P < 0.01)表达水平;④结果表明,未羧化骨钙素通过Erk/AMPKα信号通路促进高糖条件下骨髓间充质干细胞的成骨分化而抑制成脂分化。 ORCID: 0000-0003-2544-5690(杨建虹) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

兔骨髓间充质干细胞向尿路上皮分化后构建膀胱组织工程化移植物

背景：尿路上皮细胞是泌尿系组织工程领域重要的种子细胞,但是难以体外大量扩增;有研究表明骨髓间充质干细胞可以向尿路上皮细胞分化,但关于分化后细胞在植入动物体内后上皮生成情况,以及分化后细胞在组织工程领域的具体应用研究尚不多。 目的：分离、扩增兔骨髓间充质干细胞,诱导骨髓间充质干细胞向尿路上皮细胞分化并与兔膀胱脱细胞基质构建组织工程化移植物,了解分化后细胞作为种子细胞的效果。 方法：12只8周龄雄性新西兰大白兔胫骨穿刺,抽取骨髓,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,第4或5代细胞以条件培养基培养2周,进行分化后细胞的鉴定。随后将分化后细胞种植在膀胱脱细胞基质上构建组织工程化移植物,进行膀胱修补;另12只动物作为对照组以尿路上皮细胞与膀胱脱细胞基质构建复合物行膀胱修补。 结果与结论：骨髓间充质干细胞培养成功并在体外扩增,由条件培养基培养诱导分化后,PCR检测提示分化后细胞干细胞标志物CD44表达降低,而上皮细胞标志物UP1a表达升高,行免疫荧光检测发现分化后细胞能表达尿路上皮特异性标志物UP1a,而骨髓间充质干细胞无表达。分化后细胞构建的组织工程化移植物在膀胱修补2周后可形成稳定连续的上皮覆盖,上皮层厚度与尿路上皮细胞构建的组织工程化移植物类似。提示骨髓间充质干细胞向尿路上皮诱导分化后可作为泌尿系组织工程的种子细胞,可能是尿路上皮细胞之外的又一新选择。     

成人骨髓间充质干细胞向甲状腺细胞的诱导分化

背景：促甲状腺素、胰岛素或类胰岛素生长因子等对甲状腺细胞的发育分化、特异基因的表达及功能的产生等起着重要作用,故实验模拟甲状腺的体内胚胎发生过程逐步加入以上刺激因子对骨髓间充质干细胞进一步诱导。 目的：探讨在特定环境下体外定向诱导成人骨髓间充质干细胞分化为甲状腺细胞的可行性。 方法：采用密度梯度法分离培养骨髓间充质干细胞,应用促甲状腺素、胰岛素等试剂进行诱导。利用倒置光学显微镜、透射电镜观察细胞分化过程的形态学变化,免疫荧光等检测方法研究成人骨髓间充质干细胞的分化情况。 结果与结论：诱导组培养第3天可见骨髓间充质干细胞由长梭形变为圆形、椭圆形或三角形,不规则形生长,边界欠清晰。从第8天开始可见贴壁的胚胎体逐渐呈扁平状。诱导培养第7天可见分化细胞中有甲状腺细胞的特有基因如TSHr的表达;第9天检测到分化细胞中甲状腺细胞标记物TTF-1的表达。结果初步表明骨髓间充质干细胞可以在体外诱导分化为甲状腺细胞,是研究甲状腺疾病组织工程治疗的理想种子细胞。     

Wnt信号途径促进脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化

背景：脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞定向分化的能力以及调节机制尚未完全阐明。 目的：观察脂肪间充质干细胞在体外分化为Ⅱ型肺泡上皮的能力以及Wnt途径对分化的调节作用。 方法：取大鼠脂肪组织,体外分离培养脂肪间充质干细胞并通过流式细胞术进行鉴定。实验分为对照组、小气道生长液组和Wnt3a组,对照组用普通DMEM培养基培养,小气道生长液组和Wnt3a组均使用小气道生长液培养,且Wnt3a组加入Wnt信号通路激动剂Wnt3a培养。诱导10 d后分别通过qRT-PCR和免疫荧光检测Ⅱ型肺泡上皮标志物肺表面活性蛋白B,C,D的表达,并于诱导5 d和10 d时通过Western blot检测磷酸化β-catenin和GSK-3β。 结果与结论：大鼠脂肪组织中可成功分离出纯度较高的脂肪间充质干细胞,可表达CD44和CD29,不表达CD11b和CD45;经小气道生长液诱导后,脂肪间充质干细胞中肺表面活性蛋白B,C,D蛋白和mRNA表达均上调(P < 0.01),表明其可被诱导为Ⅱ型上皮细胞;加入Wnt3a后,经诱导的脂肪间充质干细胞中肺表面活性蛋白B,C,D蛋白和mRNA表达均高于小气道生长液组(P < 0.01),且在诱导过程中磷酸化β-catenin表达随时间逐渐上调而GSK-3β表达逐渐下调(P < 0.01)。结果证实,Wnt信号通路在脂肪间充质干细胞诱导分化为Ⅱ肺泡上皮细胞过程中激活并促进干细胞的定向分化。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程      

钠钙交换体启动子促进诱导多能干细胞向心肌细胞转化

背景：诱导多能干细胞治疗缺血性心脏病被认为是极具前景的方法,但目前仍未找到一种理想的诱导方式。 目的：探讨钠钙交换体(NCX1)启动子诱导多能干细胞体外分化为心肌细胞的作用。 方法：构建含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒质粒,使用ViraPowerTM慢病毒包装系统共转染293FT细胞。收集病毒测定病毒滴度后感染小鼠诱导多能干细胞,并使用嘌呤霉素进行筛选。观察胚状体数量以及诱导多能干细胞的分化效率,使用RT-PCR、免疫荧光分析法检测心肌特异标记物。 结果与结论：成功构建了含钠钙交换体1启动子的pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒,感染小鼠诱导多能干细胞后使用流式细胞仪分选NCX1⁺/GFP⁺细胞。与NCX1^-/GFP^-细胞相比,NCX1⁺/GFP⁺细胞在4 d即出现细胞分化和跳动,NCX1+细胞GATA4/MEF2c/Nkx2.5基因表达分别是NCX1-细胞的4.2,7.5,2.5倍,免疫荧光显示CX43和心肌肌钙蛋白I呈阳性表达。结果表明,钠钙交换体1启动子可以促进小鼠诱导多能干细胞向心肌细胞分化。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

Spatial (Tbata) expression in mature medullary thymic epithelial cells

The Spatial gene is expressed in highly polarized cell types such as testis germ cells, brain neurons and thymic epithelial cells (TEC). Its expression was documented in testis and brain but poorly characterized in thymus. Here, we characterize for the first time Spatial‐expressing TEC throughout ontogeny and adult mouse thymus. Spatial is expressed in thymic‐fated domain by embryonic day E10.5 and persists in subcapsular, cortical, medullary epithelial cells and in MTS24⁺ progenitor TEC. Using mouse strains in which thymocyte development is blocked at various stages, we show that Spatial expression is independent of thymocyte‐derived signals during thymus organogenesis. Analyses on purified thymic cell subsets show that Spatial short isoforms are expressed in cortical TEC (cTEC) and mature medullary TEC (mTEC). Spatial long isoforms were detected in the same TEC population. Spatial presents a nuclear distribution specific to mature mTEC expressing UEA1 and Aire. Aire‐ and RANKL‐deficient mice revealed that Spatial expression is drastically reduced in the thymus of these mutants. These findings reveal a critical function of Aire in regulating Spatial expression, which is compatible with promiscuous Spatial gene expression.     

Glia maturation factor produced by thymic epithelial cells plays a role in T cell differentiation in the thymic microenvironment

In order to determine molecules on thymic epithelial cells which play an important role in the process of T cell differentiation, mAb recognizing thymic epithelial cells were made using stromal cells of the embryonic thymus at 15-gestation date. Among many mAb, a specific one was selected in terms of its inhibition of T cell development in an in vitro culture system of the embryonic thymus. cDNA of the protein recognized by one of the mAb was obtained by a panning method. Sequence analysis revealed that the protein was identical to glia maturation factor (GMF)-beta. Northern blot analysis confirmed the expression of GMF-beta mRNA in the thymus and brain. Furthermore, immunoblotting analysis identified the production of GMF-beta protein in the thymus, the brain and a thymic epithelial cell line. GMF-beta protein prepared by a glutathione-S-transferase gene fusion system greatly influenced T cell development in the in vitro culture system of the embryonic thymus in favor of a significant increase of CD4(+) T cells with expression of TCRbeta. These data taken together suggest that GMF-beta protein is produced by thymic epithelial cells and plays a role in T cell development in favor of CD4(+) T cells.     

Onset of promiscuous gene expression in murine fetal thymus organ culture

T-cell differentiation and induction of tolerance to self-antigens occurs mainly in the thymus. Thymic stromal cells, specifically medullary thymic epithelial cells, express a diverse set of genes encoding parenchymal organ-specific proteins. This phenomenon has been termed promiscuous gene expression (PGE) and has been implicated in preventing organ-specific autoimmunity by inducing T-cell tolerance to self antigens. Early thymopoiesis and the critical factors involved in T-cell differentiation can be reproduced in vitro by murine fetal thymus organ culture (FTOC), which mimics the natural thymic microenvironment. To evaluate the occurrence of PGE in FTOC, gene expression profiling during in vitro thymic development in BALB/c mice was performed using a set of nylon cDNA microarrays containing 9216 sequences. The statistical analysis of the microarray data (sam program) revealed the temporal repression and induction of 57 parenchymal and seven lymphoid organ-specific genes. Most of the genes analysed are repressed during early thymic development (15-17 days post-coitum). The expression of the autoimmune regulator (AIRE) gene at 16 days post-coitum marks the onset of PGE. This precedes the induction of parenchymal organ genes during the late developmental phase at 20 days post-coitum. The mechanism of T-cell tolerance induction begins during fetal development and continues into adulthood. Our findings are significant because they show a fine demarcation of PGE onset, which plays a central role in induction of T-cell tolerance.     

DNA methylation signatures of the AIRE promoter in thymic epithelial cells, thymomas and normal tissues

Mutations in the AIRE gene cause autoimmune polyendocrinopathy candidiasis ectodermal dystrophy (APECED), which is associated with autoimmunity towards several peripheral organs. The AIRE protein is almost exclusively expressed in medullary thymic epithelial cells (mTEC) and CpG methylation in the promoter of the AIRE gene has been suggested to control its tissue-specific expression pattern. We found that in human AIRE-positive medullary and AIRE-negative cortical epithelium, the AIRE promoter is hypomethylated, whereas in thymocytes, the promoter had high level of CpG methylation. Likewise, in mouse mTECs the AIRE promoter was uniformly hypomethylated. In the same vein, the AIRE promoter was hypomethylated in AIRE-negative thymic epithelial tumors (thymomas) and in several peripheral tissues. Our data are compatible with the notion that promoter hypomethylation is necessary but not sufficient for tissue-specific regulation of the AIRE gene. In contrast, a positive correlation between AIRE expression and histone H3 lysine 4 trimethylation, an active chromatin mark, was found in the AIRE promoter in human and mouse TECs.     

Medullary thymic epithelial stem cells: role in thymic epithelial cell maintenance and thymic involution

The thymus consists of two distinct anatomical regions, the cortex and the medulla; medullary thymic epithelial cells (mTECs) play a crucial role in establishing central T-cell tolerance for self-antigens. Although the understanding of mTEC development in thymic organogenesis as well as the regulation of their differentiation and maturation has improved, the mechanisms of postnatal maintenance remain poorly understood. This issue has a central importance in immune homeostasis and physiological thymic involution as well as autoimmune disorders in various clinicopathological settings. Recently, several reports have demonstrated the existence of TEC stem or progenitor cells in the postnatal thymus, which are either bipotent or unipotent. We identified stem cells specified for mTEC-lineage that are generated in the thymic ontogeny and may sustain mTEC regeneration and lifelong central T-cell self-tolerance. This finding suggested that the thymic medulla is maintained autonomously by its own stem cells. Although several issues, including the relationship with other putative TEC stem/progenitors, remain unclear, further examination of mTEC stem cells (mTECSCs) and their regulatory mechanisms may contribute to the understanding of postnatal immune homeostasis. Possible relationships between decline of mTECSC activity and early thymic involution as well as various autoimmune disorders are discussed.     

质粒重编程诱导多潜能干细胞及定向分化神经干细胞

目的 　探讨游离质粒载体重编程诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts, MEFs)为非整合型诱导多潜能干细胞,并在体外定向分化为神经干细胞(neural stem cells, NSCs), 为神经干细胞移植治疗神经损伤提供稳定、安全的细胞来源。 方法　使用电转仪将质粒pEP4-EO2S-ET2K转入小鼠MEFs, 经诱导培养重编程为诱导多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs), iPSCs在不同诱导培养基中经2次悬浮及贴壁培养分化为NSCs,在体内及体外实验鉴定iPSCs多向分化潜能特性及NSCs特性。 结果　体内外实验显示iPSCs具有与胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)相似的多向分化潜能, 且不整合外源性基因。iPSCs进一步分化的NSCs其相关标志基因表达与野生型NSCs相近,且较iPSCs显著增加,免疫荧光显示NSCs高表达NSC标志物 NESTIN及PAX6,在体外存活能分化为神经元、少突胶质细胞及星形胶质细胞。 结论　游离质粒能重编程诱导非整合型iPSCs, 并定向分化为神经干细胞及神经元, 是神经损伤修复的理想种子细胞。