肝泰煎剂含药血清诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞的凋亡

目的:观察肝泰煎剂(GTJJ)含药血清诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞凋亡现象。方法:将GTJJ含药血清作用于人肝癌细胞系Bel-7402细胞,应用MTT检测对肝癌细胞生长抑制作用,倒置显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等影像学方法观察细胞形态学变化,以及PI染色单染、AnnexinV-PI双染后,流式细胞术检测对细胞周期影响及诱导细胞凋亡程度。结果:MTT法检测结果显示:GTJJ含药血清具有抑制Bel-7402肿瘤细胞生长作用[其中20%GTJJ等效剂量抑制率50.09%,与生理盐水(NS)组比,P<0.01];荧光显微镜及激光共聚焦显微镜可观察到典型的凋亡形态学变化;流式细胞术检测显示,细胞周期出现G0/G1期阻滞,并出现典型的凋亡峰;AnnexinV-PI双染法检测到早期及中晚期细胞凋亡。结论:GTJJ含药血清有诱导细胞凋亡作用。     

益气活血软坚解毒含药血清诱导人肝癌细胞系Bel-7402细胞的凋亡

目的:研究益气活血软坚解毒(YHRJ)含药血清对人肝癌细胞系Bel-7402生长抑制及诱导凋亡作用.方法:将YHRJ含药血清作用于人肝癌细胞系Bel-7402细胞,应用MTT检测对肝癌细胞生长抑制作用,倒置显微镜、荧光显微镜、激光共聚焦扫描显微镜等影像学方法观察细胞形态学变化,以及PI染色单染、AnnexinV-PI双染后,流式细胞术检测对细胞周期影响及诱导细胞凋亡程度.结果:MTT法检测结果显示:YHRJ含药血清具有抑制Bel-7402肿瘤细胞生长作用(其中20%YHRJ等效剂量抑制率49.1%,与NS比,P<0.01);荧光显微镜及激光共聚焦显微镜可观察到典型的凋亡形态学变化.流式细胞术检测结果,细胞周期出现G0/G1期阻滞,并出现典型的凋亡峰,AnnexinV-PI双染法检测到早期及中晚期细胞凋亡.结论:YHRJ含药血清有抑制人肝癌细胞系Bel-7402细胞生长并有诱导细胞凋亡作用.     

血管紧张素Ⅱ对外周血内皮祖细胞的影响

目的　观察血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对外周血内皮祖细胞 (EPCs)数量和功能的影响。方法　密度梯度离心法获取外周血单个核细胞 (MNCs) ,培养 7d后 ,收集贴壁细胞并加入不同浓度AngⅡ (10 -3 mol/L、10 -5mol/L、10 -7mol/L、10 -9mol/L)干预一定时间 (6、12、2 4h和 4 8h)。多波长激光共聚焦显微镜鉴定FITC标记荆豆凝集素Ⅰ和DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白双染色细胞为正在分化的EPCs ,流式细胞仪检测其表面标志进一步鉴定EPCs,倒置荧光显微镜下计数。分别观察EPCs的增殖、迁移、黏附和体外血管生成能力 ,并观察缬沙坦的影响。结果　AngⅡ促进外周血EPCs扩增 ,10 3 mol/LAngⅡ作用 2 4h对EPCs数量的影响最为显著 (P <0 0 1)。AngⅡ也显著增强了外周血EPCs的黏附、迁移、增殖和体外血管生成能力。而缬沙坦可显著抑制AngⅡ的这些作用。结论　AngⅡ可通过血管紧张素 1受体介导增加EPCs数量、改善其功能 ,并呈浓度和时间依赖性。     

甲胎蛋白激活PI3K/AKT信号促使肝癌Bel 7402细胞抗全反式维甲酸诱导凋亡

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞内PI3K/AKT信号传递的影响,以及其在癌细胞耐受全反式维甲酸(ATRA)中的作用. 方法 四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测ATRA对人肝癌Bel 7402细胞增殖的影响;显微照相观察细胞形态学的改变;流式细胞分析细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察AFP与PTEN的共定位;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与PTEN相互作用;Westemblot法分析磷酸化的蛋白激酶B(pAKT)和Src表达,构建干扰AFP表达的载体(AFP-siRNA)并转染Bel 7402细胞;用PI3K特异性阻断剂Ly294002处理细胞,分析Ly294002的作用效果.通过t检验分析组间的统计学差异. 结果 MTT分析显示,人肝癌Bel 7402耐受ATRA的细胞毒性;共聚焦显微镜观察显示AFP与PTEN共定位于细胞质;Co-IP技术研究发现AFP能与PTEN结合;MTT分析发现,Bel 7402细胞转染AFP-siRNA载体后24 h后,细胞生长显著受抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而且AFP-siRNA载体和ATRA共同处理组,细胞生长受到抑制更为显著,与对照组、单独处理组比较,差异均有统计学意义(P＜ 0.01);干扰AFP表达能显著增加Bel 7402细胞对ATRA敏感性,并能抑制pAKT和Src的表达;Ly294002能抑制AFP促进Bel 7402细胞表达pAKT和Src的作用.结论 肝癌细胞内表达的AFP能与PTEN结合并抑制PTEN对AKT的去磷酸化作用,肝癌细胞内高表达的AFP能激活PI3K/AKT信息通路对抗ATRA诱导的凋亡.     

双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用

目的：观测双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对体外培养的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体细胞骨架的损伤作用.方法：将用含双氢青蒿素的改良TYI-S-33培养基培养后的蓝氏贾第鞭毛虫滋养体,用专一性结合f-肌动蛋白(f-actin)的荧光染料罗丹明-鬼笔环肽(rhodanmine phalloidin,RDP)标记微丝,结合微管的紫杉醇(Paclitaxel,Oregen Green 488,P22310)标记微管,用流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测、分析,用激光共聚焦显微镜(confocal microscopy,CFM)观察滋养体微丝和微管的变化.结果：经双氢青蒿素0.002mg/L(LC_(50))作用12h,RDP标记后,流式细胞仪检测结果显示,滋养体的微丝结构有明显的损伤,其FCM激发光荧光强度值(16.18±11.02)明显低于对照组(81.7±6.43),二者有显著性差异(P＜0.01);激光共聚焦显微镜观察显示,虫体形态及轮廓不完整.经P22310标记后,共聚焦显微镜下显示.虫体的吸盘和鞭毛轮廓不清,荧光强度降低或消失,实验组吸盘面积的荧光强度值与对照组比较有显著性差异(χ~2=3.154,P<0.01).结论：双氢青蒿素对体外蓝氏贾第鞭毛虫滋养体的细胞骨架有明显的损伤作用.     

甲胎蛋白调节肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2表达及其对Bel 7402细胞耐受该配体的影响

目的 研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌细胞肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体-2(DR5)表达及其在肝癌细胞耐受TRAIL中的作用.方法 用Western blot法分析全反式维甲酸(ATRA)处理人肝癌细胞株Bel 7402细胞24 h后DR5表达的变化;免疫共沉淀(Co-IP)技术研究AFP与维甲酸受体(RAR)-β相互作用;激光共聚焦显微镜观察AFP与RAR-β的细胞共定位; RNA干扰技术抑制Bel 7402细胞AFP表达,再用ATRA处理24h后检测细胞内DR5表达的变化;用pcDNA3.1质粒和人AFP基因连接构建表达AFP的载体(称为pcDNA3.1-afp),然后转染到不表达AFP的人肝癌细胞株HLE细胞;细胞生长状况用四甲基偶氮唑盐法检测.组间比较用f检验进行统计学分析.结果 Bel 7402和HLE细胞低表达DR5,ATRA(160μmol/L)处理24h后能促进肝癌细胞DR5表达; Co-IP技术研究显示AFP能与RAR-β结合;共聚焦显微镜观察发现AFP与RAR-β共定位于细胞质;干扰AFP表达后,Bel 7402细胞的DR5表达明显提高,抑制AFP表达后,ATRA能显著促进Bel 7402细胞内DR5的表达,并增加Bel 7402细胞对TRAIL的敏感性;转染pcDNA3.1-afp载体后,HLE细胞内的AFP能与RAR-β结合,并发现pcDNA3.1-afp载体能对抗TRAIL诱导HLE细胞凋亡.结论 Bel 7402细胞内表达的AFP具有抑制DR5表达的生物学功能;AFP可能通过抑制RAR-β入核调节DR5的表达;细胞内高表达的AFP是导致Bel 7402细胞耐受TRAIL诱导细胞凋亡的重要原因.     

茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制

目的探讨茶多酚体外诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡的机制。方法茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,光学显微镜观察细胞形态变化;Hoechst33258/PI双染色,激光扫描共聚焦显微镜观察茶多酚诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞凋亡作用;DCFH-DA为细胞内活性氧探针,激光扫描共聚焦显微镜检测茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞活性氧(ROS)水平的影响,分光光度法测定茶多酚对人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞内caspase-3活性的影响。结果 50、100、200μg/ml茶多酚作用GBC-SD细胞48 h后,人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞呈现典型的凋亡特征;激光扫描共聚焦显微镜下观察茶多酚作用后GBC-SD细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强(P<0.01)。结论茶多酚能显著诱导人胆囊癌细胞系GBC-SD细胞发生凋亡作用,其机制可能是ROS过量积聚、激发caspase级联反应,从而诱导细胞凋亡。     

姜黄素诱导A549细胞凋亡过程中活性氧水平和caspase-3活性的变化

目的 探讨姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的发生机制.方法 采用MTT法检测姜黄素对A549细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察姜黄素对A549细胞凋亡的影响; DCFH-DA为细胞内活性氧(ROS)探针,激光共聚焦扫描显微镜检测姜黄素对A549细胞ROS水平的影响,分光光度法测定姜黄素对A549细胞内caspase-3活性的影响.结果 不同浓度的姜黄素作用12、24、36、48 h后均可抑制人肺腺癌A549细胞的增殖并诱导其发生凋亡作用;激光共聚焦扫描显微镜下观察姜黄素作用后细胞ROS明显上升,细胞内caspase-3活性增强.结论 姜黄素对人肺腺癌A549细胞有明显的抑制生长和诱导凋亡作用,对细胞ROS和caspase-3活性的影响在其诱导A549细胞凋亡中发挥作用.     

克氏螯虾壳聚糖抗菌的作用靶位

目的:研究克氏螯虾壳聚糖抗菌的作用靶位,探讨其抗菌机制.方法:用5(6)-羧-四甲基罗丹明-5-马来酰亚胺标记克氏螯虾壳聚糖,应用标记克氏螯虾壳聚糖与大肠埃希菌及金黄色葡萄球菌在pH5.6,37℃条件下220 r/min作用3.5 h,观察作用前后上清液中的核酸和蛋白质含量变化,并用激光共聚焦显微镜观察其对细菌的聚集部位.结果:荧光标记克氏螯虾壳聚糖对大肠埃希菌作用前后的上清液中,核酸和蛋白质的含量由作用前的0.00和0.22±0.01升高为1.13±0.06和1.49±0.05(P<0.01);对金黄色葡萄球菌作用前后的上清液中,核酸和蛋白质的含量由作用前的0.03±0.06和0.21±0.02升高为1.00±0.10和0.81±0.01(P<0.01);并且荧光标记克氏螯虾壳聚糖浓度越高,核酸及蛋白质含量也逐渐增高:激光共聚焦显微镜下显示两种实验细菌由表及里的荧光强度逐渐增强.结论:克氏螯虾壳聚糖的抗菌作用靶位,除部分作用于细菌细胞膜外,主要是进入细菌内作用于细胞器.     

早期心肌缺血缺氧性坏死中周细胞数量的变化

目的 探讨周细胞在心肌纤维化发生发展中的作用。方法 采用免疫荧光双重标记技术，将周细胞染色后，在激光扫描共聚焦显微镜下观察周细胞在早期心肌缺血缺氧性坏死中该细胞的数量变化情况。结果 激光共聚焦显微镜观察发现，内皮细胞定位明确的周细胞的数量在注射盐酸异丙肾上腺素（Isp） 4 h后明显增多，12 h后开始下降，48 h后显著低于正常水平（P<0.05）。结论 周细胞作为心肌中的间质细胞可能是心肌纤维化发生发展中的主要效应细胞。     

细粒棘球绦虫虫卵的光镜和电镜观察

应用光镜和电镜技术对细粒棘球绦虫虫卵进行了观察，结果表明细粒棘球绦虫虫卵发育经６个时期：受精卵细胞；胚细胞团；早期虫卵；前期虫卵；未成熟虫卵和成熟虫卵。虫卵壳膜由５层构成：卵壳层；卵黄膜；胚膜；钩蚴膜和颗粒层。六钩蚴分为纤维区和代谢区，前者含有网状和条索状纤维物质，不含细胞成分；后者具有生发细胞、体细胞等，并对各自的形态特点和生理意义进行了讨论。     

福尔马林对大鼠气管及肺组织的影响

目的 观察暴露于福尔马林环境中大鼠气管、肺组织的光、电镜形态学改变,为研究福尔马林对呼吸系统的损伤提供理论基础.方法 12只雄性SD大鼠随机分成对照组和甲醛暴露组,每组6只,分别饲养在两个100 cm×60 cm×80 cm的自制透明福尔马林吸入箱内.对照组大鼠的自制吸入箱内放置一个1 000 ml烧杯,加入500 ml蒸馏水.在甲醛暴露组大鼠的烧杯内加入福尔马林500 ml,每天1次,每次12 h,次日倒掉前天剩余液体,重新补充500ml福尔马林.连续吸入25 d后处死大鼠,取气管、肺组织,通过光学显微镜和透射电镜观察其形态学改变.结果 与对照组相比,暴露组大鼠光学显微镜下可见气管及肺均呈轻度水肿及炎性改变,透射电镜下肺泡腔及上皮细胞内出现大量空泡,板层小体结构破坏明显,血管内皮吞饮泡增多及空泡形成.结论 福尔马林可导致大鼠气管及肺组织出现病理改变.     

附红细胞体的形态学研究

目的对附红细胞体形态学特点进行研究。方法通过光学显微镜、电子显微镜对附红细胞体的超微结构进行观察。结果光镜下对附红细胞体进行血液悬滴压片,发现附红细胞体以前、后、左、右、上、下等不同的方向翻滚、扭转运动;附红细胞体细胞体单个或聚合在一起存在于血浆中或附着在红细胞上。在透射电镜和扫描电镜下观察,附红细胞体是一种典型的原核生物,为环状、球状、盘状等多种形态,直径0.2~2.6μm不等;无细胞壁,仅有一层单层限制膜包裹,无明显细胞器和细胞核。结论附红细胞体属原核生物,为环状、球状、盘状等多种形态,无细胞壁,无明显细胞器和细胞核。     

Imaging red blood cells with the atomic force microscope

Summary. A novel technique for the reproduction of ultramorphological images and details of the surface of normal and pathological red blood cells (RBC) was investigated. The atomic force microscope (AFM) provided high-resolution images of cell surfaces. The RBC dimensions obtained by this technique revealed differences between native red cells in smears and glutaraldehyde-fixed red cells. It was shown that fixed red blood cells were best suited for the ultramorphological imaging of the cell surface.     

Application of a Video Microscope to Observe the Gastric Mucosal Surface,Especially in Early Gastric Cancer

Abstract: The surface of cancerous mucosa in 30 surgically resected cases of early gastric cancer (22 differentiated and 8 undifferentiated adenocarcinoma) was observed through a video microscope. The mucosal surface showed characteristic findings of a pit pattern, composed of elevations and depressions of the surface, as previously reported when a dissecting microscope was used. The pit patterns of the cancerous mucosa were classified into five types under 200 × magnification: oval or round (type I), tubular or slightly branching (type II), irregular sulcus (tupe Ill), mesh-like (type IV) and non-structural or destroyed (type V). Most differentiated cancers had type I to 1V pit patterns, in contrast with undifferentiated cancers which mostly had a type V pit pattern. Our observations suggest that a video microscope is useful to observe magnified gastrointestinal mucosal lesions and to recognize the characteristic features of the surface such as the pit pattern.     

Leukozyten- und Erythrozyten-lnteraktion mit Kollagen in vitro: Eine rasterelektronenmikroskopische Untersuchung

Zusammenfassung An Hand rasterelektronenmikroskopischer Bilder wird gezeigt, da\ eine Interaktion von Leukozyten und Erythrozyten mit fibrillÄrem und polymerisierendem (Typ I und III) Kollagen möglich ist und unter bestimmten Testbedingungen beobachtet werden kann. Eine mögliche pathogenetische Bedeutung der Kollagen-,Leukozyten- und Erythrozyten-Interaktion wird diskutiert.

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Summary Scanning microscopic investigations show the interaction of Leukocytes and Erythrocytes with fibrillar and aggregating type I and type III collagens in vitro. Leukocytes, in the presence of collagen, form loose aggregates within a minute and these aggregates, after 15 to 30 minutes, coalesce and become compact. The close association of the fibrillar collagens to the leukocyte surfaces is shown. Fibrillar collagen and collagen in solution with erythrocytes form only loose aggregates. Qualitative differences between the various collagen preparations were not found. The pathogenetic implications of these observations are briefly discussed.

Diese Untersuchungen wurden vom Sonderforschungsbereich 51 (Medizinische Molekularbiologie und Biochemie in München) unterstützt.     

Bacteriological and electron microscopic examination of primary intrahepatic stones

BACKGROUND: Primary intrahepatic cholelithiasis is usually combined with biliary tract infection. This research was undertaken to investigate the relationship between intrahepatic stones and biliary tract infection. METHODS: Thirty-five bile samples and 30 stones specimens were cultured for bacteria and 12 stones specimens were examined with a scan electron microscope (SEM) or a transmission electron microscope (TEM). RESULT: 94.2% bile samples and 96.7% stones specimens were positive in bacteria culture. Bacteria were found in stones under SEM and TEM. CONCLUSION: Bacteria in stones are associated with the infection of the biliary tract.     

双氢青蒿素对体外培养阴道毛滴虫作用的电镜观察

目的 观察双氢青蒿素（DHA）对阴道毛滴虫超微结构的影响。 方法 在2.5×10⁶个／ml滴虫培养液中加入双氢青蒿素1 mg／ml。 37 ℃ 培养3 和3.5 h, 进行扫描电镜观察，培养2.5和4 h进行透射电镜观察。 结果 双氢青蒿素作用滴虫后，虫体细胞膜受损明显，表面皱褶加深、表膜凹陷，并出现裂隙。细胞核膜破损，细胞核和细胞质均出现裂隙。内质网呈囊状肿胀，氢化酶体受损、变形。细胞质从细胞膜破裂处溢出。 细胞膜剥脱后细胞核、氢化酶体和盾等结构裸露。最后虫体变性、坏死。 结论 双氢青蒿素能破坏阴道毛滴虫膜系结构并导致虫体裂解死亡。     

遗传性球形红细胞增多症患者外周血红细胞形态的扫描电镜观察

目的 :为探讨遗传性球形红细胞增多症异形红细胞的形态分类、发生演变、诊断和鉴别 ,本文运用扫描电镜技术对遗传性球形红细胞增多症患者外周血红细胞进行研究。方法 :7例遗传性球形红细胞增多症患者及 2例家系成员的静脉血置于扫描电镜下观察。结果 :在观察红细胞从盘形到口形 ,最终至球形的过程中 ,作者对各型红细胞直径和中央凹陷直径及细胞厚度的变化作了测量 ,并结合细胞表面形态和测量结果将病变红细胞分成 5个亚型 ,即 :盘口型 -碗口型 -球口型 -口球型 -典型球形 ,其他少量出现的异常红细胞 (棘状和靶状红细胞 )则归于畸变类。结论 :上述分型对于判断异形红细胞类型和诊断本病很有帮助。     

In situ observation of surface structures of cardiovascular endothelial cells with atomic force microscope

Objective To observe the surface structures of cardiovascular endothelial cells in situ with atomic force microscope （AFM）. Methods Fresh aorta and aortic valve were dissected from 10 healthy male New Zealand white rabbits. Before fixed in 1% formaldehyde, the fresh tissues were washed in the buffer phosphate solution. Under general microscope, the fixed aorta or valve was spread on the double side stick tape which had already been stuck on the glass slide. The intima of aorta or the aorta side of valve was towards upside, Then the specimen was dried under 37 degrees centigrade in an attemperator and was washed with pure water. After dried again, the specimen was loaded on the platform ofNanoScope Ⅲa AFM and was scanned in tapping mode with the scanning speed of 0.5 HZ. Results The surface structures of endothelial cell on the fixed and dried tissue could be observed clearly in situ with AFM. aortic endothelial cells were large, branched and arranged sparsely and parallel to the direction of blood flow, whereas endothelial cells on aorta valve surface were small, less branched and arranged intensively and vertical to the direction of blood flow. When the scanning range was dwindled, granular ultra-structures could be observed on the surface of endothelial cells, and, as the scanning range was dwindled further, fissure and convolution could be seen on the surface of granules from aortic endothelial cells. Centre cavity and surrounding swelling volcano-like structure could be seen on the surface of granules from endothelial cells of aortic valve. Conclusions It＇s feasible to observe the surface ultra-structures of cardiovascular endothelial cells in situ with AFM and morphological information provided by AFM might be of clinical value in future histopathological diagnosis（JGeriatr Cardiol2009; 6：178-181）.