环氧化酶-2通过影响髓源抑制性细胞增殖及活化参与肝细胞肿瘤进展

目的:以COX2-PGE2通路为靶标,探讨其调控髓源抑制性细胞（myeloid-derived suppressor cell,MDSC）增殖及活化,进而影响肝细胞肿瘤（hepatocelluar carcinoma,HCC）进展的可能机制。方法:建立小鼠肝细胞肿瘤模型,利用流式细胞术分析外周血及脾脏组织中的MDSC比例,CFSE标记法分析肿瘤浸润MDSCs对T淋巴细胞增殖的影响,ELISA检测肿瘤组织体外培养上清中PGE2水平,Western blot检测肿瘤组织中COX-2表达,最终腹腔注射COX2-PGE2通路的小分子抑制剂吲哚美辛,证实该通路在调控MDSCs增殖活化,进而影响肿瘤进展过程中具有重要作用。结果:随着HCC的进展,小鼠外周血及脾脏中MDSC比例逐渐升高,其对T淋巴细胞增殖的抑制作用,即免疫抑制功能显著增加;肿瘤组织COX-2及PGE2表达水平较正常肝脏显著升高,腹腔注射吲哚美辛能够有效抑制肿瘤生长;过继回输MDSC则在一定程度上降低吲哚美辛的肿瘤抑制作用。结论:HCC发展过程中,肿瘤细胞通过COX2-PGE2通路活化MDSC,促进肿瘤进展。COX2-PGE2通路抑制剂吲哚美辛可通过抑制MDSC介导的免疫抑制作用,减缓肿瘤进程。     

吲哚美辛对A549/DDP细胞摄取99Tcm-MIBI的影响及其逆转耐药性的机制

目的:探讨吲哚美辛对A549/DDP摄取99Tcm的影响及其逆转耐药性的机制.方法:常规方法培养A549/DDP细胞,首先行99Tcm-MIBI摄取实验,然后用DDP和吲哚美辛干预A549/DDP细胞30min后计算99Tcm-MIBI的摄取率,再分别用RT-PCR,Westen-blot检测mdrl基因,Pg-P蛋白的表达.结果:A549/DDP细胞摄取率在90min时达到高峰(0.83%),吲哚美辛干预后99Tcm-MIBI摄取比干预前增加,达到3.79%.RT-PCR,Westen-blot结果显示吲哚美辛抑制了mdrl基因和Pg-P蛋白的表达.结论:吲哚美辛能提高A549/DDP细胞99Tcm摄取率并通过抑制mdrl和Pg-P的表达逆转肺癌耐药.99Tcm放射性摄取率可作为评价肿瘤耐药的一种方法.     

吲哚美辛诱导肝癌HepG2细胞凋亡及其对cyclin E蛋白表达的影响

目的　观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,及其对 cyclin E蛋白的影响。方法　采用 MTT比色法观察吲哚美辛对肝癌 Hep G2细胞增殖的影响 ;采用流式细胞仪检测吲哚美辛对 Hep G2细胞周期分布的影响 ,同时结合透射电子显微镜观察吲哚美辛诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡的作用 ;免疫细胞化学方法观察吲哚美辛对Hep G2细胞周期调控蛋白 cyclin E的影响。结果　吲哚美辛可抑制肝癌 Hep G2细胞的增殖 ,诱导其凋亡 ,改变细胞周期分布 ,使 G0 /G1 期细胞比例增高 ,S期比例降低 ,同时还可使 cyclin E蛋白表达下降。上述作用具有剂量和时间依赖性 (P<0 .0 5 )。结论　吲哚美辛可诱导肝癌 Hep G2细胞凋亡 ,改变细胞周期分布 ,影响细胞周期调控蛋白表达 ,从而抑制细胞增殖。     

吲哚美辛对A549/DDP细胞摄取99Tcm-MIBI的影响及其逆转耐药性的机制

目的：探讨吲哚美辛对A549/DDP摄取99Tcm的影响及其逆转耐药性的机制.方法：常规方法培养A549/DDP细胞,首先行99Tcm-MIBI摄取实验,然后用DDP和吲哚美辛干预A549/DDP细胞30min后计算99Tcm-MIBI的摄取率,再分别用RT-PCR,Westen-blot检测mdrl基因,Pg-P蛋白的表达.结果：A549/DDP细胞摄取率在90min时达到高峰（0.83%）,吲哚美辛干预后99Tcm-MIBI摄取比干预前增加,达到3.79%.RT-PCR,Westen-blot结果显示吲哚美辛抑制了mdrl基因和Pg-P蛋白的表达.结论：吲哚美辛能提高A549/DDP细胞99Tcm摄取率并通过抑制mdrl和Pg-P的表达逆转肺癌耐药.99Tcm放射性摄取率可作为评价肿瘤耐药的一种方法.     

吲哚美辛抑制慢性粒细胞白血病急变期CD34~+细胞增殖及其机制探讨

目的:观察吲哚美辛对急变期慢性粒细胞白血病患者骨髓CD34~+细胞增殖和自我更新能力的影响,并从Wnt/β-catenin信号通路的角度初步探讨吲哚美辛作用的分子机制。方法:采用免疫磁珠分选技术分选获得慢性期和急变期慢性粒细胞白血病患者骨髓以及健康人脐带血标本中的CD34~+细胞,并采用FCM和实时荧光定量PCR法检测CD34~+细胞中β-catenin和Bcr-Abl的表达水平。用吲哚美辛或(和)伊马替尼处理CD34~+细胞后,采用FCM法检测细胞中β-catenin的表达水平,MTT法检测细胞增殖情况,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,实时荧光定量PCR法检测c-Myc和cyclin D1的mRNA水平。结果:成功分选出各标本中的CD34~+细胞,其中急变期慢性粒细胞白血病患者的CD34~+细胞中β-catenin和Bcr-Abl均高表达(P值均<0.05)。吲哚美辛作用后,急变期慢性粒细胞白血病患者的CD34~+细胞中β-catenin表达显著下调(P<0.05),细胞增殖和克隆形成能力均被明显抑制(P值均<0.05),并且β-catenin下游靶基因c-Myc和cyclin D1的mRNA水平也被明显下调(P值均<0.05);而吲哚美辛与伊马替尼联合用药后,以上作用效果更加明显(P值均<0.05)。结论:吲哚美辛可能通过影响Wnt/β-catenin信号通路,抑制CD34~+细胞的增殖和自我更新能力,从而增强伊马替尼对急变期慢性粒细胞白血病患者中CD34~+细胞的杀伤力。     

塞来昔布对胃癌抑制作用的实验研究

目的 :探讨塞来昔布和吲哚美辛对胃癌细胞增殖的抑制作用及可能的机制。方法 :MTT比色实验检测药物对 SGC790 1细胞和 AGS细胞增殖的影响 ,裸鼠移植瘤实验检测药物对胃癌细胞成瘤性的影响 ;流式细胞术检测药物对胃癌细胞凋亡的影响 ;电镜观察药物作用前后胃癌细胞的超微结构的变化。结果 :塞来昔布和吲哚美辛抑制 SGC790 1细胞和 AGS细胞增殖 ,效应呈剂量依赖性 ,两者抑制率比较差异有显著性 (P<0 .0 5 ) ;塞来昔布和吲哚美辛抑制荷瘤裸鼠肿瘤增殖 ,瘤结节重量分别为 (48.3± 2 .88) mg和 (83.3± 2 0 .81) m g,对照组为 (82 6 .7± 77.72 ) mg(P<0 .0 5 ) ;塞来昔布和吲哚美辛可诱导细胞凋亡 ,凋亡细胞分别增加了 30 .4 % (34.5 %比 4 .1% )和 2 3.9% (2 8.0 %比 4 .1% )。塞来昔布可使胃癌细胞超微结构发生良性转化 ,可见有凋亡特征的细胞。结论 :塞来昔布和吲哚美辛可抑制胃癌体内外增殖 ,前者作用更强 ,诱导细胞凋亡是其可能的作用机制之一。     

吲哚美辛诱导食管癌EC109细胞凋亡的Smac依赖性机制

目的:研究Smac表达下调对吲哚美辛诱导的食管癌EC109细胞凋亡的影响,并探索其内在分子机制。方法:使用Smac-siRNA脂质体法转染食管癌EC109细胞,将细胞分为空白对照组, siRNA-control阴性对照组和siRNA-Smac组。使用不同浓度的吲哚美辛处理各组细胞,MTT检测细胞活力变化,流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,Western blot法检测Caspase-9、3以及XIAP、survivin表达情况。结果:采用不同浓度吲哚美辛处理后,细胞活力明显受到抑制;Smac siRNA可明显降低Smac在RNA水平和蛋白水平的表达;吲哚美辛可引起各组凋亡率明显增加,单纯导入siRNA-Smac片段并不能引起细胞凋亡变化,siRNA-Smac联合药物能明显降低EC109细胞凋亡率（P＜0.05）。在蛋白水平,siRNA-Smac组的survivin表达无明显变化,XIAP表达明显增强;Caspase-9及Caspase-3的活性片段明显表达减弱（P＜0.05）。结论:NSAIDs药物吲哚美辛可诱导食管癌EC109细胞凋亡,这种作用一定程度上依赖于Smac的正常表达;Smac表达降低后其对XIAP的抑制减弱,Caspase-9和Caspase-3的活化受到抑制,而survivin在其中并不起决定性作用。     

吲哚美辛对结肠癌细胞中细胞周期蛋白的影响

目的体外观察吲哚美辛对含突变型p53的SW480细胞及经野生型p53转染的结肠癌细胞株SW480(wtp53/SW480)的影响,探讨吲哚美辛抗结肠癌作用的分子机制.方法不同浓度的吲哚美辛作用于细胞株,采用Western斑点免疫印迹方法,分别检测SW480细胞及wtp53/SW480细胞中CDK2、CDK4和p21WAF1/PIC1蛋白的表达水平.结果吲哚美辛作用于wtp53/SW480细胞24 h后,其CDK2、CDK4蛋白表达水平随吲哚美辛浓度的增加而逐渐下调,呈浓度依赖性,以600μmol/L时抑制作用最强;而p21WAF1/PIC1蛋白表达水平上调,其表达水平随着一定范围内吲哚美辛浓度的增加而逐渐上调,以400μmol/L吲哚美辛时作用最强,600μmol/L时回到基础水平.在未经转染的SW480细胞中CDK2、CDK4和p21WAF1/PIC1蛋白表达没有发生明显改变.结论吲哚美辛抗结肠癌作用部分分子机制可能是通过下调CDK2、CDK4蛋白的表达和上调p21WAF1/PIC1蛋白来实现且存在p53-p21WAF1/CIP1依赖途径.     

舒林酸和吲哚美辛对人血管内皮细胞ECV304的生长抑制作用

目的：体外研究非甾体类消炎药对人血管内皮细胞的生长抑制作用。方法：采用舒林酸和吲哚美辛作用于人脐静脉内皮细胞株ECV304，并设置不同的作用浓度和作用时间，以体外药物敏感实验(MTT)检测舒林酸和吲哚美辛在不同浓度及作用时间下对ECV304细胞的增殖抑制效应；以流式细胞仪技术和Hoechst33258。荧光染色检测药物作用后细胞有无凋亡改变及其形态学变化。结果：舒林酸和吲哚美辛在体外对ECV304细胞均有显著的生长抑制作用，并且具有时间和剂量依赖性，舒林酸能显著诱导ECV304细胞产生凋亡。结论：舒林酸和吲哚美辛在体外具有良好的抑制人脐静脉内皮细胞株ECV304生长的作用，非甾体类消炎药能够诱导血管内皮细胞产生凋亡而抑制其生长，同时也可能存在其他的作用机制。     

选择性环氧合酶2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的作用

背景与目的:环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)与膀胱癌的发生发展密切相关,因此COX-2抑制剂对于膀胱癌可能具有潜在的抗肿瘤效应.本实验旨在探讨选择性COX-2抑制剂对人膀胱癌细胞T24增殖和凋亡的抑制作用.方法:用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、塞来昔布(celecoxib)和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(indomethacin)对T24细胞增殖的影响;用流式细胞术、DNA电泳和Hoechst33258荧光染色3种方法检测SC-58125作用下T24细胞的凋亡,同时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax基因的变化.结果:在12.5 μmol/L至200 μmol/L的剂量范围内,SC-58125、塞来昔布及吲哚美辛均能不同程度地抑制T24细胞的增殖,以SC-58125的抑制作用最强,IC50在25 μmol/L～50 μmol/L之间;3种凋亡检测方法均观察到SC-58125作用后凋亡细胞的比例增加,其中100 μmol/L的SC-58125作用于T24细胞6 h和12 h后,流式细胞仪测得凋亡细胞的比例分别为(7.95±1.88)%和(12.5±2.42)%,较对照组增加(P＜0.05),但细胞内与凋亡相关的Bcl-2和Bax基因表达没有变化.结论:选择性COX-2抑制剂体外可抑制T24细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

TRPC3在胰腺癌细胞系中的表达及功能

目的:研究TRPC3在胰腺癌（pancreatic cancer，PC）细胞系中的表达及对细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR和Western blot检测正常和PC细胞系中TRPC3表达；采用Western blot检测GdCl3和TRPC3 siRNA干预PC细胞系后TRPC3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和PTEN蛋白表达；CCK-8法检测细胞增殖；DAPI染色法检测细胞形态学；Annexin V/PI双标法检测细胞凋亡；钙成像法检测细胞内［Ca2+］ i。结果:PC细胞系中TRPC3 mRNA和蛋白表达明显高于正常胰腺上皮细胞HDPE6-C7；与溶剂和转染阴性对照细胞比较，GdCl3和转染TRPC3 siRNA的Panc1、A8184和T3M4细胞核固缩数量明显增加，Annexin V/PI双阳性凋亡细胞比例明显增多，T3M4细胞的静息［Ca2+］i、达峰［Ca2+］i和恢复相［Ca2+］i浓度明显降低；A8184和T3M4细胞的p-PI3K、p-AKT和PTEN蛋白表达明显降低。结论:TRPC3在PC细胞系中表达上调，且TRPC3通过调节细胞Ca2+介导的PI3K/AKT信号通路从而影响PC细胞增殖和凋亡。     

RNA干扰抑制高迁移率族蛋白-1表达对人视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究siRNA抑制高迁移率族蛋白-1(high mobility group protein box-1， HMGB1)表达对人视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:RT-PCR和Western blot检测HMGB1在人视网膜母细胞瘤中的表达。体外化学合成靶向HMGB1 siRNA，RT-PCR和Western blot检测其抑制效率。MTT法检测HMGB1沉默后Y79细胞的增殖情况。Caspase-3活性检测试剂盒检测HMGB1沉默后Y79细胞的凋亡情况。采用流式细胞仪来分析细胞周期的分布以及细胞凋亡率的变化。结果:HMGB1 mRNA和蛋白在人视网膜母细胞瘤细胞中高表达，siRNA抑制HMGB1表达后，Y79细胞增殖抑制，促进凋亡。结论:抑制HMGB1的表达可以降低人视网膜母细胞瘤细胞的增殖，并促进其凋亡，为人视网膜母细胞瘤的生物学治疗提供新的思路。     

长链非编码RNA TUG1调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

目的:探讨长链非编码RNA(LncRNA)牛磺酸调节基因1(TUG1)调控miR-138-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:在骨肉瘤细胞U-2OS中转染TUG1 siRNA和siRNA control，qRT-PCR测定干扰效果，MTT测定增殖，流式细胞术测定凋亡，Transwell小室测定细胞侵袭和迁移。starBase预测TUG1与miR-138-5p有结合位点，双荧光素酶报告载体鉴定靶向调控关系。将miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染至骨肉瘤细胞中，测定干扰miR-138-5p对下调TUG1的骨肉瘤细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。结果:转染TUG1 siRNA后的骨肉瘤细胞中TUG1表达水平明显低于转染siRNA control后的细胞（P<0.05）。下调TUG1后的骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力降低，细胞凋亡率升高（P<0.05）。野生型TUG1荧光素酶报告载体与miR-138-5p共转染后细胞荧光素酶活性降低（P<0.05）。与转染TUG1 siRNA的细胞比较，miR-138-5p抑制物和TUG1 siRNA共转染后的细胞增殖、侵袭和迁移能力升高，细胞凋亡率降低（P<0.05）。结论:下调LncRNA TUG1表达通过调控miR-138-5p表达抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力并诱导细胞凋亡。     

miR-520b靶向DAD1调控肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用机制

目的:探讨miR-520b和抗细胞凋亡因子（DAD1）对肾癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法:qRT-PCR和Western blot实验检测A498人肾癌细胞中miR-520b和DAD1表达。将miR-520b mimics或DAD1 siRNA转染至A498细胞，MTT和Transwell实验检测细胞活力、迁移和侵袭。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验验证miR-520b和DAD1的靶向关系。将miR-520b mimics和pcDNA-DAD1共转染至A498细胞，检测细胞活力、迁移和侵袭。结果:在A498细胞中，miR-520b表达下调而DAD1表达上调。在A498细胞中过表达miR-520b或敲减DAD1，细胞活力下降，迁移和侵袭细胞数减少。Targetscan在线预测、双荧光素酶报告基因和Western blot实验结果表明，miR-520b可负调控DAD1蛋白表达。过表达DAD1可逆转miR-520b对A498细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论:miR-520b能够通过靶向调节DAD1表达抑制A498细胞增殖、迁移和侵袭。     

XIAP基因对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨沉默X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）基因表达对食管癌细胞黏附、侵袭和迁移能力的影响及机制。方法:参照LipofectamineTM2000说明将设计合成的XIAP特异性siRNA（si-XIAP）转染人食管癌EC9706细胞，将转染阴性对照siRNA(NC组）和仅加入脂质体的空白细胞作为两个对照组，siRNA转染48 h，通过Western blotting检测XIAP、AKT、p-AKT、E-cadherin和MMP-2蛋白表达；通过MTT法、Transwell法分别检测细胞黏附、侵袭和迁移能力；MTT法检测转染siRNA后24 h、48 h和72 h的细胞增殖。结果:XIAP特异性siRNA转染后，EC9706细胞XIAP表达明显降低，与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。与空白组比较，si-XIAP组细胞增殖明显降低，黏附率明显升高，侵袭和迁移能力明显降低，p-AKT和MMP-2表达明显降低，E-cadherin表达明显升高（P<0.05）。结论:沉默XIAP基因可增强食管癌细胞黏附率，抑制侵袭和迁移能力，机制与抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-182靶向NUMB调控结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的:研究miR-182对结直肠癌细胞HT-29增殖、迁移和侵袭的影响，并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR检测人正常结肠上皮细胞HCoEpiC、结直肠癌细胞HT-29中miR-182、NUMB的表达；将anti-miR-con组（转染anti-miR-con）、anti-miR-182组（转染anti-miR-182）、pcDNA组（转染pcDNA）、pcDNA-NUMB组（转染pcDNA-NUMB）、anti-miR-182+si-con组（anti-miR-182和si-con共转染）、anti-miR-182+si-NUMB组（anti-miR-182和si-NUMB共转染）均用脂质体法转染HT-29细胞；Western blot检测各组细胞中NUMB的蛋白表达；Transwell检测各组细胞的迁移和侵袭；MTT法检测各组细胞的增殖；双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光素酶活性。结果:与人正常结肠上皮细胞HCoEpiC相比，结直肠癌细胞HT-29中miR-182表达显著升高，NUMB表达显著降低（P<0.05）；抑制miR-182、过表达NUMB均可下调HT-29细胞的增殖、迁移、侵袭；NUMB是miR-182的靶标。敲减NUMB可逆转抑制miR-182对HT-29细胞增殖、迁移、侵袭的下调作用。结论:miR-182可促进结直肠癌细胞的增殖、迁移、侵袭，其机制可能与靶向NUMB有关，将可为miR-182靶向治疗结直肠癌提供依据。     

PTTG1 siRNA增加塞来昔布对骨肉瘤细胞生长抑制作用的实验研究

目的:研究垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)siRNA和塞来昔布对骨肉瘤细胞生长的影响。方法:以不同浓度的塞来昔布处理骨肉瘤MG-63细胞，MTT方法测定细胞增殖和塞来昔布半数抑制浓度。用PTTG1 siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒感染MG-63细胞，用Realtime PCR和Western blot检测干扰效果。以半数抑制浓度的塞来昔布处理感染siRNA慢病毒和阴性对照慢病毒的MG-63细胞，MTT法检测增殖，平板克隆实验检测克隆形成，流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot检测细胞中活化的caspase-3（c-caspase-3）、活化的caspase-12（c-caspase-12）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白水平。结果:塞来昔布能够抑制MG-63细胞增殖，其半数抑制浓度约为85 μmol/L。siRNA慢病毒感染后细胞中PTTG1 mRNA和蛋白水平均低于对照慢病毒感染的MG-63细胞（P<0.05）。半数抑制浓度的塞来昔布或干扰PTTG1后的MG-63细胞增殖能力和克隆形成能力均降低，细胞凋亡增多，细胞中c-caspase-3、c-caspase-12和CHOP蛋白水平升高。干扰PTTG1的MG-63细胞经半数抑制浓度的塞来昔布处理以后，细胞的增殖和克隆形成能力均降低，细胞凋亡率及细胞中c-caspase-3、c-caspase-12、CHOP蛋白水平均升高，与单纯半数抑制浓度塞来昔布或干扰PTTG1的MG-63细胞比较，差异有统计学意义（P<0.05）。结论:PTTG1 siRNA增加塞来昔布对骨肉瘤细胞生长的抑制作用，其作用机制可能与内质网应激诱导的细胞凋亡有关。     

HSPA5通过抑制铁死亡调控宫颈癌细胞的增殖和凋亡

目的:探讨热休克蛋白70蛋白5（heat shock 70 kDa protein 5，HSPA5）通过铁死亡对宫颈癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白质印迹法（Western Blot，WB）检测HSPA5和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)在宫颈癌和癌旁组织中的表达情况，通过TCGA数据库分析所有宫颈鳞状细胞癌和宫颈内膜腺癌（CESC）中HSPA5与患者总生存率间的相关性。体外培养人宫颈癌HeLa和SiHa细胞系，分别感染shHSPA5和shCtrl慢病毒，构建稳定的宫颈癌HSPA5敲低株，用qRT-PCR和WB检测HSPA5敲低之后铁死亡相关蛋白GPX4的表达情况。使用铁死亡抑制剂Ferrostatin-1（Fer-1）或激活剂Erastin处理细胞后，采用CCK-8和EdU检测细胞增殖情况；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH含量；还原型谷胱甘肽（GSH）试剂盒和丙二醛（MDA）试剂盒分别测定GSH和MDA含量；流式细胞术检测细胞凋亡及活性氧（ROS）的情况。结果:与癌旁组织相比，宫颈癌组织中HSPA5与GPX4的表达显著升高，HSPA5高表达与患者预后不良有关；在HeLa和SiHa细胞中敲低HSPA5能够抑制细胞的增殖和促进细胞凋亡；同时细胞内ROS、MDA和LDH的水平上调；HSPA5敲低后GPX4的mRNA和蛋白表达水平同时降低，此外细胞内GSH的含量降低；铁死亡抑制剂Fer-1逆转了HSPA5敲低导致的ROS和LDH的含量升高并抑制细胞凋亡；铁死亡激活剂Erastin和HSPA5敲低联合增加了细胞凋亡并抑制细胞增殖。结论:HSPA5在宫颈癌组织中表达上调，通过敲低HSPA5可激活铁死亡从而抑制宫颈癌细胞的增殖和促进细胞凋亡。     

siRNA沉默PIM1基因表达对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨PIM1 基因沉默对人胃癌 MKN-45 细胞增殖和凋亡的影响。方法:设计2条针对PIM1 mRNA靶序列的干扰RNA正义链和反义链及阴性对照序列，构建重组pSIREN-retroQ质粒载体，并转染胃癌 MKN-45 细胞。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测 PIM1在 mRNA水平及蛋白水平的表达。CCK-8 法检测胃癌 MKN-45 细胞的增殖，流式细胞分析胃癌细胞的凋亡，蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白Caspase 3和Caspase 9的表达。结果:重组克隆通过 PCR 扩增及测序，证明干扰序列插入正确。与正常对照组和阴性对照组相比，两个RNA干扰组胃癌 MKN-45 细胞PIM1在 mRNA及蛋白水平的表达量都显著降低（P<0.05），细胞增殖能力下降（P<0.05）。此外，干扰组细胞凋亡明显增多（P<0.01），Caspase 3和Caspase 9蛋白表达上调（P<0.01）。 结论: PIM1 siRNA能有效下调靶基因表达，产生特异性基因沉默效应；PIM1基因沉默显著抑制胃癌MKN-45 细胞的增殖并促进其凋亡。     

下调ALK2对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2，下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达，研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组，空载病毒（RFP）作为感染对照，并设空白对照组，通过倒置荧光显微镜观察和RT-PCR检测病毒在MDA-MB-468细胞中的表达水平，通过MTT、平板集落形成、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果:倒置荧光显微镜观察显示Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞的荧光效率高；RT-PCR证实Ad-siALK2感染的MDA-MB-468细胞ALK2的mRNA表达显著下降；MTT法、平板集落形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验证实MDA-MB-468细胞Ad-siALK2组相比对照组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低（P<0.05），穿膜细胞数也明显减少（P<0.05）。结论:下调ALK2表达后可以在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移与侵袭，为后续实验研究奠定了基础。