脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响

目的:研究脂联素对子宫内膜癌细胞增殖凋亡的影响及其信号的传导。方法:免疫细胞化学方法及RT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白及mRNA的表达,不同浓度脂联素(2.5,5,10,20μg/ml)作用子宫内膜癌细胞30min,Western blot检测AMPK磷酸化程度,不同浓度脂联素作用细胞48h及AMPK抑制剂(复合物C)预处理后脂联素再作用48h后,MTT试验及流式细胞仪检测不同处理组细胞的增殖及凋亡。结果:子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞AdipoR1/R2蛋白呈棕黄色颗粒状表达,并可见AdipoR1/R2基因表达。除2.5μg/ml浓度外,其余浓度组脂联素均显著诱导AMPK磷酸化,不同浓度组AMPK活化差异有统计学意义(F=27.985,P0.01),脂联素以浓度依赖模式诱导子宫内膜癌细胞AMPK活化。脂联素以浓度依赖模式显著抑制子宫内膜癌细胞增殖(F=13.322,P0.01),诱导子宫内膜癌细胞凋亡(F=46.826,P0.01),复合物C可以阻断脂联素诱导的细胞增殖抑制及凋亡。结论:脂联素可能通过影响AMPK信号通路抑制子宫内膜癌细胞增殖,促进凋亡。     

氧化苦参碱抑制子宫内膜癌细胞株Ishikawa的实验研究

目的:观察不同浓度氧化苦参碱(oxymatrine,Oxy)对人子宫内膜癌细胞株Ishikawa增殖抑制及诱导凋亡作用。方法:培养人子宫内膜癌细胞株Ishikawa,通过细胞形态学观察、CCK-8比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期人工重组基底膜侵袭小室(transwell)观察细胞的侵袭力。结果:Oxy明显抑制Ishikawa增殖,并呈时效和量效关系,24h、48h、72h的IC50分别为8.07,4.62,3.22mg/ml;细胞周期发生明显改变。随着药物浓度增高,G1期细胞比例增加,S期细胞减少;流式细胞仪可检测到细胞凋亡现象,当Oxy浓度为10mg/ml时,细胞凋亡率65.4%;荧光显微镜可见细胞凋亡形态学变化;Ishikawa细胞侵袭基底膜的能力明显被抑制。结论:Oxy可抑制Ishikawa增殖,诱导Ishikawa细胞凋亡,有可能成为治疗子宫内膜癌的有效药物。     

NK-1受体拮抗剂对Ishikawa细胞抑制作用的研究

目的:探讨NK-1受体拮抗剂对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、凋亡、细胞周期及侵袭影响。方法:体外培养子宫内膜腺癌Ishikawa细胞,将不同浓度NK-1受体拮抗剂与其共培养48h后,采用MTT法检测Ishikawa细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期分布;利用Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果:NK-1受体拮抗剂可明显抑制Ishikawa细胞增殖(P0.05);促进细胞凋亡,使细胞周期中G0/G1期比例增加,S期及G2/M期比例降低(P均0.05);抑制细胞侵袭,并且其对Ishikawa细胞的这些作用均呈剂量依赖性。结论:NK-1受体拮抗剂可明显抑制子宫内膜癌细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导凋亡及抑制侵袭,有望成为子宫内膜细胞治疗的新途径。     

NS-398与前列腺素E_2对子宫内膜异位症子宫内膜细胞环氧合酶-2mRNA表达与凋亡的影响

目的 :探讨选择性环氧合酶 2 (COX- 2 )抑制剂NS -398与前列腺素E(PGE2 )对子宫内膜异位症患者子宫内膜细胞COX -2mRNA表达与细胞凋亡的影响。方法 :以体外培养的子宫内膜细胞为研究对象 ,分别用NS- 398与PGE2 处理。采用RT- PCR法、MTT法、酶联免疫吸附试验 (ELISA)和流式细胞术 ,检测刺激前后COX -2mRNA表达量、细胞增殖、凋亡与细胞周期分布情况以及上清液中凋亡抑制蛋白Bcl 2与PGE2 的释放量。结果 :NS- 398以剂量与时间依赖方式抑制COX -2mRNA的表达以及PGE2 与Bcl -2的分泌 ,抑制子宫内膜细胞增殖 ,诱导细胞凋亡 ,改变细胞周期分布 ,增加G0 /G1期细胞的比例。PGE2以时间与剂量依赖方式刺激子宫内膜细胞的COX- 2mRNA的表达 ,使Bcl- 2释放增加。同时 ,PGE2 可以逆转NS- 398对子宫内膜细胞的抑制作用 ,细胞增殖重新活跃 ,改变细胞周期分布 ,减少G0 /G1期细胞的比例 ,抑制细胞凋亡。结论 :COX- 2选择性抑制剂NS- 398,促进细胞凋亡 ,抑制细胞增殖 ,其机制可能与抑制COX -2的表达 ,降低PGE2 以及Bcl- 2释放 ,和改变细胞周期有关。PGE2 在体外能够刺激子宫内膜细胞COX- 2的表达升高 ,促进细胞增殖 ,抑制细胞凋亡。     

雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B的影响

目的:研究雷公藤甲素对人子宫内膜癌细胞株HEC-1B体外生长特性的影响。方法:观察雷公藤甲素作用后子宫内膜癌细胞株HEC-1B的生长情况;用MTT法检测雷公藤甲素抑制细胞增殖的作用;流式细胞仪观察雷公藤甲素作用后对细胞周期及凋亡的影响。结果:倒置相差显微镜下示雷公藤甲素作用后细胞生长明显受到抑制;MTT检测显示雷公藤甲素能抑制HEC-1B细胞生长且生长抑制作用呈剂量-时间依赖性;流式细胞仪检测示雷公藤甲素低浓度(5ng/ml)条件下,能诱导HEC-1B细胞发生细胞周期阻滞,主要阻滞在S期,高浓度(40,80ng/ml)雷公藤甲素使细胞主要阻滞在G2/M期,并诱导其凋亡。结论:雷公藤甲素对子宫内膜癌细胞株HEC-1B的生长有抑制作用,使其阻滞在S期和G2/M期,并诱导其凋亡。     

环氧合酶-2抑制剂NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3细胞周期的影响

目的探讨环氧合酶2抑制剂NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3细胞周期的影响。方法2003年9月至2004年6月辽宁省肿瘤医院等采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察NS398对CAOV3的增殖抑制情况;流式细胞仪测定NS398对CAOV3细胞周期的影响;westernbloting法检测NS398作用前后的细胞周期蛋白cyclinD1、cyclinE的变化。结果NS398对CAOV3细胞的增殖具有抑制作用,并显示出明显的时间和剂量的依赖性;NS398使CAOV3细胞发生细胞周期的G1期阻滞,并抑制细胞周期蛋白cyclinD1、cyclinE的表达。结论NS398可能至少通过抑制cyclinD1和cyclinE的途径抑制CAOV3细胞的增殖。     

ERRα过度表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞内分泌治疗的影响

目的探讨孤儿受体-雌激素受体相关受体α（ERRα）在子宫内膜癌Ishikawa细胞中过度表达对内分泌治疗的影响。方法重组并构建含有绿色荧光蛋白（GFP）和G418耐药筛选标记的真核表达质粒pEGFP-N1-3FLAG-ERRα,瞬时转染子宫内膜癌细胞株Ishikawa后采用实时荧光定量PCR技术和蛋白印迹法检测ERRαmRNA和蛋白的表达情况。使用不同浓度的ICI182780处理子宫内膜癌Ishikawa细胞、Ishikawa-空载体细胞（Ishikawa-空）和ERRα过度表达的（Ishikawa-ERRα）细胞,流式细胞技术检测分析10-6mol/LICI182780对细胞诱导的凋亡情况。结果瞬时转染pEGFP-N1-ERRα质粒后,Ishikawa在mRNA和蛋白水平均能检测到ERRα的表达增加。流式细胞仪细胞凋亡分析表明,ERRα过度表达导致子宫内膜癌细胞Ishikawa耐受ICI182780的诱导凋亡作用（P〈0.05）。结论 ERRα过度表达为激素依赖性的子宫内膜癌细胞株Ishikawa提供了一种耐受内分泌治疗的机制。     

GPER抑制剂PTX对雌激素作用下子宫内膜癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:探讨G蛋白偶联雌激素受体(GPER)抑制剂百日咳毒素(PTX)对17β-雌二醇(E2)作用下子宫内膜癌系ER阳性的Ishikawa及ER低表达的HEC-1A的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,初步探讨阻断GPER介导的信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:选取对数生长的细胞随机分为空白对照组(不加任何试剂)、阴性对照组(加10-6mol/L E2)和实验组(10-6mol/L E2+PTX)。应用四甲基亚唑蓝(MTT)法、流式细胞术观察PTX对E2作用下的子宫内膜癌的细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。结果:(1)随着E2浓度的增加和作用时间的延长,子宫内膜癌Ishikawa细胞在490nm处光密度值增大。E2对Ishikawa细胞具有促增殖作用,且呈时间和浓度依赖性(P均<0.001),而对HEC-1A的细胞增殖作用不显著(P=0.393),各浓度之间差异均无统计学意义(P=0.137)。不同浓度E2作用48h后,Ishikawa细胞G0～G1期比例减少(P=0.001),S期比例增多(P=0.002),HEC-1A变化不显著。(2)随着PTX浓度增加及时间延长,两种细胞增殖能力逐渐下降并呈时间和浓度依赖性(P均<0.001);不同浓度PTX作用48h后,两种细胞的凋亡率、G0～G1比例均升高(P<0.001,P<0.05),S期比例在Ishikawa细胞无显著变化,在HEC-1A细胞降低,G2～M期比例在Ishikawa细胞降低,在HEC-1A细胞无显著变化。结论:PTX可以抑制E2对子宫内膜癌细胞的促增殖作用,促使其发生凋亡,抑制细胞周期进展。GPER介导的信号传导通路可能成为治疗子宫内膜癌的新靶点。     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞株Ishikawa体外生长的影响

目的探讨雌激素(17β-雌二醇,E2)、孕激素(P)及其不同配伍对子宫内膜癌Ishikawa细胞体外生长的影响,为临床子宫内膜癌患者术后激素补充治疗(HRT)提供理论依据。方法体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞株。实验组分别加入不同浓度E2(E2组)、P(P组)及二者不同浓度配伍(E2+P组);对照组加入0.01%乙醇。观察细胞形态变化;测定细胞的增殖、凋亡和细胞周期变化。结果 Ishikawa细胞吸光度(A值)及增殖促进率均随E2浓度的增加呈逐渐上升趋势。E2浓度增至10-8～10-6mol/L,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。相反,P和E2+P两组均随P浓度的增加,对Ishikawa细胞增殖抑制率逐渐升高(P0.05,P0.01)。E2终浓度增至10-6mol/L,P终浓度10-5及0.5×10-4mol/L时,差异有统计学意义(P0.05)。对照组Ishikawa细胞大多处于G0/G1期。经E2、P作用后,细胞周期发生改变,E2组S期细胞比例上升,凋亡率下降(P0.01);P组和E2+P组G0/G1期细胞比例上升,S期比例下降,凋亡率上升。E2组Ishikawa细胞数量增多,核分裂相多见。P组和E2+P组则见Ishikawa细胞数目减少,细胞明显皱缩,体积变小,凋亡小体多见。结论 E2对Ishikawa细胞有促增殖、抗凋亡作用;P则抑制Ishikawa细胞增殖,并诱导其凋亡;E2+P是否具有抑制细胞增殖并诱导凋亡的作用与E2和P具体配伍浓度有关;合理的E2+P配伍不促进Ishikawa细胞的增殖。     

吉非替尼对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨EGFR酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼(Gefitinib)对子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其内在作用机制。方法:MTT法检测不同浓度吉非替尼作用后细胞的增殖抑制率。采用流式细胞术检测吉非替尼作用48h后的细胞凋亡率及细胞周期分布,并用倒置显微镜对细胞进行形态学观察。Western blot法检测不同浓度吉非替尼作用细胞48h后细胞内p-Akt、CyclinD1蛋白水平表达的变化。结果:吉非替尼能显著抑制Ishikawa细胞的增殖,促进细胞凋亡,且呈时间-剂量依赖性(P0.05),并使细胞周期中G0/G1期比例升高(P0.05),而对S期和G2/M期比例无明显影响(P0.05)。吉非替尼作用48h后,Ishikawa细胞中p-Akt、CyclinD1蛋白表达随着吉非替尼浓度的增加逐渐下降(P0.05)。结论:吉非替尼对人子宫内膜癌细胞Ishikawa的体外生长具有明显的抑制作用,并能诱导Ishikawa的凋亡,导致G0/G1期细胞阻滞,其分子机制可能与吉非替尼下调p-Akt蛋白及CyclinD1蛋白的表达有关。     

NS398对人卵巢癌细胞系CAOV3和OVCAR3生长抑制作用的研究

目的 观察环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂——氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS398),对人卵巢癌细胞系CAOV3和OVCAH3生长的抑制作用。方法 应用免疫组织化学(免疫组化)链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连接(SP)法,在蛋白水平,对人卵巢上皮浆液性癌细胞系CAOV3、OVCAR3的COX-2表达情况进行检测;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法,观察NS398对CAOV3、OVCAR3生长的抑制作用,并通过倒置相差显微镜及电子显微镜观察细胞形态学的变化;通过DNA梯形电泳和末端脱氧核苷转移酶(TdT)介导的脱氧尿嘧啶三磷酸(dUTP)缺口末端标记(TUNEL)实验,对细胞凋亡情况进行检测。结果 CAOV3、OVCAR3的COX-2蛋白表达均为阳性。NS398对CAOV3、OVCAR3增殖的抑制率,均随着作用时间的延长和药物浓度的增加而增加。NS398作用后,CAOV3、OVCAR3细胞胞浆空泡化,可见凋亡小体,细胞表面的微绒毛消失。DNA梯形电泳显示特征性的梯形谱带,TUNEL实验可见凋亡细胞。结论 COX-2很可能成为卵巢癌化学药物治疗(化疗)的有效靶点,COX-2抑制剂——NS398有可能成为卵巢癌化疗的有效药物。     

TRAIL联合化疗药物对子宫内膜癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)联合化疗药物对子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖及凋亡的影响。方法:MTT法检测TRAIL单独或联合应用阿霉素(DOX)、顺铂(c-DDP)对Ishikawa细胞增殖的作用;流式细胞仪分析TRAIL单独或联合应用DOX、c-DDP对Ishikawa细胞凋亡的影响。结果:单独应用TRAIL(50μg/L),DOX(5mg/L),c-DDP(50mg/L)对Ishikawa细胞增殖无明显抑制作用(P>0.05)。TRAIL(50μg/L)联合低浓度DOX(5mg/L)、c-DDP(50mg/L)处理Ishikawa细胞后,细胞增殖抑制率明显高于对照组及单独作用细胞(P<0.01);不同浓度的TRAIL、DOX、C-DDP均能诱导Ishikawa细胞凋亡,但DOX、C-DDP能显著增强TRAIL诱导Ishikawa细胞凋亡(P<0.01)。结论:TRAIL联合低浓度化疗药物DOX、c-DDP显著抑制了Ishikawa细胞增殖,诱导了Ishikawa细胞凋亡。     

NS-398对宫颈癌细胞系的增殖抑制作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌HeLa,SiHa细胞系的增殖、凋亡作用及其对凋亡抑制基因survivin表达的影响。方法:体外培养宫颈癌HeLa,SiHa细胞系,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分析不同浓度的NS-398分别作用于HeLa,SiHa细胞系24h、48h后对细胞增殖的作用;流式细胞仪(FCM)检测对细胞凋亡的作用;RT-PCR分析对凋亡抑制基因survivin表达的影响。结果:MTT检测显示,NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞系增殖,并有浓度时间依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。FCM检测提示,NS-398可诱导HeLa,SiHa细胞系凋亡,有浓度依赖性,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR分析表明,NS-398可抑制HeLa,SiHa细胞系凋亡抑制基因survivinmRNA表达,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:NS-398可抑制宫颈癌HeLa,SiHa细胞增殖,诱导凋亡,其机制与抑制凋亡抑制基因survivin mRNA表达有关,为宫颈癌治疗提供了新的靶点和理论依据。     

舒林酸代谢产物诱导血管内皮细胞凋亡的实验研究

目的　探讨舒林酸代谢产物舒林酸硫化物及舒林酸砜化物体外对血管内皮细胞增殖及凋亡的影响。方法　根据加入药物不同将细胞分为 3组 ,舒林酸硫化物组、舒林酸砜化物组和未加药物的对照组。采用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定舒林酸硫化物及舒林酸砜化物对脐静脉内皮细胞增殖的作用 ,流式细胞仪和电子显微镜分别检测其细胞周期、细胞凋亡及其超微结构的变化。结果　MTT法显示 ,舒林酸硫化物可显著抑制血管内皮细胞的增殖 ,且呈剂量依赖效应 ,5 0 %抑制浓度 (IC50 )为 2 0 0 μmol/L。流式细胞仪检测结果显示 ,对照组、舒林酸砜化物组和舒林酸硫化物组 3组G0 G1期细胞分别为 (77 7± 1 6 ) %、(75 6± 2 1) %和 (4 6 1± 1 6 ) % ,S期细胞分别为 (13 6± 1 2 ) %、(16 4±2 3) %和 (2 7 3± 2 1) % ,G2 M期细胞分别为 (8 6± 0 7) %、(8 0± 0 5 ) %和 (2 6 6± 3 5 ) % ,舒林酸硫化物组与对照组比较 ,G0 G1期细胞显著减少 ,S期、G2 M期细胞显著增加 (P均 <0 0 1) ;而舒林酸砜化物组细胞周期分布则无明显变化 (P >0 0 5 )。对照组、舒林酸砜化物组和舒林酸硫化物组细胞凋亡率分别为 (6 1± 3 4) %、(4 8± 2 1) %和 (5 1 9± 5 7) % ,舒林酸硫化物组与对照组比较 ,差异有极显著性 (P <0     

三苯氧胺对人子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞增殖的影响

目的:探讨三苯氧胺(TAM)在体外对Ishikawa人子宫内膜癌细胞株增殖的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度TAM作用不同时间对Ishikawa细胞增殖的影响,另应用MTT法、流式细胞术、免疫细胞化学方法观察比较TAM、17β-雌二醇(17β-E2)及两者联合作用不同时间后对Ishikawa细胞增殖率,细胞周期时相分布以及C-myc、bcl-2、Bax 3种蛋白表达的影响。结果:TAM对Ishikawa细胞的促增殖作用在一定剂量范围内有浓度依赖性,可使G0/G1期细胞比例下降,S期细胞比例升高;C-myc、bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降。结论:体外TAM可能通过调节细胞周期时相分布及上调C-myc蛋白、bcl-2蛋白,下调Bax蛋白表达,促进Ishikawa人子宫内膜癌细胞增殖。     

环氧合酶-2抑制剂诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡及相关分子机制的研究

目的:探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对宫颈癌Hela细胞株增殖和凋亡的作用机制。方法:用不同浓度(100-400μmol/L)的NS-398,以不同时间段(12-72h)处理宫颈癌Hela细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定Hela细胞增殖抑制率;流式细胞术(FCM)检测Hela细胞凋亡率;Western blot检测COX-2蛋白的表达;放射免疫法检测Hela细胞PGE2释放水平。结果:不同浓度的NS-398(100-400μmol/L)对Hela细胞的增殖具有抑制作用,并呈明显的时效和量效关系,与对照组相比,差异有极显著性(P<0.01)。200-400μmol/L的NS-398诱导Hela细胞的凋亡率,与对照组比较,差异有极显著性(P<0.01),并呈浓度依赖性。NS-398能明显抑制Hela细胞COX-2的活性和表达,随着浓度的增加,其COX-2蛋白表达逐渐降低,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。不同浓度的NS-398(100-400μmol/L)可明显抑制Hela细胞PGE2释放水平,呈浓度依赖性,与对照组比较,差异有极显著性(P<0.01)。结论:NS-398对宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用,并促进其凋亡,其作用可能与抑制COX-2活性表达及抑制细胞PGE2释放水平有关。     

Genistein对人卵巢癌细胞系TC-1增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:研究植物雌激素染料木黄酮(genistein)对人卵巢癌细胞系TC-1细胞增殖的抑制作用和凋亡的诱导作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT法检测不同浓度genistein对TC-1细胞的生长抑制作用,电镜观察药物作用后细胞超微结构的改变,流式细胞仪检测细胞周期、定量分析凋亡,DNA琼脂糖凝胶电泳法确定凋亡。结果:TC-1细胞经不同浓度genistein处理后,细胞生长明显受到抑制,且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,5mg/L和10mg/L genistein作用72h后,抑制率分别达到89·84%和97·99%。genistein阻断TC-1细胞生长于G2/M期,在G0/G1前出现典型的亚二倍体凋亡峰,且凋亡呈时间依赖性。电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。DNA凝胶电泳可观察到细胞凋亡特异的DNA梯形带。结论:genistein对TC-1细胞生长的抑制作用呈明显的时间及浓度依赖性,并诱导其发生凋亡。