基因芯片检测系统在分枝杆菌属鉴定及耐药性分析的临床应用

目的探讨基因芯片检测系统在分枝杆菌属鉴定及耐药性分析的临床应用价值,以及不同类型标本检出率的差异。方法应用基因芯片技术,对患者的痰液、脓液、胸腹水、脑脊液等标本进行分枝杆菌属DNA检测,进一步对结核分枝杆菌阳性标本进行耐药性分析。结果 900份临床样本的鉴定结果总阳性率为10.6%,洗肉水、穿刺物、脓液等阳性率较高;进一步对40份结核阳性标本进行耐利福平基因rpoB及耐异烟肼kat Gi、nhA基因检测,共有9例检测到了突变的耐药基因。结论基因芯片检测系统可以直接进行分枝杆菌属鉴定及耐药性分析,适用于不同类型标本,简便快速,灵敏度高,特异性好。     

检测结核分枝杆菌两种不同方法的比较

目的比较实时荧光定量PCR法与细菌培养法检验结核分枝杆菌的能力。方法收集2013-2014年天津市某三甲医院痰涂片抗酸染色阳性肺结核患者的痰液标本200份,分别应用细菌培养法与实时荧光定量PCR法,对上述患者的痰标本进行检测。结果痰涂片抗酸染色阳性结核病患者的痰标本中,应用实时荧光定量PCR法检测结核分枝杆菌的阳性率为58.5%,应用结核分枝杆菌培养法检测的阳性率为42.0%,差异有统计学意义(P0.05)。结论荧光定量PCR技术与细菌培养法尚不能取代痰涂片抗酸染色检测结核分枝杆菌。     

骨与关节结核患者病灶感染病原菌检测结果分析

目的分析临床诊断骨与关节结核患者病灶感染病原菌的种类和耐药性,为临床抗结核治疗方案的制定提供参考。方法选取医院收治的临床诊断骨与关节结核并接受手术治疗的患者58例,收集所有患者病灶部位的脓液、坏死组织、肉芽组织等作为标本进行病原菌培养和药敏试验,对比不同临床资料患者的病原菌培养阳性率并分析病原菌的耐药性。结果 58份标本中分枝杆菌属培养阳性率为56.90%;15份抗酸染色阳性的标本中,分枝杆菌属培养阳性率为93.33%,显著高于抗酸染色阴性的标本(P<0.05);31例有结核中毒症状患者的标本中,分枝杆菌属培养阳性率为70.97%,显著高于无结核中毒症状患者的标本(P<0.05);共培养出结核分枝杆菌20株、牛分枝杆菌8株、肺结核分枝杆菌5株;其中12株为耐药株,占36.36%,其对链霉素和异烟肼的耐药率最高,达75.00%,对磺胺甲氧嗪的耐药率最低,为0。结论结核分枝杆菌是骨与关节结核主要的病原菌,分枝杆菌属对链霉素、异烟肼的耐药率较高,临床上应重视药敏试验,以指导临床抗结核药物的选择,提高临床治疗效果,减少耐药菌株的产生。     

噬菌体生物扩增法检测肺结核患者痰标本的临床应用价值

目的探讨噬菌体生物扩增法对肺结核临床诊断的应用价值。方法对298例肺结核患者的痰标本,20例非结核性其他肺部疾病患者痰标本进行噬菌体生物扩增法检测,同份标本同时进行涂片抗酸染色、分枝杆菌罗氏培养。结果 298例痰标本有167例噬菌体生物扩增法检测结果阳性,阳性率56.0%;有78例涂片抗酸染色阳性,阳性率26.2%;有129例罗氏培养阳性,阳性率43.3%。结论噬菌体生物扩增法检测肺结核痰标本中结核分枝杆菌只需2d时间,操作简便、灵敏度高、特异性强,可作为诊断肺结核的一种检测方法。     

结核分枝杆菌固液双相培养基的研究及临床应用

目的:研究固液双相培养基应用于结核分枝杆菌培养检测的临床价值。方法:采集400份清晨痰液标本,分别采用改良罗氏培养法、Bactec 960培养法、固液双相培养法对痰标本进行培养检测,对比痰标本阳性率和痰标本阳性报告时间。结果:改良罗氏培养法、Bactec 960培养法、固液双相培养法对400份痰标本的检测阳性率依次为21.25%、34%、31.75%,Bactec 960培养法、固液双相培养法检测阳性率高于改良罗氏培养法(P0.05),但Bactec 960培养法、固液双相培养法检测阳性率比较,差异无统计学意义(P0.05)。改良罗氏培养法、Bactec 960培养法、固液双相培养法培养检测下痰标本阳性报告平均耗时依次为(23.72±2.83)d、(17.65±2.55)d、(12.73±2.81)d,改良罗氏培养法、Bactec 960培养法平均耗时均大于固液双相培养法(P0.05)。结论:固液双相培养基培养检测结核分枝杆菌的阳性率高,且耗时短,可作为结核分枝杆菌培养检测的优选方法。     

Taqman聚合酶链反应检测支气管灌洗液中结核分枝杆菌DNA的临床应用

肺结核病是一种危害性十分严重的传染性疾病,全球约有1／3人口感染结核分枝杆菌,每年约有800万～1000万新发病例及300万人死于该病。因此,尽早发现新发病例,明确诊断非常重要。由于结核分枝杆菌体外生长缓慢、培养要求高,临床上一般难以用细菌培养的方法来确诊结核分枝杆菌感染。痰液涂片抗酸检查特异检出率均不高,存在较高的漏检率。基于Taqman技术的荧光探针聚合酶链反应（FQ—PCR）检测结核分枝杆菌DNA具有高灵敏性、高特异性等优点。同时克服了常规PCR容易受污染产生假阳性的缺点,是一种理想的检测方法。而采用支气管肺泡灌洗液（BALF）作为检测标本比痰液标本具有更高的阳性检出率,克服了痰液标本留取不规范带来的阳性检出率不高的问题。我们应用该技术检测112例BALF标本中结核分技杆菌DNA,现报告如     

TB-LAMP法检测阳性痰标本再培养增加耐药肺结核发现率

目的 评价结核分枝杆菌环介导等温扩增法(TB-LAMP)在检测肺结核患者痰标本LAMP阳性后再培养及表型药物敏感试验对耐药结核分枝杆菌的检出效果。方法 随机收集2017年5月至2019年2月于遵义医科大学附属医院结核病专科门诊就诊和结核病区住院的疑诊肺结核患者7823例,每例留取4份痰标本,随机分别进行1份痰涂片镜检、2份传统罗氏培养和1份TB-LAMP核酸检测,将TB-LAMP阳性标本进一步行传统罗氏培养及表型药物敏感试验,分析TB-LAMP阳性标本再培养对耐药结核病的诊断价值,提高对耐药结核病的防治意识。采用graphpad prism6.0软件进行分析,χ2检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果 所纳入的可疑肺结核患者7823例,TB-LAMP法、传统罗氏培养和涂片镜检的阳性检出率分别为16.6%、7.8%和4.6%,痰TB-LAMP法阳性检出率与痰涂片抗酸染色、传统L-J培养检查相比,差异具有统计学意义(分别为χ2＝593.57,P＜0 .01;χ2＝283.49,P＜0 .01)。TB-LAMP阳性痰标本再培养阳性率为44%(574/1298),其中52.8%(303/574)与传统结核分枝杆菌培养共同阳性,另外47.2%(271/574)为传统结核分枝杆菌培养阴性,而TB-LAMP阳性标本再培养阳性;228株结核分枝杆菌临床分离株进行结核分枝杆菌药物敏感试验,敏感结核分枝杆菌占75%(171/228),耐药结核分枝杆菌25%(57/228),其中RR-/MDR-TB为12.72%(29/228)。结论 TB-LAMP阳性标本再培养可提高RR-/MDR-TB发现率,为耐药结核病的早诊断、早治疗、减少传播提供了检测思路,值得推广应用。     

免疫荧光法检测痰标本结核分枝杆菌的研究

目的探讨特异性免疫荧光法在痰标本结核分枝杆菌检查上应用的可行性。方法制备高效价结核分枝杆菌免疫血清和单克隆抗体,并用异硫氰酸荧光素(FITC)标记,痰标本涂片、固定,加荧光抗体结合,荧光显微镜下检查。结果60份临床疑似肺结核病人痰标本,用抗酸染色法、结核分枝杆菌免疫血清和单克隆抗体免疫荧光法三种方法检测,阳性率分别为:36.7%(22/60)、58.3%(35/60)和56.7%(34/60),其中,抗酸染色阳性22份标本,两种免疫荧光法检查均为阳性,吻合率100%。结论免疫荧光法检查痰标本结核分枝杆菌阳性率大大高于抗酸染色,进一步完善后可尝试用于痰标本的结核分枝杆菌检查。     

反向杂交膜片检测结核菌耐利福平基因突变

目的利用一种新型的反向点杂交膜片,快速检测结核分枝杆菌耐利福平rpoB基因突变.方法根据结核分枝杆菌rpoB基因序列设计寡核苷酸探针并固定于尼龙膜上,用生物素标记的引物增扩结核分枝杆菌rpoB基因片断,与膜片上探针杂交,膜片检测结果与常规药敏试验结果和测序结果进行对照.结果对63株临床分离株进行检测,10株利福平敏感株未检测到突变,53株耐利福平株,其中48株检测到突变.灵敏度为90.6%,特异度为100%,阳性预测值100%,阴性预测值66.7%.用反向点杂交膜片检测27份肺结核患者的痰标本,17份非结核的痰液标本.12份耐利福平的痰标本中,11份检测到突变,膜片检测与药敏结果的符合率为92.3%;15份利福平敏感的痰标本中,膜片检测结果有6份出现突变信号;17份非结核病的其他患者的痰液标本中有1份检测到突变.检测痰标本的灵敏度为91.7%,特异度为78.1%,阳性预测值61.1%,阴性预测值96.1%.结论反向点杂交膜片可简便、快速、较准确地检测出大多数结核分枝杆菌耐利福平分离株的rpoB基因突变.     

结核分枝杆菌耐RFP快速检测的方法研究

目的应用PCR—SSCP技术直接快速检测痰标本中结核分枝杆菌rpoB基因突变，评价此方法用于结核分枝杆菌利福平（RFP）耐药性的意义。方法采用PCR—SSCP检测痰标本和菌株中结核杆菌rpoB基因突变。结果50例耐RFP菌株中有45例PCR—SSCP条带与结核分枝杆菌H37Rv条带有明显差别，与药敏试验结果做对比，PCR—SSCP检测敏感性为90％，特异性为100％；12例敏感菌株与H37Rv条带一致，35份肺结核病人痰标本，21份痰PCR扩增阳性，15份SSCP图谱与H37Rv图谱有差别，而且PCR—SSCP28份图谱与H37Rv有差别，阳性率为80％。结论PCR—SSCP检测结核分枝杆菌rpoB基因突变快速、简便、易行，有望用于结核分枝杆菌RFP耐药性的快速测定，并将成为直接检测临床标本中结核分枝杆菌耐RFP快速方法。     

3种方法检测肺结核患者痰标本结果分析

目的比较3种检测方法对肺结核患者痰菌检出率,探索噬菌体生物扩增法提高肺结核病患者结核菌阳性检出率的可行性。方法对同1例肺结核患者的痰标本,采用直接厚涂片法、结核分枝杆菌培养法和噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌。结果在150例肺结核患者痰标本中,直接厚涂片法检出菌阳26例（检出率为17．3％）,痰结核分枝杆菌培养阳性33例（检出率为22．0％）,噬菌体生物扩增法阳性85例（检出率为56．7％）,噬菌体扩增法阳性检出率高于直接厚涂片法和分枝杆菌培养法（χ^2=51．8,38．8,P〈0．01）。结论噬菌体生物扩增法可提高肺结核病例的痰菌检出率。     

γ干扰素释放试验在肺内结核和肺外结核中的诊断价值

目的：探讨IFN-γ释放试验在肺内及肺外结核诊断中的应用价值。方法采用IFN-γ释放试验试剂盒分别检测185例结核病患者（包括119例肺结核和66例肺外结核）、139例其他肺部疾病患者和100例健康对照者结核患病情况,并以病原培养或/和临床诊断为标准,评价IFN-γ法诊断的敏感度和特异性,同时分别与痰菌培养及痰涂片平行检验的结果作比较。结果以临床诊断为准金标准,IFN-γ释放试验检测敏感度为93.51%,特异度为84.52%,检测肺结核和肺外结核的敏感度分别为90.76%和98.49%,两者差异无统计学意义（P〉0.05）;而痰涂片检测肺结核和肺外结核的敏感度分别为11.76%和3.03%;痰培养检测的敏感度也仅为24.37%和3.03%,3种方法对肺结核和肺外结核检测敏感度,差异均有统计学意义（ P均〈0.05）。全部424例标本,经培养阳性有33例,其中鉴定发现2例非结核分枝杆菌感染,均为脓肿分枝杆菌,IFN-γ释放试验检测为阴性,按鉴定确认的31例结核分支杆菌培养阳性结果为金标准,IFN-γ释放试验敏感度为90.32%（95%CI：75.10%~96.65%）。结论IFN-γ释放试验肺内、外结核具有快速方便和较高的敏感度,值得用于临床结核筛查。     

233例痰菌阳性肺结核疫情特征与化疗效果分析

目的分析痰菌阳性肺结核疫情特征与化疗效果。方法采用Excel2003软件对233例肺结核阳性病例资料建立数据库,用SPSS14.0软件进行统计学分析。结果结核门诊痰菌阳性检出率为15.95%,其中追踪阳性率为26.18%,转诊阳性率为58.37%,就诊阳性率为15.45%;男、女性肺结核病例阳性检出率差异无统计学意义(χ2=0.73,P﹥0.05);15～54岁人群占痰菌阳性病例总数的72.10%,阳性病例以农民为主(89.27%);治疗2、3月末痰转阴率分别为98.28%和99.57%;治愈率为88.41%,完成疗程率为93.99%。结论转诊和追踪是发现肺结核阳性患者的主要方式;及时、准确发现和彻底治愈痰涂片阳性肺结核患者,恢复其健康,是消除传染源、控制结核病流行的重要措施。     

痰模型涂片法检测抗酸杆菌的结果分析

[目的]评价初诊活动性肺结核患者痰模型涂片法检测抗酸杆菌的应用效果。[方法]2010年1月至2012年6月,在泰安市的宁阳县、新泰市和泰山区,分别收集初诊活动性肺结核患者（每例当日即时痰、夜间痰、次日晨痰各1份）的痰标本780份（应用一组）、816份（应用二组）、1089份（研究组）,应用模型法涂片后镜检抗酸杆菌。[结果]痰标本涂片抗酸杆菌阳性检出率,应用一组、应用二组、研究组分别为29．74％、28．92％、31．68％（P〉0．05）;涂片痰细胞合格率分别为94．10％、94．98％、94．21％,痰膜大小合格率分别为98．72％、99．14％、98．99％,厚薄合格率分别为95．64％、95．22％、96．14％、染色合格率分别为93．72％、95．10％、94．49％,痰膜脱落合格率分别为97．18％、98．28％、97．43％,差异均无统计学意义（P〉0．05）。从3组分别抽检50、55、80张痰涂片,原始结果与复检结果的阳性符合率、阴性符合率均为100．00％。[结论]肺结核病人痰模型法涂片后检测抗酸杆菌,制片质量较高,检查结果较为准确。     

荧光定量PCR和FISH技术诊断肺结核的价值比较

目的比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断的敏感性和特异性。方法共收集300例明确诊断为肺结核的患者作为阳性对照组,以及收集300例健康志愿者(明确排除肺结核患者)做为阴性对照组。收集800例新收临床疑似肺结核患者做为研究组。收集该800例患者的肺活检标本以及同期的痰液标本,其中痰液进行涂片、结核杆菌分离培养以及结核杆菌DNA荧光定量PCR检测和FISH检测。比较荧光定量PCR和FISH技术对肺结核诊断阳性符合率和阴性符合率。结果 1FISH技术检测结核杆菌阳性符合率为99.3%;荧光定量PCR检测结核杆菌阳性符合率为97.3%。两者阳性符合率存在统计学差别(p=0.015)。2FISH技术检测结核杆菌阴性符合率为98.2%,荧光定量PCR技术检测结核杆菌阴性符合率为96.9%。两者阴性符合率存在统计学差别(p=0.007)。结论与荧光定量PCR比较,FISH对肺结核诊断具有较高的阳性符合率和阴性符合率。     

2～14岁赴美移民申请人结核病筛查结果分析

〔目的〕对2~14岁赴美移民申请人结核病筛查的结果进行分析,为早期发现潜伏结核感染、肺结核患者及结核病防控提供参考依据。〔方法〕对2009年7月—2010年3月期间在广东国际旅行卫生保健中心体检的2747名2~14岁赴美移民申请人进行结核病筛查,所有申请人均进行结核菌素皮试(TST);若TST≥10mm或申请人有疑似结核的体征或症状,应进行X线胸片检查;若胸片所见疑似结核或有疑似结核的体征或症状的,进行结核分枝杆菌实验室检测。〔结果〕TST皮试结果显示阳性率为47.40%,阴性率52.60%,其中中度阳性者624名,占总人数的22.72%,强阳性者25名,占总人数的0.91%。阴性率随年龄增长逐渐下降,阳性与中度阳性率随年龄增长逐渐上升(P0.001)。649名TST≥10 mm者胸片检查结果发现,疑似结核病患者8人,其中非领养儿童1例,领养儿童7例。结核分枝杆菌实验室检测结果发现,8例疑似肺结核患者中,1例为耐多药结核患者。〔结论〕加强儿童,特别是生活条件和营养条件差的儿童结核病的筛查,提高卡介苗覆盖率及接种质量对于儿童肺结核的防控具有重要意义。     

2011-2012年东海县涂阳肺结核病人耐药监测结果分析

目的了解东海县结核分枝杆菌的耐药状况及其影响因素,为制订耐药结核的防治对策提供科学依据。方法收集2011--2012年全县痰涂片阳性患者的3份标本进行培养,用比例法进行6种抗结核药物（INH、RFP、EMB、S、Km和0fx）敏感性试验。结果2011—2012年涂阳患者350例,培养阳性283例（80．86％）,经菌型鉴定及药物敏感性试验,结果缺失7例,非结核分枝杆菌17例,非耐药患者197例,耐药患者62例,总耐药率为23．94％;单耐异烟肼26例,单耐利福平2例,多耐药10例,其他耐药24例,耐药率分别为10．04％、0．77％、3．86％、9．27％。结论东海县结核分枝杆菌耐药率处于较高水平,耐药成因较为复杂,耐药谱呈多样性和复杂性,对结核病控制构成威胁,应进一步加强耐药结核病的监测和防治。     

BacT／ALERT 3 D检测技术应用于结核分枝杆菌快速培养的效果评价

目的：评价BacT/ALERT 3D快速培养系统对结核分枝杆菌（MTB）的检测和肺结核早期诊断的应用价值。方法采用BacT/ALERT 3D液体培养技术和L-J固体培养法分别对病例标本培养,比较2种方法检出结果及检出时间。结果平均出现阳性天数BacT/ALERT 3D法为（13±2.05）d,L-J固体培养法为（34.7±4.76）d,差异有统计学意义（P＜0.05）;BacT/ALERT 3D法和L-J固体培养法对治疗2月后肺结核病例的涂阳标本MTB培养阳性检出率分别为71.18％（42/59）和67.80％（40/59）,而对涂阴标本BacT/ALERT 3D法 MTB培养阳性率39.62％（42/106）高于L-J固体培养法阳性率26.42％（28/106）,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论与传统L-J固体培养法比较,BacT/ALERT 3D液体培养技术明显缩短检出时间,并能提高低浓度（痰涂阴）标本的结核分枝杆菌阳性检出率。     

2005—2011年德州市德城区流动人口结核病发病状况

目的了解山东省德州市德城区2005—2011年流动人口结核病发病状况与分布特点,对德城区流动人口结核病防治工作进行初探。方法对2005—2011年德城区流动人口和常住人口的结核病疫情报告资料进行分析。结果德城区2005—2011年肺结核病病例中,流动人口所占比例由2005年的6.06%(12/198)上升到2011年的33.11%(101/305);流动人口病例登记率由2005年的25.00/10万(12/4.8万)上升到2011的99.02/10万(101/10.2万);流动人口病例增长率明显高于该地人口病例增长率,差异有统计学意义(χ2=98.95,P0.01);流动人口病例发现以因症就诊为主,菌阳病例比重大,男性多于女性,以青壮年为主,体力劳动者多。结论德城区流动人口特殊群体结核病发病明显上升,结核病发现率逐年提高,对流动人口结核病控制应不断加强。     

血清结核抗体检测对肺结核的诊断价值

目的：评价血清结核抗体对肺结核的临床诊断价值。方法：选取本院肺部疾病住院患者2238例,其中肺结核患者799例为观察组,除肺结核外其他肺部疾病患者1439例为对照组。分别用抗酸染色法查找抗酸杆菌,金标法对结核抗体进行检测并观察其结果。结果：观察组抗体阳性率43.05%,对照组为14.38%,两组比较差异有统计学意义（P〈0.01）。痰涂片阳性患者结核抗体阳性率53.64%,高于痰涂片阴性患者结核抗体阳性率33.88%,比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：血清结核抗体检测对肺结核诊断具有一定的临床价值。