1990～1997年云南IDUsHIV—1B亚型分离株膜蛋白V3环 …

目的 观察云南静脉药瘾（ＩＤＵｓ）ＨＩＶ－１分离株ｅｎｖ基因Ｖ３环顶端四肽氨基酸和相应核苷酸序列随时间推移的变化。方法 根据１９９０～１９７年间６２株ＨＩＶ－１分离株ｅｎｖ基因Ｃ２－Ｖ３区ＤＮＡ序列，对ＨＩＶ－１膜蛋白Ｖ３环顶端四肽基因序列（基序）及其编码核苷酸进行分析，并探讨其随时间推移的变化趋势。结果 １９９０～１９９７年间６２株ＨＩＶ－１毒株膜蛋白Ｖ３环顶端四肽基序有程度不同的氨基酸变异，主     

中国登革2型病毒分离株乳鼠致病性差异与基因变化关系的研究

本文报道１９８７年从广西病人血清中分离的登革２型（Ｄ２）病毒Ｄ２－４３株和１９８５年从海南病人血清中分离的Ｄ２－０４株乳鼠致病性的差异与基因变化的关系。结果表明Ｄ２－４３株对乳鼠致病，Ｄ２－０４株不致病。Ｄ２－４３株和Ｄ２－０４株Ｃ到ＮＳ１基因的读码框架基本相同，均由３３８１核苷酸组成，编码氨基酸总数１１２７。包含三个结构蛋白Ｃ．ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和一个非结构蛋白ＮＳ１。该两株病毒核苷酸序列同源性为９３．８％，氨基酸序列的类似性为９１．３％。Ｃ和Ｅ基因同源性为９５．０％～９５．８％，ＮＳ１基因为９２．２％，Ｍ基因为８６．７％，两株之间核苷酸序列的主要差异是在Ｍ基因。两株病毒的Ｃ－ＮＳ１基因与国际参考毒株比较，４３株与ＪＡＭ株类侧性最高，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。而０４株只有Ｃ、Ｅ和ＮＳ１与ＪＡＭ株最高，ＰｒＭ（Ｍ）都与ＮＧＣ株最高。４３株与０４株的Ｍ基因相比较，０４株的ＰｒＭ（Ｍ）基因的同源性低于４３株，说明两株与国际参考毒株比较，主要差异也在Ｍ基因，乳鼠致病性差异可能与Ｍ基因变化有关。     

从人群中分离到1株A／PR／8／34（H1N1）类病毒

１９９１年５月从１名上呼吸道感染的儿童患者中分离出１株流感病毒。经血清学鉴定和分析，分离物为Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）类似毒株。病毒ＨＡ１区基因经核苷酸序列分析，分离物与Ａ／ＰＲ／８／３４毒株间有１２个位点不同，导致了ＨＡ１区蛋白分子上４个氨基酸的替换。在病毒基因组寡核苷酸指纹图分析中发现，分离物与Ａ／ＰＲ／８／３４毒株相比较丢失了２个点，而插入了９个点。因此，Ａ／广东／６／９１（Ｈ１Ｎ１）毒株不是由Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）通过实验室污染而来。     

抗肾综合征出血热病毒人单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

以亲和层析技术纯化的肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）结构蛋白（５５０００，６７０００）为特异性抗原，体外免疫正常人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ），然后将体外免疫的淋巴细胞与人－鼠种间杂交瘤细胞（Ｋ６Ｈ６／Ｂ５）融合，经ＥＬＩＳＡ间接法筛选出２株（２Ｄ５，１Ｂ７）分泌抗－ＨＦＲＳＶ人单克隆抗体（Ｈ－ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株，４次克隆化后，１００％阳性。对２Ｄ５株初步鉴定表明，其抗体类型为ＩｇＧ１；培养上清中抗体浓度为２０～３０μｇ／ｍｌ；特异性免疫荧光反应证明２Ｄ５株Ｈ－ＭｃＡｂ是ＨＦＲＳＶ特异性；中和效价为１∶１６０；体外连续传代６个月仍稳定分泌抗体。     

深圳市HIV-1 E亚型感染毒株的分子流行病学分析

目的 了解人类免疫缺陷病毒１型Ｅ亚型毒株在深圳市不同人群中流行传播情况、流行时间和传播规律。方法 应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对１９９６年深圳市检出的３份人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ－１）感染者外周血单个核细胞样本进行扩增,获得ＨＩＶ－１膜蛋白（ｅｎｖ）基因片段,并对Ｃ２－Ｖ３及其邻区３５０～４５０个核苷酸序列进行测定和分析。结果 这３份血样为ＨＩＶ－１Ｅ亚型毒株感染（ｓｚ－Ｅ）,彼此间的基因离散率为２．６％;与Ａ－Ｅ国际参考亚型及国内部分地区流行的ＢＥ型代表株比较,ｓｚ－Ｅ与Ａ－Ｄ参考亚型共享序列及国内Ｂ亚型代表株间的基因离散率均大于２４％,而与主要代表泰国Ｅ亚型（Ｅｃｏｎ）间的基因离散率仅为６．２％。系统树分析显示,ｓｚ－Ｅ与Ｅｃｏｎ聚集在一起,远离其他国际亚型毒株序列。结论 ＨＩＶ－１Ｅ亚型在深圳的流行     

－50℃冻存致人肝癌SMMC－7721细胞恶性表型改变

以１５％ＤＭＳＯ＋８５％ＲＰＭＩ１６４０为抗冻剂，研究了一５０℃低温冻存对人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞的作用。实验结果表明，经一５０℃冻存复温后恢复培养的１３ｈ中，ＳＭＭＣ－７７２１细胞的有丝分裂率较对照下降１．０９％。经一５０℃多次冻存后，人肝癌ＳＭＭＣ－７７２１细胞染色体主流范围有向正常人二倍体细胞染色体转变的趋势，主流范围由建株时的５４～５８条转变为４６～５３条，且４６条染色体的分裂相由建株时的０％转变为１６％。乳酸脱氢酶同工酶（ＬＤＨ）分析证明，经一５０℃多次冻存处理的ＳＭＭＣ－７７２１细胞ＬＤＨ各组分的百分含量较建株时有明显改变，由原来典型的肝癌细胞趋于Ｈ型（Ｈ型≥Ｍ型）ＬＤＨ３（２９．３％）＞ＬＤＨ４（２６．８％）＞ＬＤＨ２（２５．３％）＞ＬＤＨ５（１４．９％）＞ＬＤＨ１（３．６％），转变为以Ｍ型为主的分布ＬＤＨ４（４８．３％）＞ＬＤＨ５（２８．３％）＞ＬＤＨ３（１８．９％）＞ＬＤＨ２（４．４％）＞ＬＤＨ１（０％）。提示一５０℃冻存使ＳＭＭＣ－７７２１细胞的恶性表型发生改变，对ＳＭＭＣ－７７２１细胞可能起诱导分化作用。     

我国人群中一种新重配的H1N2亚型流感病毒株的发现

１９９６年１月太原铁路卫生防疫站从上感患者中分离到３株流感病毒。经血清学鉴定，它们不同于１９８９和１９９２年所发现的Ｈ１Ｎ２亚型毒株，其ＨＡ的抗原性类似于Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）病毒，而明显不同于当前人群中流行的Ｈ１Ｎ１亚型毒株。病毒粒不同基因节段迁移率比较表明，它们的１～４基因节段迁移率接近于Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１）毒株，５～６基因节段迁移率类似于Ａ／武汉／３５９／９５（Ｈ３Ｎ２）病毒，而７～８两节段既不同于Ａ／ＰＲ／８／３４（Ｈ１Ｎ１），又不同于Ａ／武汉／３５９／９５（Ｈ３Ｎ２）病毒。故可认为它们是一种新重配的Ｈ１Ｎ２亚型毒株。     

中国4株丁型肝炎病毒抗原编码区基因的cDNA克隆与序列分析

从我国四川、广西、河南的丁型肝炎病毒抗原（ＨＤＡｇ）或抗体（ａｎｔｉ－ＨＤ）阳性的ＨＢｓＡｇ携带者中，筛选出４株ＨＤＶＲＮＡ阳性标本，经逆转录和聚合酶反应（ＲＴ－ＰＣＲ）后，获得包含ＨＤＶ抗原编码区的ＣＤＮＡ片段，并对其进行克隆与序列测定。经计算机分析比较表明：四川、广西株与美国－１株同源性最高，分别为９９．３％、９９．０％；而河南－１、河南－２株与台湾株的同源性较高。分别为９４．３％、９２．１％，上述４株与日本－１、秘鲁－１的同源性在６６．１％－７７．８％之间。推导的ＨＤＡｇ的氨基酸序列的同源性为：四川、广西株与美国株分别为９９．５％、９６．４％；河南－１、河南－２株与台湾株分别为８９．７％、８９．３％，故我国至少存在基因型Ｉ型的两种亚型，其中四川、广西株为ＩＡ型；河南２株皆为ＩＢ型。同时，实验结果还证实了ＨＤＶ毒株的异质性呈地区分布特征。     

T_H2细胞经TCR和IL-1R协同刺激后可产生独特的自分泌型IL-1α介导的增殖反应

以往研究认为，Ⅱ型辅助性Ｔ细胞（ＴＨ２）经Ｔ细胞抗原（ＴＣＲ）单独刺激后即可产生自身生长因子—ＩＬ４，细胞进一步的增殖反应虽然严格需要ＩＬ１的存在，却具有ＩＬ４依赖性。但是，最近的实验表明，大多数ＴＨ２细胞克隆株经ＴＣＲ及ＩＬ１受体（ＩＬ１Ｒ）协同激活后的增殖反应并不需要内源性ＩＬ４依赖性增殖反应的作用机制。方法：取感染硕大利什曼原虫的６周龄ＢＡＬＢ／ｃ小鼠月国部受损淋巴结，采用免疫陶洗和免疫磁珠分离技术提纯ＣＤ４＋ＴＨ２细胞，将此种体内诱导产生的ＴＨ２细胞与Ｄ１０·Ｇ４·１ＴＨ２细…     

粘附分子CD54（ICAM－1）对淋巴细胞聚集和增殖的调节作用

粘附分子ＣＤ５４（ＩＣＡＭ－１）对淋巴细胞聚集和增殖的调节作用［英］／ＡｌｖａｒＧ…／／Ｃｅｌｌ．－１９９３，１４７．－１２～２４文章研究了ＣＤ５４的两个单抗（ＬＢ－２和Ｇ１Ｂ２）在淋巴细胞聚集和增殖中的作用。从正常人外周血中分离ＰＢＭＣ，经间接免疫...     

微量抗原脾内包理免疫法制多CC－1的第二代单克隆抗体

采用革克隆抗体ＣＣ－１（ＩｇＭ）免疫组化阳性的新鲜大肠癌组织制备粗抗原，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分离，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ后进行免疫染色，检测刮ＣＡ－ＣＣ－１带。用附载ＣＡ－ＣＣ－１的硝酸纤维膜（ＮＣ）进行二次小鼠脾内包埋免疫和一次腹腔粗抗原加强免疫，成功地制备了两株ＣＣ－１的第二代单抗Ｗ１３５（ＩｇＭ）与Ａ１２－２（ＩｇＧｌ）。亲和力均比原代高；抗原决定族为糖链结构；Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ免疫染色的比较发现：Ｗ１３５与Ａ１２－２除能识别ＣＡ－ＣＣ－１带外，尚能分别识别分子量为９４ＫＤ左右和３３ＫＤ的抗原带。免疫组化比较表明：对于大肠癌阳性反应率，Ａ１２－２基本与ＣＣ－１相同，而Ｗ１３５明显优于ＣＣ－１。以上研究表明：脾内包埋免疫法为一行之有效的免疫方式；第二代单抗可能较原代ＣＣ－１具有更大的临床应用价值。     

7型腺病毒疫苗株76.5～87mu核苷酸序列分析

目的获得７型腺病毒疫苗株（Ａｄ７ｖ）７６５－８７ｍｕ核苷酸序列，分析该区段的基因结构和功能。方法从Ａｄ７疫苗株克隆出６８－８７ｍｕ核苷酸片段，应用Ｓａｎｇｅｒ双脱氧法进行核苷酸序列分析。结果Ａｄ７ｖ７６５～８７ｍｕ核苷酸序列长度为３５５７ｂｐ，推测此片段编码Ｅ３区１２１ｋＤ、１９２ｋＤ、２０１ｋＤ、２０５ｋＤ、１０３ｋＤ和１５２ｋＤ蛋白的一部分。所编码的６个蛋白与Ａｄ７原型株（Ａｄ７ｐ）和Ａｄ７ｈ（１９８６年以来南美流行的毒株）核苷酸高度同源（大于９７２％）。１６１ｋＤ蛋白由于缺失一个核苷酸，造成移码突变，编码提前终止。编码７７ｋＤ蛋白的ＯＲＦ由于缺失一段核苷酸而提前终止编码。结论这一结果为阐明Ａｄ７的基因结构与功能并为构建Ａｄ７载体时对Ｅ３区缺失提供依据     

抗细菌脂多糖核心糖脂域单克隆抗体在实验性菌血症中的保护作用

以小鼠菌血症模型对抗核心糖脂域ＭｃＡｂ（ＥＬ１、ＥＬ３和３Ｈ４）的免疫保护的效果进行了研究。结果表明，（１）３株ＭｃＡｂ能显著提高受Ｅ．ｃｏｌｉ攻击小鼠的存活率（Ｐ＜０．０５）；（２）ＥＬ３和３Ｈ４还分别有降低３ＬＤ５０绿脓杆菌和５ＬＤ５０鼠伤寒沙门氏菌感染小鼠病死率的作用（Ｐ＜０．０５）；（３）ＥＬ３与３Ｈ４对受５ＬＤ５０Ｅ．ｃｏｌｉ和１０ＬＤ５０绿脓杆菌攻击小鼠有一定的协同保护作用；（４）在ＥＬ１预防性保护试验中发现，提前４周注入ＥＬ１，并于攻菌前１周加强一次，ＥＬ１可明显提高５ＬＤ５０Ｅ．ｃｏｌｉＪ５株攻击小鼠的存活率（Ｐ＜０．０５）。提示ＥＬ３和３Ｈ４对细菌感染小鼠具有一定的交叉保护作用。     

表达2型单纯疱疹病毒糖蛋白D的重组痘苗病毒对动物的免疫效果

用表达２型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－２）糖蛋白Ｄ的重组痘苗病毒（Ｒ－ｇＤ－Ｖ）免疫ＣＢＡ小鼠，通过间接免疫荧光（ＩＦ）（观察小鼠抗体滴度变化）和四甲基偶氮唑蓝法（ＭＴＴ）动态观察细胞毒性Ｔ细胞活性（ＣＴＬ），均见增高并检测了其产生的抗体对动物的保护作用。同时对Ｒ－ｇＤ－Ｖ和２型单纯疱疹病毒（ＨＳＶ－２）产生的二次ＣＴＬ活性进行了比较，结果表明，Ｒ－ｇＤ－Ｖ产生抗体３周达高峰（１：６４０），７周下降为１：３２０，抗体对病毒攻击动物有保护作用，其中和指数（Ｎ）为６３。Ｒ－ｇＤ－Ｖ在鼠体内产生初次ＣＴＬ８ｄ达高峰，１２ｄ后消失；二次ＣＴＬ持续８周之久，且ＣＴＬ活性明显高于初次。Ｒ－ｇＤ－Ｖ和ＨＳＶ－２相比较产生ＣＴＬ在统计学上有差异（Ｐ＜０．０５）。说明Ｒ－ｇＤ－Ｖ能引起体液免疫和细胞免疫，对动物有保护作用。     

散发性戊型肝炎病毒部分核苷酸序列分析

目的为阐明戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）毒株的地理分布、流行特征以及研制血清学诊断试剂和基因工程疫苗提供资料。方法选择１例浙江仙居山区散发性ＨＥ患者，从其血清中分离ＨＥＶＲＮＡ，通过逆转录－套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰＣＲ），扩增该散发性ＨＥＶ（Ｚ－３３株）ＯＲＦ２区部分ｃＤＮＡ片段（４９７ｂｐ），然后进行直接序列分析，并与ＨＥＶ各主要代表株序列作比较。结果Ｚ－３３株与新疆流行株ＣＨ１．１的核苷酸及氨基酸序列同源性分别为９６．７％及９８．２％；与缅甸流行株的同源性分别为９４．２％及９９．１％；与缅甸散发株的同源性分别为９５．２％及９９．１％，与墨西哥株的同源性分别为８１．８％及９４．５％。结论浙江仙居散发性ＨＥＶＺ－３３株和新疆流行株ＣＨ１．１一样，与ＨＥＶ缅甸株可能为同一亚型。     

全反式维甲酸可增强大鼠系膜细胞基质金属蛋白酶-2表达

一、材料与方法１．大鼠系膜细胞（ＭｓＣ）的培养与鉴定：１５０～２００ｇＳＤ大鼠购自本校动物部，取肾皮质，分离肾小球，培养与鉴定ＭｓＣ按本实验室常规方法进行［１］。实验用细胞为１０～１５代。２．Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ法检测基质金属蛋白酶２（ＭＭＰ２）ｍＲＮＡ：当ＭｓＣ长至亚融合状态后，分别在完全培养液中加入全反式维甲酸（ＡＴＲＡ，Ｓｉｇｍａ公司）１０－６、１０－７、１０－８、１０－９、０ｍｏｌ／Ｌ处理２４小时；另在亚融合状态ＭｓＣ加１０－６ｍｏｌ／Ｌ全反式维甲酸分别处理０、６、１２、２４、４…     

中国人肢带型肌营养不良症粘附蛋白基因突变鉴定

目的肢带型肌营养不良症（ＬＧＭＤ）是常见的常染色体遗传肌肉病，特点为髋肩带肌无力、萎缩，进行性发展至远端肌肉，男女均可受累，有明显的遗传异质性，国外研究发现重型ＬＧＭＤ分别涉及１３ｑ１２、１７ｑ２１、４ｑ１２、５ｑ３３区域编码γ－、α－、β－、δ－糖蛋白的４个基因座位。中国人群中ＬＧＭＤ的致病基因研究尚无报道，拟通过粘附蛋白（ａｄｈａｌｉｎ）基因突变的检测，鉴定其致病基因。方法用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ及ＤＮＡ测序法对ａｄｈａｌｉｎ基因第２、３外显子进行了突变检测及鉴定。结果发现１例散发的９岁女患者ａｄｈａｌｉｎ第２、３外显子存在纯合Ａｒｇ７７Ｃｙｓ突变，此突变在本实验的４０条野生染色体中未发现。结论发现中国人群中重型ＬＧＭＤ（ＤＬＭＤ）存在ａｄｈａｌｉｎ基因突变。提示１７ｑ２１区的ａｄｈａｌｉｎ基因是中国人ＬＧＭＤ的一个致病基因。     

抗桥粒斑蛋白II单克隆抗体的研制及鉴定

本文用改良枸椽酸－枸椽酸钠法，从新鲜牛鼻表皮制备的ＤｅｓｍｏｐｌａｋｉｎⅡ（ＤＰⅡ）免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾淋巴细胞在ＰＥＧ介导下与Ｓｐ２／０细胞融合，经筛选、克隆化获得４株能稳定分泌ＤＰⅡＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系（分别命名为ＤＰｙ－１，２，３，４）。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧｌ，染色体数目为９３￣１０５。免疫组化分析表明，４株ＤＰⅡＭｃＡｂ具有很高的上皮组织特异性和敏感性，并提示ＤＰⅡ可能不存在于     

PEA单抗相对亲和力及抗原结合位点的测定

用绿脓杆菌外毒素Ａ（ＥＰＡ）免疫后的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞，经融合后制备出４株抗ＰＥＡ的单克隆抗体。从５０％最大结合的单克隆抗体浓度分析可知，４株单克隆抗体的相对亲和力为４Ｄ１－４Ｄ３〉１Ｄ１－５Ｆ１１〉１Ｄ７－４Ｃ１０〉４Ｈ５－３Ｅ９。通过ＥＬＩＳＡ相加实验证实：４株单克隆抗体均识别相同的ＰＥＡ抗原位点。     

抗人gp130分子单克隆抗体的制备和鉴定

ｇｐ１３０可与许多细胞因子受体（ＩＬ－６Ｒ,ＩＬ－１１Ｒ,ＯＳＭＲ,ＬＩＦＲ,ＣＮＴＦＲ和ＣＴ－１Ｒ）组成受体复合物,并在这类细胞因子的信号转导中的起着重要的作用。方法以痘苗病毒为载体构建获得的可溶性ＣＤ１３０（ｓＣＤ１３０）为免疫原,通过融合的方法。得到４株稳定分泌抗ＣＤ１３０单克隆抗体（ｍＡｂ）Ｌ２,Ｌ４ａ,Ｌ４ｂ和Ｌ５）的杂交瘤细胞株。结果本组ｍＡｂ对靶细胞具有识别特异性,不但可识别相对分子