少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响

目的 研究少突胶质前体细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的影响.方法 采用Allen's打击法制作大鼠脊髓损伤(T10)模型.96只SD大鼠随机分为移植组、对照组、单纯损伤组及假手术组,每组24只.脊髓损伤后第7天时移植组进行少突胶质前体细胞移植治疗,对照组给予等量生理盐水,单纯损伤组未予任何治疗.通过运动功能评分及运动诱发电位、体感诱发电位检测评价少突胶质前体细胞移植对神经功能恢复的影响.结果 脊髓损伤后大鼠脊神经功能明显障碍,运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果明显低于假手术组.随伤后时间延长,脊髓损伤大鼠神经功能均有不同程度的恢复,但运动功能评分、运动诱发电位及体感诱发电位检测结果显示,少突胶质前体细胞移植治疗组大鼠的神经功能恢复情况明显优于对照组.结论 少突胶质前体细胞移植治疗能够促进大鼠脊髓损伤神经功能的恢复.     

胚胎脊髓移植联合应用bFGF对脊髓损伤后神经再生的影响

目的 探讨胚胎脊髓（Fetal spinal cord,FSC）移植联合外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的应用对脊髓损伤后脊髓神经再生的影响。方法 采用大鼠胸段（T8～T11）脊髓左侧半横切损伤模型。移植供体为同种异体妊娠14天的孕鼠,将实验动物分为3组：A组为损伤——FSC移植组;B组为损伤＋FSC移植＋bFGF组;C组为单纯损伤组。术后1～8周每周行综合行为评分（combined behavioral score,CBS）,评定大鼠功能,并取术后8周损伤区脊髓组织0.5cm作嗜银梁色及NF200免疫组织化学检查,分别标记轴突和胶质细胞,进行定量分析,观察神经纤维再生情况。结果 胚胎脊髓移植和外源性bFGF可以防止成鼠脊髓损伤后神经元的萎缩,图像分析发现其作用A、B组组优于C组,可以较好地恢复神经元形态。CBS评分提示大鼠神经功能的恢复也有同样趋势,治疗组统计学分析与对照组间有显著性差异。免疫组织化学检查,术后8周A、B组神经中丝（neurofilament,NF）着色点较C组密集,且没有明显的胶质增生。结论 脊髓损伤后联合应用胚胎脊髓移植和bFGF可以防止神经元的萎缩,并且对神经纤维再生及功能的恢复有促进作用。     

多种神经组织修复成鼠脊髓损伤的实验研究

目的 探讨 不同神经组织移植修复成鼠急性脊髓损伤（SCI）的能力。方法 成鼠脊髓损伤后，分别移植游离正中神经（EPN组）、带血管蒂正中神经（VPN组）、孕、14天胚胎脊髓（FSC组）、游离正中神经加胚胎脊髓（P＋F组）、带血管蒂正中神经加胚胎脊髓（V＋F组）。术后8周行神经解剖及电生理检查。结果 V＋F组再生轴突和存活雪旺氏细胞数目、胚胎脊髓体积增长速度和神经元密度显著高于对照组（P＜0．01），细胞分化较好，突触较成熟。体感诱发电位（SEP）的P1、N1波潜伏期显著缩短（P＜0．01）。结论 带血管蒂周围神经与胚胎脊髓联合移植，在解剖和电生理上均优于其他组织，对FSC的生长发育和损伤神经元的再生能力均有一定的促进作用。     

神经干细胞、丙戊酸联合应用对成鼠脊髓损伤的修复作用

目的观察神经干细胞（NSCs）和丙戊酸（VPA）联合应用对成年大鼠脊髓损伤后的修复作用。方法SD大鼠随机分为单纯损伤组、NSCs移植组和NSCs＋VPA治疗组。采用半切脊髓损伤模型,损伤后进行病理染色和神经诱发电位检测。结果NSCs＋VPA治疗组损伤处空洞闭合情况优于其余两组,移植物和宿主脊髓建立的纤维联系较其余两组多,排列有序。NSCs＋VPA治疗组诱发电位各项指标匀优于其余两组,8周时最显著,其中以运动诱发电位（MEP）的优化最明显。结论NSCs和VPA联合应用对成鼠脊髓损伤具有良好的修复作用。     

同种胚胎脊髓移植促进大鼠脊髓伤后解剖与运动功能恢复的研究

目的：研究同种胚胎脊髓移植物能够促进脊髓伤后的可塑性代偿，并修复其组织结构及运动功能的可行性．方法：在急性半切洞损伤的成年大鼠脊髓内，植入大鼠胚胎脊髓，术后进行行为观察、ＨＥ染色、尼氏染色、Ｈｏｌｍｅｓ还原银染色，以及脊髓运动诱发电位检查．结果：８０％的移植物能够存活，并能生长、分化，不同程度地修复宿主脊髓的组织损伤；能明显减少宿主脊髓损伤部位结缔组织、胶质瘢痕形成；诱导宿主未损伤神经元轴突侧支发芽；改善宿主损伤脊髓的神经传导，促进伤后运动功能的恢复．结论：移植同种胚胎脊髓能促进大鼠脊髓伤后解剖与运动功能的恢复     

转TrkC基因神经干细胞移植对脊髓损伤的治疗作用

目的 研究转酪氨酸激酶C（tyrosine kinase C，TrkC）基因神经干细胞（neural stem cells，NSCs）移植治疗脊髓损伤的作用。方法 60只SD大鼠随机分成正常对照组（A组）、脊髓半切组（B组）、NSCs移植组（C组）、NSCs移植＋神经营养素（NT）-3局部使用（D）组、转TrkC基WNSCs移植组（E组）和转TrkC基因NSCs移植＋NT-3局部使用组（F组），每组10只。脊髓损伤后第9天进行细胞移植。各组大鼠在细胞移植后2个月，行体感诱发电位（SEP）和运动诱发电位（MEP）检查以及脊髓运动功能（BBB）评分。结果 细胞移植后2个月SEP和MEP发生潜伏期和峰峰波幅以及右后肢BBB评分的恢复均以下组最佳，与其他各组比较，差异有统计学意义（P＜ 0．05，0．01）。结论在局部给予的NT-3作用下，转TrkC基因NSCs能较好地促进损伤脊髓功能的恢复。     

FTY720对急性脊髓损伤大鼠神经功能及血脊髓屏障的影响

目的观察新型免疫抑制剂FTY720对急性脊髓损伤后大鼠神经功能和血脊髓屏障的影响。方法成年SD大鼠144只,随机分为4组(n=36)。正常对照组(NG):不做任何处理;假手术组(SO):单纯咬除椎板暴露脊髓,不予损伤处理;损伤对照组(HS):脊髓右半侧横切损伤后腹腔注射生理盐水;FTY720治疗组(FTY720):脊髓右半侧横切损伤后30min给予腹腔注射FTY720[1mg/(kg·d)],连续7d。术后不同时间点行行为学检测,包括BBB运动功能评分和水平网格检测;行神经电生理运动诱发电位(MEP)N1波和感觉诱发电位(SEP)P1波潜伏期检测;对脊髓组织行苏木精-伊红(HE)染色及Evans Blue(EB)血脊髓屏障渗透性检测。分析FTY720治疗效果。结果半横切损伤后,HS组和FTY720组大鼠损伤侧脊髓神经功能下降,至28d时仍未恢复至NG组和SO组水平。行为学检测和神经电生理检测结果显示,FTY720组大鼠运动功能恢复速度比HS组更快;损伤7、14、28d时,两组大鼠BBB评分和SEP P1波潜伏期检测差异有统计学意义(P<0.05);损伤14、28d时,两组大鼠水平网格检测和MEP N1波潜伏期检测差异有统计学意义(P<0.05)。组织学检测结果显示,各时间点NG组和SO组大鼠脊髓结构均完整;损伤14d时,FTY720组脊髓损伤处慢性炎症细胞浸润,胶质化反应程度小于HS组;损伤28d时,FTY720组损伤处空洞残存面积小于HS组,再生纤维排列较HS组有序。血脊髓屏障渗透性检测结果发现,损伤后7d内,HS组和FTY720组大鼠血脊髓屏障EB渗出量较NG组和SO组明显增加;各时间点FTY720组EB渗出面积均小于HS组(P<0.05),其中损伤3d时差异最为明显。结论 FTY720能显著降低脊髓损伤急性期血脊髓屏障渗透性,有效促进急性期后神经功能的恢复,为损伤组织提供一定的神经保护作用。     

胚胎脊髓移植对大鼠损伤脊髓胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 研究大鼠脊髓损伤后胚胎脊髓（ＦＳＣ）移植是否能够影响胶质纤维酸性蛋白（ＧＦＡＰ）的表达和伤后大鼠后肢功能的恢复情况。方法 将６０只大鼠分为脊髓半脊髓半切洞损伤＿胚胎脊髓移植组（Ａ组）和单纯脊髓半切洞损伤组（Ｂ组）。伤后１,３,,７,１４,２８天,应用行为学和电生理检查观察大鼠功能恢复情况,应用原位杂我和免疫细胞化学方法观察ＧＦＡＰ的表达,并采用计算机图像分析技术,进行定量分析。结果 大鼠脊髓     

真皮多能干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的：观察真皮多能干细胞（dMSCs）移植对脊髓损伤大鼠运动功能的修复作用。方法：32只SD大鼠在L4水平制成脊髓全横断损伤模型，并随机分为真皮多能干细胞移植组（A组）及损伤对照组（B组），每组10只大鼠。伤后1w，移植组于伤处移植大鼠真皮多能干细胞（dMSCs），而对照组仅注射等量PBS。分别于移植后1d、1w、8w、12w对两组大鼠进行动物行为学（BBB）评分和脊髓诱发电位（SEP和MEP）检测，并于移植后12w进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。结果：BBB评分4w以后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05），移植组明显高于对照组（P〈0．05）；SEP和MEP潜伏期和波幅值在8、12w后组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）；移植后12w，移植组损伤脊髓结构的修复明显优于对照组。结论：移植治疗脊髓损伤，能明显改善其运动功能和神经形态，dMSC对脊髓损伤大鼠有治疗作用。     

大鼠脊髓打击伤模型的建立及病理观察

目的 观察改良大鼠脊髓打击伤模型的病理变化,评价该模型的稳定性、重复性和一致性. 方法 应用改良重物坠落打击装置建立大鼠脊髓中、重度损伤模型,通过BBB评分、神经电生理监测、免疫组化及光电镜技术观察脊髓损伤(SCI)后两组大鼠功能及病理变化特点,以评价本实验模型的重复性及与损伤程度相关的一致性. 结果 脊髓损伤后两组大鼠的后肢运动功能均有不同程度恢复,运动和感觉诱发电位提示神经信号传导功能亦逐渐恢复,但中度损伤大鼠恢复明显较重度损伤大鼠好,组织病理及免疫组化观察显示脊髓损伤后有胶质瘢痕及囊腔形成,但重度损伤组的组织损伤程度较中度组重,且残留正常组织较少,电镜下观察显示脊髓损伤后损伤部位可见明显出血、水肿,中性粒细胞浸润,胶质细胞染色质边集.脊髓损伤后2周可见线粒体空泡化,轴突变性,周围水肿.脊髓损伤后8周可见髓鞘变性,胶原原纤维沉积. 结论 本实验模型能将不同打击力度造成的损伤区分开,且和行为学、神经电生理、病理学等结果吻合,说明此模型具有良好的稳定性、重复性和一致性.胶质瘢痕及囊腔的形成是脊髓损伤的标志性病理变化,GFAP或Vimentin染色可作为判断其界限的标志性分子.     

胚胎鼠脊髓移植重建损伤成鼠脊髓神经通路的作用──光镜镀银染色观察

目的：观察胚胎鼠脊髓对成鼠损伤脊髓神经通路的修复作用．方法：将妊娠１４天（Ｅ１４）胚胎鼠脊髓植入损伤成鼠脊髓，取材制石蜡切片，镀银染色，光镜下观察神经纤维的再生和生长情况．结果：术后７天局部宿主神经纤维就可短距离再生进入移植物．术后３０天，移植物和宿主脊髓的界面区可见明显的纤维交错．随着动物存活时间的延长，交错纤维的数量进一步增加．结论：胚胎脊髓可以“粗略”地修复损伤脊髓的神经通路．     

酪氨酸受体激酶B在胚胎脊髓修复成鼠损伤脊髓过程中的变化

目的确定酪氨酸受体激酶Ｂ（ｔｒｋＢ）在胚胎脊髓修复成鼠脊髓损伤过程中的变化。方法将妊娠１４天胚胎脊髓植入急性损伤的成体脊髓后１，３，５，７，１０，１５和３０天，用原位杂交、斑点杂交和免疫组化技术对ｔｒｋＢｍＲＮＡ与蛋白作定性和定量观察。结果定性观察表明，在正常大鼠脊髓内，ｔｒｋＢｍＲＮＡ杂交产物主要分布在神经元和胶质细胞，神经纤维杂交反应不明显；脊髓损伤后阳性神经元和胶质细胞都有所增加，但阳性神经纤维增加的数目略为突出；胚胎脊髓植入损伤脊髓后，上述各阳性反应成分进一步增加，尤其是阳性神经纤维的增加更为显著。定量观察显示的ｔｒｋＢｍＲＮＡ的分子杂交反应与定性观察结果大体一致。免疫组化显色的ｔｒｋＢ蛋白，无论分布还是反应强度都与其ｍＲＮＡ的变化大致相符。结论损伤脊髓在移植修复过程中能够以调整受体合成的方式来适应营养环境的变化，但胶质细胞受体合成增加可能起了与神经成分争夺神经营养因子的副作用     

脊髓损伤组织血小板活化因子变化与脊髓水肿的关系

采用改良的Ａｌｌｅｎ法打击猫脊髓致伤模型，测定伤后２小时－１周伤区及邻近脊髓组织血小板活化因子（ＰＡＦ）含量及水含量。结果表明，伤后２－７５小时伤区及邻近脊髓组织ＰＡＦ含量及水含量较对照组明显增高，而伤后１周时与对照组无显著性差异。提示ＰＡＦ在脊髓损伤后脊髓水肿的发生、发展过程中起重要作用。     

聚乙醇酸支架组织工程神经复合物修复大鼠脊髓损伤

目的 利用组织工程技术体外初步构建组织工程神经复合物，对成年大鼠损伤脊髓进行修复并观察其效果。方法 （1）分离培养大鼠神经干细胞（neural stem cells, NSCs），体外构建NSCs／聚乙醇酸（PGA）支架复合物，以胚胎脊髓提取液对NSCs进行诱导分化，通过组织化学检测和扫描电镜观察该复合物结构。（2）制作大鼠脊髓半横断损伤模型，植入组织工程神经复合物，术后6周通过功能学和组织学检查评估修复脊髓损伤的效果。结果 （1）体外构建的NSCs／PGA支架组织工程神经复合物含有神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞等成分，有独特的组织结构。（2）组织工程神经复合物移植后，其内的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞可以存活并继续成熟，成年大鼠损伤脊髓平面以下运动功能获得了较明显的恢复。结论 体外构建的组织工程神经复合物对成年大鼠损伤脊髓的结构重建和功能恢复都有一定的作用。     

神经干细胞移植联合神经节苷脂治疗大鼠脊髓损伤

目的 观察神经干细胞(neural stem cells,NSCs)联合单唾液酸四己糖神经节苷脂(monosialotetrahexosyl ganglioside,GM1)治疗大鼠急性脊髓损伤的作用。 方法 采用成年SD大鼠,制作T8节段脊髓压迫损伤模型。动物按随机数字表法分为三组：对照组、NSCs组、NSCs+GM1组。连续观察1,2,4,8周,应用运动功能评分、病理组织学、透射电镜、体感诱发电位(SEP)等检查,比较大鼠脊髓神经功能的恢复情况。 结果 伤后动物后肢运动功能均有不同程度恢复,4,8周时NSCs+ GM1组显著高于其他组(P＜0.01),降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)染色阳性细胞较其他各组增多。与对照组和NSCs组比较,8周时NSCs+ GM1组只在损伤中心处出现灶性坏死,小血管增生明显。电镜扫描结果显示,8周时对照组仍可见大的神经髓鞘轴膜下水肿,而NSCs+ GM1组可见大量完整的神经髓鞘和分化正常的神经细胞,轴突末端还可见多种突触小泡。SEP结果显示,移植后2周NSCs+ GM1组SEP的潜伏期即明显缩短(P＜0.05),4,8周SEP缩短以NSCs组为显著,但仍高于实验正常鼠潜伏期。 结论 脊髓损伤大鼠移植NSCs联合应用GM1能够保护受伤的神经组织。GM1可促进植入的NSCs分化,并与宿主形成突触连接,重建脊髓功能。