体外阻断CD137-CD137L途径抑制移植物抗宿主病的免疫效应

目的探讨体外阻断活化的供鼠T淋巴细胞CD137-CD137L共刺激途径抑制供鼠淋巴细胞的免疫反应。方法应用雄性供鼠BALB/c脾淋巴细胞为反应细胞,雌性受鼠C57BL/6脾淋巴细胞为刺激细胞,进行混合淋巴细胞培养(MLC)。设单抗实验组(加抗CD137L单抗)和对照组(不加抗CD137L单抗),初次和再次MLC第1、3、5、7天采用流式细胞术检测CD3+CD4+T细胞、CD3+CD8+T细胞;RT-PCR法检测培养的细胞IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的水平。结果实验组CD3+CD8+T细胞明显低于对照组(P<0.01);实验组IL-2、IFN-γ水平明显低于对照组(P<0.01);实验组IL-10表达明显高于对照组(P<0.01)。结论体外MLC中,应用抗CD137L单抗孵育供鼠脾T淋巴细胞主要抑制供鼠CD3+CD8+T细胞的增殖,抑制Ⅰ类细胞因子IFN-γ及IL-2的表达,促进Ⅱ类细胞因子IL-10的表达。     

抗细胞表面抗原抗体可作为良好的免疫佐剂

目前非常需要能增强重组蛋白、合成多肽以及DNA疫苗免疫原性的优良免疫佐剂。许多尚在研究的免疫佐剂都是通过APC表面的识别受体来发挥作用，这类免疫佐剂通常会诱发细胞因子释放，从而导致注射部位或全身的不良反应。CD40和CD28是共刺激受体，分别位于B淋巴细胞和T淋巴细胞表面，它们能发出某种信号，在抗原受体受到刺激时增强淋巴细胞活化。过去的研究表明大剂量抗CD40抗体能增强机体对胸腺非依赖抗原的免疫应答，此项研究旨在确认抗原与抗CD40或CD28单克隆抗体（mAb）结合后，其免疫原性能否得到显著提高。     

阻断共刺激信号在异种小动物心脏移植中诱导免疫耐受的研究

目的在非协调性异种小动物豚鼠-大鼠心脏移植模型当中,通过单克隆抗体阻断T细胞B7/CD28及CD40/CD40L激活通路途径来探讨T细胞在异种移植延迟性免疫排斥中的作用,探索诱导异种移植T细胞外周耐受的可能性。方法将供体三色豚鼠和受体SD大鼠随即分成四组：A组（对照组）,在移植前一天大鼠腹腔内注射CVF 0.4mg/kg;B组（B7mAb组）,在移植当天大鼠腹腔内注射B7单抗0.1mg,余处理同A组;C组（CD40LmAb组）,在移植当天大鼠腹腔内注射CD154单抗0.1mg,余处理同A组;D组（联合组）,在移植当天大鼠腹腔内注射B7单抗0.1mg、CD154单抗0.1mg,余处理同A组。观察各组供心存活的时间,并行移植心脏的常规病理和免疫组化检查。结果对照组移植心脏的存活时间为（19.5±2.7）h,与对照组比较,B7组、CD40L组和联合处理组的移植心脏存活时间均得到了显著的延长,但联合处理组延长最为明显。移植心脏组织病理学检查均呈急性血管排斥反应改变,且以CD8＋T细胞浸润为主。结论联合阻断CD28/B7与CD40/CD40L共刺激通路可延长异种移植心脏存活时间。     

川芎嗪联用环孢素A抗皮肤移植排斥反应的作用机制研究

目的：探讨川芎嗪（TMPZ）联用亚剂量环孢素A（CsA）对同种异体小鼠皮肤移植的抗排斥反应作用。方法：将BALB/c小鼠作为供体,C57BL/6小鼠作为受体,行背-背皮肤移植术。随机分为模型组、TMPZ组（50 mg·kg^-1）、CsA组（10 mg·kg^-1）、TMPZ+亚剂量CsA组（TMPZ 50 mg·kg^-1+CsA 5 mg·kg^-1）、假手术组,腹腔注射给药10 d。观察受体鼠移植皮片的存活情况,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血浆中白介素-2（IL-2）、IL-4、IL-10、γ-干扰素（IFN-γ）含量,流式细胞术分析脾脏CD4⁺、CD25⁺T淋巴细胞亚群的比例。结果：各给药组小鼠移植皮片的存活天数均有不同程度的延长,与模型组相比差异均有显著性（P<0.01）。TMPZ+CsA组的移植皮片存活天数比TMPZ组或CsA组均有显著延长（P<0.05或P<0.01）;与模型组相比,TMPZ+CsA组以及TMPZ单用组均可明显减少血浆Th1类细胞因子（IL-2、IFN-γ）的表达（P<0.01）,明显增高Th2类细胞因子（IL-4、IL-10）的表达（P<0.01）。与模型组相比,各给药组均可明显增高脾脏CD4⁺ CD25⁺T淋巴细胞的比例（P<0.05或P<0.01）。结论：TMPZ具有抑制同种异体小鼠皮肤移植排斥反应的效果,与CsA联合应用可能具有协同作用,其作用机制可能与影响Th1/Th2细胞因子、刺激CD4⁺、CD25⁺T淋巴细胞的表达等有关。     

急性冠脉综合征患者血清TNF受体-配体家族高表达的临床意义

目的 探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清可溶性肿瘤坏死因子(TNF)受体-配体家族CD40L、OX40L及CD137水平变化的临床意义.方法 ELISA法检测稳定型心绞痛组(SA组,50例)、不稳定心绞痛组(UA组,50例)、急性心肌梗死组(AMI组,80例)患者和正常对照组(C组,40例)的血清可溶性CD40L、OX40L及CD137水平.结果 UA组血清CD40L为(18.6±4.7)ng/ml,OX40L为(22.5±4.3)ng/ml,CD137为(27.8±7.1)ng/ml;AMI组血清CD40L为(20.7±5.2)ng/ml,OX40L为(24.2±4.6) ng/ml,CD137为(30.2±6.5) ng/ml.两组上述三项指标均明显高于SA组的(6.6±2.1) ng/ml、(9.5±2.5) ng/ml和(7.2±2.3)ng/ml和C组的(7.0±2.2)ng/ml、(9.1±2.4) ng/ml和(7.3±2.4)ng/ml(P＜0.05).ACS患者血清CD40L、OX40L及CD137水平与心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平及冠脉复杂狭窄显著相关.结论 血清CD40L、OX40L及CD137水平升高是冠脉斑块不稳定的活动性标志物.     

抗CD3单克隆抗体激活的杀伤细胞抗瘤活性的研究

本观察了经抗人CD3单克隆抗体刺激后的人外周血单个核细胞(PBMC)的增殖及抗瘤活性。结果显示,抗CD3单抗具有促PBMC增殖的作用．其最佳浓度是10～20ng／ml。经抗CD3单抗刺激后.PBMC在含有rTL-250U／ml的培养液中培养12-13天．细胞数量增加38～46倍。抗CD3单抗激活的杀伤细胞(CD3AK)溶解肿瘤细胞的能力明显高于LAK细胞(P<0.01)。     

sCD40L在大动脉粥样硬化性卒中患者中的表达及其意义

目的 探讨可溶性CD40配体(sCD40L)在大动脉粥样硬化性卒中(LAA)患者的表达及意义.方法 用ELISA法连续测定29例LAA患者(A组)和11例健康体检者(B组)血浆sCD40L、血小板膜蛋白140(GMP-140)和白细胞介素6(IL-6)含量.结果 与B组比较,A组血小板GMP-140含量增高[(43.78±16.61)ng/ml vs.(9.42±2.96)ng/ml](P＜0.01),sCD40L和ID6亦明显增高[(8.36±4.30)ng/ml vs.(3.52±1.69)ng/ml和(55.59±18.20)pg/ml vs.(30.33±7.45)pg/ml](P＜0.01).A组患者sCD40L与GMP-140水平、sCD40L与IL-6水平、GMP-140与IL-6水平均呈正相关.结论 LAA患者血循环中sCD40L含量升高,提示血小板源性CD40L是炎症、动脉粥样硬化斑块不稳定和血栓形成的一个重要介质.循环中sCD40L升高可作为血小板活化、不稳定动脉粥样斑块发展为缺血性卒中的标志物.     

CD40、CD40L、CD8和CD28在慢性乙肝患者外周血细胞表达的研究

目的 检测慢性不同类型乙肝患者外周血淋巴与单核细胞表面CD40、CD40 L及淋巴细胞表面CD8、CD28的表达,评价患者的细胞免疫状态,为临床治疗提供指导.方法 流式细胞仪测定慢性乙肝与肝硬化患者单核细胞与淋巴细胞表面CD40、CD40 L表达的百分率及淋巴细胞表面CD8-/CD28+、CD8-/CD28-表达的百分率.结果 慢性乙肝组外周血淋巴与单核细胞表面CD40、CD40 L 表达率明显低于正常对照组(P<0.05),肝硬化组明显低于正常对照组(P<0.05).慢性乙肝、肝硬化患者CD40-/CD28+的表达低于正常人(P<0.05),CW8-/CD28-的表达高于正常人(P<0.05),慢性乙肝患者与肝硬化患者问CD8-/CD28-、CD8-/CD28-表达差异均无统计学意义(P>0.1).HBV感染者淋巴、单核细胞表面CD40和CD40L的表达呈正相关(P<0.01),淋巴细胞CD.40和CD40L表达与CD8-/CD28+表呈正相关(P<0.01).结论 HBV感采者外周血淋巴与单核细胞表达cD4e、CDdoL及淋巴细胞表达CD8-/CD28+低下,而CD8-/CD28-的表达增加.检洲外周血CD40、CD40 L及CD8-/CD28+、CD8-/CD28-的表达可评估患者的细胞免疫状态,为临床的抗病毒治疗提供新思路.     

卵巢癌细胞系SKOV3培养上清对巨噬细胞共刺激分子的影响

目的 研究卵巢癌细胞系SKOV3培养上清处理巨噬细胞后,巨噬细胞亚型的改变,以及CD80、CD86、CD40在不同巨噬细胞亚型上表达的差异.方法 Ficoll 密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞,GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后,用对数生长期的SKOV3细胞培养上清处理14 d后,采用流式细胞术检测巨噬细胞亚型的改变及不同亚型细胞CD80、CD86和CD40的表达情况.结果 流式细胞术检测显示,用SKOV3细胞培养上清培养巨噬细胞14 d后,巨噬细胞主要向CD163-M2型巨噬细胞分化[M1/M2=(12.37±1.76)%/(22.23±2.21)%].CD163-M2型巨噬细胞CD40的表达较CD64-M1型显著降低,2组比较差异均有统计学意义(P<0.05);而CD80、CD86的表达无明显改变,2组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 SKOV3细胞培养上清刺激后的巨噬细胞向不同巨噬细胞亚型分化;M2型巨噬细胞较M1型巨噬细胞共刺激分子表达下调,提示这些共刺激分子在巨噬细胞的活化及免疫应答过程中很重要,可能与肿瘤细胞的免疫逃逸有关.     

抗人CD147单克隆抗体对人肝癌细胞MHCC97-H裸鼠肝脏原位移植瘤生长抑制的实验研究

目的：研究抗人CD147单克隆抗体（mAb）对荷人肝癌裸鼠原位移植瘤生长的抑制作用。方法：建立BALB/c裸鼠肝脏原位移植MHCC97-H人高转移肝癌模型,随机分为4组,每组8只,于裸鼠尾静脉注射给药。抗CD147mAb组：给药量每千克体重10 mg,每日1次,连续给药8日。AMD组：每千克体重20 mg,每日1次,第1、8日。抗CD147mAb＋AMD组：抗CD147mAb每千克体重10 mg,每日1次,连续给药8日;AMD每千克体重20 mg,第1日给药。对照组：给予0.2 mL 0.9%的氯化钠注射液,连续给药8日,每日1次。第30日处死裸鼠,测量原位移植瘤体积;做常规病理切片观察、免疫组织化学染色以及凋亡指数检测。结果：CD147mAb组对肝脏原位荷瘤生长具有抑制作用,抑瘤率达34.1%。对照组与CD147mAb组（P=0.001 1）、AMD组（P〈0.000 1）、CD147mAb＋AMD（P〈0.000 1）间存在明显差异。CD147mAb组癌细胞凋亡指数与对照组相比有显著性差异（P=0.004 2,P〈0.01）。CD147mAb组、AMD组及CD147mAb＋AMD组的PCNA阳性细胞数及反应强度均较对照组减弱。结论：抗人CD147 mAb对肝癌生长的抑制可能是通过诱导肝癌细胞凋亡、抑制癌细胞增殖实现的。     

非霍奇金淋巴瘤中CD40、CD40L的表达及意义

目的探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）中CD40、CD40L表达与NHL预后间的关系及意义。方法免疫组织化学法检测50例非霍奇金淋巴瘤、22例淋巴结反应性增生组织中CD40、CD40L的表达。结果 （1）NHL中CD40过度阳性率（66.0%）显著高于淋巴结反应性增生（36.4%）,P〈0.05;NHL中CD40L过度阳性率（20.0%）显著低于淋巴结反应性增生（63.6%）,P〈0.05。（2）NHL中CD40与CD40L表达呈负相关,r=-0.486,P〈0.05。（3）NHL患者CD40、CD40L的过度阳性率与恶性程度、结外浸润及临床分期均显著相关,P〈0.05。结论 （1）CD40、CD40L过度阳性率与恶性程度、结外浸润及临床分期密切相关,其可能与NHL侵袭性及预后有关。（2）NHL中CD40表达的增高、CD40L表达的减少可能是影响其发病的因素之一。     

共刺激激动剂用于免疫佐剂

近年来,随着分子生物学、基因组学、蛋白质组学以及蛋白质工程技术的发展,越来越多潜在的疫苗抗原得到确认.为了最大限度发挥重组抗原疫苗的作用,迫切需要确定一些强有力的佐剂,这些佐剂应是可以安全地增强抗原的弱免疫原性,且自身副作用最小的物质.佐剂领域的研究进展很快,本文主要介绍了佐剂研究方面最新的进展:直接利用免疫系统自身共刺激通路发挥佐剂作用,着重阐述了基于CD40和CD28的佐剂应用.     

CD40和CD86在慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰中的变化及意义

目的 检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰中CD40和CD86水平的变化,分析CD40和CD86在COPD发病机制中的作用.方法 以COPD患者为研究对象,并以无COPD者健康人作为对照,采用沙丁胺醇加高渗盐水超声雾化吸入方法诱导排痰,以流式细胞技术(FCM)检测痰液中CD40及CD86水平.同时,常规方法测定肺...     

小檗碱对糖尿病模型大鼠血清血小板糖蛋白GPⅥ表达的影响

目的 探讨血小板糖蛋白Ⅵ在糖尿病模型大鼠的表达情况,以及小檗碱对其影响.方法 将雄性SD大鼠40只随机分成正常对照组、高脂组、糖尿病模型组和小檗碱治疗组,每组10只.正常组大鼠喂以普通饲料,其余30只大鼠喂养高脂饲料.8周后糖尿病模型组和小檗碱治疗组采用STZ制作糖尿病模型,正常组和高脂组给予相同剂量0.1 mol·L-1pH值为4.5的柠檬酸缓冲液腹腔注射.两周后定期剪尾测血糖,血糖＞7.8mmol·L-1者表示糖尿病模型制作成功.继续原饮食,小檗碱治疗组待模型制作成功后灌胃给予20.25 g·L-1小檗碱,100mg·kg-1·d-1.其余3组灌胃给予等体积纯化水,持续8周后处死各组大鼠,观察各预定指标.结果 流式细胞仪测定结果:糖尿病模型组大鼠GPⅥ、GPⅡb、CD40L表达均高于正常组(均P＜0.05).以上指标小檗碱治疗组与糖尿病模型组差异无显著性.GPⅥ与血糖值、CD41、CD40L均呈正相关.扫描电子显微镜显示,糖尿病模型组大鼠主动脉内皮正常纹理消失,粘附较多血小板,较多网状纤维和胶原暴露.小檗碱治疗组主动脉内皮有较多血小板聚集,粘附在内皮上,与内皮粘连紧密.结论 糖尿病大鼠血小板GPⅥ表达明显增加,血小板活化,血小板在动脉内皮的粘附增加诱导内皮炎症加剧和血栓形成.GPⅥ与糖尿病组大鼠的动脉粥样硬化和血栓形成有关.小檗碱治疗能抑制GPⅥ的表达,但差异无显著性,可能与样本较小有关.     

体外循环对血小板CD40L表达的影响

目的研究体外循环（CPB）过程中血小板膜表达CD40L的变化,及其与血小板激活、全身炎症反应及凝血变化的联系。方法CPB心内直视手术患者40例,分别于麻醉诱导后10min（T1）、CPB后30min（T2）、CPB停机即刻（T3）、CPB后2h（T4）、4h（T5）、8h（T6）,抽取外周动脉血,测定血浆TNF-α浓度、血小板表面CD40L和CD62P表达,计算术后24h纵隔引流量。结果T2时CD40L较CPB前明显升高（P〈0.01）,T3时达到峰值,T6时恢复到T1水平。血小板CD62P表达、血浆肿瘤坏死因子-α的峰值、术后24h引流量均和CD40L表达呈正相关（r=0.610,P〈0.01）。结论CD40L是随着CPB对血小板的激活而表达的,CD40L可能是联系炎性反应和凝血异常这两个导致CPB术后主要并发症的一个重要环节。     

阿托伐他汀对大鼠缺血再灌注脑组织中CD40L和MMP-3的抑制作用

目的:探讨阿托伐他汀对脑缺血再灌注损伤的脑保护作用机制.方法:采用Zealonga线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型血管内皮细胞间黏附分子.将Wistar大鼠随机分组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(IR组)、阿托伐他汀治疗组(AT组).采用免疫组织化学法检测大鼠脑组织CD40L、金属基质蛋白酶-3(MMP-3)的表达.结果:AT组脑组织CD40L、MMP-3表达及脑含水量和神经功能评分较IR组低(P＜0.01),而较Sham组明显增高(P＜0.01).结论:阿托伐他汀可以通过抑制大鼠脑缺血再灌注后脑组织CD40L、MMP-3表达,发挥脑保护作用.     

细胞因子对人脐静脉内皮细胞表达CD40和CD40L的影响

ＣＤ40 ＣＤ40Ｌ是一对互补的跨膜糖蛋白 ,在机体免疫应答中起重要作用 ,近年来的研究表明这一对配体 -受体参与了ＡＳ的发生和发展[1] 。ＡＳ的形成与发展过程中可有多种细胞因子参与和合成多种细胞因子。本文研究细胞因子γ干扰素 (ＩＦＮ γ)、肿瘤坏死因子 (ＴＮＦ)、白介素 6(ＩＬ 6)和白介素 1(ＩＬ 1)对人脐静脉内皮细胞表达ＣＤ40及ＣＤ40Ｌ的影响 ,以期揭示ＣＤ40 ＣＤ40Ｌ在ＡＳ发生中的作用地位。1　材料和方法1.1　材料　ＩＦＮ γ、ＴＮＦ、ＩＬ 6、ＩＬ 1、ＣＤ40和ＣＤ40Ｌ单抗购自Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ公司 ,鼠ＩｇＧＰＥ…     

冠心病患者行冠状动脉支架置入术后P-选择素及CD40L的变化及临床意义

目的 探讨冠心病(CHD)患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)前后 CD40 配体(CD40L),P选择素(P-selectin)水平的变化及其临床意义.方法 选择2006年9月至2010年9月我院行 PCI 的患者168人为研究组,同时选择同期进行冠状动脉造影(CAG)的患者50人作为对照组,PCI 组于术前1 h及术...     

Association between serum levels of soluble CD40/CD40 ligand and organ damage in hypertensive patients

1. CD40 and CD40 ligand (CD40L) have a critical role in the pathophysiology and risk prediction of coronary artery syndrome, including atherothrombosis and atherosclerosis. However, the contribution of the CD40/CD40L dyad, especially the soluble form of CD40L (sCD40L), to the pathophysiology of hypertension and associated organ damage remains unknown. 2. In the present study, serum levels of CD40 and sCD40L were measured in 328 hypertensive patients with varying degrees of organ damage. The data revealed that serum levels of CD40 were significantly greater in patients with severe, but not mild, organ damage compared with patients without any organ damage. There were no significant differences in serum concentrations of sCD40L between patients with no, mild and severe organ damage. Concentrations of soluble CD40 were comparable in patients with mild organ damage that included left ventricular hypertrophy, retinal damage, renal dysfunction and proteinuria. In contrast, concentrations of soluble CD40 were increased significantly in patients with certain forms of severe organ damage, specifically stroke, but not coronary and peripheral artery disease. 3. Collectively, our data indicate that upregulation of the CD40 system in hypertensive patients with certain forms of severe end‐organ damage may contribute to the pro‐inflammatory, pro‐atherogenic and prothrombotic milieu in hypertension.