当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的影响

目的　探讨当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血 (AA)小鼠骨髓细胞组织形态及超微结构的影响。方法　雌性Balb/c小鼠 ,随机分为正常组、模型组、治疗组和对照组。于d1 2每只小鼠采集尾静脉血测外周血白细胞计数 ,后断颈处死小鼠 ,取出尺骨及股骨 ,计数骨髓单个核细胞。并行尺骨组织学切片及超微结构观察。结果　与正常组比较 ,模型组造血细胞明显减少 ,骨髓微环境受损 ,治疗组能明显改善骨髓增生程度 ,修复骨髓微环境 ,增加骨髓单个核细胞计数 ;与对照组比较无显著差异。结论　当归注射液能通过促进骨髓造血细胞增生 ,改善骨髓微环境对免疫诱导AA小鼠进行保护作用。     

再生障碍性贫血患儿骨髓内人巨细胞病毒活动性感染对造血功能的影响

目的探讨再生障碍性贫血(再障)患儿骨髓内人巨细胞病毒(HCMV)活动性感染与骨髓CD34 细胞/有核细胞的百分比之间的关系,了解骨髓HCMV活动性感染对再障患儿骨髓造血功能的影响。方法收集23例再障初诊患儿(再障组),5例非血液病患儿作为对照。所有患儿均于治疗前抽取骨髓液标本,一部分骨髓液采用Trizol法抽提骨髓液RNA,然后进行反转录聚合酶链反应,扩增后通过琼脂糖凝胶电泳检测患儿骨髓内是否存在HCMV活动性感染;将再障组和对照组患儿另一部分骨髓液进行多参数流式细胞术检测,分别检测二组患儿骨髓CD34 细胞/有核细胞百分比。结果23例再障患儿中9例患儿骨髓标本内可检测到HCMV RNA表达,阳性率为39.1%;5例对照组患儿骨髓标本内均未检测到HCMV RNA表达。流式细胞术检测显示再障患儿骨髓CD34 细胞/有核细胞为(0.27±0.21)%,明显低于对照组[(1.57±0.45)%](P<0.05)。骨髓HCMV RNA阳性再障患儿的CD34 细胞/有核细胞为(0.13±0.07)%,显著低于HCMV RNA阴性患儿[(0.36±0.22)%](P<0.05)。结论HCMV可感染再障患儿的骨髓组织,其活动性感染可导致骨髓CD34 细胞/有核细胞的百分比明显减少,提示骨髓内HCMV活动性感染对骨髓造血功能有抑制作用。     

TNF-α与细胞凋亡基因产物Fas、FasL蛋白在儿童再生障碍性贫血的表达研究

目的探讨TNF-α和Fas/FasL系统的表达与再生障碍性贫血(ziplastic anemia,AA)的关系。方法采用ELISA方法检测AA患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度,采用流式细胞术测定骨髓CD3+4细胞Fas、FasL的表达率。结果AA患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度和CD3+4细胞Fas、FasL的表达率明显高于对照组(P<0.05),但重型AA(SAA)组与慢性型AA(CAA)组之间无差别。各型AA患者TNF-α浓度与CD3+4Fas+表达率呈正相关(r=0.542P=0.011)。结论TNF-α和Fas/FasL系统介导的凋亡参与了AA患者骨髓造血干细胞的凋亡过程。结果导致造血干细胞减少,骨髓造血功能衰竭。     

哮喘患儿单个核细胞表面CD86分子表达和TH源细胞因子水平及之间相关性研究

目的探讨哮喘急性发作患儿T细胞协同刺激途径和T细胞亚群激活状况.方法随机选择哮喘急性发作期患儿35例,对照组31例.用直接免疫荧光流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞分化抗原14阳性(CD+14)细胞表达CD86的平均荧光强度;经脂多糖刺激后PBMC中CD+19细胞百分率及CD+19CD+86双阳性细胞百分率;ELISA检测植物血凝素刺激后PBMC培养上清白细胞介素(IL)-4、IL-13、IFN-γ水平及血浆总IgE水平,并分析它们之间的相关性.结果 (1)哮喘组CD+14细胞表达CD86的平均荧光强度(31.8±9.2)、CD+19细胞百分率[(13.5±4.0)%]、CD+19CD+86细胞百分率[(4.6±2.0)%]及血浆总IgE水平[186.6(64.3～723.6) kIU/L]与对照组[(23.5±6.4)、(8.2±3.0)%、(2.3±1.4)%、42.0(0.9～115.2)]比较差异有显著性;(2)哮喘组IL-4和IL-13水平均增高,IFN-γ水平降低,与对照组比较差异有显著性;(3)哮喘组CD+14细胞的CD86平均荧光强度与CD+19CD+86细胞百分率、CD+19CD+86百分率与血浆总IgE水平及CD+19、CD+19CD+86百分率与IL-4、IL-13水平均呈显著正相关.结论哮喘急性发作患儿PBMC中抗原递呈细胞表达CD86的强度或数量增高;B细胞和TH2细胞对丝裂原的活化作用应答增强.这提示CD86及TH亚群失衡在哮喘发病机制中起重要作用.     

CD34+细胞在哮喘小鼠中的表达及布地奈德干预的实验研究

目的研究CD34 细胞在卵白蛋白(OVA)致敏小鼠、哮喘小鼠中的表达及布地奈德(BUD)吸入对哮喘小鼠CD34 细胞表达的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分成致敏组、哮喘组、BUD干预组、正常对照组。用OVA进行致敏和激发,建立哮喘模型。常规检测骨髓、外周血中有核细胞总数,流式细胞仪检测CD34 细胞。结果致敏小鼠骨髓中CD34 细胞比例为(3.99±1.37)%,较正常小鼠[(2.33±1.27)%]明显增加;外周血中CD34 细胞比例为(1.58±0.63)%,与正常小鼠[(1.50±1.04)%]相比,未见明显变化。哮喘小鼠骨髓中CD34 细胞比例为(5.64±1.87)%,与致敏小鼠相比进一步升高;外周血中CD34 细胞比例为(2.91±1.27)%,与正常小鼠相比亦有明显增加;布地奈德吸入后,骨髓、外周血中CD34 细胞表达分别为(3.77±1.81)%和(1.76±1.06)%,均有明显下降。结论小鼠在OVA致敏状态下骨髓中CD34 细胞表达明显增强,OVA激发后哮喘状态下其表达进一步增强,同时,外周血中CD34 细胞比例也明显增高。布地奈德可以抑制哮喘小鼠骨髓、外周血中CD34 细胞的增殖表达。     

支气管哮喘患儿人白细胞组织相容性DR、DQ抗原表达及其与血清总免疫球蛋白E的关系

目的探讨哮喘患儿外周血单个核细胞人白细胞组织相容性DR、DQ抗原(HLA-DR、HLA-DQ)表达及其与血清总IgE(TIgE)表达的关系。方法急性发作的支气管哮喘患儿27例和正常儿童12例,采用间接免疫荧光法测定其外周血单个核细胞HLA-DR、HLA-DQ表达。Phadiatop全自动过敏原检测系统测定血清TIgE。结果哮喘患儿外周血单个核细胞HLA-DR、HLA-DQ阳性细胞表达率分别为(27.77±3.89)%和(9.49±3.71)%,正常儿童为(18.23±1.50)%和(3.79±2.04)%,二组比较均有显著性差异(Pa<0.001)。HLA-DR、HLA-DQ表达与血清TIgE水平之间密切相关[r(HLA-DR)=0.774 4,r(HLA-DQ)=0.749 4 Pa<0.001]。结论哮喘急性发作患儿外周血单个核细胞HLA-DR、HLA-DQ表达增加,并与血清TIgE表达呈正相关。提示HLA-DR、HLA-DQ基因的高表达是哮喘形成的重要因素。     

过敏性紫癜患儿Th细胞亚群及免疫球蛋白状态的研究

目的探讨HSP的免疫学发病机制。方法采用直接免疫荧光流式细胞分析技术检测HSP患儿急性期外周血单个核细胞CD4+CD30和CD4+CD30Th细胞亚群,多克隆抗体单向免疫扩散法检测血浆免疫球蛋白IgA、IgG、IgM浓度,采用SAS8.0统计软件进行分析。结果1.外周血单个核细胞CD4+CD30和CD4+CD30+Th的含量:HSP组分别为80.43%±1.42%和19.56%±1.42%,对照组健康儿童为89.73%±0.52%和10.26%±0.05%,t检验P<0.05,显示与健康儿童相比HSP组外周血单个核细胞CD4+CD30含量明显较高而CD4+CD30+Th明显降低。2.血浆免疫球蛋白的浓度:HSP组IgA、IgG、IgM分别为1.616±0.060g/L、10.551±1.157g/L及1.307±0.144g/L,对照组健康儿童为1.077±0.101g/L、10.597±1.283g/L及1.272±0.145g/L,显示HSP患儿血浆IgA浓度显著高于正常对照组(P<0.05),血浆IgA、IgM与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。结论HSP患儿急性期体内存在T细胞功能紊乱,Th1和Th2的失衡,Th2细胞优势活化。血浆免疫球蛋白IgA合成异常增高。     

CD133表达与儿童急性髓细胞白血病临床特征的相关性研究

目的探讨CD133在儿童急性髓细胞白血病(AML)中的表达及意义。方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法,对20例AML患儿和10例非肿瘤患儿(对照组)的骨髓单个核细胞进行CD133 mRNA的表达检测。结果 (1)AML患儿的CD133 mRNA阳性表达率为45%,显著高于对照组(P<0.05)。(2)AML患儿骨髓细胞CD133 mRNA表达与CD34表达相关。(3)CD133 mRNA的表达与儿童AML FAB分型及临床危险度分型有关(P<0.05),与外周血白细胞数、淋巴结肿大、性别、年龄等因素无相关性。结论 AML患儿CD133 mRNA表达率较高;CD133 mRNA表达与AML分型有关。     

骨髓衰竭小鼠动物模型的建立及碱性成纤维细胞生长因子表达

目的建立再生障碍性贫血动物模型,检测其碱性成纤维细胞生长因子2(FGF2)的表达。方法 BALB/c小鼠20只分为模型组和对照组,模型组采用5.0 Gy射线照射,随后输注异体小鼠淋巴细胞1×106个,观察小鼠外周血细胞、骨髓单个核细胞计数和骨髓组织切片等指标,ELISA法测定和比较小鼠骨髓单个细胞FGF2蛋白表达。结果模型组小鼠外周血血红蛋白、白细胞、血小板和骨髓单个核细胞数均较对照组小鼠显著降低,差异有统计学意义(P均0.05)。模型组骨髓单个核细胞FGF2蛋白较对照组亦降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论以射线照射并输注淋巴细胞方法制作的骨髓衰竭小鼠动物模型,其各项指标均符合临床骨髓衰竭的标准,且提示FGF2表达减低参与骨髓衰竭的发生。     

多药耐药基因介导的骨髓保护在肝癌小鼠化疗时的富集效应

目的 探讨多药耐药基因转染小鼠骨髓单个核细胞移植后,化疗时其在体内的表达、分布以及在骨髓和外周血的富集效应.方法 骨髓造血细胞转染外源性多药耐药基因后移植入荷瘤Balb/c小鼠,免疫组化和RT-PCR观察mdr1基因在骨髓造血细胞、外周血单个核细胞及重要脏器的表达和分布;监测外周血白细胞变化及肿瘤组织P-糖蛋白表达.结果 外源性多药耐药基因在重要脏器和肿瘤组织无表达;化疗前骨髓细胞和外周血的P-糖蛋白表达阳性率分别为(9.36±1.84)%、(8.52±1.26)%,化疗药物剂量递增时,P-糖蛋白表达阳性率增高;移植未转染组与移植转染组外周血白细胞计数差异有统计学意义(P＜0.01).结论 外源性多药耐药基因转染在骨髓造血细胞和外周血单个核细胞有持续较高表达,在重要脏器无表达;随化疗药物剂量递增时骨髓和外周血有明显的富集效应;多药耐药基因转染介导保护骨髓在超剂量化疗中获得显著效果.     

Fas/FasL在再生障碍性贫血患儿中的表达及意义

目的研究凋亡基因Fas及其配体(FasL)在儿童再生障碍性贫血(AA)中的表达及意义,探讨AA的发病机制。方法30例AA患儿分为重型再生障碍性贫血(SAA)组12例,慢性型再生障碍性贫血(CAA)组18例,对照组为健康体检儿童10例。采用流式细胞术结合单克隆抗体荧光染色的方法测定AA患儿Fas/FasL表达水平及CD34 细胞数量。比较各组间表达差别。结果AA患儿Fas表达水平显著高于健康对照组(P<0.05),但SAA与CAA组Fas表达水平无差别(P>0.05);FasL表达水平在AA和健康对照组比较无差异(P>0.05)。CD34 细胞数量AA组明显低于健康对照组(P<0.05)。结论Fas/FasL系统参与诱导AACD34 细胞凋亡过程,导致造血干细胞减少,骨髓造血衰竭。     

抗CD47抗体联合阿糖胞苷靶向治疗NOD/SCID小鼠单核细胞白血病的研究

目的：探讨CD47在急性髓细胞白血病NOD/SCID小鼠模型中的预后意义及靶向治疗的最佳策略。方法：将分选的CD34+CD38-白血病干细胞（leukemia stem cells, LSCs）移植入NOD/SCID小鼠体内,建立小鼠急性单核细胞白血病模型;抗人CD47单克隆抗体单独或联合阿糖胞苷治疗白血病小鼠7~14 d,并进行疗效分析。将LSCs与小鼠巨噬细胞在含抗CD47单克隆抗体的培养液中共培养,观察CD47对巨噬细胞吞噬LSCs能力的影响。结果：THP-1细胞中存在CD34+CD38- LSCs,比例约为0.12%±0.06%,将分选后的CD34+CD38- LSCs（比例高达97.0%±1.7%）移植入NOD/SCID小鼠后成功建立白血病模型。体内实验表明,阿糖胞苷（7 d）联合抗CD47单克隆抗体（14 d）治疗后,白血病小鼠外周血和骨髓中CD33+CD45+白血病细胞下降最明显（P<0.01）,生存时间明显长于其它各组。体外共培养2 h后,抗CD47单克隆抗体组吞噬指数（76.9%±12.2%）明显高于抗CD45单克隆抗体组（7.60%±2.4%,P<0.01）。结论：CD47高表达是急性髓细胞白血病的预后不良因素。阿糖胞苷联合抗CD47单克隆抗体可有效杀灭普通白血病细胞和白血病干细胞,对彻底治愈急性髓细胞白血病具有重要临床意义。     

儿童白血病BMSCs及VLA-4抗体联合VP-16对白血病细胞凋亡的影响

目的研究儿童白血病(急性淋巴细胞白血病和急性髓系白血病)骨髓基质细胞(BMSCs)、缓慢抗原-4(VLA-4)抗体及VLA-4抗体联合化疗药物足叶乙甙(VP-16)对儿童白血病细胞凋亡的影响,探索儿童白血病新的治疗方法。方法分离培养儿童白血病骨髓单个核细胞,根据组别加入VLA-4抗体和VP-16,采用流式细胞仪检测不同组别白血病细胞的凋亡率。结果对照组与BMSCs组、骨髓基质上清组比较,其白血病细胞早期凋亡率均有显著增高,P<0.05,而BM-SCs组与骨髓基质上清组比较,白血病细胞早期凋亡率无显著差异。抗体组、BMSCs组和骨髓基质上清组白血病细胞凋亡率分别为[12 h:(10.16±1.29)%,24 h:(13.72±1.72)%]、[12 h:(4.99±1.66)%,24 h:(5.54±1.53)%][12 h:(6.06±1.77)%,24 h:(6.62±1.8)%],抗体组与BM-SCs组和骨髓基质上清组比较,其早期凋亡率均显著增加,P<0.05;抗体加药物组白血病细胞早期凋亡率最高,为[12 h:(26.79±1.29)%,24 h:(20.81±1.39)%],与其他任何一组比较,差异显著,P<0.05;除BMSCs组和骨髓基质上清组,其他四个组12 h与24 h的白血病细胞早期凋亡率有显著差异,P<0.05。结论白血病患儿的BMSCs可以保护白血病细胞免于失巢凋亡和药物诱导的凋亡,VLA-4抗体可增强VP-16诱导的白血病细胞的凋亡敏感性。     

儿童急性淋巴细胞白血病抗原错译表达的临床意义

目的 研究儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)抗原错译表达的临床意义。方法 对54例ALL患儿的骨髓标本分别进行细胞形态学及细胞化学染色，确定其FAB类型，运用一组相关的单克隆抗体，采用流式细胞仪及直接免疫荧光标记技术进行免疫分型，采用吉姆萨G显带技术进行核型分析。结果 儿童ALL54例髓系抗原阳性表达率为29.63％，其中CD13为25．93％，CD33为20．37％，CD14为11．11％。T—ALL和B—ALL髓系抗原阳性表达差异无统计学意义(30．77％vs529．27％ P＝0.918)。CD34表达阳性ALL髓系抗原阳性表达率明显高于CD34表达阴性ALL髓系抗原阳性表达率(40.63％vs13.64％P＝0．039)；ALL髓系抗原阳性表达与髓系抗原阴性表达的完全缓解(CR)率差异无统计学意义(81．25％vs94．74％ P＝0．148)；但生存率曲线比较分析，ALL髓系抗原阳性表达的生存时间短(P＝0.031)。结论 儿童ALL的抗原错译表达率为29．63％；CD34阳性的ALL抗原错译表达率明显高于CD34表达阴性的ALL抗原错译表达率；ALL髓系抗原阳性表达的生存时间短；ALL髓系相关抗原阳性表达可能是影响ALL患儿预后的不利因素。     

儿童EB病毒感染传染性单核细胞增多症T细胞亚群的动态变化

目的研究儿童传染性单核细胞增多症(IM)不同时期外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞的改变及其变化规律。方法在病程不同时期采集30例IM患儿的外周血,肝素抗凝,采用流式细胞术方法分别检测了30例IM患儿急性期、病程1月、病程3月、病程6月及正常对照组外周血淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+细胞表达率。结果1IM急性期CD4+(14.84±5.03%)及CD4/CD8(0.25±0.13%)明显降低,CD3+(82.55±5.49%)、CD8+(66.17±8.10%)明显增高,与其余各组比较均存在显著性差异(P<0.001);2随时间推移及感染的控制CD4+及CD4/CD8细胞逐渐升高,但病程1月(CD4+:27.89±6.04%,CD4/CD8:0.66±0.16%)与病程3月(CD4+:29.49±4.49%,CD4/CD8:0.76±0.20%)比较无显著性差异(P>0.05),与病程6月(CD4+:32.81±6.79%,CD4/CD8:0.93±0.31%)及对照组(CD4+:65.04±6.50%,CD4/CD8:1.18±0.35%)比较,均存在显著性差异(P<0.001);3病程1月CD3+(76.25±8.33%),CD8+(46.35±9.43%)与病程3月CD3+(71.20±5.32%),CD8+(37.76±8.28%)、病程6月CD3+(67.98±8.01%),CD8+(33.96±7.37%)及对照组CD3+(65.04±6.50%),CD8+(30.72±16.51%)比较均存在显著性差异(P<0.001);4实验各组病程3月与病程6月CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比较均无显著性差异(P>0.05),但3月组与对照组比较均存在显著性差异(P<0.01);5实验各组病程病程6月CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+与对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。结论IM急性期CD3+、CD8+明显增高,CD4+及CD4/CD8明显降低,随着时间推移及感染控制,CD3+、CD8+逐渐降低,CD4+及CD4/CD8逐渐增高,6月CD3、CD4、CD8的表达及CD4+/CD8+达正常水平。     

全身炎症反应综合征患儿中性粒细胞淋巴细胞CD11b表达意义

目的：探讨全身炎症反应综合征（SIRS）患儿血液中性粒细胞、淋巴细胞CD11b表达对诊断和判断病情的意义。方法：用流式细胞术检测36例SIRS患儿血液中性粒细胞、淋巴细胞CD11b表达水平,28例一般感染性疾病,不符合SIRS诊断标准的患儿作为对照组。比较各指标对诊断SIRS的灵敏度、特异度,评价它们对诊断SIRS和判断病情的价值。结果：急性期SIRS组中性粒细胞CD11b表达为（96.7±8.1）%,高于对照组的（85.1±5.1）%,差异有显著性（P＜0.05）。中性粒细胞CD11b＞92.24%为阳性标准,诊断SIRS敏感性和特异性分别为97.2%,92.9%。急性期SIRS组淋巴细胞CD11b表达为(13.4±8.6)%,对照组为（19.2±6.4）%,差异有显著性（P＜0.05）;其中严重脓毒症组淋巴细胞CD11b表达为（7.3±3.0）%,低于非感染SIRS组的（19.3±2.9）%和脓毒症组的(15.9±12.5)%（P＜0.01）。恢复期SIRS组淋巴细胞CD11b表达为（13.35±4.89）%,对照组为（13.8±4.7）%,差异无显著性（P＞0.05）。结论：中性粒细胞CD11b可作为诊断SIRS的可靠指标,淋巴细胞CD11b表达下调可能是SIRS患儿病情加重的信号。［中国当代儿科杂志,2009,11（7）：540-542］     

Immune Function of T-lymphocyte and Erythocyte in Children with Febrile Convulsion

Ｔｈｅｎｅｒｖｏｕｓｓｙｓｔｅｍｉｓｃｌｏｓｅｌｙｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｍ ｍｕｎｅｓｙｓｔｅｍ .ＡｌｔｈｏｕｇｈｔｈｅｓｅｒｕｍＩｇＡｌｅｖｅｌｉｎｃｈｉｌ ｄｒｅｎｗｉｔｈｆｅｂｒｉｌｅｃｏｎｖｕｌｓｉｏｎ (ＦＣ)ｉｓｏｆｔｅｎｒｅｄｕｃｅｄ ,ａｌｔ