微小RNA-124-3p对自发性高血压大鼠心肌线粒体功能和PI3K/AKT信号通路的调控作用

目的 探究微小RNA(miR)-124-3p对自发性高血压(SHR)大鼠心肌线粒体功能和PI3K/AKT信号通路的调控作用。方法 45只SHR大鼠分为SHR组、SHR+miR-124-3p 激动剂(agomir)和SHR+miR-124-3p 拮抗剂(antagomir)组,每组各15只,另选15只健康大鼠为对照组。通过尾静脉注射miR-124-3p agomir和miR-124-3p antagomir(300 μg)以提高和抑制心肌细胞中miR-124-5p的水平。4周后检测各组大鼠心肌酶指标、心肌组织中miR-124-3p、细胞凋亡水平、线粒体凋亡标志蛋白[细胞色素C(Cyt C)、caspase9、cleaved caspase3]、PI3K/AKT通路水平。双荧光素酶报告实验验证miR-124-3p和PI3K的靶向关系。将心肌细胞分为miR-124-3p NC组和miR-124-3p mimic组,细胞分别转染miR-124-3p NC和miR-124-3p mimic,检测各组细胞中miR-124-3p和PI3K蛋白水平。结果 对照组、SHR组、SHR+miR-124-3p agomir和SHR+miR-124-3p antagomir组大鼠心肌组织中的miR-124-3p水平分别为(0.87±0.12)、(2.56±0.38)、(4.51±0.86)和(1.13±0.16)。四组大鼠各项指标比较差异有统计学意义(P0.05)。SHR组的乳酸脱氢酶[(LDH,1982.35±207.44)IU/L]、肌酸激酶同工酶[(CK-MB,942.55±107.62)IU/L]、凋亡细胞数目[(27.18±2.10)个]、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著高于对照组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著低于对照组(P0.05)。SHR+miR-124-3p agomir组的LDH[(2371.92±244.26)IU/L]、CK-MB[(1301.42±135.49)IU/L]、凋亡细胞数目[(52.76±3.56)]个、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著高于SHR组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著低于SHR组(P0.05)。SHR+miR-124-3p antagomir组的LDH[(1624.43±176.31)IU/L]、CK-MB[(722.41±78.43)IU/L]、凋亡细胞数目[(11.85±0.97)个]、Cyt C、caspase9和cleaved-caspase3蛋白表达量显著低于SHR组,PI3K和AKT mRNA和蛋白表达量显著高于SHR组(P0.05)。双荧光素酶报告结果表明miR-124-3p与PI3K靶向结合。MiR-124-3p mimic组的miR-124-3p水平显著高于miR-124-3p NC组,PI3K mRNA和蛋白的表达水平显著低于miR-124-3p NC组(P0.05)。结论 SHR大鼠心肌组织中miR-124-3p升高,其水平会抑制PI3K/AKT加剧线粒体凋亡途径,导致心肌细胞凋亡。     

白藜芦醇单用或与miR-27b激动剂联合应用对脑出血大鼠脑组织继发性病理损伤的防治作用观察

目的 观察白藜芦醇（Res）单用或与miR-27b激动剂联合应用对脑出血（ICH）大鼠脑组织继发性病理损伤的防治作用。方法 将180只雄性SD大鼠随机分为假手术组、ICH组、Res组、Res+miR-27b agomir组、NC组,每组36只。ICH组、Res组、Res+miR-27b agomir组以及NC组大鼠采用胶原酶注射尾状核法制备ICH模型。Res组、Res+miR-27b agomir组、NC组大鼠在造模前连续7 d腹腔注射Res,假手术组及ICH组采注射等体积DMSO。Res+miR-27b agomir组大鼠在造模前3 d将miR-27b激动剂miR-27b agomir注入大鼠右侧脑室,NC组大鼠注射agomir阴性对照试剂,假手术组、ICH组、Res组注射等量生理盐水。各组大鼠造模成功后继续喂养24 h,使用mNSS评分量表评估神经功能。各组大鼠处死后取脑组织,采用TUNEL法测算脑组织神经细胞凋亡率,采用ELISA法检测大鼠脑组织炎症因子、氧化应激相关因子,采用qRT-PCR法检测大鼠脑组织中miR-27b、核因子相关因子2(Nrf2)mRNA,采用Western...     

过/降表达miR-92a的食管鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭能力及PTEN/PI3K/Akt通路蛋白表达变化

目的 观察过/降表达miR-92a的食管鳞癌（ESCC）细胞增殖、迁移、侵袭能力及磷酸酯酶与张力蛋白同源物（PTEN）/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/Akt通路蛋白表达变化。方法 将人ESCC细胞系Eca-109随机分为miR-92a过表达组、miR-92a降表达组、过表达阴性对照组、降表达阴性对照组,分别转染miR-92a mimics、miR-92a inhibitor、mimic-NC、inhibitor-NC 24 h。采用CCK-8法检测各组培养24、48、72、96 h的的吸光度（A）值,划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell小室检测细胞侵袭能力。采用Westen blotting法检测细胞PTEN/PI3K/Akt通路蛋白PTEN、PI3K、Akt、磷酸化PTEN(p-PTEN)、p-PI3K、p-Akt。结果 各时点细胞A值、细胞迁移距离、穿膜细胞数比较,miR-92a过表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>miR-92a降表达组（P均<0.05）。p-PTEN蛋白miR-92a降表达组>过表达阴性对照组、降表达阴性对照组>...     

miR-34a调控PI3K/AKT通路对口腔癌细胞生物学行为的影响及机制

目的 探究微小RNAa(miR)-34a调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对口腔癌细胞生物学行为的影响及机制。方法 选择口腔癌细胞系Tca8113、OEC-M1、OC3及人口腔角质形成细胞HOK,并对其中miR-34a相对表达量进行检测。将Tca8113细胞分为miR-34a组(转染miR-34a模拟物)、miR-34a NC组(转染miR-34a模拟物对照物)和不做处理的NC组,观察转染24、48、72 h时各组细胞增殖率,并比较各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数及PI3K/AKT通路相关因子表达。结果 miR-34a在Tca8113、OEC-M1、OC3细胞中的表达较HOK细胞明显减少(P<0.05)。miR-34a组细胞增殖率较NC组明显减少,凋亡率较NC组明显增加(P<0.05)。miR-34a组细胞迁移及侵袭细胞数均较NC组明显减少(P<0.05)。miR-34a组细胞PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKt蛋白表达均较NC组明显减少(P<0.05)。结论 miR-34a在口腔癌细胞中呈低表达,上调其表达可抑制口...     

雷帕霉素通过下调微小RNA-27a介导的雷帕霉素靶分子信号通路调控糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞自噬的影响研究

目的 探讨微小RNA-27a(miR-27a)介导的雷帕霉素靶分子（mTOR）信号通路调控DKD大鼠足细胞自噬的作用。方法 将30只SD大鼠随机分为正常对照组（NC,n=10）、糖尿病模型组（DKD,n=10）和雷帕霉素治疗组（Rap,n=10）。检测各组肾功能相关指标和细胞凋亡率，HE染色及免疫组化评估肾组织形态学变化。Western blot法检测各组肾组织中自噬相关指标Beclin1、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3)及mTOC蛋白表达，qRT-PCR检测足细胞特异性蛋白miR-27a、Podocalyxin、Nephrin、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Bax、Beclinl mRNA表达量。结果 与NC组比较，DKD组第6、12周FPG、24 hUAlb、BUN、血肌酐（Scr）、肾脏指数（KI）表达升高（P<0.05）。与NC组比较，DKD组细胞凋亡、mTOC蛋白、miR-27a、mTOR、Bax mRNA表达升高（P<0.05）,Beclinl、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin1、Podocalyxin、Nephrin mRNA...     

miR-124通过抑制TLR4/NF-κB/CCL2对脑梗死大鼠神经元凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-124通过抑制Toll样受体(TLR)4/核因子(NF)-κB/CC类趋化因子配体(CCL)2对脑梗死(CI)大鼠神经元凋亡的影响。方法 通过线栓闭塞大脑中动脉法建立CI大鼠模型60只,以随机数表法平均分为5组：模型组、miR-124激活剂(miR-124 agomir)组、TLR4过表达质粒组、miR-124 agomir阴性对照+空载质粒组、miR-124 agomir+TLR4过表达质粒组,另取12只大鼠只分离颈动脉,作为假手术组。分组干预后,评测大鼠神经功能缺损情况,比较各组神经功能缺损评分;采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠CI情况,比较各组CI面积;采用TUNEL染色检测海马神经元凋亡情况,比较各组海马神经元凋亡率;采用试剂盒测量各组血清活性氧(ROS)及炎症因子环氧合酶(COX)-2、白细胞介素(IL)-17水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)实验检测各组脑组织miR-124表达;采用Western印迹实验检测各组脑组织凋亡及TLR4/NF-κB/CCL2通路蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组、miR-124 agomi...     

单硝酸异山梨酯注射液通过调控PI3K/AKT/GSK3β通路改善急性心肌缺血大鼠心功能的研究

目的 探讨单硝酸异山梨酯注射液（isosorbide mononitrate injection,ISMI）对急性心肌缺血（acute myocardial ischemia,AMI）大鼠心功能及磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B/glycogen synthase kinase 3 beta,PI3K/AKT/GSK3β)信号通路的影响。方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、AMI模型组、AMI+ISMI组、AMI+PI3K抑制剂组、AMI+ISMI+PI3K抑制剂组，每组8只，冠状动脉结扎法构建AMI大鼠模型，构建成功后各组连续干预14 d。超声心动图检测大鼠心功能指标，多导生理记录仪检测大鼠血液流变学指标，苏木精-伊红染色法（hematoxylin-eosin,HE）染色、Masson染色观察大鼠心肌组织损伤情况，TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡情况，蛋白质印迹（Western blot,WB）法检测大鼠心肌组织中PI3K/AKT/GSK3β通路蛋白表达。结果 与假手术组相比，AMI...     

miR-29a通过调控PTEN/AKT信号通路对CCl_4诱导的肝纤维化大鼠的影响

目的探究miR-29a对四氯化碳(CCl_4)诱导的肝纤维化大鼠的保护作用及机制。方法通过腹腔注射40%的CCl_4橄榄油溶液构建大鼠肝纤维化模型,将造模成功的30只大鼠随机分为3组:肝纤维化组(B组)、NC-miRNA+肝纤维化组(C组)和miR-29a+肝纤维化组(D组),每组10只,采用胰岛素注射器通过尾静脉注射注入质粒。另取8只大鼠设为正常组(A组)。采用HE染色评估大鼠肝组织的损伤情况。酶联免疫法(ELISA)检测各组血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的含量。采用实时定量PCR法(Real-time PCR)检测大鼠肝脏组织中miR-29amRNA、张力蛋白同源第10染色体丢失的磷酸酶基因(PTEN)mRNA表达水平,采用Western blot法检测PTEN和磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白的变化情况。结果 B、C组大鼠肝细胞坏死及空泡变性,有炎性细胞浸润,明显病理性改变。D组大鼠肝小叶内偶见肝细胞坏死,有少量炎性细胞浸润。D组ALT、AST水平、p-AKT的蛋白表达水平明显低于B、C组,而miR-29amRNA、PTEN mRNA和PTEN的蛋白表达水平明显高于B、C组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论 miR-29a过表达可抑制肝纤维化大鼠的肝损伤,其机制可能与调控PTEN/AKT信号转导通路有关。     

微小RNA-223调控白细胞介素-6/信号转导与转录激活因子3信号通路改善慢性肾小球肾炎大鼠炎症反应和纤维化的机制研究

目的 探讨微小RNA(miR)-223对慢性肾小球肾炎(CGN)大鼠炎症反应、纤维化及白细胞介素-6(IL-6)/信号转导与转录激活因子3(STAT3)信号通路的影响。方法 通过注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)建立CGN大鼠模型，随机分为模型组(CGN组，尾静脉注射等体积生理盐水)、NC agomir组(尾静脉注射50μg/kg NC agomir)、miR-223 agomir组(尾静脉注射50μg/kg miR-223 agomir)、miR-223 agomir+IL-6/STAT3通路激活剂组(miR-223 agomir+rhIL-6组，尾静脉注射50μg/kg miR-223 agomir和1μg/kg rhIL-6),以正常大鼠作为对照组(Control组，造模期间同期同部位注射等量生理盐水，给药期间尾静脉注射等体积生理盐水),每组各10只。检测5组大鼠肾功能指标[24h尿蛋白、血清尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、胱抑素C(Cys-C)、视黄醇结合蛋白(RBP)]及肾组织炎症因子[IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和单核细胞趋化蛋白(MCP)-1]水平并进行...     

miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡

目的]探讨miR-301影响冠心病大鼠心肌细胞凋亡的机制。 [方法]SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-301激动剂组(agomir miR-301组)、miR-301激动剂对照组(agomir NC组)、Wnt/β-catenin通路抑制剂组(Dkk1组)及agomir miR-301＋Dkk1组,每组10只。除对照组外,其余各组均高脂喂养建立大鼠冠心病模型,连续给药1周后,超声检测大鼠左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(FS)、左心室舒张期末内径(LVEDD)和左心室收缩期末内径(LVESD)等心功能指标。HE染色观察大鼠心肌组织形态,TUNEL检测心肌细胞凋亡,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测心肌组织miR-301表达,Western blot检测大鼠心肌组织Caspase-3、Bax、Wnt3a及β-catenin蛋白表达。 [结果]与对照组相比,模型组大鼠LVEF、FS降低49.2%、49.1%,心肌组织miR-301表达水平降低69.0%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平降低60.7%、39.7%(P＜0.05),LVEDD、LVESD升高32.2%、99.6%,心肌细胞凋亡率升高1362.6%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平升高100.0%、114.6%(P＜0.05);与模型组相比,agomir miR-301组大鼠LVEF、FS升高71.4%、71.8%,心肌组织miR-301表达水平升高1935.5%,Wnt3a、β-catenin蛋白表达水平升高102.4%、45.1%(P＜0.05),LVEDD、LVESD降低15.6%、39.2%,心肌细胞凋亡率降低65.0%,心肌组织Caspase-3、Bax蛋白表达水平降低70.2%、78.4%(P＜0.05),而Dkk1可逆转这种现象。 [结论]miR-301通过激活Wnt/β-catenin信号通路改善冠心病大鼠心肌细胞凋亡。     

PTEN/PI3K/AKT蛋白、miR-21在青海藏族及汉族胃癌患者癌组织中的表达差异

目的探讨PTEN/PI3K/AKT蛋白、miR-21在青海藏族及汉族胃癌患者癌组织中的表达差异。方法选取2016年12月至2018年12月我院胃肠外科进行手术的78例胃癌患者为研究对象(藏族38例,汉族40例)。采用实时荧光定量PCR法检测癌组织标本及癌旁组织中miR-21水平,采用免疫组化染色法检测PTEN/PI3K/AKT蛋白,分析不同民族胃癌患者不同组织PTEN/PI3K/AKT蛋白、miR-21表达情况,同时分析其与临床病理特征之间的关系。结果汉族、藏族胃癌患者癌组织中miR-21表达水平高于癌旁组织(P<0.05),且汉族癌组织中miR-21表达水平明显高于藏族(P<0.05)。汉族、藏族胃癌患者癌组织中PTEN、PI3K、AKT蛋白阳性率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中汉族胃癌组织中PTEN蛋白阳性率低于藏族,但PI3K、AKT蛋白阳性率高于藏族(P<0.05)。两民族胃癌组织中的PTEN、AKT蛋白、miR-21表达与TNM分期、分化程度、淋巴转移相关(P<0.05),PI3K蛋白表达与TNM分期、淋巴转移相关(P<0.05)。在汉族、藏族胃癌患者中,miR-21与PTEN蛋白均呈负相关,与PI3K、AKT蛋白均呈正相关(P<0.05)。结论PTEN在藏族、汉族胃癌患者中表达水平降低,且汉族表达低于藏族,且PTEN与PI3K、AKT呈负相关,miR-21可能通过抑制PTEN,激活PI3K、AKT信号通路从而参与胃癌患者的发生、发展。     

miR-362-3p通过MAPK1/PTEN/AKT信号通路调节冠心病大鼠心肌细胞凋亡和内皮细胞损伤

目的:通过构建冠心病大鼠模型,探讨微小RNA-362-3p(miR-362-3p)是否通过调节有丝分裂原活性蛋白激酶1(MAPK1)、蛋白酪氨酸磷酸酶基因(PTEN)、蛋白激酶B(AKT),参与影响冠心病大鼠的心肌细胞凋亡和内皮细胞损伤。方法:构建冠心病大鼠模型,随即将大鼠分为健康组、冠心病组、miR-362过表达组、过表达阴性对照组、过表达+MAPK1激活组,苏木精-伊红(HE)染色观察各组大鼠冠状动脉组织病理学变化;原位末端标记测定法(TUNEL)检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中炎性相关因子及一氧化氮(NO)、内皮素(ET)-1等含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测各组大鼠冠状动脉组织中MAPK、磷酸化MAPK(p-MAPK)、PTEN、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)信号通路蛋白表达水平。结果:健康组大鼠冠状动脉组织完好;与健康组比较,冠心病组大鼠冠状动脉组织增厚明显,心肌细胞凋亡率、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、ET-1含量及冠状动脉组织p-MAPK/MAPK...     

CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的 探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法 将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST₂)、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和...     

基于PI3K/PTEN/Akt信号通路探讨Hp阳性萎缩性胃炎的作用机制

目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶/第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/Akt)信号通路探讨幽门螺旋杆菌(Hp)阳性萎缩性胃炎(CAG)的发生机制。方法 70只Wistar大鼠，随机取50只用Hp感染联合水杨酸钠乙醇灌胃的方法建立Hp阳性CAG大鼠模型，剩余20只健康大鼠作为对照组。取对照组、模型组大鼠各10只为对照1组、模型组，检测胃液分泌量、胃蛋白酶活性；血清胃泌素(GAS)、胃蛋白酶原(PG)Ⅰ、PGⅡ水平；PI3K、PTEN、Akt蛋白表达；另取10只对照组大鼠为对照2组，另40只模型大鼠分为阴性对照(NC)组，PI3K基因沉默(sh-PI3K)组，Akt基因沉默(sh-Akt)组、PTEN过表达(miR-PTEN)组，分别通过尾静脉注射空白载体、PI3K-shRNA、Akt-shRNA及PTEN慢病毒载体调节PI3K、PTEN、Akt表达。8 w后检测大鼠胃液分泌量、胃蛋白酶活性；血清GAS、PGⅠ、PGⅡ水平；Hp检测胃组织Hp阳性率；检测胃黏膜组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶(Ca...     

过表达miR-150通过PI3K/AKT信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨过表达miR-150通过磷脂酰肌醇-3-羟激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol 3-hydroxykinase/seronine kinase,PI3K/AKT)信号通路调控结直肠癌细胞凋亡的机制。方法将体外培养HT-29细胞分为空白对照组(转染空脂质体) NC组(转染mimic)和miR-150(转染miR-150 mimic);采用RT-PCR检测转染后细胞中miR-150 mRNA水平; CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡; WB法检测Cleaved caspase3、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。将对数生长期HT-29分为阴性对照组、miR-150组、LY294002组和LY294002+miR-150组,采用PI3K抑制剂验证LY294002在HT-29细胞凋亡中的作用。结果与空白对照组和NC组相比,miR-150组细胞中miR-150 mRNA水平明显升高(P 0. 05),24 h、48 h、72 h和96h的细胞抑制率明显升高(P 0. 05),细胞凋亡率明显升高(P 0. 05),Bcl-2/Bax、p-PI3K/PI3K和p-Akt/Akt蛋白的表达明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白的表达明显升高(P 0. 05);与阴性对照组相比,miR-150组和LY294002组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显降低(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显升高(P 0. 05);与miR-150组相比,LY294002+miR-150组p-Akt/Akt和Bcl-2/Bax蛋白表达均明显升高(P 0. 05),cleaved Caspase-3蛋白表达明显降低(P 0. 05)。结论 miR-150过表达可能通过负调控PI3K/AKT信号通路抑制人结直肠癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

微小RNA-451a通过巨噬细胞迁移抑制因子/腺苷酸激活蛋白激酶信号通路改善脓毒症大鼠肺损伤的作用机制研究

目的 探讨微小RNA-451a(miR-451a)通过巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)/腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路改善脓毒症大鼠肺损伤的作用机制。方法 采用随机数表法选取40只大鼠为造模组，其余10只大鼠为假手术组。造模组大鼠采用结扎盲肠法制备脓毒症模型后，再随机分为模型组、miR-451a agomir组、agomir-NC组和MIF抑制剂(ISO-1)组，每组各10只。miR-451a agomir组、agomir-NC组、ISO-1组分别由尾静脉注射2 mg/kg miR-451a agomir、2 mg/kg agomir-NC、1 mg/kg ISO-1干预，假手术组、模型组大鼠均注射等体积的生理盐水，每4 h注射1次、连续干预48 h。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血清和肺组织中miR-451a、MIF mRNA表达水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平。采用HE染色观察肺组织病理学变化。采用TUNEL染色观察肺组织细胞凋亡情况。采用Western blot检测肺组织MIF、AMPK、p-AMPK蛋白...     

miR-556-3p通过调控PTEN/AKT信号通路影响肝细胞癌的转移活性

目的 通过探索miR-556-3p在肝癌细胞发生发展过程中的作用机制,以期为肝细胞癌的预防和治疗提供一个新思路。方法 取肝细胞癌组织和癌旁肝组织,采用PCR法检测miR-556-3p水平,采用免疫组化法检测磷酸酯酶与张力蛋白同源物(PTEN)表达,采用荧光素酶法检测细胞作用靶点,应用miR-556-3p mimic、miR-556-3p NC、PTEN cDNA和PTEN siRNA转染HepG2细胞,采用Western blotting法检测PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达。采用CCK-8法检测细胞增殖能力,采用Transwell法检测细胞侵袭力,使用流式细胞术检测细胞凋亡。应用生物信息学法预测miR-556-3p对HepG2细胞PTEN/AKT通路的调控作用。结果 肝癌组织miR-556-3p水平显著低于癌旁组织(P<0.05),HepG2细胞miR-556-3p水平显著低于正常肝细胞(P<0.05);荧光素酶分析显示,PTEN是miR-556-3p的直接靶点;miR-556-3p处理的HepG2细胞增殖、侵袭和凋亡率显著低于miR NC处理组(P<0.05)...     

miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、ROS水平及PI3K/AKT信号通路的影响研究

目的:探索miR-182基因对心肌细胞增殖凋亡、活性氧簇(ROS)水平及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法:将H9C2心肌细胞分为对照组、NC组、H_2O_2组、miR-182mimics组和miR-182inhibitor组,各组细胞均培养24h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-182的mRNA表达;CCK8法检测各组细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡及ROS含量;Western bloting检测增殖相关蛋白ki67和细胞增殖核抗原(PCNA),凋亡相关蛋白含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)及PI3K/AKT信号通路磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达。结果:与对照组比较,H_2O_2组细胞miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9的表达均显著升高(均P0.05);与H_2O_2组比较,miR-182mimics组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖均显著升高,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著降低(均P0.05),miR-182inhibitor组miR-182、ki67、PCNA、PI3K、p-AKT表达及细胞增殖显著降低,细胞凋亡率、ROS含量及Caspase-3和Caspase-9表达均显著升高(均P0.05)。结论:H_2O_2刺激可降低H9C2心肌细胞miR-182基因表达,过表达miR-182可促进细胞增殖,降低细胞凋亡,激活PI3K/AKT信号通路,其中对细胞增殖凋亡的影响方式是降低ROS含量,上调ki67和PCNA表达,下调Caspase-3和Caspase-9表达;抑制miR-182表达的结果则相反。     

miR-29b通过PI3K/AKT信号通路抑制白血病细胞的增殖

目的探讨miR-29b对K562白血病细胞增殖与凋亡的影响及相关机制。方法利用Lipofectamine~(TM)2000脂质体将miR-29b mimics,miR-29b NC转入白血病细胞K562中,实时荧光定量PCR法检测miR-29b表达,MTT法检测细胞活力,EdU染色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹检测细胞中B淋巴细胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax),髓样细胞白血病(MCL)-1,细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4,CDK6蛋白表达及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)激活情况。结果与miR-29b NC组比较,miR-29b mimics组miR-29b表达上调(P<0.01),细胞活力及细胞增殖率降低(P<0.01),细胞周期阻滞在G1期(P<0.01),Bcl-2,MCL-1,CDK4,CDK6,PI3K及p-AKT表达量均明显下调(P<0.01),Bax表达量明显上调(P<0.01)。结论 miR-29b mimics能显著抑制白血病细胞K562增殖、诱导细胞凋亡,可能与阻断PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-33-5p对糖尿病肾脏疾病大鼠肾纤维化影响机制的研究

目的探讨miR-33-5p对DKD大鼠肾纤维化的影响机制。方法选取60只SD大鼠中未经任何处理的15只为正常对照(NC)组,其余45只建立DKD大鼠模型,造模成功后随机分为DKD模型组(DKD)、miR-33-5p拮抗剂组(miR-33-5p antagomir)及其阴性对照(antagomir-NC)组,每组各15只。antagomir-NC、miR-33-5p antagomir组尾静脉注射antagomir-NC或miR-33-5p antagomir,每周1次,持续12周。检测各组FPG、24 hUAlb、BUN和血肌酐(Scr)含量。Masson染色观察各组肾纤维化程度。qRT-PCR检测肾组织中miR-33-5p、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagenⅢ)mRNA表达水平。Western blot检测肾组织中TGF-β1、Smad同源物3(Smad3)、Smad2、p-Smad3、p-Smad2、平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)等蛋白表达水平。结果与DKD组比较,miR-33-5p antagomir组肾脏间质胶原纤维减少,24 hUAlb、FPG、BUN、Scr含量降低[(36.22±2.41)vs(19.24±1.25)mg/24 h,(29.15±1.53)vs(14.25±1.76)mmol/L,(18.33±3.16)vs(13.73±0.68)mmol/L,(60.17±2.37)vs(39.42±1.74)μmol/L,P0.05],肾组织中miR-33-5p、CollagenⅠmRNA、CollagenⅢmRNA降低[(5.19±0.20)vs(1.88±0.27),(3.44±0.21)vs(1.28±0.08),(4.71±0.32)vs(2.06±0.12),P0.05],TGF-β1、p-Smad3/Smad3、p-Smad2/Smad2、α-SMA等蛋白表达水平降低(P0.05)。antagomir-NC、DKD组各指标比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论抑制miR-33-5p表达可改善DKD大鼠肾纤维化,其作用机制可能与阻断TGF-β/Smad信号通路有关。