STAT3小分子化合物LLL-HS-1抑制人肺癌A549细胞增殖的研究

摘 要：［目的］探讨信号转导与转录因子3(STAT3)在肺癌细胞中的表达,并观察以其为靶点的化合物LLL-HS-1腹腔给药对肿瘤的抑制作用。［方法］ 皮下接种A549细胞成瘤1周后,15只小鼠随机3组,以低剂量（10mg/kg）和高剂量（20mg/kg）LLL-HS-1腹腔给药,对照组接受安慰剂。采用Western blot检测肺癌A549细胞蛋白中STAT3的表达及其磷酸化STAT3(p-STAT3)状态。最终以肿瘤体积大小为衡量药效学的指标。［结果］ 体外研究发现,化合物LLL-HS-1可以抑制STAT3 酪氨酸残基705 磷酸化,而且具有靶点特异性。持续3周给药,发现高和低剂量组对肿瘤的增长有明显的抑制效果,平均肿瘤体积分别为（336.8±60.5）mm3,（487.2±78.6）mm3,明显小于对照组（1989.5±214.3）mm3（F=33.8,P=0.0001;F=17.4,P=0.005）。对照组瘤重明显高于高和低剂量组,各组间比较,F=9.2,P=0.02。［结论］ 化合物LLL-HS-1对肺腺癌细胞有明显抑制作用,可能通过下调STAT3的磷酸化,诱导肿瘤细胞凋亡来实现。     

靛玉红甲肟对HT-29细胞STAT3和Bcl-2/Bax表达的影响

目的检测靛玉红甲肟（Indirubin-3’-monoxime,IRO）作用前后人结肠癌HT-29细胞转录活化因子3（STAT3）和凋亡调节基因Bcl-2/Bax表达变化,探讨IRO抑制HT-29细胞增殖的机制。方法MTT法检测不同浓度、不同作用时间IRO对HT-29细胞增殖活性的影响。RT-PCR法检测10μmol/L的IRO作用不同时间对HT-29细胞STAT3、Bcl-2和BaxmRNA表达的影响。结果IRO对HT-29细胞生长具有明显的增殖抑制作用,且表现为剂量依赖性和时间依赖性（P〈0.01）。RT-PCR检测发现,以10μmol/L的IRO处理HT-29细胞后,STAT3和Bcl-2表达显著下降,而Bax表达上升,不同时间组间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论IRO具有抑制人结肠癌HT-29细胞增殖的作用,其机制与下调STAT3、Bcl-2表达和升高Bax表达有关。     

NGX6基因联用5-Fu对人结肠癌细胞凋亡的影响

目的:探讨候选抑瘤基因NGX6联用5-Fu对结肠癌细胞凋亡的影响.方法:以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用作为实验组.以PDTC与5-Fu联用的HT-29细胞作为对照组.通过EMSA检测各组结肠癌HT-29细胞核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,利用MTT比色法检测各组细胞增殖的情况.吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)双染法显微镜观测以及PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.结果:稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞以及应用了PDTC的HT-29细胞NF-κB的激活均明显受到抑制;与5-Fu作用的HT-29细胞组比较,5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞后,HT-29细胞增殖受到明显抑制,5-Fu诱导HT-29细胞凋亡作用增强;与5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞的对照组比较,在诱导细胞凋亡以及抑制细胞增殖方面,稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用组和对照组所取得一致的效果,NGX6基因增强5-Fu对HT-29细胞增殖抑制的能力及诱导HT-29细胞凋亡的能力.结论:NGX6基因抑制了肿瘤细胞NF-κB的激活,具有增强5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其机制可能是抑制肿瘤细胞NF-κB的激活,NGX6基因对肿瘤的治疗及预后起积极作用.     

二烯丙基二硫对人结肠癌HT-29细胞周期的阻滞作用

[目的]探讨二烯丙基二硫(DADS)对人结肠癌HT-29细胞周期的阻滞作用及其分子机制.[方法]应用MTF法及细胞计数法测量HT-29细胞生长抑制,流式细胞术检测细胞时相分布,免疫细胞法测定p21、C-myc、Cyclin E表达.[结果]MTT法显示,不同浓度DADS作用HT-29细胞12、24、48h后,细胞生长抑制率及细胞群体倍增时间呈浓度、时间依赖性增加.流式细胞仪分析,30、60pmol/LL DADS阻滞HT29细胞在G1期,与对照组相比,可使G1期细胞增加约2倍,而90、120μmol/L DADS显著地将细胞阻滞在G2/M期.免疫细胞化学分析表明在细胞周期阻滞的同时有p21wafl蛋白表达上调,Cyclin E、C-myc蛋白表达下降.[结论]DADS对HT-29细胞的抑制增殖作用可能与细胞周期阻滞有关,DADS对HT-29细胞周期阻滞的分子机制可能与调节p21wafl、Cyclin E、C-myc表达相关.     

NDGA对HT-29结肠癌细胞生长抑制及对端粒酶表达影响的研究

目的:探讨脂氧合酶抑制剂NDGA在体外对结肠癌HT-29细胞株生长抑制、诱导凋亡,并对端粒酶表达的影响进行研究.方法:应用MTT法绘制生长曲线,倒置相差显微镜观察细胞形态变化;扫描电镜观察细胞超微结构变化,观察凋亡小体;RT-PCR检测端粒酶催化活性亚单位(hTERT)表达水平变化.结果:不同浓度NDGA处理HT-29结肠癌细胞,随着药物浓度加大,细胞形态变圆,体积缩小,从瓶壁上逐步脱落,肿瘤细胞生长抑制.应用扫描电镜可见凋亡小体形成.对照组结肠癌HT-29细胞hTERT mRNA呈阳性表达,随着药物浓度上升,hTERT mRNA表达水平逐步下降.结论:NDGA对结肠癌HT-29细胞具有抑制生长、诱导凋亡作用,并且具有剂量依赖效应.端粒酶参与其诱导凋亡的过程.     

双糖链蛋白聚糖对大肠癌细胞增殖抑制作用及其机制研究

[目的]探讨双糖链蛋白聚糖Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480增殖抑制作用及其机制[方法]采用Brd U法和细胞克隆形成实验检测Biglycan对大肠癌细胞HT-29和SW480的增殖能力影响;Hoechst染色检测细胞凋亡情况;Western Blot法检测加药处理前后细胞内细胞周期相关蛋白Cyclin D1、CyclinA、p21和p27表达变化.[结果]Biglycan呈剂量依赖性的抑制大肠癌细胞HT-29和SW480生长,100nmol/L Biglycan和50 nmol/L Biglycan浓度作用即可诱导HT-29 、SW480细胞凋亡. 经Biglycan处理后,细胞内CyclinD1和CyclinA表达出现下调趋势,p21和p27表达有所增加.[结论]Biglycan 可能抑制大肠癌细胞HT-29和SW480增殖,诱导细胞凋亡、下调CyclinDl和CyclinA表达和上调p21和p27表达.     

NDRG 1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的研究NDRG1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将重组真核表达质粒pEGFP-NDRG1-N3和空载体pEGFP-N3采用阳离子脂质体Lipofectamine转染HT-29人结肠癌细胞株,通过荧光倒置显微镜检测绿色荧光蛋白的表达。免疫组织化学染色检测转染前后HT-29细胞NDRG1的表达。并通过多种体外实验（流式细胞术法、24-transwell法、扫描电镜和透射电镜等）研究NDRG1对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力及表面和超微结构的影响。结果流式细胞术结果显示,与未转染组和转染pEGFP-N3空载体组比较,pEGFP-NDRG1-N3组细胞生长周期G0/G1期比例增高,S期明显减低,差异有统计学意义（P〈0.05）。细胞侵袭和迁移实验的结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组细胞与空载体和空白对照组比较,穿过微孔膜的细胞数均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。扫描和透射电镜结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组HT-29细胞生长增殖受抑制,细胞分化程度有增高趋势。结论 NDRG1基因可明显抑制HT-29人结肠癌细胞的体外增殖活性,降低其侵袭和迁移能力,促进其分化,提示其可作为一种候选的肿瘤转移抑制基因。     

复方苦参注射液对荷DMS153裸鼠移植瘤的抑瘤作用及STAT3、MMP9表达的影响

目的:观察复方苦参注射液(compound Kushen injection,CKI)对荷DMS153小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用,并初步探讨其作用机制与STAT3、MMP9表达的关系。方法:建立荷DMS153裸鼠移植瘤模型。实验分为对照组、CKI低中高剂量干预组、顺铂干预组,共5组,每组10只裸鼠。CKI低中高干预组每天予以不同剂量CKI干预［1.0、2.0和4.0 ml/（kg·d）］,顺铂（DDP）干预组予以顺铂干预（第1、3、5天给药4.8 mg/kg）,每天观察移植瘤生长情况,并测量肿瘤体积,各实验组裸鼠在第29天处死取材。qPCR和Western blotting法检测肿瘤中STAT3和MMP9的mRNA和蛋白表达水平。结果:相比于对照组,CKI不同剂量干预均能不同程度抑制肿瘤的生长（P<0.05）,其中高剂量组抑制作用最为明显;与对照组相比,DDP干预亦能够显著抑制移植瘤生长（P<0.05）,与CKI高剂量干预组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,CKI不同剂量干预均能不同程度抑制移植瘤中STAT3和MMP9的mRNA转录和蛋白表达水平（P<0.05）,其中高剂量组抑制最为显著;CKI不同剂量干预组STAT3和MMP9的mRNA转录呈显著正相关（Pearson相关系数为0.912>0,P=0.044＜0.05）;CKI不同剂量干预组STAT3和MMP9的蛋白表达水平均呈显著正相关（Pearson相关系数为0.990>0,P=0.005＜0.05）;与对照组相比,DDP干预亦能够显著抑制移植瘤组织中STAT3和MMP9的mRNA转录和蛋白表达（P<0.05）,与CKI高剂量干预组相比差异亦具有统计学意义（P<0.05）。结论:CKI能够有效抑制荷DMS153小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长,且高剂量组抑瘤作用较优;CKI抗小细胞肺癌的作用机制可能与其调控STAT3和MMP9的基因和蛋白表达有关。     

盐酸普鲁卡因对人结肠癌HT-29细胞的作用及其机制

目的探讨盐酸普鲁卡因对人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用及其机制。方法 应用不同浓度（0~10mmol/L）盐酸普鲁卡因处理HT-29细胞,通过倒置显微镜观察细胞形态学改变、四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率、流式细胞术（FCM）观察细胞周期变化。结果倒置显微镜观察盐酸普鲁卡因处理后的HT-29细胞呈现缩小、皱缩、空泡、脱壁等增殖变慢的形态学特征;MTT结果分析表明盐酸普鲁卡因能显著抑制HT-29细胞增殖,其抑制率呈药物浓度及时间依赖性;FCM结果显示盐酸普鲁卡因可以使HT-29细胞的G0/G1期延长,S期缩短。结论盐酸普鲁卡因能够使HT-29细胞的生长阻滞在G0/G1期,从而显著抑制HT-29细胞的增殖,并且具有剂量、时间依赖效应。     

红参含药血清对人乳腺癌MCF?鄄7细胞增殖和细胞周期的影响

[目的]研究红参含药血清对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响.[方法]采用MTT法观察红参含药血清对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖活性.流式细胞术检测人乳腺癌细胞MCF-7的细胞周期、细胞凋亡率.[结果]红参低剂量含药血清对MCF-7细胞有促增殖作用,24、48、72h时增殖率分别为105.9％、115.9％和121.5％.而高剂量对MCF-7细胞表现为抑制作用.红参低剂量组使MCF-7细胞S期DNA含量比例明显增多,高剂量组使细胞周期阻滞在G0/G1期,并能够诱导细胞凋亡,凋亡率达26.86％.[结论]红参含药血清在高剂量时抑制MCF-7细胞生长,低剂量时对细胞具有促增殖作用.