环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞A549的增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨环状RNA circ0004771对肺腺癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响及其机制。方法 培养肺腺癌A549细胞,分为阴性对照（si-NC）组及circ0004771小干扰RNA（siRNA）组（si-circ0004771组）,将si-NC和circ0004771 siRNA分别转染入相应组A549细胞中。si-NC组和si-circ0004771组细胞转染后,通过实时荧光定量聚合酶链反应检测2组细胞circ0004771、miR-339-5p的表达水平,通过细胞计数试剂盒法检测细胞活力,通过EdU实验检测2组细胞增殖能力,通过Transwell小室实验检测2组细胞迁移和侵袭能力。结果 si-NC组和si-circ0004771组A549细胞circ0004771基因的相对表达水平分别为3.07±0.07和0.68±0.04,miR-339-5p相对表达水平分别为1.14±0.13和2.33±0.07,差异均有统计学意义（t=51.34、13.96,P值均<0.001）。si-NC组和si-circ0004771组A549细胞在培养前（0 h）和培养后24、48 h的吸光度值分别为0.21±0.02、0.35±0.05、0.65±0.04和0.21±0.01、0.33±0.04、0.59±0.05,差异均无统计学意义（P值均>0.05）;而在培养后72 h si-circ0004771组吸光度为0.92±0.15, 小于si-NC组的1.32±0.04,差异有统计学意义（t=4.46,P=0.011）。EdU实验中,si-circ0004771组细胞阳性率为47.97%±4.68%,低于si-NC组的58.61%±2.15%,差异有统计学意义（t=3.58,P=0.023）。转染后si-circ0004771组的细胞迁移率、侵袭率分别为52.27%±2.92%、55.33%±6.29%,均低于si-NC组的99.79%±4.23%、98.67%±5.72%,差异均有统计学意义（t=16.26、8.83,P值均<0.001）。结论 下调肺腺癌A549细胞circ0004771的表达水平,可以降低A549细胞的活力和增殖能力,可抑制A549细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与上调miR-339-5p的表达有关。     

TPX2对人肺癌细胞增殖、凋亡及cleavedcaspase-3表达的影响

目的 探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)对人肺癌细胞增殖、凋亡及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved caspase-3)表达影响。方法 培养人肺癌细胞A549,分为Control组(不进行细胞转染)、siRNA-NC组(细胞转染TPX2 siRNA control)、TPX2 siRNA组(细胞转染TPX2 siRNA),采用实时荧光定量PCR (qPCR)和Western blot检测TPX2 siRNA的转染效果。取转染后各组细胞,采用噻唑蓝检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved caspase-3蛋白表达情况。结果 TPX2 siRNA组中,TPX2 mRNA、蛋白水平和细胞光密度(OD)值均明显低于Control组和siRNA-NC组,细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3蛋白表达水平均明显高于Control组和siRNA-NC组,差异均有统计学意义(P值均<0.05);而siRNA-NC组中,TPX2 mRNA、蛋白水平及细胞OD值、细胞凋亡率、细胞中cleaved caspase-3与Control组比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。结论TPX2 siRNA能够干扰人肺癌细胞A549中TPX2的表达。下调TPX2的表达能够抑制人肺癌细胞A549增殖,促进caspase-3活化,促进人肺癌细胞A549的凋亡。     

小干扰RNA沉默hPTTG1基因对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的: 利用RNA干扰技术沉默人垂体瘤转化基因1( hPTTG1 )表达,观察卵巢癌细胞增殖能力和细胞凋亡的改变并探讨分子机制。方法: 化学合成靶定 hPTTG1 的小干扰RNA(siRNA)转染体外培养的A2780细胞,RT-PCR和Western blotting检测 hPTTG1 及c-myc表达水平;MTT法和 -TdR掺入实验检测 hPTTG1 对细胞增殖的影响;annexin V/PI染色流式细胞术和TUNEL法测定各组细胞凋亡情况。结果: hPTTG1 siRNA转染组 hPTTG1 mRNA和蛋白表达下降,抑制率分别为70.5%±3.9%和63.8%±4.5%;转染 hPTTG1 siRNA 24 h细胞吸光度值开始下降,48 h抑制效果最明显,抑制率为42.9%±5.2%;转染 hPTTG1 siRNA后细胞 -TdR放射性计数明显低于空白组和阴性对照组; hPTTG1 siRNA干扰组细胞存活率下降,细胞凋亡率和坏死率均增加;TUNEL染色分析结果可见 hPTTG1 siRNA干扰组凋亡指数明显高于空白组和阴性对照组; hPTTG1 干扰后c-myc mRNA和蛋白表达均下调。结论: hPTTG1 siRNA通过下调c-myc表达抑制A2780细胞增殖,诱导细胞凋亡, hPTTG1 可作为卵巢癌基因治疗的候选靶点。     

miRNA-210对肺癌细胞株A549增殖及凋亡的作用

目的探讨miRNA-210是否通过调控STAT3表达来影响肺癌细胞株A549增殖及凋亡。方法选用肺癌细胞株A549,通过干扰慢病毒敲低miRNA-210表达水平,RT-PCR检测miRNA-210、STAT3基因表达水平,Western blot检测STAT3蛋白水平,CCK-8检测A549细胞增殖水平。结果肺癌A549细胞中miRNA-210、STAT3表达上调(P0.01);敲低miRNA-210后,STAT3表达水平明显降低(P0.01),Bax与Bcl-2比值明显升高(P0.01),而A549细胞增殖被显著抑制(P0.01)。结论 miRNA-210可能通过调控STAT3表达从而影响肺癌细胞A549增殖和凋亡。     

雷公藤甲素对非小细胞肺癌细胞系A549增殖的抑制和凋亡的诱导

目的探讨雷公藤甲素(TP)通过调控趋化因子受体4(CXCR4)基因表达对人非小细胞肺癌(A549)细胞增殖和凋亡的影响。方法实验分为4组:对照组、TP组(100 nm/L TP处理细胞)、CXCR4+TP组(转染质粒及TP处理细胞)和NC+TP组(转染空载质粒及TP处理细胞)。RT-qPCR和Western blot检测CXCR4表达以及转染效果;MTT法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡;Western blot检测增殖及凋亡相关蛋白表达。结果雷公藤甲素能够抑制A549细胞中CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。雷公藤甲素可抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡(P<0. 05)。转染pc DNA-CXCR4能够上调CXCR4 mRNA和蛋白的表达(P<0. 05)。上调CXCR4的表达能够部分逆转雷公藤甲素对A549细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用(P<0. 05)。结论雷公藤甲素可能通过下调CXCR4的表达抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

miR23a促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制

目的研究miR23a通过JNK信号通路促进肺癌细胞株A549细胞凋亡蛋白Caspase-3表达的分子机制。方法利用脂质体转染试剂Lipo2000将mi23a转染到肺癌A549细胞,实时荧光定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)法检测阴性对照(NC)组和转染mi23a组细胞中miR23a的表达;划痕实验检测肺癌细胞株A549的迁移能力;Western blotting法检测JNK通路中p-JNK水平的变化;RT-PCR法和Western blotting检测肺癌细胞株A549转染miR23a后细胞凋亡蛋白Caspase-3的mRNA和蛋白质水平的表达。结果 Real-time PCR结果显示,转染miR23a组其miR23a表达水平显著高于阴性对照(NC)组(P0.05),A549细胞转染miR23a后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P0.05);Western blotting结果显示,转染miR23a组中p-JNK和Caspase-3的水平均有明显升高(P0.05)。结论 miR23a可通过活化JNK信号通路,进而促进肺癌A549细胞中细胞凋亡蛋白Caspase-3的表达,从而抑制其肿瘤细胞的增殖和扩散能力。     

超活化血小板裂解液对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞影响的实验研究

目的 探讨超活化血小板裂解液(sPL)对类风湿关节炎患者成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)的影响。方法 选取哈尔滨医科大学附属第一医院2018年1月—2019年3月6例类风湿关节炎患者作为研究对象,其中男3例、女3例,年龄26～49岁、中位年龄33岁,受累关节功能分级均为Ⅱ级。收集患者静脉血标本,先进行两次离心分离获得富血小板血浆(PRP);再加入0.08 mmol/L CaCl₂, 37 ℃孵育激活血小板;然后经过冷冻、融化、离心、过滤除菌、去除纤维蛋白原,获得sPL。培养RA-FLS,分为对照组和2.5%、5%、10% sPL组,分别与含有0、2.5%、5%、10% sPL的培养液培养48 h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞中炎症因子白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-1β的浓度;细胞计数试剂盒(CCK)-8法测定各组细胞增殖活性;流式细胞术测定各组细胞的凋亡率;体外小管生成实验检测各组细胞血管生成能力;Transwell实验检测各组细胞迁移能力和侵袭能力;Western blot法测定各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP-9、血管内皮生长因子(VEGF)和VEGF受体-2 (VEGFR2)的表达情况。结果 (1)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组细胞培养基中IL-6浓度分别为(80.18±11.67)、(59.94±9.50)、(46.60±8.04)、(60.67±9.24)pg/mL,TNF-α浓度分别为(70.75±9.14)、(54.56±7.81)、(43.27±6.30)、(53.99±8.60)pg/mL,IL-1β浓度分别为(64.18±9.90)、(46.97±8.79)、(36.28±7.44)、(47.66±8.15)pg/mL,组间比较差异均有统计学意义(F=12.186、11.934、10.709,P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组炎症因子表达水平低于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(2)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS增殖率分别为87.33%±10.98%、76.17%±8.18%、60.83%±7.99%、75.83%±8.45%,细胞凋亡率分别为6.51%±1.16%、16.23%±2.75%、29.69%±3.80%、16.37%±2.29%,小管形成数分别为(41.00±7.55)、(26.67±4.16)、(11.67±3.51)、(26.00±6.56)个,迁移细胞数目分别为(443.00±54.06)、(282.33±31.66)、(154.64±23.18)、(292.00±35.03)个,侵袭细胞数目分别为(243.30±27.39)、(67.00±12.53)、(22.33±8.74)、(79.33±14.98)个,组间比较差异均有统计学意义(F=8.795、38.095、34.278、29.352、94.772, P值均<0.05);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组RA-FLS细胞增殖率、血管管腔形成数量、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均低于对照组,细胞凋亡率均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组中细胞增殖率、小管形成数、迁移细胞数目和侵袭细胞数目均明显低于2.5% sPL组和10% sPL组,细胞凋亡率则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。(3)对照组、2.5%sPL组、5%sPL组、10%sPL组RA-FLS PCNA、CyclinD1、Bax、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量比较,差异均有统计学意义(P值均＜0.01);2.5%sPL组、5%sPL组、10% sPL组细胞中PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于对照组,Bax蛋白相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);5% sPL组PCNA、CyclinD1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9、VEGF和VEGFR2蛋白相对表达量均低于2.5% sPL组和10% sPL组,而Bax蛋白相对表达量则高于2.5% sPL组和10% sPL组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 sPL对RA-FLS的增殖、迁移、侵袭、血管生成以及炎症因子的产生具有抑制作用,对RA-FLS凋亡具有促进作用,且SPL对RA-FLS的生长抑制效果与SPL浓度有关。     

miRNA-126对肺癌A549细胞的增殖、迁移、侵袭及EGFR/AKT/mTOR信号通路的影响

 目的: 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-126对肺癌A549细胞功能的影响及相关的作用机制。方法: 利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-126转染入肺癌A549细胞中,采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-126的表达;MTT法检测细胞活力;台盼蓝拒染实验检测细胞存活数目;细胞集落培养实验观察转染后细胞集落形成;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blot法检测EGFR/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果: Real-time PCR结果显示,转染miRNA-126组细胞中的miRNA-126表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P<0.01),而阴性对照组与空白对照组无显著变化;A549细胞转染miRNA-126模拟物后,细胞增殖和集落形成能力均呈明显下降(P<0.01);肺癌细胞的迁移和侵袭能力也受到明显抑制(P<0.01);Western blot结果显示,转染miRNA-126组细胞中EGFR/AKT/mTOR通路相关蛋白p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的水平均有明显降低(P<0.01)。结论: miRNA-126可以显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-AKT和p-mTOR的蛋白水平,进而可能抑制其细胞增殖和迁移侵袭能力。     

集缩素NCAPG对非小细胞肺癌增殖和凋亡的影响及其可能机制

目的 探讨非小细胞肺癌细胞中集缩素NCAPG表达对A549与H1299细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 构建shRNA-NCAPG慢病毒载体转染A549及NCI-H1299细胞,实时定量PCR法(qRT-PCR)及免疫印迹法(Western blot)验证两种细胞中NCAPG表达情况.应用CCK-8方法检测对照组及下调组的细胞增殖差异,明确NCAPG表达对细胞增殖的抑制作用.Annexin V/PI双染法流式细胞术检测两组细胞中早期凋亡及晚期凋亡细胞比例.Western blot法比较两组细胞中Caspase-3、Bax及Bcl-2的表达水平.结果 shRNA-NCAPG转染组细胞的NCAPG表达量低于对照组.下调NCAPG表达抑制A549及NCI-H1299细胞增殖,增加早期凋亡及晚期细胞凋亡比例,增加肺癌细胞促凋亡相关蛋白Caspase-3及Bax的表达、抑制Bcl-2蛋白表达.结论 下调NCAPG表达诱导非小细胞肺癌A549及H1299细胞增殖,通过线粒体通路抑制其细胞凋亡.     

RNA干扰抑制乙酰肝素酶对肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 探讨抑制乙酰肝素酶表达对人肺腺癌细胞A549增殖、侵袭和凋亡的影响.方法 构建靶向人乙酰肝素酶基因短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达质粒(pshRNA-Hpa),用脂质体将其转入A549细胞,建立稳定转染细胞株系,经逆转录.PCR和Western blot法检测转染效率后,分别用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、Transwell侵袭实验和流式细胞术(AnnexinV-FITC/PI双染法)检测其对A549细胞增殖、侵袭和凋亡的影响.采用Western blot法检测转染后磷酸化蛋白激酶B(PKB/Akt-Ser473)的表达.结果 转染pshRNA-Hpa的A549细胞乙酰肝素酶mRNA及蛋白表达明显低于未处理A549细胞,抑制率分别为54.09%和48.26%,细胞增殖速度减缓,侵袭能力降低,流式细胞术显示早期细胞凋亡率达(12.53±0.34)%,较空白对照组、空载体转染细胞组和阴性对照组明显增加(P＜0.01).同阴性对照质粒相比,转染pshRNA-Hpa的A549细胞Akt-Ser473的磷酸化水平降低52.15%.结论 靶向乙酰肝素酶重组shRNA质粒pshRNA-Hpa能有效抑制A549细胞乙酰肝素酶的表达,并可能通过下调磷酸化蛋白激酶B途径抑制细胞的增殖侵袭、促进细胞的凋亡.     

长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制

目的 探讨长链非编码RNA KLHL7-DT对人退变髓核细胞增殖和凋亡的影响及其相关机制。方法 选取2018年1月—2019年10月南京江北医院骨科脊柱骨折患者手术切除的正常椎间盘标本18例,其中男11例、女7例,年龄为22~46 （38.3±4.3）岁,PfirrmannⅠ级6例、Ⅱ级12例。取椎间盘标本常规分离、培养髓核细胞,使用10 ng/mL IL-1β处理髓核细胞获得退变髓核细胞。将退变髓核细胞分为沉默对照组、KLHL7-DT沉默组、过表达对照组、KLHL7-DT过表达组。4组细胞分别对应转染沉默对照序列、siRNA-KLHL7-DT沉默序列、过表达对照序列、KLHL7-DT过表达序列。取转染后4组退变髓核细胞采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷（EdU）法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测聚集蛋白聚糖（Aggrecan）、Ⅱ型胶原（Col Ⅱ）蛋白的表达情况。结果 （1）KLHL7-DT过表达组EdU染色阳性细胞/DAPI染色阳性比值（0.147±0.002）低于过表达对照组（0.203±0.007）,而KLHL7-DT沉默组比值（0.428±0.050）高于沉默对照组（0.240±0.032）,差异均有统计学意义（t=14.25、-5.44,P值均<0.05）。（2）KLHL7-DT过表达组细胞凋亡率（19.01%±0.41%）高于过表达对照组（14.38%±0.31%）,KLHL7-DT沉默组细胞凋亡率（16.08%±0.59%）低于沉默对照组（17.42%±0.36%）,差异均有统计学意义（t=15.69、3.36,P值均<0.05）。（3）Western blot结果显示,KLHL7-DT过表达组细胞Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为0.34±0.29、0.57±0.11）均低于过表达对照组（1.00±0.22、1.05±0.10）,KLHL7-DT沉默组Aggrecan和Col Ⅱ蛋白的相对表达量（分别为1.77±0.14、1.63±0.12）均高于沉默对照组（1.10±0.18、0.98±0.08）,差异均有统计学意义（t=3.10、5.54、-5.05、-7.66,P值均<0.05）。结论 上调KLHL7-DT的表达可抑制退变髓核细胞的增殖,促进退变髓核细胞的凋亡,其机制可能是通过调节细胞外基质Aggrecan、Col Ⅱ蛋白的合成,进而参与椎间盘退变的发展。     

miRNA-181a在人肺腺癌细胞中的表达及对细胞功能的影响

目的:研究微小RNA-181a(mi RNA-181a)在不同人肺腺癌细胞中的表达及其转染人肺腺癌耐药细胞A549/DDP后对其细胞功能的影响及机制。方法:利用实时荧光定量PCR方法检测mi RNA-181a在人正常肺上皮细胞系BEAS-2B、人肺腺癌细胞系A549、人肺腺癌耐药细胞系A549/DDP中的表达;利用p Genesil-mi RNA-181a真核表达质粒转染A549/DDP细胞,同时设置未转染组和空载组;分别采用实时荧光定量PCR、MTT法、流式细胞术、Transwell实验以及Western blot法检测mi RNA-181a转染前后的表达情况、对A549/DDP细胞活力、细胞周期、细胞侵袭能力和顺铂(DDP)作用下的细胞生长抑制率、细胞凋亡率的影响以及对A549/DDP细胞中mi RNA-181a的靶基因bcl-2和p53蛋白表达的影响。结果:mi RNA-181a在A549和A549/DDP中的表达量显著低于BEAS-2B(P0.05),且在A549/DDP中表达量最低;mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后其表达显著升高(P0.05)且能够抑制A549/DDP细胞活力、细胞周期和细胞侵袭能力(P0.05),同时升高DDP作用下A549/DDP细胞的生长抑制率和细胞凋亡率(P0.05);mi RNA-181a转染A549/DDP细胞后抑制Bcl-2蛋白的表达而促进P53蛋白的表达(P0.05)。结论:mi RNA-181a可能参与了肺腺癌的发生发展,mi RNA-181a可作为人肺腺癌治疗的新靶点。     

miRNA-24对内皮型一氧化氮合酶表达调节及血管内皮细胞增殖的影响

 目的：为进一步探讨miRNA-24是否参与内皮型一氧化氮合酶（eNOS）表达的调控及其对血管内皮细胞增殖的影响,本研究构建miRNA-24高表达质粒,并用脂质体将其导入人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,观察miRNA-24对eNOS表达及HUVECs增殖的影响。方法：用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,RT-PCR、免疫组织化学和Western blotting检测eNOS与Sp1转录因子mRNA和蛋白表达水平。结果：与对照组比较, miRNA-24高表达组细胞增殖减慢41.97 %（0.47±0.04 vs 0.81±0.03, P<0.01）,eNOS mRNA降低44.8%（0.48±0.01 vs 0.87±0.03,P<0.05）,蛋白表达减少71.92%（0.16±0.06 vs 0.57±0.08,P<0.05）;同时Sp1 mRNA降低53.00%（0.45±0.02 vs 0.93±0.01,P<0.05）,其蛋白质表达量也相应减少62.31%（0.13±0.07 vs 0.31±0.09,P<0.05）。miRNA-24抑制组中,上述指标比对照组降低,但比miRNA-24高表达组明显升高。结论：miRNA-24高表达明显抑制HUVECs的增殖及eNOS的表达;Sp1可能是参与miRNA-24调控eNOS表达的重要因素之一。     

miRNA-132通过Hedgehog信号通路对肝癌细胞凋亡的作用机制

目的：探究miRNA-132（miR-132）通过Hedgehog 信号通路对肝细胞癌细胞凋亡的机制。方法：用miR- 132 类似物转染人肝癌HepG2 细胞,将样本分为空白组（ 无转染HepG2）、NC组（HepG2 转染miR-132-NC）、 YJ 组（HepG2 转染miR-132 mimic）。通过qRT-PCR 检测miR-132 在HepG2 细胞中的表达量,采用CCK-8 法、流 式细胞仪、Transwell 小室、免疫印迹检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力以及Shh 蛋白表达。结果：PCR检测结果显示, 3 组对比,YJ 组HepG2 细胞中miR-132 表达量最高,说明转染成功;CCK-8 检测结果显示,YJ 组HepG2 细胞增 殖数量最低,空白组HepG2 细胞的增殖与NC组相似,皆高于YJ 组;流式细胞检测结果显示,与NC组及空白组 比较,YJ 组HepG2 细胞凋亡数量最多 ;Transwell 小室检测结果显示, YJ 组细胞侵袭数量与空白组和NC组相比 明显降低,空白组细胞侵袭数量与NC组相比数据接近;免疫印迹检测结果显示,YJ 组Shh 蛋白相对表达量与空 白组和NC组比明显降低。结论：过表达miR-132 降低Hedgehog 信号通路,可促进人肝癌HepG2 细胞凋亡作用。     

miRNA-7通过EGFR/PI3K/Akt通路抑制鼻咽癌5-8F细胞增殖

 目的:探讨过表达微小RNA（microRNA-7,miRNA-7）对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）5-8F细胞增殖能力的抑制作用及其与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,也称Akt）通路的关联情况。方法:利用脂质体试剂Lipofectamine 2000将miRNA-7模拟物转染入人鼻咽癌5-8F细胞中;采用real-time PCR法检测转染后各组细胞中miRNA-7的表达情况;CCK-8法检测细胞增殖能力变化;细胞平板克隆形成实验观察转染后细胞克隆能力变化情况;real-time PCR法检测EGFR/PI3K/Akt通路各mRNA表达水平的变化;Western blotting法检测EGFR/PI3K/AKT通路各蛋白表达水平的变化。结果:real-time PCR结果显示,转染miRNA-7模拟物组细胞中的miRNA-7表达水平显著高于无关序列组和空白对照组（P<0.01）;5-8F细胞转染miRNA-7模拟物后,细胞增殖和平板克隆能力均呈明显下降（P<0.01）;real-time PCR及Western blotting结果显示,转染组的5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路中各主要成员的mRNA及相应蛋白表达水平均有明显降低(P<0.01)。结论: 过表达miRNA-7可以显著降低鼻咽癌5-8F细胞中EGFR/PI3K/Akt通路各主要成员mRNA和蛋白的表达水平,进而显著抑制其增殖和平板克隆形成能力。     

miR-26-p 在甲状腺癌中的表达及其功能研究

目的:探讨微小分子核糖核酸(miR)-126-3p 在甲状腺癌中的表达,探讨其生物学功能。方法:RT-PCR 检测35 例甲状腺癌、癌旁组织以及三种甲状腺癌细胞系(TPC-1、FTC-133、8505C)中miR-126-3p 表达量;将甲状腺癌细胞分为类似物组(mimic)和对照组(NC),分别转染miR-126-3p mimic 及阴性对照质粒。两组细胞增殖、凋亡分别采用Brdu-ELISA 法和流式细胞术检测, Transwell 小室法检测两组细胞迁移和侵袭。结果:35 例癌组织中miR-126-3p 相对表达量显著低于癌旁组织(0.384±0.28 vs 0.981±0.039,t =10.291,P<0.05);在三种甲状腺癌细胞中,TPC-1 细胞中miR-126-3p 相对表达量最低;与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 增殖受到显著的抑制,第3 天两组间开始表现出统计学差异(P<0.05);与NC 组比较,mimic 组甲状腺癌细胞TPC-1 凋亡显著增加[(15.32±3.20)% vs (8.12±1.17)%,t = 4.623,P<0.05],迁移受到抑制(26.68±4.48 vs 82.21±3.65,t=17.789,P<0.05),侵袭受到抑制(12.28±1.03 vs 34.43±2.10,t =8.103,P<0.05)。结论:甲状腺癌组织中miR-126-3p 表达降低,上调miR-126-3p 表达可以显著抑制甲状腺癌细胞增殖、促进凋亡、抑制迁移和侵袭,miR- 126-3p 可能作为一种抑癌基因在甲状腺癌中发挥重要的生物学功能。