蚤休薯蓣皂苷经Notch1/NF-κB p65信号转导途径抑制巨噬细胞损伤

目的研究蚤休薯蓣皂苷(rhizome dioscin,RD)对氧化损伤的小鼠巨噬细胞(Ana-1)炎症反应的影响及与Notch1/NF-κB p65信号转导途径的关系,探讨RD抗炎性效应的分子机制。方法体外培养Ana-1,RD 3个浓度预处理,加入氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导氧化损伤,MTT比色法检测细胞存活率,ELISA测定培养液中白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量、流式细胞术Annexin V/PI双染色以及激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡率及凋亡的细胞形态变化,Western blot检测Notch1、NF-κB p65的表达。结果与正常对照组相比,经ox-LDL损伤后,细胞存活率降低(P<0.05、P<0.01)、而IL-6和TNF-α的释放量增加(P<0.05、P<0.01)、凋亡细胞数目增多并呈现典型的凋亡形态学改变、Notch1和NF-κB p65的表达与正常组比较均升高。而RD各剂量组预处理能提高细胞存活率(P<0.05、P<0.01)、降低细胞上清液IL-6和TNF-α含量(P<0.05、P<0.01)、降低细胞凋亡率、改善细胞的凋亡形态以及Notch1和NF-κB p65的表达。结论 RD可抑制ox-LDL炎性损伤和凋亡,提高细胞存活率,其作用机制可能是通过激活Notch1NF-κB p65途径而实现的。     

Toll样受体4和9基因在宫颈病变的表达和意义

目的探讨Toll样受体4(TLR4)和Toll样受体9(TLR9)基因在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变(CIN)组织和宫颈癌组织中的表达及意义。方法采用qRT-PCR法检测正常宫颈、CIN及宫颈癌各30例组织中TLR4和TLR9基因表达水平及其下游分子NF-κB和IFN-γ表达。分析TLR4和TLR9基因表达与NF-κB和IFN-γ表达的相关性。结果CIN、宫颈癌组织的TLR4、TLR9、NF-κB和IFN-γ表达水平均高于正常宫颈(P<0.01或P<0.05),且宫颈癌组织的TLR4、TLR9、NF-κB和IFN-γ表达水平均高于CIN组织(P<0.01)。TLR4与NF-κB、IFN-γ表达呈正相关(r=0.905、r=0.873,P<0.01),TLR9与NF-κB、IFN-γ表达亦呈正相关(r=0.953、r=0.976,P<0.01)。结论 TLR4和TLR9可能参与宫颈病变的恶性转变过程。     

阿司匹林诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡及机制

目的:探讨阿司匹林对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的作用及机制。方法:体外培养HeLa细胞,分别以0.5,1.0,5.0mmol.L-1阿司匹林干预。采用Annexin V-FITC/PI凋亡试剂盒检测凋亡;碘化丙锭(PI)染色法检测细胞周期;Western-blot法检测NF-κB p65蛋白表达。结果:0.5,1.0,5.0mmol.L-1的阿司匹林均能使Hela细胞凋亡率明显增加,S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,细胞中NF-κB p65蛋白表达水平明显下降,且上述作用均呈剂量依赖性。结论:阿司匹林在体外可以通过下调NF-κB p65蛋白表达,影响细胞周期,诱导Hela细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA对EA.hy926细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响

目的观察丹参酮ⅡA对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926 TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养人脐静脉细胞融合细胞EA.hy926;观察丹参酮ⅡA低、中、高剂量组对LPS刺激EA.hy926细胞的保护作用,RT-PCR和Western bolt法检测TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA和蛋白表达。结果 LPS刺激组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA和蛋白表达较正常组明显增加(P<0.05)。与LPS刺激组相比,丹参酮ⅡA低剂量组TLR4、NF-κB、TNF-αmRNA及蛋白表达无明显差异,而丹参酮ⅡA中、高剂量组TLR4、NF-κB和TNF-αmRNA及蛋白质表达明显降低(P<0.05)。结论丹参酮ⅡA抗AS的作用机制之一是通过干预TLR4/NF-κB信号通路来实现的。     

蟾酥活性成分协调索拉非尼通过下调Akt/NF-κB信号途径抑制肝癌HepG2细胞生长

目的探讨蟾酥活性成分蟾蜍灵和华蟾毒配基协调索拉非尼抑制肝癌HepG2细胞生长的机制。方法 MTT法检测HepG2细胞经药物作用12、24、48 h后的增殖活性;Hoechst 33342荧光染色检测细胞形态学变化;流式细胞仪检测药物对HepG2细胞周期的影响;Western blot检测Akt、p-Akt(Ser473)、IκB、NF-κB、p-NF-κB p65、Bcl-2、Bax、cyclin A、PCNA蛋白表达水平。结果蟾蜍灵、华蟾毒配基和索拉非尼作用组均能抑制HepG 2细胞增殖,且药物联合作用组的增殖抑制率明显高于单独药物作用组,呈时间依赖性,用金氏公式得出在24 h具有协同作用(P<0.01);荧光染色结果显示,HepG 2细胞经药物处理24 h后,细胞呈现出核染色质凝集的凋亡形态特征;细胞周期检测结果显示,索拉非尼作用组使细胞周期阻滞于G0/G1期(P<0.01),蟾蜍灵、华蟾毒配基作用组使细胞周期阻滞于S期(P<0.01),药物联合作用组使细胞周期阻滞于S期(P<0.01);Western blot结果显示,蟾蜍灵、华蟾毒配基和索拉非尼单独药物作用组和联合作用组Akt、NF-κB总蛋白表达均无明显变化,p-Akt(Ser473)、p-NF-κB p65、Bcl-2、cyclin A、PCNA蛋白表达水平逐渐降低,联合作用组比单独药物作用组降低更为明显(P<0.01)。IκB、Bax蛋白表达水平逐渐升高,联合作用组比单独药物作用组升高更加明显(P<0.01)。结论蟾酥活性成分蟾蜍灵和华蟾毒配基协调索拉非尼通过下调Akt/NF-κB信号通路,抑制肝癌HepG 2细胞增殖。     

H_2O_2预处理对NF-κB的激活作用特征及其细胞保护作用

目的探讨H2O2预处理对核转录因子-κB(NF-κB)的激活作用,并观察NF-κB在H2O2预处理诱导的适应性细胞保护中的作用。方法在PC12细胞建立H2O2预处理对抗高浓度H2O2诱导细胞凋亡的实验模型,分组如下:(1)空白对照组;(2)预处理组;(3)损伤组;(4)预处理+损伤组;(5)TPCK+预处理+损伤组;(6)TPCK组。应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率,甲氮甲唑蓝(MTT)法检测细胞存活率,免疫印迹法(Westernblot)测定NF-κB的表达水平,电泳迁移实验(EMSA)检测NF-κBDNA结合活性。结果H2O2预处理PC12细胞上调NF-κBp65的表达,增强DNA结合活性,并能明显地增加高浓度H2O2引起的NF-κBp65的表达(与损伤组比较,P<0.01)。H2O2预处理能使PC12细胞对抗高浓度H2O2引起的损伤,提高细胞存活率,降低细胞凋亡率(与损伤组比较,P<0.01)。NF-κB抑制剂甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮(TPCK)可拮抗H2O2预处理对NF-κBp65的激活作用,并减弱H2O2预处理诱导的适应性细胞保护作用(与预处理+损伤组比较,P<0.01)。结论H2O2预处理对NF-κB的激活作用可能是其引起的适应性细胞保护机制之一。     

Tacrolimus对糖尿病大鼠肾脏巨噬细胞Toll样受体2与4表达的影响

目的探讨Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)2和TLR4在糖尿病大鼠肾脏巨噬细胞的表达水平及tacrolimus对其的调节作用。方法将40只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、tacrolimus(0.5、1.0 mg.kg-1)给药组,通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型,4周后测大鼠血糖、相对肾质量、尿白蛋白排泄率(UAER),应用免疫组化单染及双染方法检测肾组织ED-1+细胞、NF-κB-p-p65+细胞及ED-1+TLR2+细胞、ED-1+TLR4+细胞的表达。结果 ta-crolimus 1.0 mg.kg-1给药组大鼠相对肾质量明显低于模型组(P<0.05),tacrolimus(0.5、1.0 mg.kg-1)给药组大鼠UAER较模型组明显减少(P<0.05或P<0.01)。免疫组化显示:模型组大鼠肾组织ED-1+、ED-1+TLR2+、ED-1+TLR4+及NF-κB-p-p65+细胞数明显高于对照组(P<0.01),tacrolimus 0.5与1.0 mg.kg-1给药组ED-1+细胞数与模型组比较无差异,而ED-1+TLR2+、ED-1+TLR4+及NF-κB-p-p65+细胞数则明显低于模型组(P<0.05)。结论糖尿病大鼠肾脏巨噬细胞TLR2和TLR4的过度表达与巨噬细胞的活化及由此引发的炎症反应有关,tacrolimus可通过直接或间接作用下调肾脏巨噬细胞TLR2与TLR4表达,从而抑制与TLR-NF-κB信号转导及调控途径有关的炎症反应。     

齐墩果酸调节HMGB1/TLR4/NF-κB介导的炎症通路减轻蛛网膜下腔出血后的早期脑损伤

目的探讨齐墩果酸对大鼠蛛网膜下腔出血模型HMGB1/TLR4/NF-κB炎症通路的影响。方法将72只成年雄性SD大鼠随机分成3组(假手术组、SAH模型组、齐墩果酸20 mg/kg给药组)。采用颈内动脉穿刺法建立大鼠SAH模型,造模1 h后给予齐墩果酸,剂量为20 mg/kg。大鼠SAH模型建立24 h后进行神经功能学评分;检测脑水含量及脑伊文思蓝浸出率;并利用Western blot方法检测脑组织中HMGB1、TLR4、IκBα和p65蛋白的表达量。结果齐墩果酸(20 mg/kg)能够显著增加神经功能评分并且明显降低脑含水量和伊文思蓝渗透率(P<0.01)。齐墩果酸给药可有效降低HMGB1的表达和释放(P<0.01),抑制TLR4的表达、IκBα降解及p65入核(P<0.01)。结论齐墩果酸能够抑制HMGB1/TLR4/NF-κB炎症通路,减轻蛛网膜下腔出血后的炎症反应,改善脑损伤。     

TLR4/NF-κB通路在脂多糖诱导喉癌细胞释放HMGB1中的作用

目的探讨脂多糖(LPS)对喉癌细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放的诱导作用。方法采用酶联免疫吸附试验、实时荧光定量PCR和Western blot检测LPS诱导后人喉癌细胞株Hep-2培养上清液中HMGB1含量、细胞HMGB1mRNA表达水平和细胞Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平的变化,观察TLR4单克隆抗体、NF-κB抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对HMGB1释放的影响。结果 LPS诱导12h和18h后,HMGB1mRNA表达水平和HMGB1含量均升高,且呈时间依赖性;LPS诱导24h后,TLR4及NF-κB p65蛋白明显升高。TLR4单克隆抗体和PDTC对LPS诱导的HMGB1释放有不完全的抑制作用。结论 LPS诱导喉癌细胞释放HMGB1;其机制可能与TLR4/NF-κB信号通路有关。     

基于TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路研究三叶香茶菜含药血清对枯否细胞活化的影响

目的 研究三叶香茶菜含药血清(isodon ternifolius-containing serum，ITS)通过Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)信号通路对脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)诱导的大鼠原代肝枯否细胞(Kupffer cell，KC)活化的影响。方法 分离培养大鼠原代KC，将LPS诱导的大鼠原代KC分为空白对照组、模型对照组、空白血清组、阳性对照组(秋水仙碱含药血清组)、ITS组、TLR4阻断剂组、TLR4阻断剂+ITS组。MTT法检测不同浓度ITS对KC增殖活性的影响；ELISA法检测KC细胞上清液白介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量；荧光定量聚合应(PCR)、Western blotting和免疫荧光检测KC中TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路中TLR4、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、半胱肽氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白表达情况。结果 与模型对照组相比，各药物组KC上清液中IL-1β、IL-18、TNF-α和IL-6含量，以及细胞中TLR4、IκBα、Caspase-1、NLRP3 mRNA和TLR4、IκBα、p-IκBα、Caspase-1、NLRP3、NF-κBp65蛋白的表达均下调或降低(P<0.05或P<0.01)；与TLR4阻断剂组比较，TLR4阻断剂+ITS组上述多数指标的改善更加明显。结论 三叶香茶菜可能通过下调TLR4/NF-κB/NLRP3信号通路抑制KC活化，减少炎性因子的表达和释放，从而减轻肝脏炎症损伤。     

PCSK9抑制剂在ox-LDL诱导HUVECs损伤中的保护作用研究

目的　探讨人类枯草溶菌素转化酶9（PCSK9）抑制剂对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）导致的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护机制。方法　对数生长期HUVECs细胞分为Control组（正常培养）,ox-LDL组（50 mg/L ox-LDL诱导24 h）,低、中、高剂量PCSK9抑制剂组（分别用5、10、20 μmol/L PCSK9抑制剂预处理24 h,再加入50 mg/L ox-LDL诱导24 h）。采用CCK-8法检测各组细胞活性并计算细胞存活率,实时荧光定量PCR（qPCR）和酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测细胞或细胞培养上清液中肿瘤坏死因子（TNF）-α,白细胞介素（IL）-6和单核细胞趋化蛋白（MCP）-1的转录和分泌水平;流式细胞术检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bax、Bcl-2、Cleaved-Caspase-3）和核因子（NF）-κB通路相关蛋白的表达水平。结果　与Control组比较,ox-LDL组细胞存活率下降,TNF-α、IL-6和MCP-1转录及分泌水平升高,细胞凋亡率升高,促凋亡蛋白Bax、Cleaved-Caspase-3表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2下调,磷酸化NF-κB（p-NF-κB）水平上调;同时NF-κB在细胞核内表达上调,胞质中表达下调。中、高剂量PCSK9抑制剂处理后,与ox-LDL组比较,细胞存活率升高,TNF-α、IL-6和MCP-1转录和分泌水平下降,细胞凋亡率下降, Bax、Cleaved-Caspase-3表达下调,Bcl-2表达上调,p-NF-κB水平下降。进一步分析发现,PCSK9抑制剂下调ox-LDL导致的HUVECs细胞核中NF-κB表达,上调胞质中NF-κB的表达（P＜0.05）。结论　PCSK9抑制剂可以抑制ox-LDL导致的HUVECs炎症反应和细胞凋亡,发挥内皮功能保护作用。     

丹参酮ⅡA磺酸钠联合阿托伐他汀对冠心病患者外周血单个核细胞TLR4、MyD88、NF-κB表达的影响

目的：观察冠心病患者外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB 的表达,分析丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀对其表达的影响,以 TLR4炎症信号通路为靶点探讨丹参酮ⅡA 磺酸钠治疗冠心病的可能机制。方法选取诊治的冠心病患者160例,同期进行健康体检的正常人100例作为对照。采用 Real time-PCR 和 Western blot 测定外周血单个核细胞 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定血清高敏 C-反应蛋白（hs-CRP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。160例冠心病患者随机分为观察 A 组和观察 B 组,每组80例。观察 A 组在常规治疗基础上给予阿托伐他汀治疗,观察 B 组在观察 A 组基础上加用丹参酮ⅡA 磺酸钠注射液,疗程均为30 d,比较2组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平。结果与对照组比较,冠心病患者组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平显著升高（ P ﹤0.05）。TLR4、MyD88、NF-κB 蛋白表达与 hs-CRP、TNF-α呈正相关（ r ＝0.761和0.802,0.699和0.774,0.835和0.749,P 均﹤0.05）。与治疗前比较,治疗后观察 A 组和观察 B 组 TLR4、MyD88、NF-κB mRNA 和蛋白表达、hs-CRP、TNF-α水平均显著降低（ P ﹤0.05）;但观察 B 组降低程度更明显（ P ﹤0.05）。结论丹参酮ⅡA 磺酸钠联合阿托伐他汀通过抑制外周血单个核细胞 TLR4炎症信号通路的激活发挥抗炎作用,可能是丹参酮ⅡA 磺酸钠发挥治疗作用的机制之一。     

LOX-1: A male hormone-regulated scavenger receptor for atherosclerosis

Lectin-like oxidized LDL receptor-1 (LOX-1) is a unique scavenger receptor that mediates the binding and uptake of oxidized LDL (ox-LDL) by vascular cells during the development of atherosclerosis. Exposure to ox-LDL induces LOX-1 expression and LOX-1-dependent biological activities, such as activation of NF-κB, a nuclear factor important for signal transduction in inflammation. Accumulating evidence indicates that male hormones may regulate expression of LOX-1 and NF-κB as well as atherogenesis. Deficiency or low levels of the male hormone testosterone promote LOX-1 expression and NF-κB activation, while testosterone replacement therapy reduces the expression of LOX-1 and the activation of NF-κB, thereby protecting the arterial wall against atherogenesis.     

银杏叶滴丸对冠心病患者TLR4/NF-κB信号通路及免疫指标的影响

目的 评价银杏叶滴丸对冠心病患者TLR4及NF-κB信号通路及免疫相关指标的影响.方法 100例患者随机分为试验组50例和对照组50例.两组患者均给予常规西药治疗,试验组同时给予银杏叶滴丸,1次5丸,1日3次,连续30天.采用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定两组患者血浆超敏-C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用免疫比浊法测定免疫球蛋白IgA、IgG、IgM水平;采用实时荧光-PCR仪检测Toll样受体4(TLR4)、单核细胞核因子-κB(NF-κB)的表达.HT5"H结果 治疗后,两组TLR4、NF-κB的表达量较治疗前显著降低(P WTBZ<0.05),观察组显著低于对照组(P<0.05);观察组hs-CRP、I L-6、TNF-α的含量治疗后较治疗前显著降低(P<0.05),且治疗后均显著低于对照组(P<0.05);治疗后,两组IgA、IgE、IgM的水平较治疗前显著降低(P<0.05),试验组显著低于对照组(P<0.05).结论 银杏叶滴丸治疗冠心病的作用机制可能与抑制外周血TLR4/NF-kB炎症信号通路的激活,抑制炎症反应并改善机体免疫功能紊乱有关.     

参附对脐静脉内皮细胞Toll样受体4/NF-κB途径的影响

目的观察参附注射液对内毒素介导的人脐静脉细胞Toll样受体4/NF-κB途径及细胞间黏附分子、E-选择素表达的影响。方法健康产妇分娩后的新鲜婴儿脐带,应用胶原酶消化,收集内皮细胞进行培养。实验分为对照组、内毒素组、内毒素+参附组。对照组:M199培养基中不加任何物质。内毒素组:M199培养基中加入脂多糖1 mg/L。内毒素+参附组:预先加入参附注射液10 mL/L,30 min后加入脂多糖1 mg/L。干预1h收集细胞,提取核蛋白测定NF-κB活性,干预12 h后收集细胞检测Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平。结果内毒素组的Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平、NF-κB活性均显著高于对照组,内毒素+参附组的Toll样受体4、细胞间黏附分子1、E-选择素表达水平、NF-κB活性均明显低于内毒素组。结论参附注射液可以通过抑制NF-κB活化,减弱Toll样受体4/NF-κB途径,抑制了脂多糖介导的黏附分子表达,从而减轻机体的炎症反应。