丹参酮ⅡA对抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察丹参酮ⅡA对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:用0～320mg/L丹参酮ⅡA作用体外培养的HPF,24～96h后MTT法检测药物对HPF的影响,免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性。结果:80mg/L丹参酮ⅡA作用48h后能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。丹参酮ⅡA在80～320mg/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA可显著抑制HPF的增殖。     

粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增生作用的研究(英文)

目的:观察粉防己碱(tetrandrine,Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblast,HPF)增殖的影响,研究粉防己碱对翼状胬肉成纤维细胞增殖的作用,寻找辅助治疗翼状胬肉的新方法。方法:用不同浓度(0 ～160μmol/L)Tet作用体外培养的HPF,观察24 ～96h Tet对HPF的影响。MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测Tet干预前后HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:在Tet20, 40, 80, 160μmol/L浓度作用24 ～72h范围内,可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。Tet干预后PCNA蛋白表达下降,当Tet的浓度在20 ～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)结论:Tet可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,在一定浓度和时间范围内抑制作用呈剂量与时间依赖性。但在高浓度时( >160μmol/L)可能存在细胞毒性作用。     

NF -κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸对人翼状胬肉成纤维细胞增殖的影响

目的:研究(nuclear factor,NF)2κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(NF-B Inhibitor pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblast,HPF)增殖的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法.方法:取人翼状胬肉标本进行体外贴壁细胞常规培养,取第3～6代细胞进行试验.(1)免疫组化法染色结合细胞生物学特征鉴定成纤维细胞;(2)不同浓度PDTC(2.5,5,10,20,40 μmol/L)干预成纤维细胞24,48,72 h后,MTT法检测细胞生长抑制率;(3)免疫细胞化学法分别检测PDTC干预48 h后HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果:体外培养的翼状胬肉细胞经免疫组化染色可见波形蛋白表达阳性,结合细胞生物学特性可以确定为成纤维细胞.MTT实验表明,随着PDTC干预浓度的增大和时间延长,成纤维细胞生长抑制率增加(P＜0.05),在2.5-40 μmol/L浓度作用24-72 h,PDTC可呈剂量和时间依赖性.PDTC干预后PCNA蛋白表达均下降.当PDTC的浓度在5,10,20,40 μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P＜0.05).结论:PDTC对体外培养的HPF细胞有抑制作用,在一定浓度和时间范围内抑制作用呈剂量与时间依赖性.     

姜黄素抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的研究

目的观察姜黄素对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新方法。方法用0～160μmol/L姜黄素作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度姜黄素对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果在20～160μmol/L浓度作用24～72h范围内,姜黄素可剂量和时间依赖性的抑制HPF增生(P<0.05)。20,40,80,160μmol/L姜黄素作用24h后,流式细胞仪检测结果发现,姜黄素作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当姜黄素的浓度在20～160μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论姜黄素可显著抑制翼状胬肉成纤维细胞增生,使细胞周期停滞于G0/G1期,并诱导其凋亡,作用呈时间和剂量依赖性。     

两种选择性环氧化酶-2抑制剂对翼状胬肉成纤维细胞生长影响的对比研究

目的:观察两种选择性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖和凋亡的影响,并比较两者作用强弱,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉复发的新途径。方法:用0～200μmol/L尼美舒利(nimesulide)和美洛昔康(meloxicam)作用体外培养的HPF,24～96h后观察不同浓度的两种药物对HPF的影响。MTT法及免疫组织化学染色增生细胞核抗原(PCNA)检测细胞生长活性,流式细胞仪测定细胞周期时相变化。结果:在尼美舒利50μmol/L作用24h后,美洛昔康100μmol/L作用24h后均能显著抑制HPF的增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性。100μmol/L尼美舒利和美洛昔康分别作用48h后,流式细胞仪检测结果发现,药物作用组均出现典型的亚二倍体凋亡峰,G0/G1期细胞百分比上升(P<0.05),S期细胞百分比下降(P<0.05),说明细胞阻滞于G0/G1期。当尼美舒利的浓度在25～200μmol/L,美洛昔康在50～200μmol/L范围内能浓度依赖性地抑制细胞表达PCNA(P<0.05)。结论:两种选择性COX-2抑制剂均能抑制HPF的生长,并诱导其调亡,对COX-2的选择性越高,对HPF的抑制作用越强,尼美舒利的作用强于美洛昔康。     

翼状胬肉中环氧合酶2的表达及其相关研究

目的探讨翼状胬肉中环氧合酶2（COX-2）的表达及其选择性抑制剂尼美舒利的相关抑制作用。方法翼状胬肉组织与对照的正常结膜组织标本分别取自在华中科技大学同济医学院附属协和医院眼科行手术治疗的患者,采用免疫组织化学法分别检测组织中COX-2的表达情况;原代培养人翼状胬肉成纤维细胞（HPF）,经鉴定后,分别应用浓度0、1、10、100ng／ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）作用24h,采用Western—blot法分别检测HPF中COX-2蛋白的表达变化;分别应用浓度0、25、50、100、200μmol／L尼美舒利作用于HPF,分别培养24、48、72、96h,四唑氮蓝还原法（MTT）检测不同浓度尼美舒利在不同时间对HPF增殖的影响。结果免疫组织化学结果显示翼状胬肉组织中COX-2阳性表达率为70％。Western blot法显示在不同浓度bFGF刺激下,HPF中COX-2蛋白的表达均呈阳性,且表达呈剂量依赖性;MTT试验证实尼美舒利呈剂量依赖性和时间依赖性抑制成纤维细胞的增殖。用药24h后50μmol／L浓度即开始明显抑制（P〈0．05）。结论bFGF可以刺激HPF的增殖并诱导翼状胬肉中COX-2的表达上调。COX-2可能参与翼状胬肉的形成;而应用选择性COX-2抑制剂尼美舒利可显著抑制HPF的增殖。     

紫杉醇对体外人翼状胬肉成纤维细胞的抑制作用

目的:观察紫杉醇(PA)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增生,凋亡的影响。方法:用0～1000nmol/LPA作用于体外培养HPF的24～96h后观察不同浓度的PA对HPF的影响。MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪测定细胞的周期时相。结果:在1～1000nmol/LPA对HPF的抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。1,10,1000,10000nmol/L的PA作用HPF24h后,流式检测发现低浓度药物组(1～10nmol/L)主要阻止细胞在G0～G1,高浓度组(100～1000nmol/L)主要阻止细胞在G2～M期,并可见细胞凋亡。结论:PA可显著抑制HPF的增殖,使细胞周期停止在G2～M期和细胞的凋亡。     

翼状胬肉成纤维细胞中COX-2的表达及其抑制剂的实验研究

目的:探讨环氧化酶-2(COX-2)与血管内皮生长因子(VEGF)在人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)中的关系,以及美洛昔康(Meloxicam)抗HPF增殖的作用和机制。方法:采用免疫组化方法测定翼状胬肉组织中COX-2的表达。体外培养HPF,采用Western法,MTT法,研究在不同浓度的VEGF刺激下,HPF中COX-2蛋白的表达,以及不同浓度的美洛昔康对HPF增殖的影响。结果:翼状胬肉组织中COX-2呈阳性表达。HPF中VEGF浓度的增高可致COX-2蛋白的表达呈增强趋势。当美洛昔康的浓度在75～300μmol/L之间变化时,能明显抑制HPF的增殖,且其抑制强度呈剂量、时间依赖性。结论:HPF中VEGF的浓度升高能增强COX-2蛋白的表达,美洛昔康能够通过拮抗COX-2达到抑制HPF增殖的作用。     

美洛昔康对翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制的实验研究

目的探讨美洛昔康(Meloxican)抗翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPF)增殖的作用和机制.方法采用免疫组化方法测定翼状胬肉组织中环氧化酶-2(COX-2)的表达.体外培养HPF,采用Western法,MTT法,研究在不同浓度的血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)刺激下,HPF中COX-2蛋白的表达,以及不同浓度的COX-2抑制剂美洛昔康对HPF增殖的影响.结果翼状胬肉组织中COX-2呈阳性表达.HPF中VEGF浓度的增高可致COX-2蛋白的表达呈增强趋势.当美洛昔康的浓度在75～300μmol/L之间变化时,能明显抑制HPF的增殖,且其抑制强度呈剂量、时间依赖性.结论HPF中VEGF的浓度升高能增强COX-2蛋白的表达,美洛昔康能够通过拮抗COX-2达到抑制HPF增殖的作用.     

汉防己甲素抑制翼状胬肉成纤维细胞增殖的研究

目的:观察汉防己甲素对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖抑制作用并探讨其机制,寻找治疗翼状胬肉和预防其复发的有效药物.方法:(1)倒置相差显微镜下观察不同浓度的Tet作用下,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞形态的变化,并与丝裂霉素(Mitomycin,MMC)进行比较.(2)MTT比色法测定不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用,并与MMC进行比较.(3)流式细胞仪检测不同浓度的Tet作用48h,体外培养的翼状胬肉成纤维细胞细胞周期的变化.结果:(1) Tet作用下,细胞胞体收缩,变圆,间隙增宽,药物浓度高时,细胞碎裂,浮起.0.1,0.2g/L MMC作用下大量细胞碎裂,溶解.(2)不同浓度的Tet作用48h对体外培养的翼状胬肉成纤维细胞的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.01);0.1g/L与0.2g/L MMC、4×10-5 mol/L Tet与0.2g/L MMC对翼状胬肉成纤维细胞活性的影响无显著性差异(P＞0.05).Tet的IC50接近10-5mol/L(为0.848×10-5mol/L).(3)Tet作用下,翼状胬肉成纤维细胞周期中S期细胞增多,浓度越高,作用越明显.结论:汉防己甲素对翼状胬肉成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用,呈剂量依赖性,细胞分裂被阻止在S期(DNA合成期).可望用于对翼状胬肉的治疗.     

核心蛋白多糖抑制翼状胬肉成纤维细胞增生的实验研究

目的　观察核心蛋白多糖对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｔｅｒｙｇｉｕｍｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＦ）增生和凋亡的影响,寻找辅助治疗和预防翼状胬肉切除术后复发的新方法。方法　采用组织块法体外培养ＨＰＦ,将处于对数生长期的细胞用于实验。将０．１ｍｇ?Ｌ－１、１．０ｍｇ?Ｌ－１、１０．０ｍｇ?Ｌ－１的Ｄｅｃｏｒｉｎ分别加入细胞培养基中培养２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ。ＭＴＴ比色法分别测定不同浓度的Ｄｅｃｏｒｉｎ作用于ＨＰＦ不同时间后的细胞生长抑制率,流式细胞仪测定细胞周期时相变化,免疫组织化学法染色ＰＣ-ＮＡ检测细胞生长活性。结果　ＭＴＴ结果显示不同浓度组Ｄｅｃｏｒｉｎ作用ＨＰＦ２４ｈ细胞生长抑制率分别为（７．８１±１２６）％、（１９５２±２．１４）％、（４２．６９±１．６２）％,作用４８ｈ分别为（１０．１９±２．７４）％、（２２．２８±０．９７）％、（４５．７３±０．８２）％,作用７２ｈ分别为（２０．４９±１．３９）％、（２９．５０±２．４７）％、（５９．４１±１．７１）％。随着药物浓度的逐渐增高和作用时间的延长,细胞生长抑制率逐渐增加,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。流式细胞仪检测各浓度Ｄｅｃｏｒｉｎ组ＨＰＦ中Ｇ０／Ｇ１期细胞比率均较空白对照组高,差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。当Ｄｅｃｏｒｉｎ浓度在０．１～１０．０ｍｇ?Ｌ－１范围内作用ＨＰＦ７２ｈ,均能够明显抑制细胞表达ＰＣＮＡ（均为Ｐ＜０．０５）。结论　Ｄｅｃｏｒｉｎ可以抑制ＨＰＦ的增生,诱导其凋亡,且呈明显的剂量和时间依赖性,有望成为防治翼状胬肉的药物之一。     

VEGF、SDF-1、Ki-67、PCNA及Survivin与翼状胬肉的关系分析

目的：分析血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor 1,SDF-1)、肿瘤增殖抗原(Ki-67)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及生存素(Survivin)与翼状胬肉的关系。

方法：选取2013-01/2015-05于本院进行诊治的79例106眼翼状胬肉患者为观察组,同时期的79例正常结膜者为对照组,然后将两组的组织VEGF、SDF-1、Ki-67、PCNA及Survivin阳性细胞数分级及染色强度分级进行比较,并比较其中不同性别、分期及分型患者的检测结果,同时以Logistic分析上述指标与翼状胬肉的关系。

结果：观察组的组织VEGF、SDF-1、Ki-67、PCNA及Survivin阳性细胞数分级及染色强度分级均高于对照组,不同分期及分型患者的检测结果也存在一定差异(均P<0.05),而不同性别患者间的检测结果则无明显差异(均P>0.05),经Logistic分析显示,上述组织指标均与翼状胬肉有密切的关系。

结论：翼状胬肉组织中的VEGF、SDF-1、Ki-67、PCNA及Survivin表达呈现异常状态,上述指标均与翼状胬肉有密切的关系。     

血管生成拟态与翼状胬肉进行期及静止期的相关性研究

目的：研究血管生成拟态与翼状胬肉发生发展的相关性,初步探讨其临床意义。
　　方法：选取20例正常眼的结膜组织及翼状胬肉静止期和进行期各50例标本行苏木素－伊红（ HE）染色、过碘酸雪夫（ PAS）染色、免疫组化CD34、VEGF染色及免疫组化CD31染色联合PAS双重染色观察翼状胬肉新生血管和血管生成拟态情况。
　　结果：CD34和VEGF在翼状胬肉组织中的表达均高于正常结膜组织（两者P＜0．05）,并且两者在进行期翼状胬肉组织中的表达均高于静止期（两者P＜0．05）。 PAS染色血管拟态区网眼间隔染成紫红色,进行期和静止期出现血管生成拟态的例数分别是38例和11例,差异具有统计学意义（P＜0．05）,相关性分析显示血管生成拟态与进行期翼状胬肉呈显著密切正相关（ Spearman’s相关系数r＝0．540＞0．5,P＝0．000）。
　　结论：翼状胬肉除了新生小血管形成增多外,血管生成拟态也是其血供方式之一,并且血管生成拟态与翼状胬肉的进展具有密切关系。     

银杏叶提取物对体外培养翼状胬肉成纤维细胞增殖的抑制作用

目的：研究不同浓度的银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(human pterygium fibroblasts,HPFs)增殖和凋亡的影响。 方法：用噻唑蓝比色法(MTT)检测不同浓度(12.5,25.0,50.0,100.0mg/L) GBE在不同作用时间(24,48,72h)对体外培养的HPFs增殖的影响。用流式细胞仪检测HPFs的细胞周期及凋亡率。 结果：MTT结果显示,GBE浓度为12.5mg/L组作用24h后对HPFs的增殖无明显抑制作用（P>0.05）,其余各时间段各组均可见明显抑制HPFs的增殖,且各组间比较差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测发现GBE作用48h后G₀/G₁期细胞比例增加,S期细胞比例下降,计算不同浓度GBE作用下凋亡率分别为4.37%,8.14%,11.09%,15.18%,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论：GBE对HPFs的增殖有明显抑制作用,并与用药剂量和持续时间有关。     

单眼双侧翼状胬肉临床特征和病理组织变化的研究

目的:探讨单眼双侧翼状胬肉与单眼鼻侧翼状胬肉临床特征及病理组织结构的差异.方法:回顾性研究.选取单眼双侧翼状胬肉及单眼鼻侧翼状胬肉各11例11眼患者纳入研究,观察其生长时间、组织面积大小、血管分级、透明度及泪膜破裂时间(BUT).并对6例正常结膜组织及11例单眼双侧翼状胬肉组织标本采用40g/L多聚甲醛固定处理,予石蜡包埋切片后行HE染色,在光镜下观察其病理组织差异.结果:单眼双侧翼状胬肉泪液BUT较单眼鼻侧翼状胬肉显著缩短,差异有统计学意义(t=3.410,P=0.003).单眼双侧翼状胬肉的BUT与其生长时间(r=-0.661,P<0.05)、组织大小(r=-0.775,P<0.01)、透明度(r=-0.671,P<0.05)均呈显著负相关;单眼鼻侧翼状胬肉的BUT与其组织大小(r=-0.927,P<0.01)、透明度(r=-0.764,P<0.01)均呈显著负相关.单眼双侧翼状胬肉中鼻侧上皮细胞层数较颞侧增多(t=-7.351,P<0.05)、血管数量增加(t=-7.400,P<0.05)、炎症细胞数量增多(t=-7.481,P<0.05),差异有统计学意义.结论:单眼双侧翼状胬肉较单眼鼻侧翼状胬肉泪膜稳定性差,且单眼双侧翼状胬肉中鼻侧较颞侧鳞状上皮增生明显,血管化及炎症反应显著,活动性较高.