lncRNA NEAT1调控miR-206对缺氧复氧大鼠心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1调控miR-206对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和凋亡的影响和机制。方法 体外培养H9c2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测缺氧复氧诱导后lncRNA NEAT1和miR-206的表达水平。将lncRNA NEAT1小干扰RNA(si-lncRNA NEAT1)、miR-206模拟物(miR-206 mimics)分别转染H9c2细胞,缺氧复氧诱导后,检测细胞中丙二醛(MDA)和活性氧(ROS)含量以及细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,MTT法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9蛋白表达。利用荧光素酶报告基因实验以及RT-qPCR验证lncRNA NEAT1和miR-206的靶向结合关系。结果 缺氧复氧诱导后H9c2细胞中lncRNA NEAT1的表达显著升高,miR-206的表达显著降低(P＜0.05)。转染si-lncRNA NEAT1或miR-206 mimics处理缺氧复氧H9c2细胞,细胞存活率显著升高,MDA、ROS含量以及LDH活性显著降低,cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表达显著降低,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)。lncRNA NEAT1靶向miR-206并负调控miR-206表达。抑制miR-206部分逆转沉默lncRNA NEAT1对缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化损伤和凋亡的影响(P＜0.05)。结论 沉默lncRNA NEAT1通过上调miR-206可减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤和细胞凋亡,进而发挥心肌保护作用。     

miR-200c-3p靶向XIAP调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨miR-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测细胞中miR-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p组(转染anti-miR-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAP组(转染pcDNA-XIAP)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-NC组(共转染anti-miR-200c-3p和si-NC)、H/R+anti-miR-200c-3p+si-XIAP组(共转染anti-miR-200c-3p和si-XIAP),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAP、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中miR-200c-3p与XIAP的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中miR-200c-3p表达明显上调,XIAP表达明显下调;抑制miR-200c-3p、过表达XIAP均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved Caspase-3、Bax,上调Bcl-2;miR-200c-3p可显著抑制XIAP 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAP的表达;敲减XIAP可逆转抑制miR-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论 miR-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAP有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。     

微小RNA-34a调控高糖诱导H9c2心肌细胞凋亡的初步研究

目的探讨微小RNA-34a(miR-34a)对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为3组:正常组(葡萄糖浓度5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度33mmol/L),抑制剂组(miR-34a抑制剂浓度50nmol/L+葡萄糖33mmol/L)。采用定量PCR检测miR-34a和凋亡相关基因Bcl-2基因表达的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2表达的变化;采用流式细胞术检测细胞凋亡。结果与正常组比较,高糖组心肌H9c2细胞凋亡率明显升高(P<0.05),H9c2细胞miR-34a表达显著上调(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达减少(P<0.05)。与高糖组比较,抑制剂组H9c2细胞凋亡明显下降(P<0.05),H9c2细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.05)。结论 miR-34a能调控高糖所致的H9c2心肌细胞凋亡,可能是通过直接抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达而实现的。     

miR-376b-3p通过靶向FGF21加重缺氧复氧心肌细胞的损伤

目的 探讨miR-376b-3p对缺氧复氧(H/R)心肌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 培养心肌细胞H9c2,缺氧复氧法体外模拟H/R细胞损伤,建立心肌细胞损伤模型。用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附(ELISA)检测正常对照组、H/R组、anti-miR-NC组、anti-miR-376b-3p组、anti-miR-376b-3p+si-NC组、anti-miR-376b-3p+si-成纤维细胞生长因子21(FGF21)组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)情况。双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果 成功建立缺氧复氧损伤的细胞模型;模型组细胞中miR-376b-3p表达显著升高,FGF21表达显著降低,并且抑制miR-376b-3p可以减轻损伤细胞的凋亡和TNF-α、IL-6、IL-17的含量,以及上调Bcl-2,下调Bax。此外,miR-376b-3p还可靶向FGF21 mRNA。抑制FGF21后,抑制miR-376b-3p对缺氧复氧损伤的H9c2细胞的保护作用被减弱。结论 miR-376b-3p可促进缺氧复氧心肌细胞的凋亡和炎性反应,其机制与靶向FGF21 mRNA相关。     

MiR-499靶向HMGB1保护缺氧复氧心肌细胞损伤的分子机制探讨

目的研究miR-499对缺氧复氧心肌细胞H9c2损伤的影响,并探讨其作用机制。方法运用免疫印迹法(Western blot)检测缺氧复氧心肌细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、免抗人单克隆抗体(Bax)、caspase-3的蛋白表达;将H/R+miR-con组(转染miRcon)、H/R+miR-499组(转染miR-499 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、miR-499组(转染miR-499mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-499组(转染anti-miR-499)、H/R+si-con组(转染si-con)、H/R+si-HMGB1组(转染si-HMGB1)、H/R+miR-499+Ctrl组(miR-499 mimics和pcDNA3.1共转染)、H/R+miR-499+HMGB1组(miR-499 mimics和pcDNA3.1-HMGB1共转染),均以脂质体法转染至H9c2细胞;实时荧光定量聚合酶链锁反应(q RT-PCR)检测各组细胞中miR-499的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与NC组相比,H/R组细胞中HMGB1蛋白表达显著升高,miR-499表达显著降低(P0.05);过表达miR-499或敲减HMGB1均可显著下调H/R H9c2细胞凋亡率,显著下调Bax、caspase-3的蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达(P均0.05);过表达HMGB1可逆转miR-499对H/R H9c2细胞凋亡的抑制作用。结论 MiR-499可抑制缺氧复氧心肌细胞H9c2凋亡,保护心肌细胞,其机制与靶向HMGB1有关,将可为心脏病的治疗提供新靶点。     

microRNA-1对心肌缺氧复氧中细胞凋亡的影响

目的明确心肌缺氧复氧(H/R)时miR-1的表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法建立乳大鼠心肌细胞H/R模型,TUNEL检测细胞凋亡、Western-Blot检测凋亡蛋白表达和实时荧光定量PCR检测miR-1表达。重组miR-1慢病毒感染乳大鼠心肌细胞,Western-Blot检测各组相关凋亡蛋白的表达。重组miR-1慢病毒感染乳大鼠心肌细胞后H/R处理,通过TUNEL检测心肌细胞凋亡,软件分析和计算心肌细胞凋亡率。结果心肌细胞H/R后,细胞凋亡率明显增加,同时促凋亡蛋白(Bax和Caspase-3)表达水平增加和抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平下降。在成功构建心肌细胞缺氧复氧细胞模型后,检测到心肌细胞miR-1表达水平下降。与对照组相比,感染LV-rno-miR-1组促凋亡蛋白(Bax和Caspase-3)明显增加和抗凋亡蛋白Bcl-2降低,而感染LV-rno-miR-1 sponge凋亡蛋白的结果相反。相对于感染LV-rnomiR-1组和缺氧复氧组,感染LV-rno-miR-1病毒后缺氧4小时复氧12小时,细胞凋亡率进一步增加。结论 miR-1具有促进细胞凋亡的作用。miR-1表达下降可能是心肌细胞缺氧复氧时维持稳态的一种自我调节机制。     

miR-24-3p靶向PDCD5减轻缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的作用机制

目的研究miR-24-3p对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及潜在的分子机制。方法 qRT-PCR检测miR-24-3p和程序化细胞死亡因子(PDCD)5 RNA表达,Western印迹测定PDCD5蛋白、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase-3的表达,测定心肌细胞H9c2 H/R后乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-24-3p与PDCD5的调控关系。结果与对照组相比,H/R组心肌细胞H9c2中miR-24-3p表达量显著下降(P<0.05),PDCD5 mRNA和蛋白表达量显著上升(P<0.05);心肌细胞中LDH和MDA含量显著升高(P<0.05),SOD活性显著降低(P<0.05);凋亡相关蛋白Bcl-2表达量显著下降(P<0.05),Bax和Cleaved-caspase-3表达量显著上升(P<0.05),细胞凋亡率显著上升(P<0.05)。过表达miR-24-3p和抑制PDCD5表达均可减轻H/R对H9c2细胞的损伤,提高细胞抗氧化能力,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-24-3p靶向负调控PDCD5的表达;过表达PDCD5可逆转上调miR-24-3p对H9c2细胞H/R损伤的作用。结论 miR-24-3p通过靶向PDCD5减轻H/R对心肌细胞H9c2的损伤、抑制细胞凋亡。     

miR-145通过调控PDCD4表达抑制缺氧/复氧所诱导的心肌细胞凋亡

目的 研究miR-145对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 建立H/R诱导的H9c2细胞体外模型,通过实时定量PCR法检测miR-145和程序性细胞死亡因子4(PDCD4)mRNA表达,免疫印迹法检测PDCD4蛋白表达。向H9c2细胞中转入miR-145以上调miR-145表达,转入pcDNA-PDCD4以上调PDCD4蛋白表达。通过流式细胞仪检测细胞凋亡。结果 H/R抑制H9c2细胞中miR-145表达而促进PDCD4表达,并且上调miR-145的表达抑制H/R诱导的H9c2细胞的凋亡。荧光素酶基因报告实验显示,miR-145在H9c2细胞中靶向抑制PDCD4蛋白的表达,上调PDCD4蛋白表达可显著促进H/R诱导的H9c2细胞凋亡。结论 miR-145可抑制缺氧/复氧诱导心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制PDCD4蛋白表达有关。     

微小RNA-92a调控音猥因子途径对心肌缺血再灌注损伤后促血管再生的影响及机制

目的 探究微小RNA-92a(miR-92a)调控音猥因子(SHH)途径对心肌缺血再灌注(I/R)损伤后促血管再生的影响及机制。方法 从1～3 d龄SD大鼠中培养原代心肌细胞后建立心肌细胞缺氧/复氧模型,将其分成心肌细胞常氧培养组和心肌细胞I/R组。miR-92a模拟物(mimic)和拮抗剂(inhibitor)转染入大鼠原代心肌细胞,使miR-92a过表达或低表达,分成对照组、I/R组、miR-92a mimic组和miR-92a inhibitor组。细胞计数法8测定各组细胞活力,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,ELISA和QT-PCR测定血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和血管生成素1等血管新生因子表达,Western blot法测定SHH信号通路蛋白表达。结果 心肌细胞I/R组miR-92a表达显著高于心肌细胞常氧培养组(3.89±0.29 vs 1.53±0.19,P<0.01)。对照组、miR-92a inhibitor组、I/R组和miR-92a mimic组SHH蛋白(0.57±0.13 vs 0.51±0.11 vs 0.24±0.03 vs 0.14±0....     

circPRKCI靶向miR-217对缺氧/复氧诱导心肌细胞损伤的影响

目的探讨circPRKCI对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡的影响及其对miR-217的调控作用。方法采用H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,pcDNA、pcDNA-circPRKCI、anti-miR-NC、anti-miR-217、pcDNA-circPRKCI与miR-NC、pcDNA-circPRKCI与miR-217 mimics分别转染至心肌细胞后进行H/R处理;采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)实验检测circPRKCI、miR-217表达量;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测circPRKCI与miR-217的靶向关系;免疫印迹法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果H/R诱导的H9c2细胞中circPRKCI表达水平降低(P<0.05),miR-217、MDA、凋亡率及Bax蛋白水平升高(P<0.05),SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05)。H/R诱导的H9c2细胞中转染pcDNA-circPRKCI或转染anti-miR-217后可降低MDA含量、凋亡率及Bax蛋白水平(P<0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P<0.05)。双荧光素酶实验显示circPRKCI可靶向结合miR-217;miR-217过表达可逆转circPRKCI过表达对H/R诱导的H9c2细胞氧化应激及凋亡的作用。结论circPRKCI过表达通过下调miR-217表达抑制氧化应激及其诱导的细胞凋亡,从而减轻心肌细胞氧化损伤。     

缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞凋亡的影响

目的 观察缺氧后处理对缺氧复氧心肌线粒体活性氧及细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨其调控心肌细胞凋亡的机制.方法 构建大鼠乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤模型,将细胞分为对照组、缺氧/复氧纽(缺氧3h后复氧6h)、缺氧后处理组(缺氧3h后行复氧5min、缺氧5 min,反复3次,再复氧6 h).应用荧光酶标仪测定线粒体活性氧量,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡,Western blot检测细胞膜和线粒体Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞线粒体活性氧量较对照组显著升高(P＜0.01).缺氧后处理组心肌细胞线粒体平均荧光强度为30.74±1.88a.u./μg,显著低于缺氧/复氧组(63.17±2.75a.u./μg,P＜0.01),仍高于对照组(14.41±2.15a.u./μg).缺氧/复氧组和缺氧后处理组心肌细胞凋亡率较对照组显著升高(45.86％±3.29％和26.99％±3.35％比5.72％±1.63％,P＜0.01),缺氧后处理组低于缺氧/复氧组(P＜0.01).细胞膜和线粒体Bcl-2蛋白在缺氧后处理组显著上调,在缺氧/复氧组显著下调;Bax蛋白在缺氧后处理组显著下调,在缺氧/复氧组显著上调.结论 缺氧后处理抑制线粒体活性氧爆发,减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡,其抗凋亡机制可能与线粒体和细胞膜Bcl-2蛋白表达上调及Bax蛋白表达下调有关.     

miR-141-3p靶向调控Keap1对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激和Nrf2/HO-1通路的影响

目的:探讨miR-141-3p通过靶向调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞氧化应激、凋亡和Nrf2/血红素氧合酶1(HO-1)通路的影响。方法:体外培养大鼠胚胎心肌细胞H9c2,构建心肌细胞H/R损伤模型。将H9c2细胞随机分为control组(正常培养的H9c2细胞)、H/R组(H9c2细胞经H/R处理)、H/R+miR-NC组(H9c2细胞NC转染经H/R处理)和H/R+miR-141-3p组(H9c2细胞转染miR-141-3p经H/R处理),每组设3个复孔。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测不同组别心肌细胞中miR-141-3p和Keap1表达水平,细胞毒性试验(CCK-8)法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组心肌细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)表达水平,化学荧光法检测各组心肌细胞活性氧(ROS)含量,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测Nrf2、HO-1蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验和Western Blo...     

lncRNA PVT1通过靶向miR-761对缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的探讨lncRNA PVT1对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡、氧化应激的影响及其对miR-761的调控作用。方法采用H/R诱导大鼠心肌细胞H9c2建立细胞损伤模型,分别将si-NC、si-PVT1、miR-mimics-NC、miR-761 mimics、si-PVT1与miR-inhibitor-NC、si-PVT1与miR-761 inhibitor转染至H/R诱导的心肌细胞;采用qRT-PCR法检测PVT1、miR-761的表达量;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的含量;双荧光素酶报告实验检测PVT1与miR-761的靶向关系;Western blot法检测B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤2相关蛋白(Bax)的蛋白表达量。结果与对照组比较,H/R组PVT1的表达水平升高(P0.05),miR-761的表达水平降低(P0.05)。与H/R+si-NC组比较,H/R+si-PVT1组凋亡率及Bax蛋白水平降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平及SOD、CAT的活性升高(P0.05),MDA的含量降低(P0.05)。与H/R+miR-mimics-NC组比较,H/R+miR-761 mimics组凋亡率及Bax蛋白水平降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平及SOD、CAT的活性升高(P0.05),MDA的含量降低(P0.05)。双荧光素酶报告实验证实PVT1可靶向结合miR-761;干扰miR-761可明显逆转沉默PVT1对H/R诱导的心肌细胞氧化应激及凋亡的作用。结论沉默PVT1可通过上调miR-761而抑制细胞凋亡及氧化应激从而减轻H/R诱导的心肌细胞损伤。     

miR-92a对H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响

目的探讨miR-92a对过氧化氢(H2O2)诱导的H9C2心肌细胞增殖、凋亡及Wnt信号通路的影响。方法通过Lipofectamine~(TM)2000将miR-92a抑制物(inhibitor)及阴性对照组转染大鼠心肌细胞H9C2,RT-PCR检测转染后细胞中miR-92a的表达;将后续实验分为空白对照组、H2O2组和miR-92a inhibitor+H2O2组,利用CCK8法、流式细胞仪及Western印迹分别检测3组细胞的增殖、凋亡、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和Bcl-2相关X蛋白(Bax)及Wnt信号通路β-连环蛋白(β-catenin)和c-Myc的蛋白表达。结果 miR-92a inhibitor组miR-92a mRNA表达显著低于空白对照组(P0.05),阴性对照组与空白对照组差异无统计学意义(P0.05);与空白对照组比较,H2O2组细胞增殖显著降低,凋亡率显著增加,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著上调表达,Bcl-2蛋白显著下调表达(均P0.05),与H_2O_2组比较,miR-92a inhibitor+H_2O_2组细胞增殖显著升高,凋亡率显著降低,Bax、β-catenin、c-Myc蛋白显著下调表达,Bcl-2蛋白显著上调表达(均P0.05)。结论抑制miR-92a的表达可促进H2O2诱导的H9C2心肌细胞增殖,抑制细胞的凋亡,其机制与调节Bax、Bcl-2蛋白及Wnt信号通路表达有关。     

miR-877靶向TRIM72调控脂多糖诱导的大鼠心肌细胞炎症反应和细胞凋亡

目的研究miR-877对脂多糖(LPS)诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应和细胞凋亡的影响及潜在的分子机制。方法实时荧光定量(qRT)-聚合酶链式反应(PCR)检测miR-877和三重基序(TRIM)72 mRNA的表达,Western印迹测定TRIM72蛋白、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定LPS诱导心肌细胞H9c2后培养上清液中肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的含量,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-877与TRIM72的调控关系。结果 LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2中miR-877表达量显著上升(P0.05),TRIM72 mRNA和蛋白表达量显著下降(P0.05);LPS可诱导H9c2细胞大量产生炎症因子TNF-α和IL-6,诱导细胞凋亡;抑制miR-877表达或过表达TRIM72均可减轻LPS诱导的心肌细胞H9c2炎症反应,降低TNF-α和IL-6的产生,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示,miR-877靶向负调控TRIM72的表达;抑制TRIM72表达可逆转下调miR-877对LPS诱导的H9c2细胞炎症因子表达和细胞凋亡的作用。结论 miR-877通过靶向TRIM72以减轻LPS诱导的大鼠心肌细胞H9c2炎症反应,抑制细胞凋亡。     

微小RNA-760在H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响

目的探讨微小RNA-760(miR-760)在缺血再灌注(H/R)后H9c2细胞中的表达及对凋亡的影响。方法采用H9c2细胞制备H/R模型,通过转染调控H9c2细胞的miR-760表达,并通过系统随机化法分为对照组、模型组(H/R组)、阴性对照组(H/R+miR NC组)和H/R+miR-760 mimics组,以RT-PCR检测H9c2细胞中miR-760的表达,CCK-8检测miR-760对H9c2细胞活力的影响,流式细胞术检测miR-760对H9c2细胞凋亡的影响,Western blot检测miR-760对心肌细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3表达的影响。结果 miR-760在H/R组H9c2细胞中的相对表达量较对照组显著降低(P<0.001),而H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的miR-760表达量较H/R组明显上调(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞活力显著降低(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的活力显著增加(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的凋亡率显著增加(P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组H9c2细胞的凋亡率显著降低(P<0.01)。与对照组比较,H/R组H9c2细胞的Bcl-2表达量显著下调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著上调(均为P<0.001);与H/R组比较,H/R+miR-760 mimics组的Bcl-2表达量显著上调,Bax和cleaved caspase-3表达量显著下调(均为P<0.001)。结论 miR-760在H/R后H9c2细胞中表达下调,上调miR-760的表达能够抑制H9c2细胞凋亡,其机制可能与上调Bcl-2、下调Bax和cleaved caspase-3的表达有关。     

人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用

目的观察人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用。方法采用人参皂苷Rb1对H9c2细胞缺氧复氧进行预处理,通过检测氧化应激、凋亡指标观察人参皂苷Rb1的作用。将细胞随机分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧加人参皂苷Rb1(50、100、200μmol/L),按实验设计因素处理后,通过蛋白电泳检测凋亡相关蛋白caspase-3,检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS),TUNEL法检测细胞凋亡。结果缺氧复氧处理可使H9c2心肌细胞的ROS和MDA水平显著增加,SOD活性显著下降,上调caspase-3的表达,增加H9c2心肌细胞的凋亡。人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞MDA表达量,增加SOD活性,降低ROS水平,且人参皂苷Rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞caspase-3的表达量及凋亡细胞数量。结论人参皂苷Rb1可降低缺氧复氧对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及凋亡,从而对缺氧复氧H9c2心肌细胞起保护作用。     

miR-92a在大鼠缺血再灌注心肌组织中的表达及对心肌细胞凋亡的影响

目的研究miR-92a在大鼠缺血再灌注(I/R)心肌组织中的表达及对心肌细胞凋亡的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为I/R组和假手术组,采用夹闭冠状动脉法将I/R组大鼠制备成心肌缺血再灌注模型,采用新生SD乳鼠制备原代心肌细胞并制备缺氧/复氧(H/R)细胞模型,以Lipofectimane2000脂质体干扰心肌细胞中miR-92a的表达,以定量PCR检测miR-92a在心肌组织中的表达,流式细胞仪检测miR-92a对心肌细胞凋亡的影响,Western印迹检测凋亡相关蛋白淋巴瘤/白血病(Bcl)-2和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3的表达。结果 miR-92a在I/R心肌组织中的表达与假手术组相比显著升高(P0. 05),在H/R组心肌细胞中的表达也显著高于常氧组细胞(P0. 05)。与对照组(未进行转染)相比,miR-92a NC组(转染miR-92a阴性对照)细胞中miR-92a的相对表达差异无统计学意义(P0. 05),而miR-92a inhibitor组(转染miR-92a抑制剂)细胞中miR-92a的相对表达量显著升高(P0. 05)。与对照组相比,I/R组细胞凋亡率显著升高(P0. 05); I/R+miR-92a inhibitor组细胞凋亡率较I/R组显著降低(P0. 05)。与对照组相比,I/R组细胞中Bcl-2蛋白的相对表达量显著降低(P0. 05),酶切Caspase-3蛋白的相对表达量显著升高(P0. 05);与H/R组相比,I/R+miR-92a inhibitor组细胞中Bcl-2蛋白的相对表达量显著升高(P0. 05),酶切Caspase-3蛋白的相对表达量显著降低(P0. 05)。结论 miR-92a在缺血再灌注后心肌组织和细胞中呈现高表达,下调miR-92a表达后能够减弱缺血再灌注引起的细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bcl-2和酶切Caspase-3蛋白的表达有关。     

磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路介导葛根素改善缺氧复氧损伤的作用及机制

目的:探讨磷酯酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路介导葛根素改善缺氧复氧损伤的作用及机制。方法:应用噻唑蓝法筛选出合适的葛根素以及PI3K抑制剂LY294002干预人脐静脉内皮细胞EA.hy926的浓度。分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧+葛根素组(葛根素组),缺氧复氧+葛根素+LY294002处理组(葛根素+抑制剂组),每组均设3个复孔。应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测葛根素预处理细胞后以及葛根素预处理细胞的同时加入LY294002后对B细胞淋巴瘤/白血病-(2Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化天冬氨酸蛋白水解酶-(3cleaved caspase-3)、活化天冬氨酸蛋白水解酶-9(cleaved caspase-9)、磷酸化的蛋白激酶B(p-Akt)、Akt蛋白表达的影响。应用实时荧光定量PCR检测葛根素预处理对EA.hy926细胞缺氧复氧后天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)和Bcl-2信使核糖核酸(m RNA)表达的影响。应用Hoechest染色检测葛根素预处理对EA.hy926细胞凋亡的影响。结果:葛根素(10-7mol/L)明显升高缺氧复氧后EA.hy926细胞活力(P0.001),并显著上调Bcl-2蛋白水平的表达,下调Bax、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3蛋白水平的表达(P均0.01)。与缺氧复氧组相比,葛根素预处理后,p-Akt蛋白表达水平明显升高(P0.01)。加入LY294002(10μmol/L)后p-Akt蛋白表达水平下降,且抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降,促凋亡蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bax的表达水平升高(P均0.01)。结论:葛根素对缺氧复氧诱导的EA.hy926细胞凋亡具有抑制作用,其抑制作用可能与其对PI3K/Akt信号通路的调控有关。     

当归多糖对缺氧-复氧损害H9c2心肌细胞的保护作用

目的探讨当归多糖(angelica sinensis polysaccharide,ASP)对缺氧-复氧损害H9c2心肌细胞的保护作用。方法噻唑蓝[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]检测ASP对H9c2细胞增殖的影响;在体外ASP培养后,再缺氧-复氧培养H9c2心肌细胞为实验组,以正常培养细胞为对照组,以仅缺氧-复氧培养细胞为缺氧-复氧组。观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞活性氧水平;生化检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2 deoxyguanosine,8-OHdG)浓度;实时荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(humanγ-glutamyl systeine synthetase,γ-GCS)、红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、醌氧化还原酶1[NAD(P)H dehydrogenase 1,NQO1]mRNA表达;Western bloting实验检测细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bcl-2-Associated X,Bax)、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白浓度。结果在常氧环境中ASP可浓度-时间依赖地抑制H9c2细胞增殖;缺氧-复氧诱导H9c2细胞显著凋亡(P0.05)、活性氧水平显著升高(P0.05),同时造成活性氧清除相关酶γ-GCS、HO-1、NQO1 m RNA表达及Nrf2蛋白表达显著下调(P0.05);而ASP可浓度依赖地显著抑制缺氧-复氧诱导的H9c2细胞凋亡(P0.05),降低缺氧-复氧诱导的H9c2细胞活性氧水平(P0.05),显著提高缺氧-复氧诱导的H9c2细胞中γ-GCS、HO-1、NQO1mRNA表达及Nrf2蛋白表达(P0.05)。结论 ASP可上调Nrf2表达,提高心肌细胞内抗氧自由基酶的表达,降低由缺氧-复氧所导致心肌细胞的氧化应激水平,抑制心肌细胞凋亡。