RNA干扰HIF-1α影响宫颈癌HeLa细胞上皮细胞间质变标记蛋白的研究

目的 通过RNA干扰技术沉默人宫颈癌HeLa细胞缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)的表达,在细胞水平研究HIF-1α对宫颈癌HeLa细胞上皮细胞-间质变标记蛋白(E-cadherin,N-cadherin,vimentin)表达的影响.方法 将人宫颈癌HeLa细胞株(H0细胞)、转染pGenesil-1空白质粒的HeLa细胞株(H1细胞)及转染HIF-1α-shRNA质粒的HeLa细胞株(H2细胞)分别行常氧及缺氧(150 μmol/L CoCl2培养12 h)培养,应用Western印迹、免疫细胞化学法检测每组HeLa细胞中HIF-1α、上皮标记蛋白E-cadherin、间质标记蛋白vimentin、N-cadherin的表达情况.结果 Western印迹分析各缺氧组HIF-1α、E-cadherin、vimentin及N-cadherin的平均光密度值,免疫细胞化学显示H0细胞、H1细胞缺氧时HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白高表达,而E-cadherin低表达,H2细胞在乏氧时HIF-1α、N-cadherin、vimentin蛋白表达显著减弱,而E-cadherin高表达.结论 通过shRNA干扰抑制人宫颈癌HeLa细胞HIF-1α,可一定程度上抑制乏氧环境中宫颈癌HeLa细胞上皮细胞-间质变.     

RNAi沉默HIF-10α基因抑制滋养细胞TGF-3β表达的实验研究

目的 构建缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达质粒,探讨其在低氧条件下对BeWo细胞转化生长因子3β(transforming growth factor 3β,TGF-3β)基因表达的抑制作用.方法 根据小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,针对HIF-1α基因设计并合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒,应用脂质体将重组质粒转染BeWo细胞.缺氧培养后,应用Western blot法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3β蛋白表达水平,应用real time PCR法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3βmRNA表达水平.结果 成功构建HIF-1α的shRNA真核表达载体,转染BeWo细胞.低氧条件下,细胞HIF-1α蛋白和mRNA表达下降;同时细胞TGF-3β蛋白和mRNA表达也降低.结论 构建的HIF-1α基因shRNA表达质粒在低氧条件下明显抑制滋养细胞TGF-3β基因的表达.     

RNAi沉默HIF-1α基因抑制滋养细胞TGF-3β表达的实验研究

目的构建缺氧诱导因子1α（hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α）基因的短发夹状干扰RNA（short hair-pin RNA,shRNA）表达质粒,探讨其在低氧条件下对BeWo细胞转化生长因子3β（transforming growth factor3β,TGF-3β）基因表达的抑制作用。方法根据小干扰RNA（small interference RNA,siRNA）设计原则,针对HIF-1α基因设计并合成两条寡聚DNA片段,退火后克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒,应用脂质体将重组质粒转染BeWo细胞。缺氧培养后,应用Western blot法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3β蛋白表达水平,应用real time PCR法检测滋养细胞HIF-1α和TGF-3βmRNA表达水平。结果成功构建HIF-1α的shRNA真核表达载体,转染BeWo细胞。低氧条件下,细胞HIF-1α蛋白和mRNA表达下降;同时细胞TGF-3β蛋白和mRNA表达也降低。结论构建的HIF-1α基因shRNA表达质粒在低氧条件下明显抑制滋养细胞TGF-3β基因的表达。     

HIF-1α转染方法的优化及其对间充质干细胞存活及分化功能的影响

目的探索应用脂质体作为载体将低氧诱导因子-1α(HIF-1α)转染至间充质干细胞(MSCs)的转染方法。方法应用脂质体作为载体将HIF-1α转染至P3代MSCs,荧光观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,评估转染效率。比较在不同情况下细胞的转染效率。将转染的MSCs、空质粒转染的MSCs和未转染的MSCs置于缺氧环境下(CoCl2模拟缺氧),比较3种细胞HIF-1αmRNA、HIF-1α蛋白的表达。鉴定转染的MSCs向成骨细胞和脂肪细胞的分化能力,及在缺氧环境中的存活率。结果应用脂质体法可以成功将pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP转染至MSCs。当细胞汇合度在80%以上,DNA与质粒的比为(μg/μL)1∶1.25,且转染时间为4 h时转染效率最高,为21%。转染HIF-1α的MSCs在缺氧环境中可被成功向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化,HIF-1α转染可以提高缺氧时MSCs存活率(P<0.05)。在缺氧条件下pcDNA3.0-HIF-1α-eGFP瞬时转染的MSCs较空质粒(pcDNA3.0-eGFP)转染的MSCs和未转染的MSCs能高表达HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白(P<0.05)。结论应用脂质体作为载体可以将HIF-1α转染至MSCs,HIF-1α转染的MSCs在缺氧时高表达HIF-1αmRNA及蛋白。     

缺氧诱导骨肉瘤U2OS细胞分泌IL-11的机制研究

目的探讨缺氧诱导骨肉瘤U2OS细胞分泌IL-11的分子机制。方法体外缺氧(1%O2)环境下培养人骨肉瘤U2OS细胞系,同时加入HIF-1α抑制剂孵育,或预先加入不同信号通路抑制剂处理,Western blot检测HIF-1α的蛋白水平,定量PCR检测IL-11的mRNA水平,ELISA检测IL-11的蛋白水平。结果与正常氧环境培养的U2OS细胞相比,缺氧显著诱导U2OS细胞上调HIF-1α的表达,同时促进IL-11的mRNA水平和蛋白水平增加,并具有时间依赖性;加入HIF-1α抑制剂后可显著抑制缺氧诱导的HIF-1α表达以及IL-11的mRNA和蛋白水平;加入JNK信号抑制剂亦显著抑制缺氧诱导的IL-11表达和分泌,上述差异均具有统计学意义(P 0. 05)。但HIF-1α的表达无显著变化,差异无统计学意义(P 0. 05)。结论缺氧可通过HIF-1α-JNK信号诱导骨肉瘤U2OS细胞分泌IL-11,从而促进骨肉瘤的发生发展。     

HIF-1α过表达慢病毒载体的构建及对心肌细胞Notch配体Jagged1表达的影响

目的构建低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)过表达重组慢病毒质粒并包装病毒,将病毒感染乳鼠心肌细胞,分析其对Notch配体Jagged1表达的影响。方法从cDNA文库中PCR扩增人HIF-1α编码序列并克隆入酶切线性化慢病毒载体GV218,转化感受态大肠杆菌细胞筛选出阳性克隆并测序鉴定。将HIF-1α过表达慢病毒质粒与病毒包装辅助质粒共转染工具细胞HEK293T,包装出慢病毒颗粒。原代分离SD乳大鼠心肌细胞,将HIF-1α过表达慢病毒感染心肌细胞,定量PCR分析Jagged1 mRNA水平的变化。结果成功扩增HIF-1α编码序列并正确连接入线性化载体GV218,获得阳性转化子并测序无误。将转化子质粒与病毒包装辅助质粒共转染HEK293T后,获得滴度为1×10~8TU/ml的慢病毒颗粒,Western blot法检测到HIF-1α-GFP融合蛋白。重组慢病毒感染乳鼠心肌细胞后,胞核中见GFP信号。与对照组相比,HIF-1α过表达5天后显著上调Jagged1 mRNA的水平。结论心肌细胞中HIF-1α可诱导Jagged1的表达。HIF-1α过表达重组慢病毒载体的成功构建,为研究缺血缺氧性心肌损伤反应的分子机制奠定了基础。     

HIF-1α基因RNA干扰对肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是细胞缺氧反应网络的关键调节转录因子,而HIF-1α是决定HIF-1 活性的亚单位.HIF-1能在缺氧条件下促进血管内皮生长因子(VEGF) 依赖性的肿瘤血管形成.本研究构建了针对HIF-1α的pSUPER-EGFP siRNA表达载体,抑制HepG2细胞HIF-1α的表达.RT-PCR和Western blot蛋白印迹检测结果显示,RNA干扰能明显抑制HIF-1α的表达;在缺氧培养条件下,HepG2细胞中VEGF有较高的表达,当HIF-1α基因表达被有效抑制,VEGF mRNA和蛋白质的表达随之大幅下降.本研究结果表明,HIF-1α是血管生成因子VEGF表达的调节因子,通过RNA干扰导致的HIF-1α基因抑制,能下调VEGF的表达,提示HIF-1α基因可作为抗抑制VEGF依赖性的肿瘤血管生成的一个靶点.     

人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒的构建及对人肺腺癌SPCA-1细胞HIF-1α表达的影响

目的构建人HIF-1α基因RNAi重组腺病毒Ad.HIF-1α,并观察其对人肺腺癌细胞SPCA-1的影响。方法采用酶切、连接、转化等方法,利用AdEasy系统构建插入HIF-1αRNAi片段的重组腺病毒Ad.HIF-1α。氯化铯梯度离心法纯化病毒。病毒功能滴度采用传导293细胞的方法,以2MOIAd.HIF1α传导SPCA-1细胞,48h后应用流式细胞术检测绿色荧光蛋白(GFP)表达和HIF-1α蛋白表达。HIF-1αmRNA表达用荧光定量PCR检测。结果酶切和卡那霉素抗性筛选证实,重组穿梭载体pAdTrack.HIF-1α和腺病毒质粒pAd.HIF-1α均构建正确。pAd.HIF-1α导入293细胞3d,约15%的细胞表达GFP,最终所获病毒滴度为5.0×1010TU/mL。Ad.HIF-1α转导SPCA-1细胞48h,GFP表达率为92%;HIF-1αmRNA和蛋白表达分别下降89%和87%。结论成功构建人HIF-1α基因RNAi腺病毒,为通过阻断HIF-1α基因治疗肺癌提供初步实验依据。     

KIF2A及HIF-1α在胃癌组织的表达及其意义

目的探讨KIF2A与HIF-1α在胃癌组织中表达及意义。方法免疫组化法检测72例胃癌组织及20例正常胃组织中KIF2A和HIF-1α的表达情况;Western blot检测1%O下敲除HIF-1α对胃癌MKN-28细胞2KIF2A表达的影响。结果胃癌组织中KIF2A与HIF-1α阳性表达率分别为62.50%和76.39%,显著高于正常胃组织(5.00%和10.00%,P0.05);胃癌组织中KIF2A与HIF-1α表达水平无相关性(P0.05);KIF2A及HIF-1α均与临床分期和淋巴结转移有关(P0.05);KIF2A与浸润程度有关(P0.05)。敲除HIF-1α对缺氧环境下MKN-28细胞中KIF2A的表达水平无影响(P0.05)。结论 KIF2A与HIF-1α在胃癌组织中高表达,与胃癌发生进展相关。     

血管生成素1基因真核表达质粒的构建及测序

目的:构建血管生成素1(Ang1)的真核表达质粒psecTagBk-Ang1。方法:用PCR方法从人心脏文库中扩增Ang1基因全外显子片段, 并定向插入真核表达载体psecTagBk中, 用限制性内切酶酶切和测序鉴定克隆的Ang1基因。结果:扩增出人Ang1cDNA片段, 测序结果显示扩增的Ang1cDNA包括长为1497bp、1494bp的2种剪切体, 分别编码498和497个氨基酸残基。限制性内切酶酶切和DNA测序证实获得正确的重组质粒psecTagBk-Ang1。结论:发现2种共存的Ang1cDNA剪切体, 并成功构建真核表达质粒psecTagBk-Ang1。     

硫酸右旋糖苷抑制人胃癌细胞HIF-1α和整合素β1表达及其相关性

目的培养人胃癌细胞株BGC-823,探讨硫酸右旋糖苷(dextran sulphate,DS)对人胃癌细胞整合素β1(Integrinβ1)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia induced factor-1α,HIF-1α)的表达及其相关性。方法培养BGC-823细胞,分别在培养液中加入DS和磷酸缓冲液(phosphate buffered saline,PBS),低氧培养不同时间,应用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HIF-1α、Integrinβ1的表达,并分析二者的相关性。结果实验组HIF-1α、Integrinβ1的表达水平明显低于对照组,且HIF-1α和Integrinβ1表达呈正相关。结论 DS可以抑制人胃癌细胞的黏附过程,减弱HIF-1α、Integrinβ1的表达。DS可能通过抑制HIF-1α降低Integrinβ1的表达,有利于抑制人胃癌细胞的腹腔种植转移。     

缺氧在肝星状细胞激活中的作用机制

目的:探讨缺氧在肝星状细胞(HSC)激活中的作用机制.方法:缺氧培养大鼠HSC株HSC-T6,逆转录PCR检测HIF-1α、TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA的表达,Westren blot检测α-SMA表达.缺氧/常氧下,加TGF-β1中和抗体、HIF-1α诱导剂氯化钴(CoCl2)或抑制剂2-甲氧雌二醇(2ME2),逆转录PCR检测HSC-T6表达Ⅰ型胶原mRNA的变化.结果:缺氧能诱导HSC-T6表达HIF-1α、TGF-β1、Ⅰ型胶原mRNA及α-SMA蛋白;常氧下CoCl2能诱导HSC-T6表达Ⅰ型胶原mR-NA,TGF-β1中和抗体及2ME2能减弱缺氧诱导HSC-T6表达Ⅰ型胶原mRNA,但表达量仍高于常氧培养.结论:缺氧能激活HSC,分泌Ⅰ型胶原,增加细胞外基质沉积,其作用机制既依赖于TGF-β的胞内信号传导机制,也与HIF-α介导的信号传导有关,在肝纤维化形成中起着举足轻重的作用.     

HIF-1基因RNA干扰对肝癌HepG2细胞VEGF表达的抑制

缺氧诱导因子-1(HIF-1)是细胞缺氧反应网络的关键调节转录因子,而HIF-1α是决定HIF-1活性的亚单位。HIF-1能在缺氧条件下促进血管内皮生长因子(VEGF)依赖性的肿瘤血管形成。本研究构建了针对HIF-1α的pSUPER-EGFP siRNA表达载体,抑制HepG2细胞HIF-1α的表达。RT-PCR和Western blot蛋白印迹检测结果显示,RNA干扰能明显抑制HIF-1α的表达;在缺氧培养条件下,HepG2细胞中VEGF有较高的表达,当HIF-1α基因表达被有效抑制,VEGF mRNA和蛋白质的表达随之大幅下降。本研究结果表明,HIF-1α是血管生成因子VEGF表达的调节因子,通过RNA干扰导致的HIF-1α基因抑制,能下调VEGF的表达,提示HIF-1α基因可作为抗抑制VEGF依赖性的肿瘤血管生成的一个靶点。     

红景天苷通过PI(3)K/Akt激活HIF-1α表达抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡

目的:探讨红景天苷激活HIF-1α表达,抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡的可能的信号通路.方法:将原代培养的心肌细胞分为4组:正常对照组、缺氧组、缺氧 100 mg/L红景天苷组、缺氧 100 mg/L红景天苷 LY294002组.MTT法测定细胞存活率,Hoechst33258染色、DNA-ladder检测细胞凋亡,通过免疫荧光染色、Western blot检测细胞Akt、磷酸化Akt、HIF-1α的表达.结果:LY294002处理后,红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的保护作用被明显减弱,细胞存活率明显下降(P<0.01),细胞凋亡比率明显增加(P<0.01),琼脂糖凝胶电泳特异性"ladder"灰度明显加深,磷酸化Akt、HIF-1α2种蛋白表达水平明显降低.结论:红景天苷对缺氧诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用,其机制可能是通过PI(3)K/Akt信号通路激活HIF-1α的表达有关.     

缺氧反应元件启动子表达反义血管内皮生长因子(VEGF)165 cDNA靶向性抑制骨肉瘤细胞VEGF表达

目的以缺氧诱导因子-1/缺氧反应元件(HIF-1/HRE)基因调节系统为载体,构建含HRE启动子的人反义血管内皮生长因子(VEGF)165 cDNA真核表达载体,探讨其对缺氧条件下骨肉瘤细胞VEGF表达的靶向性抑制作用.方法采用聚合酶链反应(PCR)和DNA重组技术构建由HRE启动子驱动的含荧光素酶(Luc)报告基因和人反义VEGF165 cDNA全长的真核表达质粒,将其转染骨肉瘤细胞系MG63,用液闪计数仪测定缺氧对报告基因表达的调节,酶链免疫吸附试验(ELISA)法检测缺氧条件下细胞VEGF表达的变化.结果成功构建了由HRE启动子驱动的含Luc和反义VEGF165 cDNA全长的真核表达质粒pBI-HRE-Luc-AsVEGF165,该质粒转染骨肉瘤细胞系,缺氧条件下可使报告基因在肿瘤细胞中的表达提高3.5×102倍,使肿瘤细胞VEGF分泌下降45%.结论利用肿瘤缺氧,HRE启动子能够实现反义VEGF165的高效表达,为开展靶向性抗肿瘤血管生成治疗提供了实验依据.     

低氧及HIF－1α基因转染对HepG2细胞基因表达谱的影响

 目的：应用基因芯片技术,研究缺氧及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)基因转染对HepG2细胞基因表达谱的影响。方法: 以常氧对照腺病毒(Ad-GFP)转染组（CC组）为对照组,常氧HIF-1α腺病毒(Ad-HIF)转染组（CH组）、低氧对照腺病毒(Ad-GFP)转染组（HC组）、低氧(2%O₂, 24 h) HIF-1α腺病毒(Ad-HIF)转染组（HH组）为实验组,提取HepG2细胞的总RNA,反转录成Cy3和Cy5标记的cDNA探针,与定制的包含1 628个能量代谢相关基因的cDNA芯片进行杂交,筛选出实验组与对照组差异表达基因并进行分析。结果: 与常氧对照腺病毒转染组相比较,常氧HIF-1α腺病毒转染组3个基因表达下调;低氧对照腺病毒转染组10个基因表达上调;低氧HIF-1α腺病毒转染组6个基因表达上调、1个基因表达下调。这些差异表达基因编码蛋白的功能涉及能量代谢、信号转导、细胞凋亡、转录和HIF-1调节、生物转化、酸碱平衡调节、细胞黏附分子等方面。结论: 低氧可以上调HepG2细胞能量代谢相关基因表达,HIF-1的转录调节作用可能是其重要环节。     

RNA干扰沉默缺氧诱导因子-1α逆转乳腺癌的耐药性

目的观察RNA干扰缺氧诱导因子（HIF）-1α逆转乳腺癌耐药性的作用.方法构建靶向缺氧诱导因子-1α的短发夹状小干扰RNA基因并转染到人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR中.常规MTY法检测细胞存活率,外排实验检测细胞的P-糖蛋白转运功能,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测细胞的HIF-1α、多药耐药基因1（mdr-1）mRNA变化,Western印迹法观察干扰前后HIF-1α、P-糖蛋白的变化.结果测序证实成功构建HIF-1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer-HIF,转染空质粒ADR/neo不影响肿瘤细胞的耐药性.MTT法检测ADR/shRNA组细胞存活率由76%下降到43%,Rh123荧光强度由22.0%升为86.6%,ADR/shRNA组中HIF-1α、mdr-1mRNA、蛋白水平显著降低（P＜0.05）,且Spearman相关分析HIF-1α和mdr-1指数在三组中显示呈正相关（r=0.816,P＜0.01）.结论成功构建了HIF-1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer-HIF,可显著降低乳腺癌MCF-7/ADR细胞中HIF-1α表达从而起到逆转肿瘤耐药的作用.     

RNA干扰沉默HIF-1α基因对宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭的影响

目的探讨HIF-1α基因短发夹干扰RNA(shRNA)低氧条件下对宫颈癌HeLa细胞定植和侵袭能力的作用。方法针对HIF-1α基因设计并合成2条寡聚DNA片段,退火后将其克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒中,构建shRNA真核表达质粒,脂质体转染人宫颈癌细胞株HeLa细胞。低氧培养后,应用Western blot和定量PCR法检测HIF-1α蛋白及mRNA表达水平;用软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测HeLa细胞的定植和侵袭能力。结果成功构建的HIF-1αshRNA真核表达载体转染宫颈癌HeLa细胞,低氧条件下HeLa细胞的HIF-1α蛋白及mRNA表达下降;同时细胞在软琼脂中克隆形成数和穿透Matrigel膜的细胞数减少。结论HIF-1α的shRNA真核表达载体在低氧条件下可抑制宫颈癌细胞的定植和侵袭能力。     

枸杞多糖增加缺氧肺血管平滑肌细胞SIRT1表达并降低MMP-9及HIF-1α表达

目的监测在缺氧条件下进行枸杞多糖处理后肺血管平滑肌细胞中沉默接合型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)及缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达。方法血管平滑肌细胞分为常氧(200 m L/L O2)培养的正常细胞、2μmol/m L枸杞多糖处理的常氧细胞、DMSO处理的常氧细胞、DMSO处理的缺氧(100 m L/L O2)细胞、(0.5、1、2)μmol/m L枸杞多糖处理的缺氧细胞、SIRT1的特异性激动剂10μmol/L白芦藜醇处理的缺氧细胞、非特异性激动剂1μmol/L SRT-1720处理的缺氧细胞、SIRT1抑制剂0.5μmol/L EX-527处理的缺氧细胞,培养于6、12、24 h,实时定量PCR、Western blot法分别检测SIRT1、MMP-9及HIF-1α的mRNA和蛋白表达;在缺氧的血管平滑肌细胞中加入枸杞多糖处理12 h,实时定量PCR、Western blot法分别检测血管平滑肌细胞中SIRT1、MMP-9及HIF-1α的表达。结果缺氧条件下血管平滑肌细胞SIRT1mRNA和蛋白水平降低,MMP-9及HIF-1αmRNA和蛋白水平升高。缺氧条件下用枸杞多糖处理后,SIRT1的含量随枸杞多糖剂量的增加而增加,同时MMP-9、HIF-1α的含量降低。SIRT1的特异性激动剂白藜芦醇可抑制MMP-9的表达。结论枸杞多糖增加缺氧肺血管平滑肌细胞SIRT1水平、降低MMP-9及HIF-1α的水平。     

乏氧对肺癌细胞系HIF家族成员HIF-1α、HIF-2α和HIF-β表达的影响及其相关性

目的 探讨乏氧对不同类型肺癌细胞乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)、乏氧诱导因子-2α(HIF-2α)和乏氧诱导因子-β(HIF-β)基因表达的影响及其相关性. 方法 以0.5%低氧培养箱模拟细胞低氧环境,采用定最RT-PCR和Western blotting方法 分别检测乏氧处理4～24h人肺癌细胞系SPCA1、A549、H446、SH77、H520和95D中HIF-1α、HIF-2α和HIF-βmRNA和蛋白水平的表达. 结果 1.常氧下不同肺癌细胞系HIF-1α、HIF-2α mRNA表达水平较低,短期乏氧HIF-1α mRNA降低而HIF-2α mRNA增加,随乏氧时间延长两者mRNA表达逐渐增加.2.HIF-1α和HIF-2α蛋白在常氧下表达均较低,乏氧下两者表达增强但变化趋势不一致,HIF-1α蛋白在所有细胞中均有表达,HIF-2α蛋白仅在某些细胞有表达.3.HIF-β mRNA和蛋白在常氧或乏氧下表达无明显变化.4.相关性分析表明,乏氧下HIF-2α mRNA与蛋白表达呈正相关(r=0.989,P=0.011);而HIF-1α和HIF-β mRNA与蛋白无相关性. 结论 肺癌细胞中HIF-1α、HIF-2α和HIF-β对乏氧刺激表现出不同的应答方式且具有细胞特异性,乏氧对HIF-1α和HIF-2α的调控可能分别发牛在翻译和转录水平,而对HIF-β无明显的调控作用.