GSH 耗竭介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导肺癌A 549 细胞凋亡

目的探讨5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用是否涉及细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）耗竭。方法体外培养A549细胞,分光光度法测定细胞内GSH含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 DMF以浓度依赖方式诱导A549细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂。DMF显著降低A549细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。500μmol·L-1GSH预孵育1h,能有效阻断DMF诱导细胞内GSH耗竭,并减弱DMF触发细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论细胞内GSH耗竭是DMF诱导人肺癌A549细胞凋亡作用机制之一。     

低剂量卡铂诱导人肺癌细胞A549过早性衰老的作用研究

目的考察低剂量卡铂诱导人肺癌细胞A549过早性衰老的作用。方法 A549细胞经不同浓度卡铂处理,采用MTT法和克隆形成率试验检测卡铂对细胞增生的抑制作用;β-半乳糖苷酶染色试验检测卡铂诱导细胞衰老情况;FCM法检测卡铂对细胞凋亡和细胞周期分布的影响;全波长荧光酶标仪检测细胞内活性氧自由基(ROS)水平变化。结果低剂量卡铂能诱导细胞衰老;不同浓度卡铂作用细胞48 h后,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞显著增多;细胞周期多停滞于G0/G1期,S期显著减少,且细胞内ROS水平明显升高(P<0.05)。结论低剂量卡铂能诱导人肺癌细胞A549过早性衰老。     

氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的作用机制

目的:探讨氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的可能作用机制。方法:人肺癌细胞株A549和NCI-H460细胞先加入终浓度IL-1β11μg/L刺激24h,再加入不同浓度氯美昔布继续培养24h,采用Western blot法检测ERK2、p-ERK及Bcl-2表达水平。氯美昔布体外处理A549、NCI-H460后,采用Western blot法检测Bcl-2、Bax表达水平。结果:氯美昔布作用后肺癌细胞中ERK2及p-ERK的磷酸化水平均下降,并伴有Bcl-2水平的下降,差异有统计学意义(P<0.01)。并且随着氯美昔布浓度的增大,Bcl-2蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达在A549细胞中增强,在NCI-H460细胞中不变,Bcl-2/Bax的比值下降。结论:氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的机制可能与通过ERK信号转导途径调节肺癌细胞产生Bcl-2,进而诱导Bcl-2/Bax的比值下降有关。     

活性氧介导5, 7- 二甲氧基黄酮增敏TRAIL 诱导肺癌细胞凋亡

目的研究5,7-二甲氧基黄酮(5,7-DMF)是否能增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的人肺癌细胞凋亡及其作用机制。方法体外培养人肺癌A549细胞。MTT法测定细胞增殖活性;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)和ELISA试剂盒检测细胞凋亡;DCFH-DA荧光标记FCM检测细胞内活性氧(ROS)水平。结果 5,7-DMF能增强TRAIL诱导的A549细胞凋亡和ROS生成。N-乙酰半胱氨酸能有效阻断5,7-DMF与TRAIL所诱导的A549细胞凋亡及ROS生成。结论 5,7-DMF通过促进A549细胞内活性氧生成从而增强TRAIL诱导的凋亡。     

苦瓜蛋白对A549肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK信号通路的影响

目的:观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A549细胞p42/44-MAPK及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制。方法:以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A549细胞,分别作用不同时间,CCK-8检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡。提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白,westernblot检测p42/44-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的变化。结果:苦瓜蛋白对A549细胞生长具有明显抑制作用,可显著地诱导A549细胞凋亡。与阴性对照比较,苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/44-MAPK及p-p42/44-MAPK信号分子的表达(P<0.05)。结论:苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A549细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用,其作用可能通过诱导A549细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK和磷酸化p42/44-MAPK的表达;MAPK信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制,驱使肿瘤细胞发生凋亡。     

BAPTA-AM对MDCK细胞的保护作用及其机制

目的观察BAPTA-AM抗D-氨基半乳糖(D-GalN)诱导MDCK细胞损伤作用,探讨其作用机制。方法采用MTT法,Annexin V-EGFP/PI与Hoechst33342/PI荧光染色,罗丹明123(Rhodamine 123)荧光染色,Caspase-8、Caspase-9活性测定及钙离子载体A23187诱导细胞内高钙等方法,分别测定D-GalN攻击下MDCK细胞活性,细胞凋亡状况,线粒体膜电位(△Ψm)、Caspase-8、Caspase-9活性和细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)变化等。结果 BAPTA-AM能明显抑制D-GalN所致的细胞活力下降、减少细胞凋亡、维持△Ψm,抑制Caspase-8、Caspase-9的激活,减轻A23187所致细胞损伤,降低[Ca2+]i。结论 BAPTA-AM通过减轻钙超载,保护线粒体、抑制外源及内源性凋亡通路的激活,发挥抗肾细胞凋亡作用。     

榄香稀对肺癌细胞凋亡的影响

目的:研究榄香稀对肺癌细胞的凋亡作用。方法:采用MTT法和Annexin V/PI法检测榄香稀和顺铂作用于肺癌A549细胞株的毒性和凋亡情况,比较榄香稀和顺铂诱导凋亡的差异。结果:榄香稀细胞半数毒性浓度为102.21μg/m1,榄香稀具有细胞毒性,且呈量效关系,但弱于顺铂;榄香稀和顺铂均能促进肺癌A549细胞凋亡,两者间无明显差异。结论:榄香稀可有效诱导肺癌细胞凋亡,对临床用药具有指导意义。     

AZIN-1小分子抑制剂抗非小细胞肺癌活性研究

目的研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(AZIN-1)小分子抑制剂对非小细胞肺癌的抑制作用及机制。方法通过CCK-8法检测A549细胞增殖;流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染)分析A549细胞凋亡;蛋白质免疫印迹实验检测A549细胞内鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸脱羧酶抗酶-1(AZ-1)和AZIN-1的表达;流式细胞术(PI单染)分析A549细胞周期;高效液相色谱法检测A549细胞内总多胺含量。结果AZIN-1小分子抑制剂能够显著抑制A549细胞的增殖,使细胞发生G0/G1周期阻滞,并诱导A549细胞发生凋亡,显著抑制AZIN-1和ODC的表达,干扰细胞内多胺代谢,降低细胞内总多胺含量。结论AZIN-1小分子抑制剂对A549细胞具有显著的生长抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和干扰多胺代谢有关。     

牛膝多糖硫酸酯和磷酸酯衍生物对人肺癌A549细胞的影响

目的探讨牛膝多糖硫酸酯(S-AbPS)和磷酸酯(P-AbPS)衍生物对人肺癌A549细胞的影响及其作用机制。方法用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测牛膝多糖、S-AbPS和P-AbPS对A549细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪观察S-AbPS和P-AbPS处理A549细胞后细胞凋亡的改变。结果S-AbPS和P-AbPS对A549细胞的增殖有抑制作用,且存在时间和剂量相关性。S-AbPS和P-AbPS的48 h抑瘤活性均较同浓度的牛膝多糖强。流式细胞仪分析显示,S-AbPS和P-AbPS均可不同程度地诱导细胞凋亡。结论S-AbPS和P-AbPS较牛膝多糖能更有效地抑制人肺癌A549细胞的增殖,其机制可能是通过诱导A549细胞凋亡而实现。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用

目的:研究藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞凋亡的诱导作用。方法:以0(阴性对照)、40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞48、72 h后,凝胶电泳法测定细胞DNA裂解情况。以0(阴性对照)、40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞24、48、72 h后,流式细胞仪测定细胞凋亡和细胞周期分布情况;免疫组化法测定细胞生存素(Survivin)表达。结果:40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞48、72 h后出现凋亡细胞特有的梯状条带;与阴性对照比较,40、80、160μg/ml藤梨根乙酸乙酯提取物培养细胞24、48、72 h后细胞凋亡率升高,G0/G1期细胞比例升高,Survivin表达减弱,且呈时间、浓度依赖关系。结论:藤梨根乙酸乙酯提取物可诱导A549细胞凋亡,将细胞周期阻滞于G0/G1期,其机制可能与降低Survivin表达有关。     

丹参酮ⅡA诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的探讨丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)抗人肺腺癌A549作用及其可能作用机制。方法通过细胞形态学和MTT法观察TanⅡA对A549细胞增殖的影响;应用Hoechest33258和PI双染法观察细胞凋亡;采用荧光分光光度计检测细胞内钙及线粒体膜电位;RT-PCR检测Bad和MT-1A mRNA的表达。结果 TanⅡA能抑制A549细胞增殖,且随TanⅡA剂量的增加和作用时间的延长而增强,TanⅡA作用A549细胞24、48和72h的IC50分别为117.85、14.87和6.89μmol·L-1。TanⅡA作用A549细胞24h后,A549细胞出现染色质聚集等典型的凋亡形态学改变,且随TanⅡA剂量的增加,A549细胞凋亡百分率逐渐增大。TanⅡA作用后,A549细胞的细胞内钙升高、线粒体膜电位降低、Bad mRNA表达增加、MT-1A mRNA表达下调。结论 TanⅡA具有抗A549作用,其诱导细胞凋亡可能与钙依赖性通路和MT-1A表达下调有关。     

苯乙双胍通过影响线粒体功能促进A549/DDP细胞凋亡

目的 探究苯乙双胍抑制 A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡的可能机制。方法 MTS法检测顺铂（顺铂 组）和苯乙双胍（苯乙双胍组）对 A549/DDP 细胞和 A549 细胞的细胞活力（24 h 和 48 h）的影响。苯乙双胍组以 2.5 mmol/L苯乙双胍处理,对照组采用PBS处理,MTS法检测苯乙双胍对A549/DDP细胞增殖的影响,克隆形成实验检测 苯乙双胍对 A549/DDP细胞克隆形成能力的影响,流式细胞术检测苯乙双胍对 A549/DDP细胞凋亡和活性氧（ROS） 胞内线粒体质量（Mitotracker）、钙离子（Rhod-2）的影响,实时荧光定量PCR检测线粒体DNA（mtDNA）变化,三磷酸腺 苷（ATP）试剂盒检测 ATP的变化,Western blot检测苯乙双胍对线粒体氧化磷酸化复合物表达的影响。结果 与顺 铂组比较,苯乙双胍组A549/DDP细胞在24 h和48 h的细胞活力降低（P＜0.05）,而2组间A549细胞24 h和48 h活力 差异无统计学意义。顺铂处理48 h时A549/DDP细胞活力均高于A549细胞（P＜0.05）,而24 h间差异无统计学意义; 苯乙双胍处理的A549/DDP细胞活力低于A549细胞（P＜0.05）。与PBS组相比,苯乙双胍组A549/DDP细胞的24 h和 48 h 增殖率、集落形成数减低,而凋亡率升高,ROS 水平增高,Mitotracker、Rhod-2、mtDNA 及 ATP 水平降低（P＜ 0.05）,线粒体氧化磷酸化复合物Ⅰ中的NDUFB8蛋白、复合物Ⅱ中的SDHB蛋白和复合物Ⅳ中的MTCO1蛋白表达明 显降低（P＜0.05）。结论 （1）A549/DDP细胞较 A549细胞对苯乙双胍更为敏感,但对顺铂耐受性较 A549细胞强。 （2）苯乙双胍通过增加细胞内 ROS、减少线粒体质量、钙离子和 mtDNA、抑制线粒体氧化磷酸化复合物表达,减少 ATP生成,从而抑制A549/DDP细胞增殖并促进其凋亡。     

Protective effect of tubuloside B on TNFalpha-induced apoptosis in neuronal cells.

AIM: To investigate the neuroprotective effect of tubuloside B, one of the phenylethanoids isolated from the stems of Cistanche salsa, on tumor necrosis factor-alpha (TNFalpha)-induced apoptosis in SH-SY5Y neuronal cells. METHODS: Cell viability was analyzed using MTT assay. Apoptotic cells were detected using Hoechst33342 staining, and confirmed by DNA fragmentation and flow cytometric analysis. The activity of caspase-3 was measured with special assay kit. The concentration of free intracellular calcium was determined with the probe Indo-1 by spectrometer. The level of intracellular reactive oxygen species and the potential of mitochondrial membrane were determined by laser scanning confocal microscopy (LSCM) combined with fluorescence probe H2DCFDA or JC-1 respectively. RESULTS: SH-SY5Y cells treated with TNFalpha 100 microg/L for 36 h showed typical morphological changes of apoptosis. DNA ladder could be observed by agarose gel electrophoresis. The highest percentage of apoptotic cells accumulated to 37.5 %. Following 36 h treatment with TNFalpha, accumulation of intracellular ROS and [Ca2+]i and decrease in mitochondrial membrane potential were observed, and caspase-3 activity increased by about five-fold compared with controls. However, pretreatment with tubuloside B (1, 10, or 100 mg/L) for 2 h attenuated the TNFalpha-mediated apoptosis. The antiapoptotic action of tubuloside B was partially dependent on an anti-oxidative stress effects, maintain of mitochondria function, decrease of concentration of free intracellular calcium and inhibition of caspase-3 activity. CONCLUSION: Tubuloside B has the neuroprotective capacity to antagonize TNFalpha-induced apoptosis in SH-SY5Y cells and may be useful in treating some neurodegenerative diseases.     

缓激肽介导的治疗心血管和糖尿病药物致血管性水肿的研究进展

目的 本研究旨在调查慢性射血分数降低的心力衰竭(HFrEF)患者神经内分泌抑制剂-血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素II受体阻滞剂(ARB)、β受体阻滞剂(BB)和醛固酮受体拮抗剂(MRA)使用现状及其与指南的差距。方法 搜集并分析2018年01月到12月HFrEF住院患者基本资料和三类神经内分泌抑制剂使用情况。结果 共纳入301例慢性HFrEF患者,平均年龄为71.3±11岁,男性占56.5%,平均EF值32.1±7.2%,51.8%合并有高血压,心衰最常见的病因是心脏瓣膜病。ACEI/ARB、BB和MRA使用率分别为77.4%,60.5%和94.0%,剂量达标率分别为44.2%、22.5%和100%。48.8%患者采用指南推荐的联合用药,包括1.3%两药联合(ACEI/ARB+BB)和47.4%三药联合(ACEI/ARB+ BB+MRA)。结论 该院慢性HFrEF患者神经内分泌抑制剂应用现状与指南仍有差异,ACEI/ARB和BB使用率和剂量达标率不足,而MRA使用过度,需进一步提高医生对指南依从性。     

多胺类似物CPENSpm通过干扰多胺代谢抑制肺癌细胞的增殖

目的研究多胺类似物CPENSpm对肺癌细胞株A549增殖和细胞凋亡的影响,以探讨CPENSpm抗肿瘤的作用机制。方法MTS法分析细胞的增殖速度,化学分析法测定多胺代谢酶的活性,HPLC法分析细胞内的多胺含量,亚凋亡峰测定法和DNA片段化分析法鉴定细胞程序性凋亡。结果CPENSpm处理A549肺癌细胞可导致:①癌细胞生长抑制并激发细胞凋亡;②抑制多胺合成关键酶ODC的活性,活化多胺降解代谢关键酶SSAT和SMO的活性;③耗竭细胞内多胺含量。SMO抑制剂MDL72527可拮抗CPENSpm对A549细胞的生长抑制作用。结论CPENSpm通过干扰A549细胞的多胺代谢途径,耗竭肿瘤快速生长必需的多胺成分,诱导产生活性氧H2O2从而抑制癌细胞生长并激发细胞程序性凋亡。     

Cyclosporine inhibited calcium-mediated apoptosis of HL-60 cells.

AIM: To study the effects of cyclosporine (Cyc) on apoptosis of HL-60 cells. METHODS: Apoptotic cells induced by harringtonine (Har), camptothecin (Cam), or calcimycin (Cal), thapsigargin (Tha) were identified with DNA electrophoresis, morphology, and flow cytometry. Relative [Ca2+]i alteration of apoptotic HL-60 cells were determined with flow cytometry. RESULTS: Cal 1 mg.L-1 or Tha 0.5 mg.L-1 induced apoptosis of HL-60 cells. This effect was inhibited by nontoxic concentration of Cyc 1 mg.L-1. Cyc did not inhibit Har- or Cam-induced apoptosis of HL-60 cells. Both Cal and Tha increased intracellular calcium, whereas Har or Cam did not. CONCLUSION: Cyc inhibited apoptosis only induced by calcium increasement in HL-60 cells. The mechanism of apoptosis induced by Cal or Tha was different from that by Har or Cam.     

Caspase-independent apoptosis induced by differentiation-inducing factor of Dicytostelium discoideum in INS-1 cells

Differentiation-inducing factor (DIF) is a lipophilic hormone of Dicytostelium discoideum and has been shown to exert diverse effects in mammalian cells. We investigated the effect of DIF on cell viability in insulin-secreting INS-1 cells. DIF induced cell death in a dose-dependent manner. In DIF-treated cells, nuclear condensation and shrinkage of the cell body were observed. After 6 h of DIF treatment, cells became Tdt-mediated dUTP-biotin nick end-labeling-positive, and DNA ladder formation was detected, indicating that DIF induced apoptosis in these cells. DIF did not activate caspase-3, a key enzyme mediating apoptotic signals generated by various agents. Furthermore, DIF-induced cell death was not affected by Z-asp-2, 6-dichlorobenzoyloxymethylketone, a broad inhibitor of the caspases. As is the case in other types of cells, DIF increased cytoplasmic free calcium concentration in INS-1 cells. However, DIF-induced cell death was not affected by chelating intracellular free calcium by 1, 2-bis(2-aminoophenoxy)ethane-N, N, N, N-tetra acetic acid (BAPTA). These results indicate that DIF induces apoptosis in INS-1 cells by a mechanism independent of caspase-3. DIF-induced elevation of cytoplasmic calcium does not mediate the effect of DIF on cell death.     

红霉素对人脐静脉内皮细胞一氧化氮及钙离子水平的影响

目的　探讨红霉素对人脐静脉内皮细胞一氧化氮通路及钙离子的影响。方法　应用一氧化氮及一氧化氮合酶试剂盒测定内皮细胞NO的含量及NOS的活性 ,采用Fura 2负载荧光技术检测胞内游离钙水平。结果　红霉素能明显增加内皮细胞NO的产生和胞内游离钙水平 ,并能明显增强NOS的活性 ,具有浓度和时间效应。结论　红霉素对人脐静脉内皮细胞一氧化氮通路的影响可能通过胞内游离钙而起作用。