左归丸和右归丸对皮质酮所致大鼠海马神经细胞病理模型学习记忆相关信号转导分子mRNA表达的影响

目的 观察左归丸和右归丸含药鼠血清对皮质酮所致大鼠海马神经细胞病理模型学习记忆相关信号转导分子mRNA表达的影响.方法 以新生24h乳鼠海马组织为材料,体外原代培养细胞,用高浓度皮质酮(10~(-4)mol/L)处理细胞制作大鼠海马病理细胞模型.采用倒置显微镜观察细胞形态变化,FDA/PI荧光双染法观察细胞存活情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,实时定量PCR法观察与学习记忆相关的信号转导分子BDNF、CaMKⅡ、ERK、CREB mRNA的表达变化,及补肾方药左归丸和右归丸的改善作用.结果 与空白对照组相比,皮质酮模型组神经细胞树突和轴突变细、细胞活力下降,死亡细胞明显增多,及BDNF、CaMKⅡ、ERK、CREB等信号转导分子的 mRNA表达下调;而左归丸和右归丸含药鼠血清可明显改善模型组细胞上述各项指标的异常变化.结论 左归丸和右归丸鼠血清能够保护大鼠海马神经细胞免遭高浓度皮质酮的损伤作用,改善模型细胞学习记忆相关信号转导分子mRNA的表达.     

补肾方药对老年大鼠血清皮质酮含量、LTP及空间学习记忆能力的影响

目的 观察补肾方药(左归丸、右归丸)对老年大鼠血清皮质酮水平、海马长时程增强(LTP)及空间学习记忆能力的影响.方法 以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年对照组、老年皮质酮(GC)拮抗组、老年左归组和老年右归组,另设青年对照组.采用ELISA法检测大鼠血清皮质酮含量,Morris水迷宫法观察各组大鼠空间学习记忆能力,电生理方法记录在体大鼠LTP变化;同时观察补肾方药对上述指标异常变化的改善作用.结果 与青年对照组相比,老年对照组大鼠的血清皮质酮含量明显升高(P＜0.05),空间学习记忆能力显著下降,海马CA1区LTP明显受到抑制(P＜0.05);补肾方药左归丸、右归丸能不同程度地改善上述指标的异常变化.结论 补肾方药左归丸、右归丸改善老年大鼠空间学习记忆能力的机制之一可能与拮抗高皮质酮对老年大鼠空间学习记忆的损伤有关,其余相关分子机制有待进一步研究.     

疲劳大鼠经疏肝补肾方用药后海马CaMK Ⅱ水平的变化

目的研究疏肝补肾方药对于疲劳大鼠海马CA1区钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)水平的变化。方法成年雄性Spargue-Dawley大鼠36只,随机分为模型组、对照组、疏肝补肾组。应用大鼠游泳运动结合睡眠剥夺建立疲劳大鼠复合模型,以Y迷宫实验评定其学习记忆能力。取大鼠海马CA1区以Western Blot定量检测,并以Real-time PCR技术分析海马CA1区CaMKⅡ的mRNA表达。结果 Y迷宫实验显示用药后大鼠的学习和记忆能力优于模型组,而疏肝补肾组大鼠在正确反应率和错误反应次数皆与模型组比较有统计学意义(P<0.01)。Western Blot结果显示,模型组CaMKⅡ磷酸化的蛋白表达明显低于对照组(P<0.01),疏肝补肾组高于模型组(P<0.01)。Real-time PCR结果显示,在mRNA水平上模型组及疏肝补肾组与对照组比较均有统计学意义(P<0.01),疏肝补肾组CaMKⅡmRNA表达高于模型组(P<0.05)。结论疲劳引起大鼠海马CA1区的CaMKⅡ水平下调,而使用疏肝补肾方药可改善之,提示可由疏肝补肾法对抗疲劳引起的学习记忆损伤。     

左归丸、右归丸对肾虚质大鼠海马MEK表达的影响

目的 观察补肾药物对肾虚质大鼠海马MEK表达的调控,探讨其对大鼠记忆学习能力的影响。方法 将40只SD子代鼠按雌雄1∶1比例随机分成空白对照组、肾虚质模型组、左归丸组和右归丸组,运用总蛋白提取,BCA蛋白定量、酶联免疫吸附法测定MEK浓度对比4组子代鼠海马组织内MEK蛋白表达差异,探究肾虚质子代鼠学习记忆能力与MEK间的关系。结果 与空白对照组比较,肾虚质模型组MEK蛋白含量降低(P<0.01),与肾虚质模型组相比,左归丸组、右归丸组MEK蛋白含量升高(P<0.05),左归丸组和右归丸组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 肾虚质大鼠海马MEK蛋白表达下降,左归丸、右归丸可以上调其异常表达,补肾药物可以通过上调中枢神经系统中的MEK表达改善肾虚质导致的学习记忆能力减退。     

老年大鼠学习记忆相关基因egr1表达变化的机制及补肾益气方药的调整作用

目的探讨DNA甲基化老年大鼠学习记忆相关基因egr1表达变化的机制及补肾益气方药——左归丸、益气聪明汤的调整作用。方法以自然衰老(24月龄)SD雄性大鼠为动物模型,随机分为老年对照组、老年补肾组、老年益气组、老年合剂组和老年拮抗组,另设一组青年对照组(5月龄)。采用RT-PCR法及Western印迹法观察大鼠学习记忆相关基因egr1 mRNA和蛋白表达变化,采用亚硫酸氢盐转化结合高通量测序法检测基因egr1启动子区甲基化状态,同时观察补肾益气方药对上述指标变化的调整作用。结果与青年对照组相比,老年大鼠egr1基因mRNA和蛋白表达均明显降低(P<0.05),其启动子区甲基化增高,左归丸、益气聪明汤能不同程度地改善egr1的表达,并降低egr1启动子区甲基化率。结论补肾益气方药改善老年大鼠增龄性学习记忆退化可能与抑制基因egr1启动子DNA甲基化而提高egr1的表达有关。     

血管性痴呆大鼠突触后致密物质变化机制的研究

目的观察血管性痴呆(VaD)大鼠N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)的2B亚基(NR2B)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的变化情况,探讨其在VaD发生、发展中的作用。方法将96只Wistar大鼠随机分为假手术组(32只)、VaD模型组(模型组,32只)和美金刚治疗组(治疗组,32只)。采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备VaD大鼠模型。用RT-PCR法检测术后4、8、12、16用犬鼠海马NR2B mRNA的表迭,用γ-~(32)P掺入法检测大鼠海马CaMKⅡ的活性。结果与假手术组比较,模型组海马NR2B mRNA水平术后4周时明显增高(P<0.05),术后8～16周显著降低(P<0.01),海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后12周、16周明显降低(P<0.01);治疗组术后4周时上述2项结果与假手术组差异无统计学意义,除治疗组8周时,在其他时间点,与假手术组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);但NR2BmRNA水平于术后8周、12周明显高于模型组(P<0.01,P<0.05);总CaMKⅡ活性与模型组差异无统计学意义。结论 CaMKⅡ活性变化主要是NMDAR介导的,美金刚通过调节NR2B表达改善VaD大鼠认知功能,但对CaMKⅡ活性的影响有限。     

补阳还五汤对血管性痴呆大鼠学习记忆和海马N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的观察补阳还五汤对血管性痴呆(VaD)大鼠海马CA1区N甲基D-天冬氨酸受体表达及长时程增强(LTP)的影响及机制。方法选择SD大鼠144只,随机分为假手术组、VaD模型组(模型组)、尼莫地平组和补阳还五汤组,每组36只。采用四血管阻断法制备VaD大鼠模型。Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能,大鼠海马CA3-CA1区记录海马CA1区LTP,免疫组织化学、Western blot法和实时荧光定量PCR检测大鼠海马NR1、NR2A、NR2B蛋白和mRNA表达的变化。结果与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长和平均探索次数减少(P<0.05),大鼠海马CA1区LTP明显降低(P<0.05),CA1区NR1、NR2A、NR2B蛋白及mRNA表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤组、尼莫地平组大鼠学习、记忆成绩明显提高(P<0.05),海马CA1区NR1、NR2A、NR2B蛋白及mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。结论补阳还五汤可上调脑缺血再灌注海马CA1区脑组织NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达,促进LTP,进而改善VaD大鼠学习记忆能力。     

左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类和单胺类神经递质含量变化的影响

目的 观察左归丸、右归丸对老年大鼠海马、杏仁核氨基酸类神经递质Asp、Glu、Gly、GABA和单胺类神经递质5-HT、NE含量变化的影响，探讨老年机体神经元的神经递质的变化，以及左归丸、右归丸延缓老年大鼠神经内分泌调控退化的作用机制。方法 以自然衰老大鼠为动物模型，分设4组：青年对照组、老年对照组、老年左归丸组、老年右归丸组。采用HPLC-荧光法，检测各组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、gly、GABA含量变化；采用ELISA法，检测5-HT、NE含量变化。结果 与青年对照组相比，老年对照组大鼠海马、杏仁核Asp、Glu、Gly、GABA含量有不同程度升高，而与老年对照组相比，两用药组含量有不同程度降低。同时，老年对照组大鼠海马NE含量减少，左归丸组能提高老年大鼠海马NE含量。而各组大鼠5-HT含量无明显差异。结论 左归丸、右归丸通过不同程度地纠正老年大鼠海马和杏仁核脑区氨基酸类和单胺类神经递质的紊乱状态，使兴奋性和抑制性神经递质趋向平衡，从而有助于改善大脑边缘系统，延缓机体衰老。     

三七总皂苷对缺血再灌注大鼠脑组织CaMKⅡβ mRNA及蛋白的影响

目的 研究三七总皂苷(PNS)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马及皮层钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMK)Ⅱβ mRNA及蛋白表达的影响.方法 实验大鼠随机分为实验对照组、伪手术组、模型组、PNS治疗组,采用尼龙线插线法建立局灶性脑缺血再灌注模型.治疗组于术后2、14、26、38 h分别于腹腔给予50 mg/kg PNS,各组大鼠于48 h处死,急性分离海马及皮层组织,分别采用RT-PCR及Western印迹技术检测CaMK Ⅱβ mRNA及蛋白表达.结果 海马组织与皮层的CaMK Ⅱβ mRNA表达变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ mRNA表达没有显著性差异(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMK Ⅱβ mRNA表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).采用Western印迹从蛋白质水平检测CaMK Ⅱβ表达,结果显示:海马组织与皮层的变化趋势一致;与对照组相比,伪手术组CaMK Ⅱβ蛋白表达没有明显变化(P＞0.05);而缺血再灌注模型组CaMK Ⅱβ mRNA蛋白表达显著升高(P<0.01);采用50 mg/kg PNS治疗后,CaMKⅡβ 蛋白表达较缺血再灌注模型组显著下降(P<0.01).蛋白变化趋势与基因表达结果一致.结论 PNS可能通过降低缺血再灌注大鼠海马及皮层CaMKⅡβ mRNA及蛋白表达对脑神经元损伤所起的保护作用,从而发挥其对脑缺血的治疗作用.     

头穴透刺对阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力及海马NR1、NR2B受体mRNA表达的影响

目的观察头穴透刺对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及海马NR1、NR2B受体mRNA表达的影响。方法采用链脲佐菌素侧脑室注射制备大鼠痴呆模型,随机分为空白组、假手术组、模型组、针刺组、西药组。连续治疗28 d后,采用Morris水迷宫实验观察大鼠的学习记忆能力,荧光定量PCR法检测大鼠海马NR1、NR2B受体mRNA表达量。结果大鼠学习记忆能力比较:造模后,模型组、西药组、针刺组逃避潜伏期较空白组、假手术组明显延长,跨越平台次数较空白组、假手术组明显减少,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后,西药组、针刺组逃避潜伏期较造模后缩短(P0.05),跨越平台次数较造模后增加(P0.05),且与模型组、空白组、假手术组比较差异有统计学意义(P0.05)。大鼠海马NR1、NR2B受体mRNA表达量比较:模型组NR1、NR2B受体mRNA表达较空白组、假手术组明显下降,差异均有统计学意义(P0.05)。针刺组、西药组NR1、NR2B受体mRNA的表达较模型组升高,差异均有统计学意义(P0.05),且针刺组NR1、NR2B受体mRNA的表达量高于西药组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论头穴透刺能够提高AD大鼠海马NR1、NR2B受体mRNA表达量,从而改善AD大鼠的学习记忆能力。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.